针刺对脑心综合征大鼠脑组织细胞凋亡、炎症因子及丝裂原活化蛋白激酶/核因子-κB/激活蛋白-1信号通路的影响

目的探讨针刺对脑心综合征大鼠脑组织细胞凋亡、炎症因子及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)/激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)信号通路的影响。方法将36只SD大鼠随机分为针刺组、模型组和对照组,各12只。采用胶原酶加肝素联合注射大鼠尾状核制备脑心综合征大鼠模型,对照组给予等剂量生理盐水向大鼠尾状核注入,手术操作过程同模型组。模型组和假手术组均不予针刺;针刺组选心俞穴、内关穴、风府穴和水沟穴,每日针刺1次,连续3天。采用原位末端凋亡(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling,TUNEL)法测定脑组织细胞凋亡情况;神经功能采用Zea-Longa法评估;运用酶联免疫法测定白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α水平;采用Western Blot法测定MAPK、NF-κB、AP-1蛋白表达。结果模型组和针刺组大鼠脑组织细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)高于假手术组(P<0.05);针刺组大鼠脑组织AI低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠神经行为评分高于假手术组(P<0.05);针刺组大鼠神经行为评分低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠IL-1β、IL-6和TNF-α水平高于假手术组(P<0.05);针刺组大鼠IL-1β、IL-6和TNF-α水平低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠MAPK蛋白灰度值、NF-κB蛋白灰度值和AP-1蛋白灰度值高于假手术组(P<0.05);针刺组大鼠MAPK蛋白灰度值、NF-κB蛋白灰度值和AP-1蛋白灰度值低于模型组(P<0.05)。结论脑心综合征大鼠采用针刺可减轻大鼠脑组织细胞凋亡,减轻大鼠炎症因子,且可下调MAPK/NF-κB/AP-1信号通路表达。

激活蛋白1(AP-1)在豚鼠进展性近视巩膜重塑中与Ⅰ型胶原的表达关系研究

目的研究近视眼巩膜重塑中激活蛋白-1(activator protein 1,AP-1)的动态表达变化以及与Ⅰ型胶原表达之间的关系。方法选取出生1周左右的三色豚鼠75只,随机抽取50只遮盖左眼建立形觉剥夺近视组(FDM组,50眼),其右眼作为自身对照组(50眼),其余25只豚鼠双眼均未做任何处理作为空白对照组(50眼),分别测量并记录空白对照组和FDM组豚鼠在遮盖前(0周)及遮盖后2周、4周、6周及遮盖4周去遮盖1周(4/-1周)时的双眼屈光度及眼轴长度。于上述5时间点分别处死豚鼠并制备巩膜组织切片,采用免疫组织化学染色法及逆转录PCR(RT-PCR)技术检测各组豚鼠巩膜中遮盖不同时间点AP-1和Ⅰ型胶原蛋白及mRNA的表达量并分析二者之间的关系。结果遮盖前空白对照组、自身对照组、FDM组的豚鼠屈光度均为远视,差异无统计学意义(P> 0. 05),FDM组由遮盖前(0周)时的远视眼(2. 09±0. 31) D到遮盖2周、4周、6周及4/-1周后逐渐变成近视眼[(-1. 23±0. 68) D、(-4. 17±0. 58) D、(-7. 07±0. 55) D、(-2. 67±0. 59) D],眼轴长度由遮盖0周(5. 93±0. 38) mm到遮盖2周、4周、6周及4/-1周后逐渐增加[(6. 62±0. 37) mm、(7. 30±0. 35) mm、(7. 99±0. 31) mm、(6. 97±0. 32) mm],与空白对照组、自身对照组比较,遮盖后各个时间点FDM组豚鼠近视屈光度明显升高,眼轴测量值明显增加,差异均有统计学意义(均为P <0. 05)。各组巩膜组织均有AP-1和Ⅰ型胶原蛋白与mRNA表达,遮盖前空白对照组、自身对照组与FDM组豚鼠巩膜组织中AP-1和Ⅰ型胶原蛋白及mRNA表达量的差异均无统计学意义(均为P> 0. 05),随着遮盖时间的延长,FDM组中AP-1和Ⅰ型胶原蛋白表达量均逐渐减弱(均为P <0. 05),AP-1和Ⅰ型胶原的mRNA表达也相应逐渐下调(均为P <0. 05),两者具有高度正相关性。结论在近视巩膜重塑过程中,AP-1可能作为转化生长因子-β1的下游信号转录因子参与调控Ⅰ型胶原的合成与降解。

