基于腺苷酸激活蛋白激酶-自噬信号通路探讨减重平板训练对脊髓损伤大鼠运动功能的影响

目的 基于腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)-自噬信号通路探讨减重平板训练对脊髓损伤(SCI)大鼠运动功能的影响及其作用机制。方法 选择30只10周龄SPF级雌性SD大鼠,按照随机数字表法分为假手术组、模型组和运动组,每组10只。模型组和运动组均采用Allen's法制作T10不完全性脊髓损伤模型,假手术组仅进行假手术。3组均于SCI造模前3 d进行预适应运动训练,以适应跑台环境。运动组于造模后第8天进行减重平板训练,减重为大鼠体质量的20%~40%,跑台速度6 m/min,20 min/次,2次/d,持续训练3周;假手术组和模型组造模后均自由活动,不进行减重平板训练。分别在造模后第1、7、14、21、28天采用脊髓损伤行为学(BBB)评分法评估各组大鼠后肢运动功能;于干预结束后(SCI后第28天)采用步态分析处理系统评估大鼠的步态参数(足印面积、步幅长度、触地强度、摆动速度和运动速度);采用尼氏染色法观察脊髓神经元形态及数目;采用Western blot法检测脊髓组织p-AMPK、t-AMPK、LC3、p62蛋白表达水平。结果(1) BBB评分:与假手术组比较,模型组、运动组造模后第1、7、14、21、28天BBB评分明显更低,差异均具有统计学意义(P<0.05);与模型组同一时间点比较,运动组造模后14、21、28天BBB评分明显更高,差异均具有统计学意义(P<0.05);模型组、运动组内不同时间点BBB评分比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(2)步态参数:与假手术组比较,模型组足印面积、触地强度、摆动速度、步幅长度和运动速度均明显更低,运动组足印面积明显更低,差异均具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,运动组第28天足印面积、触地强度、摆动速度、步幅长度和运动速度均明显更高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(3)脊髓前角神经元形态及数目:与假手术组比较,模型组脊髓前角神经元数目明显减少(P<0.05),可见细胞核固缩。与模型组比较,运动组脊髓前角可见较为清晰的尼氏体,细胞核固缩程度降低,脊髓前角神经元存活数目增加(P<0.05)。(4) p-AMPK、t-AMPK、LC3、p62蛋白表达水平:与假手术组比较,模型组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ明显降低,p62明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,运动组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-AMPK/t-AMPK明显升高,p62明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 减重平板训练可改善SCI大鼠神经功能和后肢运动功能,这可能与激活脊髓AMPK-自噬信号通路有关。

应激激活蛋白激酶及其磷酸化在晚期前列腺癌表达

目的:探讨应激激活蛋白激酶(JNK)与磷酸化JNK(p-JNK)在晚期前列腺癌(PCa)和良性前列腺增生(BPH)中的表达及意义。方法:收集晚期PCa组织蜡块40例,BPH组织蜡块21例。免疫组化法检测组织中JNK和p-JNK蛋白表达,并分析其与晚期PCa和BPH的关系,及与晚期PCa患者病理特征的关系。结果:BPH组与PCa组JNK蛋白阳性表达率分别为42.86%、52.50%,无统计学差异(P>0.05)。在未转移癌和转移癌、Gleason≤7和Gleason>7、PSA≤20μg/L和PSA>20μg/L、生存时间>5年和生存时间≤5年PCa中的JNK蛋白阳性表达率分别为53.85%和51.85%、58.82%和47.82%、57.14%和51.52%、60.00%和45.00%,无统计学差异(P>0.05)。p-JNK蛋白在BPH组与PCa组中的阳性表达率分别为33.33%、35.00%,无统计学差异(P>0.05)。在未转移癌和转移癌、Gleason≤7和Gleason>7、PSA≤20μg/L和PSA>20μg/L PCa中的p-JNK蛋白阳性表达率分别为30.77%和37.03%、35.29%和34.78%、43.75%和10.93%,无统计学差异(P>0.05)。生存时间>5年组pJNK阳性率为50%,生存时间≤5年组p-JNK阳性率为20.00%,有统计学差异(P<0.05)。结论:p-JNK高表达的PCa组生存时间长,并与PCa的预后相关。

