结直肠癌转录因子激活蛋白2α和2β表达与腹腔镜下根治术后复发的临床关系

目的探讨结直肠癌转录因子激活蛋白2α(TFAP-2α)和转录因子激活蛋白2β(TFAP-2β)表达与腹腔镜下根治术后复发的临床关系。方法选取该院收治的147例行腹腔镜根治术的结直肠癌患者作为研究对象,采用免疫组化法检测TFAP-2α和TFAP-2β表达。根据患者术后3年的复发情况,将其分为复发组和未复发组,比较癌组织与切缘正常组织、复发组与未复发组中TFAP-2α和TFAP-2β的表达,并采用Cox回归分析法探讨术后复发的影响因素。结果结直肠癌患者癌组织与切缘正常组织相比,TFAP-2α和TFAP-2β阳性表达率较低(P<0.05)。随访期间,结直肠癌患者术后复发率为23.13%。复发患者与未复发患者相比,癌组织TFAP-2α和TFAP-2β阳性表达率较低,以及病理分期T3至T4期、N1至N2期和血管侵犯占比较高(P<0.05);经Cox回归分析显示,病理分期T3至T4期、N1至N2期、血管侵犯占比较高,以及癌组织TFAP-2α、TFAP-2β阳性表达率降低,是结直肠癌患者腹腔镜下根治术后复发的危险因素(P<0.05)。结论结直肠癌患者癌组织TFAP-2α和TFAP-2β阳性表达率较低,两者阳性表达率降低,以及病理分期T3至T4期、N1至N2期和血管侵犯占比较高,是结直肠癌患者腹腔镜下根治术后复发的危险因素。

福尔马林致痛大鼠脊髓去甲肾上腺素能神经元及其激活蛋白2α的表达变化

目的观察疼痛应激时,脊髓去甲肾上腺素(noradrenaline,NA)能神经元的形态、分布、数量和激活蛋白2α(AP-2α)的表达变化,以探讨NA参与痛觉调制的分子机制。方法应用免疫组化、免疫荧光双标、Western blotting和计算机图像分析方法检测福尔马林诱导致痛模型大鼠脊髓多巴胺-β-羟化酶(dopamine-β-hydroxylase,DBH)和AP-2α的表达变化。结果正常脊髓内NA能神经元主要分布于脊髓前角,模型鼠脊髓前角、中间带和后角均出现大量深染的DBH阳性神经元,3 d时达到高峰,至第7天时DBH阳性神经元数有所下降,但仍高于正常水平。图像分析和统计学分析表明,DBH阳性神经元的数量和染色强度明显增加,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05);Western blotting结果证实DBH不同时段的表达变化规律与上述形态学变化一致。AP-2α的表达变化与DBH的表达变化规律具有显著的相似性。免疫荧光双标显示DBH和AP-2α共存于脊髓神经元内。结论在疼痛等应激状态下,脊髓前角NA能神经元内DBH表达明显增强;且中间带和后角新出现大量DBH阳性神经元,推测这些区域内一些神经元可能发生了化学性质的改变,由非NA能神经元转化为NA能神经元;而上述区域内AP-2α表达随着DBH表达增强而增加,提示NA与AP-2α在痛觉的调制和调控中发挥重要作用。

非小细胞肺癌组织中TP酶激活蛋白SH3功能结合蛋白2的表达及临床意义

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织和细胞中TP酶激活蛋白SH3功能结合蛋白2(G3BP2)的表达情况,分析G3BP2对NSCLC细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法收集NSCLC患者120例,腺癌47例,鳞状细胞癌73例。免疫组织化学检测腺癌、鳞状细胞癌组织中G3BP2的表达情况,分析G3BP2表达与患者临床病理特征的关系。蛋白免疫印迹实验和qRT-PCR检测SPC-A-1、16HBE细胞中G3BP2的表达。对NCI-H226、SPC-A-1细胞转染si-NC、si-G3BP2质粒,检测敲低G3BP2对细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。结果腺癌组织和鳞状细胞癌组织中G3BP2的阳性表达率无统计学差异(P>0.05),G3BP2阳性与TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。NCI-H226和SPC-A-1细胞中G3BP2蛋白及mRNA的表达高于16HBE细胞。敲低G3BP2可明显抑制NCI-H226、SPC-A-1细胞的增殖和侵袭并增强细胞凋亡。结论G3BP2在NSCLC组织中的阳性表达与TNM分期、淋巴结转移有关,敲低G3BP2的表达可显著抑制NSCLC的进展。