转录激活蛋白AP-1的研究进展

转录激活蛋白ＡＰ１存在于不同类型的细胞中，许多基因的调节区都有ＡＰ１的结合位点。ＡＰ１通过调节基因的转录，对肿瘤的引发。

莫西沙星联合比阿培南治疗老年重症肺炎患者疗效及对炎性因子肿瘤坏死因子相关激活蛋白和血管细胞黏附分子-1的影响

目的探讨莫西沙星联合比阿培南治疗老年重症肺炎患者疗效及对炎性因子、血清中肿瘤坏死因子相关激活蛋白(CD40L)和血管细胞黏附分子-1(VACM-1)的影响。方法采用前瞻性分析,选取浙江省人民医院收治的150例老年重症肺炎患者,根据随机数字表法分为2组,各75例。其中采用比阿培南治疗者为对照组,采用莫西沙星联比阿培南治疗者为联合组。比较2组患者疗效、病原菌检出率、炎性因子、血清CD40L和VACM-1水平。结果联合组临床总有效率明显高于对照组(97%与79%),治疗后致病菌检出率低于对照组(χ^(2)=21.714、4.812,P<0.05);联合组肺部体征、咳嗽、气喘消退时间较对照组明显缩短(t=4.751,P=0.018;t=4.369,P=0.023;t=5.134,P=0.007);联合组治疗后血清白细胞介素6(IL-6)、C-反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、CD40L和VACM-1水平均低于对照组(t=3.721,P=0.019;t=4.021,P=0.016;t=4.739,P=0.012;t=3.792,P=0.020;t=5.134,P=0.001);联合组与对照组不良反应发生率比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.714,P=0.381)。结论莫西沙星联合比阿培南治疗老年重症肺炎患者疗效显著,患者炎症反应明显减轻,血清CD40L、VACM-1表达明显下调,且安全性较高,值得推荐。

雌激素受体α、雌激素受体β、激活蛋白1、血管内皮生长因子在大鼠子宫内膜异位症模型中的表达及意义

目的探讨雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)、激活蛋白1(AP-1)、血管内皮生长因子(VEGF)在大鼠子宫内膜异位症(EMs)模型中的表达及意义。方法采用皮下种植法建立大鼠EMs模型,选取建模成功的28只大鼠为模型组(n=28),观察大鼠EMs模型在位内膜及异位病灶的组织病理学改变,并通过免疫组织化学法检测对照组子宫内膜、模型组在位子宫内膜和异位病灶ERα、ERβ、AP-1、VEGF的表达情况。结果 1大鼠EMs模型在位内膜及异位病灶腺体、间质血管明显增加;2大鼠EMs模型的异位病灶与对照组子宫内膜间ERα阳性率比较,差异无统计学意义(P=0.107),而其在位内膜中的表达较对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。ERβ、AP-1(c-jun)蛋白、VEGF在模型组在位内膜及异位病灶中阳性率与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),但其在位内膜及异位病灶中的表达比较,差异无统计学意义。结论大鼠EMs模型在位内膜中ERα和ERβ均高表达,异位病灶中则仅表现为ERβ高表达,同时上调c-jun,VEGF的表达,ERβ可能在EMs的发生发展中起到较ERα更为重要的作用。