阿尔茨海默病大鼠海马N-甲基天冬氨酸受体和丝裂酶原激活蛋白激酶的表达

目的探讨N甲基天冬氨酸受体(NMDAR)及丝裂酶原激活蛋白激酶(MAPK)在阿尔茨海默病(AD)发病中的变化及其可能机制。方法将β淀粉样肽(Aβ1～40)1μl(10g L)在立体定位仪下注入大鼠海马建立大鼠AD模型。2周后测水迷宫潜伏期、长时程增强(LTP)、原位杂交方法检测大鼠海马NMDAR mRNA的表达及免疫组织化学SABC法检测MAPK的蛋白表达,并应用显微图像分析系统对两者的表达进行分析。结果AD模型组Aβ注射2周后,水迷宫潜伏期与模型组术前及对照组相比显著延长(P<0.05);模型组刺激前后fEPSP斜率变化及高频刺激增加的幅值与对照组相比显著下降(P<0.01);模型组海马CA1区、CA3区NMDAR mRNA及MAPK蛋白的表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。相关性分析表明,AD模型2周后LTP检测的结果与NMDAR mRNA的表达及MAPK的蛋白表达呈正相关。结论Aβ通过抑制MAPK信号通路和降低NMDA受体磷酸化状态,导致大鼠海马LTP降低和学习记忆功能减低,参与AD学习记忆障碍和痴呆形成。

吡格列酮对淀粉样β蛋白片段1-42引起的大鼠海马有丝分裂原激活蛋白激酶p38信号传导通路变化的影响

目的探讨吡格列酮(Pio)对淀粉样β蛋白片段1-42(Aβ1-42)所致大鼠海马损伤的保护作用及其作用机制。方法大鼠随机分为正常对照组,Aβ1-42损伤组,Aβ1-42+Pio20,40及80mg·kg-1组。d1与d2,Pio处理组大鼠灌胃给予Pio,正常对照组和Aβ1-42损伤组灌胃给予0.2%二甲亚砜。d2给药处理后,Aβ1-42损伤组及Pio处理组大鼠左侧脑室内单次注射Aβ1-425μL(2.0mmo·lL-1)制备大鼠痴呆模型,正常对照组注射等量生理盐水。继续给药6d,处死大鼠,取海马CA1区,Western蛋白印迹法观察磷酸化有丝分裂原激活蛋白激酶激酶3/6(MKK3/6)、磷酸化有丝分裂原激活蛋白激酶P38(p38MAPK)、磷酸化活化转录因子2(ATF-2),磷酸化有丝分裂原激活蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MAPKAPK-2)和磷酸化热休克蛋白27(HSP27)的蛋白表达水平的改变。结果脑室内注射Aβ1-42可引起海马CA1区磷酸化的MKK3/6、磷酸化的p38MAPK和磷酸化的ATF-2表达明显增加,而磷酸化的MAPKAPK-2和磷酸化的HSP27表达明显降低。Pio可明显抑制Aβ1-42引起的磷酸化的MKK3/6、磷酸化的p38MAPK和磷酸化的ATF-2表达的增加;逆转Aβ1-42引起的磷酸化的MAPKAPK-2和磷酸化的HSP27表达降低的变化。结论Pio对Aβ1-42引起的海马神经损伤的保护作用可能与其抑制Aβ1-42引起的磷酸化p38MAPK信号传导通路的改变有关。

肢体缺血预处理通过激活有丝分裂原激活蛋白激酶p38减轻脑缺血导致的大鼠海马CA1区神经元凋亡和脑水肿(英文)