黄姑鱼转录因子激活蛋白AP2α的克隆和特征分析

转录因子激活蛋白AP2α是一类能特异地结合DNA的核转录因子,参与动物胚胎发育的调节、细胞生长、细胞凋亡、肿瘤发生以及免疫反应等多种生物过程。课题组前期通过基因组关联分析(GWAS)发现,AP2α是黄姑鱼(Nibea albiflora)抗哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的候选基因。本研究克隆了黄姑鱼转录因子AP2α,其开放阅读框(ORF)为1275 bp,编码424个氨基酸;所编码的AP2α蛋白质N端是富含脯氨酸和谷氨酰胺(P/Q-rich domain)的反式激活结构域,中间是中心基本结构(central basic region),C端为高度保守的helix-span-helix基序,负责结合DNA和蛋白质二聚化。氨基酸序列多重比对表明,AP2α保守性强,与所检测的鱼类、两栖类、鸟类和哺乳动物同源性在84.63%以上。实时荧光定量PCR检测结果显示,AP2α基因的mRNA广泛分布于所检测的黄姑鱼9种组织样品中,其中血液中的表达量最高;受哈维氏弧菌攻毒感染后,肝脏、脾脏和头肾中AP2α表达量均明显升高,特别是在肝脏中,AP2αmRNA表达水平在24 h时达到攻毒前的39倍。通过构建重组真核表达质粒pGEFP-AP2α并转染HEK293T细胞进行亚细胞定位研究的结果显示,AP2α分布于HEK293T细胞的细胞核中。进一步通过原核克隆表达获得了可溶性的GST-AP2α融合蛋白。以上结果表明,AP2α在黄姑鱼抵御哈维氏弧菌感染过程中发挥重要作用。本研究对AP2α在硬骨鱼类先天免疫中的重要功能提供了新的见解,为深入研究黄姑鱼的分子免疫机理和抗病分子育种奠定了基础。

microRNA-200c靶向抑制转录因子激活蛋白2α表达增强结肠癌细胞增殖能力的体外研究

目的 探讨hsa-microRNA-200c对结肠癌细胞增殖能力影响的作用及相关机制.方法 利用生物信息学数据库筛选可能与转录因子激活蛋白2α （AP-2α）特异性结合的microRNA并合成其真核表达质粒与特异干扰序列.利用脂质体介导将质粒PEZX-miR-200c、PEZX-NC、pmir-GLO-AP-2 α3＇UTR、pmir-GLO与干扰序列miR-67-inhibtor、miR-200c-inhibitor转染至结肠癌HCT-116、SW480、HEK-293T细胞中.用实时荧光定量PCR法、Westem blot法和免疫细胞化学染色法检测细胞中AP-2α表达情况,用CCK-8法检测细胞增殖情况,用PE标记流式细胞术检测细胞凋亡情况;用双荧光素酶活性检测法判断miR-200c与AP-2 α的相互作用.结果 转染miR-200c-inhibitor的SW480（anti-miR-200c/SW480组）细胞增殖能力低于转染miR-67-inhibitor组（anti-miR-67/SW480组）,同时凋亡水平高于anti-miR-67/SW480组[（78±0.7）％比（66±1.1）％,P＜ 0.05],anti-miR-200c/SW480组AP-2α蛋白表达量高于anti-miR-67/SW480组（0.49±0.01比0.09±0.08,P＜0.05）.转染PEZX-miR-200c表达质粒组HCT-116细胞（PEZX-miR-200c/HCT-116组）增殖能力高于转染PEZX-NC组（PEZX-NC/HCT-116组）,同时AP-2 α的mRNA和蛋白量均降低（0.67±0.07比0.51±0.09,P＜0.05）.共转染PEZX-miR-200c与pmirGLO-AP-2 α-3＇ UTR质粒组（共转实验组）HEK-293T细胞相对荧光素酶活性值明显低于共转染PEZX-miR-200c与pmir-GLO-AP-2α-3＇ UTR-deleted组（共转对照组）HEK-293T细胞（0.51±0.09比0.98±0.04,P＜ 0.01）.结论 结肠癌细胞中miR-200c通过抑制AP-2 α转录后水平的表达活性增强细胞体外增殖能力.

乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活蛋白2基因的克隆化研究

目的 :应用抑制性消减杂交 (SSH )技术及生物信息学 (bioinformatics)技术筛选并克隆乙型肝炎病毒(HBV)前 S1蛋白 (pre S1)反式激活新型靶基因 ,进一步阐明HBV感染相关疾病的发病机制。方法 :以HBV前 S1蛋白表达质粒 pcDNA3 1( -) pre S1转染HepG2细胞 ,以空载体 pcDNA3 1( -)为平行对照 ,提取mRNA并进行抑制性消减杂交分析。并应用分子生物学技术 ,结合生物信息学技术 ,克隆HBV前 S1反式激活作用的新的靶基因。结果 :对于所获基因片段序列分析表明 ,其中之一为新型基因片段。从HepG2细胞提取总RNA ,以逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列 ,并测序证实 ,因其可以被前 S1蛋白反式激活 ,故命名为前 S1反式激活蛋白 2 (PS1TP2 ) ,已在GenBank中注册 ,注册号 :AY42 6673。PS1TP2基因的编码序列全长为 5 73个核苷酸 (nt) ,编码产物由 190个氨基酸残基 (aa)组成。结论 :HBV前 S1蛋白在HBV进入宿主细胞的过程中起着重要作用 ,最近的研究表明前 S1蛋白还具有反式激活的作用 ,上调宿主细胞某些基因的表达 ,从而改变宿主正常的免疫应答水平 ,引起病变。HBV前 S1反式激活新靶基因的发现 ,为进一步研究HBV前

激活蛋白-2α在鼻咽癌患者表达的作用及意义

目的探讨激活蛋白-2α的表达与鼻咽癌预后的关系,为指导个体化治疗提供依据。方法采用免疫组织化学技术检测激活蛋白-2α在鼻咽癌组织切片中的表达情况,并结合鼻咽癌患者的临床病理因素及预后进行分析。结果激活蛋白-2α在129例鼻咽癌组织切片中,阳性表达率为87.6%(113/129),阴性率、低度表达率、中度表达率、高度表达率分别为12.4%(16/129),21.7%(28/129),40.3%(52/129),25.6%(33/129)。单因素分析显示激活蛋白-2α表达性质与鼻咽癌的总生存时间相关,激活蛋白-2α表达阳性的患者5年生存率高于表达阴性的患者,两组差异有统计学意义(P=0.049)。多因素分析结果显示,临床分期是鼻咽癌的独立预后因素(P=0.012)。结论激活蛋白-2α在鼻咽癌发生、发展中具有重要作用。激活蛋白-2α在分期较高的组织中阳性率更高,同时阳性表达的患者更易发生远处转移。提示激活蛋白-2α可能是鼻咽癌的一个预后分子指标。

激活蛋白-2在非小细胞肺癌组织的表达及意义

目的 :研究激活蛋白 2 (AP 2 )在非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达及其与肿瘤生物学特征的关系。方法 :采用免疫组织化学法 (ABC法 )对 5 0例NSCLC和 1 5例远离肿瘤的正常肺组织中AP 2蛋白的表达状况进行检测 ,分析其在NSCLC和正常肺组织中表达以及与病理分级、组织学类型、淋巴结转移及临床分期的关系。结果 :①AP 2在正常肺组织无表达 ,在NSCLC组织表达阳性率为 32 % ,较正常对照明显增高 (P <0 .0 5 ) ;②AP 2表达增高与NSCLC的病理分级和临床分期相关。病理分级Ⅲ级者AP 2表达阳性率 (5 7.89% )高于病理分级Ⅰ～Ⅱ者(1 6 .1 3% ) (P <0 .0 5 )。临床Ⅲ～Ⅳ期表达阳性率 (4 4 .83% )高于临床Ⅰ～Ⅱ期者 (1 4 .2 9% ) (P <0 .0 1 ) ;有淋巴结转移组AP 2表达阳性率 (4 0 .5 4 % )高于无淋巴结转移组 (7.7% ) (P <0 .0 5 )。结论 :正常肺组织AP 2表达阴性 ,NSCLC癌组织AP 2表达阳性率明显高于正常肺组织。AP 2表达水平与NSCLC临床分期、病理分级、淋巴结转移有关 ,提示AP