心绞痛患者血清内脂素水平变化与激活蛋白-1、基质金属蛋白酶-2的关系

目的探讨心绞痛患者血清内脂素与激活蛋白-1(AP-1)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的关系。方法选择不稳定型心绞痛患者(UAP组)75例、稳定型心绞痛患者(SAP组)65例和健康对照组60例,采用ELISA法检测其血清内脂素、磷酸化c-Jun(反映活性AP-1数量)、MMP-2及组织金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)的水平。结果UAP组血清内脂素、磷酸化c-Jun、MMP-2、TIMP-2及MMP-2/TIMP-2均高于SAP组(P均<0.01);SAP组上述指标均高于对照组(P均<0.01);Pearson相关分析显示心绞痛患者血清内脂素水平与磷酸化c-Jun、MMP-2、TIMP-2及MMP-2/TIMP-2呈正相关(r分别为0.662、0.657、0.456、0.273,P均<0.01);磷酸化c-Jun与MMP-2、TIMP-2及MMP-2/TIMP-2呈正相关(r分别为0.588、0.433、0.184,P均<0.05)。结论心绞痛患者的血清内脂素水平明显升高,其可能通过促进AP-1活化、增加MMP-2分泌而降低冠脉粥样硬化斑块的稳定性。

内毒素致伤大鼠白介素-10表达及肺组织激活蛋白-1活性的变化

目的 :观察内毒素 (L PS)致伤大鼠血浆 IL 10及肺组织 IL 10 m RNA含量和激活蛋白 1(AP 1)活性的变化 ,探讨 AP 1对 IL 10基因表达的作用。方法 :采用 L PS(2、4、6和 8mg/kg)致伤 Wistar大鼠 ,在各时间点 (1、2、4和 6小时 )制备动脉血浆并取肺组织。采用酶联免疫吸附法 (EL ISA)检测血浆 IL 10含量 ,采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测 IL 10 m RNA含量 ;采用凝胶迁移率分析法 (EMSA)检测 AP 1活性。结果 :1L PS可使血浆 IL 10含量及肺组织的 IL 10 m RNA含量和 AP 1活性同步升高 ;2 L PS≥6 mg/kg时 ,血浆 IL 10含量及肺组织的 IL 10 m RNA含量和 AP 1活性的高峰增长幅度显著加大。结论 :急性肺损伤或急性呼吸窘迫综合征时 IL 10基因表达增强与 AP 1活性同步升高有关。

激活蛋白-1调控转化生长因子β_1诱导的人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原分泌

目的:探讨核转录因子激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)在转化生长因子β1(transfor-ming growth factor-β1,TGF-β1)诱导人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原分泌中的作用。方法:以人肺成纤维细胞HLF-02细胞系为研究对象,给予10μg/L的TGF-β1刺激,于不同时间点收集细胞,采用RT-PCR和Wester blot检测细胞Ⅰ型胶原转录和分泌;阻断实验中选用AP-1抑制剂姜黄素为阻断剂,凝胶阻滞实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测细胞内AP-1的DNA结合活性变化,同时Western印迹检测Ⅰ型胶原分泌变化。结果:TGF-β1能诱导HLF-02细胞Ⅰ型胶原mRNA的转录和分泌(P<0.05);TGF-β1能提高HLF-02细胞AP-1的DNA结合活力(P<0.05);姜黄素能明显抑制TGF-β1诱导的HLF-02细胞AP-1的DNA结合活力,抑制率分别为17.1%,17.6%,24.2%,31.3%(P<0.05);同时,姜黄素能明显抑制TGF-β1诱导的HLF-02细胞Ⅰ型胶原的分泌,抑制率分别为62.1%,58.8%,62.1%,59.6%(P<0.05)。结论:核转录因子AP-1参与TGF-β1刺激的HLF-02细胞Ⅰ型胶原的分泌调控。

乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活蛋白l基因的克隆化研究

目的 应用抑制性消减杂交 (SSH)技术及生物信息学 (bioinformatics)技术筛选并克隆乙型肝炎病毒 (HBV)前 S1蛋白(pre S1)反式激活新型靶基因 ,进一步阐明HBV感染相关性疾病的发病机制。方法 以HBV前 S1蛋白表达质粒pcDNA3 .1(-) PreSl转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 .1(-)为平行对照 ,提取mRNA并进行抑制性消减杂交分析。并应用分子生物学技术 ,结合生物信息学技术 ,克隆HBV前 Sl反式激活作用的新的靶基因。结果 对于所获基因片段序列分析表明 ,其中之一为新型基因片段。从HepG2细胞提取总RNA ,以逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列 ,并测序证实 ,因其可以被前 S1蛋白反式激活 ,故命名为前Sl反式激活蛋白 1(PSlTPl) ,已在GenBank中注册 ,注册号 :AY42 6672。PSlTPl基因的编码序列全长为64 2个核苷酸 (nt) ,编码产物由 2 13个氨基酸残基 (aa)组成。结论 HBV前 Sl蛋白在HBV进入宿主细胞的过程中起着重要的作用 ,最近的研究表明前 Sl蛋白还具有反式激活的作用 ,上调宿主细胞某些基因的表达 ,从而改变宿主正常的应答水平 ,引起病变。HBV前 Sl反式激活新靶基因的发现 ,为进一步研究HBV前

大鼠急性肺损伤时肺组织激活蛋白-1活性变化的研究

目的 探讨脂多糖(LPS)致伤大鼠后肺组织激活蛋白-1(AP-1)活性与肺组织损害及功能障碍程度的关系。方法 经Wistar大鼠尾静脉注射不同剂量(2、4、6及8mg/kg)LPS复制急性肺损伤(ALI)模型,以注射生理盐水为对照,观察致伤后不同时相点(1、2、4及6h)大鼠的呼吸频率及死亡情况;检测动脉血氧分压(PaO_2)和肺湿重/干重(W/D)值,并行组织学检查;采用凝胶迁移率分析法(EMSA)检测肺组织AP-1活性。结果 LPS 2mg/kg即可致大鼠呼吸频率增快,LPS≥6mg/kg时出现呼吸困难或呼吸窘迫,死亡率为60％(36/60);各剂量组PaO_2均较对照组低,以LPS≤6mg/kg降低显著(P<0.01);肺组织W/D用值从LPS 2mg/kg、2h时显著升高,LPS≥4mg/kg各时相均显著升高(P<0.05);肺大体观察LPS剂量越大,肺水肿及炎症反应越严重;LPS致伤后肺组织AP-1活性均升高,剂量越大,AP-1活性越高,不同剂量组均在2h点达到高峰,且以LPS≥6mg/kg组升高显著(P<0.01)。结论 ①LPS≥6mg/kg是介导大鼠发生ALI和ARDS的临界剂量;②肺组织AP-1活性升高水平与肺组织损伤和功能障碍程度密切相关。

乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活蛋白2基因的克隆化研究

目的 :应用抑制性消减杂交 (SSH )技术及生物信息学 (bioinformatics)技术筛选并克隆乙型肝炎病毒(HBV)前 S1蛋白 (pre S1)反式激活新型靶基因 ,进一步阐明HBV感染相关疾病的发病机制。方法 :以HBV前 S1蛋白表达质粒 pcDNA3 1( -) pre S1转染HepG2细胞 ,以空载体 pcDNA3 1( -)为平行对照 ,提取mRNA并进行抑制性消减杂交分析。并应用分子生物学技术 ,结合生物信息学技术 ,克隆HBV前 S1反式激活作用的新的靶基因。结果 :对于所获基因片段序列分析表明 ,其中之一为新型基因片段。从HepG2细胞提取总RNA ,以逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列 ,并测序证实 ,因其可以被前 S1蛋白反式激活 ,故命名为前 S1反式激活蛋白 2 (PS1TP2 ) ,已在GenBank中注册 ,注册号 :AY42 6673。PS1TP2基因的编码序列全长为 5 73个核苷酸 (nt) ,编码产物由 190个氨基酸残基 (aa)组成。结论 :HBV前 S1蛋白在HBV进入宿主细胞的过程中起着重要作用 ,最近的研究表明前 S1蛋白还具有反式激活的作用 ,上调宿主细胞某些基因的表达 ,从而改变宿主正常的免疫应答水平 ,引起病变。HBV前 S1反式激活新靶基因的发现 ,为进一步研究HBV前