目的旨在探讨肢体缺血预处理(LIP)能否减轻脑缺血过程中海马CA1区神经元凋亡和脑水肿。方法72只永久凝闭椎动脉的Wistar大鼠随机分为6组:假手术,LIP(双侧股动脉夹闭10min,间歇10min,3次循环),脑缺血,LIP+脑缺血,DMSO和SB 203580+LIP+脑缺血组。各组大鼠中6只在脑缺血后3d处死,TUNEL染色计数凋亡细胞;6只在脑缺血后24h处死,测定脑组织含水量。结果TUNEL染色显示,假手术和LIP组海马CA1区偶有TUNEL阳性细胞;脑缺血组海马CA1区可见大量棕黄色着色的TUNEL阳性细胞,与假手术组及LIP组相比,细胞数量明显增加;LIP+脑缺血组,TUNEL阳性神经元数与脑缺血组相比明显减少,提示LIP明显抑制缺血引起的海马CA1区锥体细胞凋亡;有丝分裂原激活蛋白激酶p38拮抗剂SB 203580+LIP+脑缺血组,海马CA1区阳性染色锥体细胞明显增加,与DMSO+LIP+脑缺血组相比有显著性差别,表明SB 203580可拮抗LIP抑制凋亡的作用。与假手术和LIP组比较,脑缺血组脑组织含水量明显增加,表明LIP降低了脑缺血引起的脑组织含水量增加;LIP前应用SB 203580可抑制LIP的脑保护作用,使脑组织含水量较LIP+脑缺血组显著增加。结论LIP能够减轻脑缺血过程中海马CA1区神经元凋亡和脑水肿,可能与活化有丝分裂原激活蛋白激酶p38有关。

p38丝裂原激活蛋白激酶抑制剂对脓毒症早期大鼠心肌中炎性因子和细胞凋亡蛋白表达的影响

目的探讨脓毒症时心肌损害的原因及p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)抑制剂的保护作用。方法将84只雄性SD大鼠随机分为对照组、实验组和治疗组(n=28)。实验组和治疗组采用腹腔注射内毒素(10 mg/kg)制作脓毒症模型,治疗组同时加p38MAPK抑制剂SB203580予以干预,对照组腹腔注射生理盐水。在不同时间点观察大鼠血清脑钠素(BNP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的浓度及心肌组织中TNF-α、IL-6、凋亡蛋白caspase-9的表达情况。结果实验组大鼠血清TNF-α、IL-6进行性升高。对照组心肌组织中仅有微量TNF-α、IL-6及caspase-9表达,而实验组心肌组织中则大量表达。血清TNF-α、IL-6浓度及心肌中caspase-9的表达与心肌损害程度呈显著正相关。应用SB203580后,治疗组血清TNF-α、IL-6浓度显著降低,心肌中caspase-9的表达也减少。但各组血清BNP浓度之间差异无统计学意义,均在正常范围之内。结论 TNF-α、IL-6的大量释放及其在心肌中的表达是脓毒症心肌损害的原因之一,p38MAPK抑制剂SB203580可对脓毒症大鼠心肌损害起保护作用。

肿瘤坏死因子-α激活人肺微血管内皮细胞p38丝裂原激活蛋白激酶信号通路

目的 建立体外人肺微血管内皮细胞 (HPMEC)培养技术 ,观察肿瘤坏死因子 α(TNF α)对HPMECp38丝裂原激活蛋白激酶 (MAPK)活性的影响。方法 ( 1)建立体外人肺微血管内皮细胞培养模型 ;( 2 )采用Westernblot和免疫复合物激酶技术检测TNF α对HPMECp38MAPK的活化作用。结果 ( 1)TNF α可迅速诱导HPMECp38MAPK的磷酸化和活化 ,在一定程度上呈时间、剂量依赖关系 ;( 2 )p38MAPK特异性阻断剂———SB2 0 35 80可显著抑制由TNF α诱导的p38MAPK活化。结论 TNF α激活p38MAPK信号通路 。

促丝裂原激活蛋白激酶在牙髓干细胞向成牙本质细胞分化和牙髓损伤修复中的作用

通过诱导牙髓干细胞(DPSC)向成牙本质细胞方向分化,龋源性牙髓炎的治疗将不再局限于根管治疗这一临床选择,修复治疗也不再成为缺失牙治疗的唯一方案。促丝裂原激活蛋白激酶(MAPK),尤其是P38MAPK通过直接或间接磷酸化特定的转录因子,将细胞外刺激信号转导至细胞及其核内,从而引起一系列细胞生物学反应,如细胞增殖、分化、转化和程序性死亡。骨形态发生蛋白-2、矿物三氧化物聚合体和Biodentine皆可诱导DPSC向成牙本质细胞分化,而三者正是通过MAPK信号转导通路发挥作用的。在组织工程支架诱导DPSC分化过程中,支架材料通过激活P38MAPK信号转导通路促进了DPSC的分化。此外,MAPK信号转导通路参与牙髓损伤修复中DPSC的迁移、黏附和分化,参与牙髓损伤修复中牙本质的形成。由于MAPK信号转导通路在细胞增殖、分化和生存等过程中都起着十分关键的作用,因此,深入研究其反应分子、作用底物和作用机制有着重要的理论和临床意义。