TOLL样受体9/激活蛋白-1信号通路在过敏性鼻炎中的作用

目的探讨TOLL样受体9/激活蛋白-1(TLR9/AP-1)信号通路在过敏性鼻炎中的作用机制。方法48只SD大鼠采用随机数字表法分为对照组、实验组、干预组,每组16只。实验组、干预组制备过敏性鼻炎大鼠的动物模型。干预组造模成功后给予治疗药物干预。将各组16只大鼠采用随机数字表法分为两组,每组8只,分别于末次干预后6、12 h处死后采集血液标本和鼻黏膜标本。检测各组大鼠干预后免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、症状评分、鼻黏膜组织中C-Fos、C-Jun表达。结果实验组大鼠IgE[(18.65±1.09)IU/mL比(11.39±1.56)IU/mL]、IL-4[(75.33±7.16)ng/L比(56.55±6.08)ng/L]、TNF-α[(57.25±5.15)ng/L比(32.33±2.26)ng/L]、症状评分、C-Fos[(0.850±0.012)比(0.425±0.050)]、C-Jun[(0.950±0.052)比(0.425±0.030)]均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。干预组大鼠IgE[(15.95±1.02)IU/mL]、IL-4[(65.12±5.47)ng/L]、TNF-α[(48.53±4.18)ng/L]、症状评分、C-Fos[(0.575±0.047)]、C-Jun[(0.615±0.047)]均明显低于实验组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论药物治疗过敏性鼻炎的机制与抑制TLR9/AP-1信号通路及其下游因子的释放和分泌有关。

激活蛋白-1、巨噬细胞游走抑制因子与人颈动脉粥样硬化斑块的关系研究

目的探讨激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)、巨噬细胞游走抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)在人颈动脉粥样硬化斑块中的表达变化及作用机制。方法收集60例人颈动脉粥样硬化斑块标本(试验组,A组)和30例正常人肠系膜动脉标本(对照组,B组)。根据颈动脉超声检查结果将颈动脉粥样硬化斑块标本分为软斑组(A1,n=20)、混合斑块组(A2,n=20)、硬斑组(A3,n=20)。分别采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法测定标本中AP-1亚单位c-Jun mRNA及蛋白表达水平,反映AP-1的表达水平。用酶联免疫法(ELISA)测定斑块组和对照组血清中MIF水平。结果 (1)人颈动脉粥样硬化斑块中c-Jun mRNA及蛋白较对照组表达上调(P<0.05),A1组较A3组表达显著升高(P<0.05),A2组与A1组和A3组分别比较无明显差异(P>0.05)。(2)斑块组比健康对照组血清中MIF的含量显著增高(P<0.05);A1组较A3组含量显著增高(P<0.05),A2组与A1组和A3组分别比较无明显差异(P>0.05)。(3)在人颈动脉粥样硬化斑块中,MIF浓度与c-Jun表达水平明显呈正相关(r=0.759,P<0.01)。结论 AP-1和MIF与人颈动脉粥样硬化斑块的形成及稳定性显著相关,其可能作为预测颈动脉粥样硬化斑块病变情况及斑块稳定性的一个指标。AP-1表达量与MIF浓度越高,斑块不稳定性越高。

转录因子激活蛋白-1在Buerger’s病中的表达与意义

目的:观察转录因子激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)在Buerger’s病患者腰交感神经元内的表达。方法:收集2011年1月至2012年3月行腰交感神经节切除术的Buerger’s病男性患者腰交感神经节标本,Buerger’s病患者组:23例,对照组:12例。应用免疫组化、RT-PCR、Western blot技术测定对照组腰交感神经节神经元AP-1的表达水平并比较其表达差异。结果:Buerger’s病患者腰交感神经节神经元中AP-1的基因表达(P=0.045 9)、蛋白表达(P=0.028 3),高于对照组。结论:AP-1在调节Buerger’s病细胞增殖和血管炎症反应中发挥着作用。

激活蛋白-1对香烟烟雾提取物诱导气道黏蛋白5AC基因表达的调控作用

目的:了解激活蛋白-1(AP-1)参与调控香烟烟雾诱导的气道黏蛋白(MUC)5AC表达的作用机制,探讨此过程中AP-1活化的可能信号途径。方法:体外培养人气道上皮细胞BEAS-2B,给予香烟烟雾提取物(CSE)刺激,干预实验用c-Jun的显性负性突变体TAM67转染细胞阻断AP-1的DNA结合活性;用SP600125和PD98059预处理分别阻断c-Jun氨基端激酶(JNK)和细胞外信号调节激酶(ERK)的活性。以ELISA法检测MUC5AC蛋白含量,Western印迹检测磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化ERK(p-ERK)和磷酸化P38(p-P38)含量,RT-PCR检测MUC5ACmRNA表达水平,EMSA测定AP-1的DNA结合活性。结果:CSE(1g/L)刺激后MUC5ACmRNA表达水平和蛋白含量明显高于对照组(均P<0.01),AP-1的DNA结合活性也明显强于对照组(P<0.01),伴随p-ERK和p-JNK蛋白含量显著增加,与对照组相比,差异有统计学意义(均P<0.01),而P38含量无明显变化(P>0.05);与CSE组相比,TAM67转染细胞后MUC5ACmRNA表达水平和蛋白含量均显著降低(P<0.01);与CSE组相比,用SP600125或PD98059处理细胞后可明显抑制AP-1的DNA结合活性(均P<0.05),并下调MUC5AC蛋白含量和mRNA的表达(均P<0.05)。结论:AP-1参与调控CSE诱导的气道MUC5AC基因表达的过程,此过程是由JNK和ERK信号转导通路激活AP-1,再由AP-1与MUC5AC启动子上AP-1DNA反应元件结合后在转录水平上调MUC5AC的表达而实现的。

流感病毒PB1-F2蛋白通过激活ERK1/2激酶刺激AP-1转录因子的活化

为探索A型流感病毒PB1-F2蛋白对转录因子AP-1信号通路的调控机制,本研究通过荧光素酶报告基因试验检测PB1-F2蛋白的表达对AP-1转录活性的调控,利用荧光定量PCR和免疫印迹方法检测PB1-F2对c-Fos/AP-1的m RNA转录和ERK1/2磷酸化水平的影响,并以ERK通路特异性抑制剂U0126抑制ERK1/2的活性后,以验证PB1-F2调控AP-1是否通过ERK1/2激酶介导。结果显示:A549和293T细胞中表达PB1-F2蛋白后,AP-1的转录活性均显著升高,并且c-Fos/AP-1的m RNA转录水平呈现显著上调;过表达PB1-F2蛋白同样能够显著上调磷酸化ERK1/2水平;以U0126抑制ERK1/2激活后,PB1-F2上调AP-1转录活性的作用显著下降。本研究表明,流感病毒PB1-F2蛋白能够通过激活ERK1/2激酶诱导AP-1转录因子的活化,为进一步研究PB1-F2蛋白参与调控炎症反应的机制提供了实验依据。