藏雪莲多糖通过P38丝裂原激活蛋白激酶通路减轻中波紫外线辐射后皮肤角质形成细胞凋亡引起炎性损伤的研究

目的探讨藏雪莲(SSB)多糖是否通过P38丝裂原激活蛋白激酶(P38MAPK)通路减轻中波紫外线(UVB)辐射后皮肤角质形成细胞(Ha Ca T细胞)凋亡引起炎性损伤。方法 2014年10月—2015年3月,提取SSB多糖,体外培养Ha Ca T细胞,将Ha Ca T细胞分为低剂量辐射组(30 m J/cm2,辐射1 h,A组)和高剂量辐射组(60 m J/cm2,辐射1 h,B组);将A组和B组又分别分为对照组(1组)、辐射组(UVB,2组)、低剂量SSB多糖组(UVB+SSB 10 mg/ml,3组)和高剂量SSB多糖组(UVB+SSB 40 mg/ml,4组)。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测并比较白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、P38MAPK、P53、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)水平。结果 A2组IL-6、TNF-α、P38MAPK、P53、Bax、Caspase-3水平高于A1组,Bcl-2水平低于A1组(P<0.05);A3组IL-6、TNF-α、P38MAPK、Caspase-3水平高于A1组(P<0.05);A4组TNF-α、Bcl-2水平高于A1组(P<0.05);A3组、A4组IL-6、TNF-α、P38MAPK、P53、Bax、Caspase-3水平低于A2组,Bcl-2水平高于A2组(P<0.05);A4组IL-6、TNF-α、Caspase-3水平低于A3组,Bcl-2水平高于A3组(P<0.05)。B2组IL-6、TNF-α、P38MAPK、P53、Bax、Caspase-3水平高于B1组,Bcl-2水平低于B1组(P<0.05);B3组IL-6、TNF-α水平高于B1组,Bcl-2水平低于B1组(P<0.05);B4组IL-6、Bcl-2水平高于B1组,TNF-α、Caspase-3水平低于B1组(P<0.05);B3组、B4组IL-6、TNF-α、P38MAPK、P53、Bax、Caspase-3水平低于B2组,Bcl-2水平高于B2组(P<0.05);B4组IL-6、TNF-α、Caspase-3水平低于B3组,Bcl-2水平高于B3组(P<0.05)。结论 SSB多糖通过P38MAPK通路减少UVB辐射后Ha Ca T细胞凋亡,进而减轻Ha Ca T细胞的炎性损伤。

p38丝裂原激活蛋白激酶对人胚胎肾293细胞一氧化氮合酶基因转录的调控

目的探讨p38 丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)家族四种亚型对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因的转录调控。方法以人胚胎肾293(HEK 293)细胞为靶细胞,采用脂质体(LPS)介导的细胞基因共转染技术、荧光素酶报告基因技术,分别将FLAG-tagged p38 MAPK 4种亚型、含有鼠iNOS基因启动子区的荧光素酶报告基因质粒(piNOS-Luc)、空载体(pcDNA3)、β-半乳糖苷酶表达质粒(pCMV-β)共转染,检测并比较荧光素酶相对活性。结果(1)未加刺激时,在HEK 293细胞中,p38 MAPK中仅有p38α能够诱导iNOS基因启动子的转录活性;(2)在LPS刺激下,p38 MAPK 4种亚型均能够诱导iNOS启动子的转录活性,其中,p38β所诱导的转录活性最高,p38α的诱导作用亦很明显。结论(1)LPS能够在HEK 293细胞中诱导iNOS基因转录活性;(2)在HEK 293细胞中,p38 MAPK参与了静息时及LPS刺激下对iN-OS基因的转录调控。