小鼠动力蛋白激活蛋白1-shRNA慢病毒载体的构建及在足细胞中的敲低效应

目的构建表达小鼠动力蛋白激活蛋白1(dynactin-1)特异性shRNA的慢病毒载体,并检测其对小鼠足细胞dynactin-1的敲低效果。方法针对小鼠dynactin-1mRNA序列,设计合成3种shRNA,克隆到入门质粒pENTR/pTER中,再利用LR反应重组到pLenti X2Puro慢病毒目的质粒,经过酶切测序鉴定后,将慢病毒质粒和包装质粒共转染293FT细胞,包装得到病毒颗粒。各组shRNA病毒载体转染小鼠足细胞后,用嘌呤霉素抗性筛选细胞,利用蛋白质印迹法检测各组细胞中dynactin-1蛋白的表达水平。结果构建的各组shRNA入门质粒和慢病毒载体经酶切及测序鉴定正确;慢病毒载体与慢病毒包装质粒共转染293FT细胞,制备病毒颗粒,转染小鼠足细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定表达shRNA的足细胞系;蛋白质印迹检测结果表明转染dynactin-1-shRNA组的dynactin-1蛋白表达降低。结论构建的小鼠dynactin-1-shRNA慢病毒载体能有效降低小鼠足细胞中dynactin-1蛋白表达,为进一步研究dynactin-1在足细胞中的功能奠定了基础。

儿童喉乳头状瘤组织中Toll样受体4及激活蛋白-1表达及相关性研究

目的:研究儿童喉乳头状瘤(juvenile onset laryngeal papilloma,JLP)中Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)(通常是c-Jun和c-Fos的异源二聚体)蛋白的表达及其相互关系。方法:应用免疫组化法及RT-PCR检测JLP组织中TLR4和AP-1(c-Jun、c-Fos)的表达情况,分析两者表达的相关性及与JLP复发的相关性。结果:儿童JLP组织中TLR4和AP-1(c-Jun、cFos)蛋白和mRNA均为阳性表达,与无复发组比较,复发组有显著性增高(P<0.01),与正常对照组比较,JLP两组均有显著性增高(P<0.01)。其中TLR4蛋白复发组和无复发组阳性率分别为83.33%和58.33%,cJun、c-Fos蛋白复发组阳性率分别为86.67%和83.33%,无复发组阳性率均为66.67%。TLR4和AP-1(c-Jun、c-Fos)蛋白表达均与JLP的复发有明显相关性(P<0.05或者P<0.01);JLP组织中TLR4和AP-1(c-Jun、c-Fos)表达两者呈正相关(P<0.01)。结论:TLR4及AP-1的高表达可能在JLP的发生发展机制中起着重要作用。

激活蛋白-1与变应性疾病的研究进展

激活蛋白-1(AP-1)是指一类主要由Jun和Fos两大类蛋白质因子家族组成的转录因子,能与许多基因上AP-1位点即佛波酯反应元件结合,参与众多生长因子和细胞因子的基因转录调控,从而导致机体一系列生理和病理生理变化,近年来关于它与变应性疾病的关系日益得到重视。本文就AP-1的结构、活化及其与变应性疾病之间的关系作一综述。

强心饮对肿瘤坏死因子α诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成以及激活蛋白1 mRNA表达的影响

目的:研究激活蛋白1(activator protein-1,AP-1)在肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖、胶原合成中的作用,探讨强心饮抑制心肌纤维化的作用机制。方法:胰酶消化法分离培养乳鼠CFs,建立TNFα诱导新生大鼠CFs纤维化模型。将CFs按培养方式不同分为正常对照组、模型组和强心饮5%含药血清组、10%含药血清组和20%含药血清组。治疗24h后,采用荧光实时定量聚和酶链式方法检测不同浓度强心饮对CFs AP-1 mRNA表达的影响,甲基噻唑基四唑法检测强心饮对CFs增殖的影响;羟脯氨酸法检测对CFs胶原合成量的影响。结果:TNF-α作用CFs24h后,与空白对照组相比,AP-1 mRNA表达明显增加(P<0.05),细胞增殖和胶原合成增加(P<0.05);强心饮干预后,CFs增殖和胶原合成减少(P<0.05),AP-1 mRNA表达下调(P<0.05)。结论:强心饮能够抑制TNF-α诱导的CFs增殖和胶原合成增加,具有抗心肌纤维化作用,其机制可能与下调AP-1 mRNA表达有关。