落新妇苷对心脏移植排斥反应中活化T细胞p38丝裂原激活蛋白激酶信号传导通路的影响

目的:用小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型,探讨落新妇苷对心脏移植排斥反应中活化T细胞p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)信号传导通路的影响。方法:分离BALB/C小鼠心肌细胞(2×105个.mL-1)和C57BL/6小鼠的脾细胞(1×106个.mL-1),前者做刺激细胞,后者做反应细胞,进行混合细胞培养,建立小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型。实验分3组:对照组,心肌细胞与脾细胞混合培养;落新妇苷组,在对照组基础上加入落新妇苷(15mg.L-1);落新妇苷加p38MAPK抑制剂组,在对照组基础上加入落新妇苷(15mg.L-1)和p38MAPK抑制剂SB203580(5μmol.L-1)。TUNEL法检测T淋巴细胞凋亡情况。RT-PCR和Western blot法检测T细胞p38MAPK表达情况。结果:落新妇苷组T细胞凋亡指数和p38MAPK表达均明显高于对照组(P<0.01)。落新妇苷加p38MAPK抑制剂组T细胞凋亡指数和p38MAPK表达均明显低于落新妇苷组(P<0.01),而与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论:落新妇苷诱导心脏移植排斥反应中活化T细胞凋亡与其激活p38MAPK信号传导通路有关。

p38丝裂原激活蛋白激酶基因重组慢病毒载体的构建及其在建立人前列腺癌稳定细胞株中的应用

目的构建p38丝裂原激活蛋白激酶基因(MAPK)重组慢病毒载体并建立表达外源性p38基因的人前列腺癌稳定细胞株。方法采用限制性内切酶酶切、T4 DNA连接酶连接等方法,将EGFP/p38融合基因插入慢病毒载体pTYF-EF1α-IRES-EGFP中,构建启动子EF1α调控的EGFP/p38共表达慢病毒载体pTYF-EF1α-EGFP/p38,经酶切鉴定后,利用慢病毒三质粒系统,通过脂质体法转染包装细胞HEK 293T细胞,收集病毒上清后转导人前列腺癌DU145细胞株,经有限稀释法筛选重组EGFP/p38稳定细胞株,用Western blotting检测细胞总p38的表达,用计数法绘制细胞的生长曲线。结果经酶切鉴定,成功构建EGFP/p38重组慢病毒载体,并包装慢病毒,检测病毒悬液的滴度为4.7×106 TU/ml,利用此病毒悬液感染DU145细胞,成功筛选到EGFP/p38稳定表达细胞株,Western blotting显示该细胞株能稳定表达外源性EGFP/p38融合蛋白,这种过表达p38的细胞株的生长速度明显低于对照组。结论成功构建p38 MAPK重组慢病毒载体并建立了表达外源性p38 MAPK基因的稳定细胞株EGFP/p38-DU145,细胞内p38过表达能够抑制DU145细胞的增殖。

丝裂原激活蛋白激酶在内毒素脂多糖诱导大鼠施万细胞一氧化氮合酶表达中的作用

目的主要研究丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号途径在内毒素脂多糖(LPS)诱导大鼠施万细胞(Scs)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达和一氧化氮(NO)产生中的作用。方法先用3种MAPK的特异性抑制剂PD98059(ERK1/2)、SB202190(P38MAPK)和SP600125(JNK)以不同浓度预处理细胞1h,再用LPS作用施万细胞4h后,用RT-PCR检测细胞中iNOS mRNA、IL-6mRNA和TNF-αmRNA的表达;Western blotting观察iNOS蛋白水平的表达变化;通过测定细胞培养液中亚硝酸盐含量来观察NO的水平。结果LPS可显著激活施万细胞中MAPK信号通路诱导iNOS表达。MAPK的抑制剂预处理细胞后,可显著抑制细胞iNOS mRNA和NO的合成及IL-6mRNA和TNF-αmRNA的表达。结论MAPK信号通路参与了LPS介导的大鼠施万细胞iNOS基因表达和NO产生,通过阻断细胞内信号转导通路来减少iNOS及其他细胞因子的产生,为抑制周围神经损伤后的炎症以及免疫反应发生提供了一条新思路。

大麻素受体1拮抗剂利莫那班对肉仔鸡下丘脑食欲调控因子和腺苷酸激活蛋白激酶基因表达的影响

研究旨在探讨大麻素受体1(CB1)拮抗剂利莫那班(SR141716)对肉仔鸡下丘脑食欲调控因子和腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)基因表达的影响。选取1日龄体重相近的健康爱拔益加(AA)肉仔鸡20只,7日龄时随机分为2个组,进行第3脑室埋管,恢复3 d。10日龄08:00试验组以1μg剂量脑室注射SR141716,对照组同时注射等量的二甲基亚砜(DMSO)。统计每只鸡在注射后2 h的采食量,然后采集血液和下丘脑样品,测定血清中丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶活性及葡萄糖、尿酸、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇含量,利用荧光定量PCR技术检测下丘脑中AMPKα1、AMPKα2以及食欲调控相关基因厌食神经肽(POMC)、促食神经肽Y (NPY)、刺鼠色蛋白相关蛋白(AgRP)、可卡因和苯丙胺调节转录物(CART)的基因表达量。结果表明:1)与对照组相比,肉仔鸡脑室注射SR141716后,2 h内的采食量显著降低(P<0.05)。2)与对照组相比,肉仔鸡脑室注射SR141716显著提高了血清中低密度脂蛋白胆固醇含量(P<0.05),对其他血清生化指标无显著影响(P>0.05)。3)与对照组相比,肉仔鸡脑室注射SR141716显著降低了下丘脑AMPKα1、AMPKα2、POMC和AgRP的基因表达量(P<0.05),显著提高了下丘脑CART的基因表达量(P<0.05),对下丘脑NPY的基因表达量无显著影响(P>0.05)。由此可见,脑室注射CB1受体拮抗剂SR141716可降低肉仔鸡食欲,并影响中枢AMPK及其下游食欲调控因子POMC的基因表达;中枢通过抑制促食神经肽AgRP和提高抑食神经肽CART的基因表达,参与肉仔鸡食欲调控。

丝裂素原激活蛋白激酶途径在内毒素激活枯否细胞中的作用

目的 :探讨丝裂素原激活蛋白激酶 (MAPKs)途径在脂多糖 (L PS)激活枯否细胞 (KC)中的作用。方法 :用 3种 MAPK通路阻滞剂 ,测定其后培养 KC中肿瘤坏死因子 α m RNA(TNFα m RNA)、白介素 6m RNA (IL 6 m RNA )以及诱生型一氧化氮合酶 (i NOS)表达和 TNFα、IL 6以及 NO的释放。结果 :1ERK1/ 2途径抑制剂 (PD0 980 5 9)对 KC中 TNFα m RNA表达和 TNFα的释放影响极小 ,而对 IL 6m RNA和 i NOS的表达以及 IL 6和 NO的释放有明显的抑制作用 ;2 p38MAPK途径抑制剂 (SB2 0 35 80 )对KC中 TNFα m RNA和 IL 6 m RNA表达以及 IL 6和 TNFα的释放影响极小 ,而对 i NOS的表达和 NO的释放有明显的抑制作用 ;3当用 SB2 0 2 4 74抑制整个 MAPK途径时 ,KC中 TNFα、IL 6 m RNA和 i NOS的表达和 TNFα、IL 6以及 NO的释放均明显降低。结论 :TNFα m RNA表达和 TNFα的释放主要受MAPK途径中的 JNK/ SAPK途径的调节 ,IL 6 m RNA表达和 IL 6的释放主要受 MAPK途径中的 ERK1/ 2和 JNK/ SAPK通路的调节 ,而 i NOS的表达和 NO的释放可能与以上 3种途径均有关系。

基于芯片数据分析丝裂原激活蛋白激酶信号通路基因在不同证候H22肝癌小鼠肾上腺的表达差异

目的:探索丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路基因在不同证候H22肝癌荷瘤小鼠肾上腺的表达特征。方法:采用小鼠标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22肝癌小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共4个证候肾上腺基因表达的差异,分析不同证候小鼠肾上腺组织MAPK信号通路的表达特征。结果:与正常小鼠比较,①肝癌小鼠各证候中,ERK通路、p38/MAPK通路、ERK5通路基因在肾上腺中表达升高;②JNK通路基因在各证候肝癌小鼠肾上腺中表达下降;③其他级联激酶基因在MAPK信号通路中表达也下降。结论:H22肝癌小鼠肿瘤发生后,其肾上腺组织MAPK信号转导中与TGF-β相关的p38/MAPK通路被激活,而JNK通路被抑制;另外两条ERK与ERK5通路同样也被激活。提示不同证候肝癌小鼠的肾上腺组织主动参与了MAPK信号转导过程。

补阳还五汤通过抑制p38有丝分裂原激活蛋白激酶通路改善大鼠缺血性脑损伤

目的：探讨补阳还五汤针剂对缺血性脑卒中的治疗作用及机制.方法：大鼠分为假手术组,模型组,补阳还五汤高、低剂量组.参照Zea-Longa线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型.术后H-E染色观察海马区神经细胞形态变化,免疫组织化学法和免疫印迹法检测海马区磷酸化有丝分裂原激活蛋白激酶（p38MAPK）和环氧化酶-2（COX2）表达,原位缺口末端标记法（TUNEL）检测凋亡细胞.伤后3～7d水迷宫法测试动物学习记忆功能.结果：与对照组比较,脑缺血后海马区神经元结构损伤明显、磷酸化p38MAPK水平（术后1、6、24h）、COX2蛋白（术后1、6、24、48h）、凋亡神经细胞数量（6、24、48、72h）增加;大鼠的学习记忆功能下降;与模型组比较,补阳还五汤组中大鼠的学习记忆功能改善,神经元形态结构损伤减轻,磷酸化p38MAPK、COX2蛋白以及神经细胞凋亡数量下降,上述变化在高剂量补阳还五汤组更为明显.结论：补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤有很好的治疗作用,其机制与调控p38MAPK/COX2信号通路,抑制神经细胞凋亡有关.

腺苷酸激活蛋白激酶在大鼠酒精性肝病中的表达减少

目的观察酒精对大鼠肝脏腺苷酸激活化蛋白激酶(AMPK)表达水平的影响及意义。方法雄性Wistar大鼠50只,随机分为模型组和对照组,模型组采用乙醇灌胃法,分别于4、8、12和16周末随机分批处死,检测其血清ALT、AST、CHE、TG、TC、LDL、VLD和HDL;应用HE、天狼红及苏丹Ⅳ染色观察肝组织病理变化;应用免疫组织化学染色、RT-PCR法检测AMPK、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和固醇调节原件结合蛋白(SREBP)及其mRNA的表达。结果随着造模时间延长,大鼠血清ALT、AST、TG、TC和LDL水平逐渐升高,CHE和HDL水平逐渐降低;模型16周组肝组织中AMPK的表达为0.50±0.094,显著低于对照组的0.84±0.041,而ACC及SREBP表达逐渐多于对照组(P<0.05);肝组织AMPK与ACC及SREBP的表达呈负相关(P<0.01)。结论酒精性肝病中AMPK表达减少,导致脂质合成增多,脂肪堆积于肝脏中,可能是造成肝脏损伤的重要因素。

腺苷酸激活蛋白激酶与肥胖大鼠肝脏脂质沉积的关系

目的探讨肥胖大鼠肝脏组织腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)的表达及其对肝脏脂质沉积的影响。方法选用18只刚断乳的SPF级SD雄性大鼠,随机挑选6只普通饲料喂养为正常组,另一组12只高脂饲料喂养,12 w后成功建立肥胖模型大鼠6只。分别检测体重、Lee指数、内脏脂肪、肝湿重等指标。通过油红O染色和检测肝脏甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量评估两组大鼠肝脏脂质沉积的情况。采用Western印迹检测大鼠肝脏磷酸化(p)-AMPK/AMPK、p-ACC/ACC水平。结果与正常组大鼠相比,肥胖组大鼠体重与Lee指数、附睾脂肪、肾周脂肪量、肝湿重、肝脏内TG与TC含量均显著升高,油红O染色结果显示肥胖组肝脏脂质沉积较正常组明显增多。Western印迹结果显示,与正常组大鼠比较,肥胖组大鼠肝脏p-AMPK/AMPK和p-ACC/ACC表达明显降低。两组大鼠肝脏组织中p-AMPK、p-ACC表达水平与肝脏TG、TC呈负相关。结论高脂饮食诱导食源性肥胖大鼠可降低AMPK的活性,从而导致肝脏组织TG、TC合成增加,脂质在肝脏组织中沉积增加。

丙型肝炎病毒核心蛋白下调AMP激活蛋白激酶对肝细胞脂类代谢的影响

目的探讨HCV核心蛋白对AMP激活蛋白激酶(AMPK)表达及肝细胞脂类代谢的影响。方法表达HCV核心蛋白的质粒转染HepG2细胞。分别应用液体闪烁计数仪、实时荧光定量-PCR(RT-PCR)、Western印迹检测AMPK活性、mRNA及蛋白的表达。试剂盒检测三酰甘油、总胆固醇(TC)的含量,液闪计数仪检测脂肪酸β氧化速度,流式细胞仪、硫代巴比妥酸比色法、黄嘌呤氧化酶法分别测定活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。RT-PCR检测AMPK下游调节脂类代谢的基因固醇调节元件结合蛋白(SREBP)-1c、脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、SREBP-2、羟甲基戊二酸单酰CoA还原酶(HMGR)、羟甲基戊二酸单酰CoA合成酶(HMGS)、过氧化物酶体增殖活化受体(PPAR)α、PPARγ、肉碱脂酰转移酶1(CPT1)mRNA水平。结果与转染空载体的HepG2细胞相比,表达HCV核心蛋白HepG2细胞AMPKα2活性(0.2±0.05比1.0±0.2,t=9.505,P<0.01)、AMPKα2 mRNA(0.3±0.1比1.0±0.3,t=5.422,P<0.01)及磷酸化-AMPK蛋白的表达水平(0.25±0.05比0.6±0.2,t=4.159,P<0.01)明显下降,细胞内三酰甘油含量[(78.5±20.5)μg/mg比(40.5±11.0)μg/mg,t=4.078,P<0.01]和TC含量[(52.5±13.0)μg/mg比(32.0±8.5)μg/mg,t=3.233,P<0.01]明显升高,脂肪酸β氧化速度[(1.80±0.40)nmol·mg-1·h-1比(3.10±0.60)nmol·mg-1·h-1,t=4.416,P<0.01]明显减慢,ROS水平(3.8±0.7比1.0±0.2,t=9.421,P<0.01)明显升高,MDA含量[(8.50±2.40)nmol/mL比(3.00±0.60)nmol/mL,t=5.446,P<0.01]明显升高;SOD活性[(9.60±2.50)U/mL比(15.50±3.00)U/mL,t=3.764,P<0.01]明显降低。脂肪酸、胆固醇合成的相关基因SREBP-1c mRNA水平(1.9±0.4比1.0±0.3,t=4.409,P<0.01)、FAS mRNA水平(3.0±0.6比1.0±0.3,t=7.303,P<0.01)、ACC mRNA水平(2.6±0.5比1.0±0.3,t=6.721,P<0.01)、SREBP-2 mRNA水平(2.3±0.5比1.0±0.2,t=5.913,P<0.01)、HMGR mRNA水平(1.9±0.4比1.0±0.2,t=4.929,P<0.01)和HMGS mRNA水平(2.6±0.7比1.0±0.2,t=5.383,P<0.01)明显升高,脂肪酸β氧化的相关基因PPARα mRNA水平(0.3±0.1比1.0±0.3,t=6.971,P<0.01)和CPT1A mRNA水平(0.4±0.1比1.0±0.2,t=6.573,P<0.01)明显下降。结论 HCV核心蛋白下调AMPK活性及表达,改变其下游调节脂类代谢相关基因表达,增加三酰甘油和TC合成,减少脂肪酸β氧化,增加脂质过氧化,导致肝细胞脂类代谢紊乱。