中性粒细胞激活蛋白-2在大鼠哮喘中性粒细胞中的表达及意义

目的:观察大鼠哮喘中性粒细胞激活蛋白-2(NAP-2)蛋白在中性粒细胞(NEU)上的表达及地塞米松对其的影响,探讨NEU参与哮喘发病的可能作用机制。方法:采用大鼠哮喘模型,随机分成哮喘组、对照组、地塞米松治疗组,分离纯化血NEU,免疫组织化学法测定支气管和血NEU中NAP-2蛋白的表达水平。结果:哮喘组NEUNAP-2蛋白的平均光密度值(0.198±0.016)显著高于对照组值(0.079±0.015)(P<0.01);地塞米松治疗组的NEUNAP-2蛋白的平均光密度值(0.135±0.021)显著低于哮喘组且高于对照组(P<0.01)。哮喘组支气管NAP-2蛋白的平均光密度值(0.226±0.050)显著高于对照组值(0.140±0.012)(P<0.01);地塞米松治疗组的支气管NAP-2蛋白的平均光密度值(0.175±0.028)显著低于哮喘组且高于对照组(P<0.01或P<0.05)。NEUNAP-2蛋白的表达水平与支气管肺泡灌洗液NEU计数呈显著正相关(n=29,r=0.334,P<0.05)。结论:哮喘大鼠NEUNAP-2蛋白的表达水平增加,NEU可能通过NAP-2参与哮喘发病的炎症过程;地塞米松部分通过抑制NEUNAP-2的表达从而减轻气道炎症,NAP-2可能与NEU在肺组织中聚集有关。

沉默激活蛋白2α诱导结肠癌HCT-116细胞对奥沙利铂的抗药性

目的研究转录因子激活蛋白2α（Ap-2α）在结肠癌HCT-116细胞对奥沙利铂抗药性中的作用及相关机制。方法利用脂质体介导将Ap-201RNA干扰质粒GV102-Ap-2α-RNAi（实验组）及对照质粒GV102-NC（阴性对照组）转染至HCT-116细胞中；用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法与Westernblot法检测实验组、阴性对照组及未处理的HCT-116空白对照组AP-2α表达情况；用CCK-8法研究HCT-116细胞增殖情况；用PE标记流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果转染载有AP-2α—RNAi序列的质粒，干扰序列1干扰后Ap-2αmRNA与蛋白水平均下降最显著。奥沙利铂处理HCT-116细胞后Ap-2α蛋白水平随作用时间延长而升高，但mRNA变化不明显；奥沙利铂作用后实验组Ap-2α蛋白水平低于阴性对照组；CCK-8法结果提示奥沙利铂处理的实验组细胞增殖水平[（88±3）％]高于奥沙利铂处理的阴性对照组【（57±3）％]与空白对照组【（73±4）％]，同时流式细胞术结果表明奥沙利铂处理实验组细胞凋亡率[（15．07±1．20）％]低于奥沙利铂处理阴性对照组[（24．93±0．90）％】与空白对照组（23．71％±1．32％）。结论AP-2α表达降低可能与结肠癌细胞对奥沙利铂的抗药性有关。

转录因子激活蛋白-2α重组质粒的构建及其对肾透明细胞癌细胞增殖能力的影响

目的构建转录因子激活蛋白-2α(transcription factor AP-2 alpha,TFAP2α)重组真核质粒及其稳转细胞株,研究过表达TFAP2α对肾透明细胞癌细胞增殖能力的影响。方法采用反转录PCR方法从293T细胞全基因组DNA中扩增TFAP2α基因编码序列,运用质粒酶切、连接及转化构建重组真核质粒p LV-EGFP(2A)Puro-TFAP2α,测序鉴定。利用慢病毒包装系统将重组质粒转染入293T细胞,制备病毒悬液转染质粒入肾透明细胞癌细胞系786-O和Caki-2中,嘌呤霉素加压筛选,形成稳定转染细胞株后扩大培养,并通过实时定量PCR法和Western Blot法检测转染细胞中TFAP2α的m RNA和蛋白的表达。通过MTS实验、平板克隆实验和细胞周期检测,观察未转染质粒组、转染空载体组和转染重组质粒组细胞增殖和周期的变化。结果成功构建重组真核质粒p LV-EGFP(2A)Puro-TFAP2α和稳定转染过表达TFAP2α的786-O和Caki-2细胞株。重组质粒组TFAP2αm RNA表达水平和蛋白表达水平均明显高于未转染组和空载体组(P<0.05)。MTS实验中,重组质粒组490 nm处光吸收值较未转染组和空载体组显著降低(P<0.05)。平板克隆实验中,重组质粒组的平板克隆率较未转染组和空载体组亦显著降低(P<0.05)。与未转染组和空载体组比较,重组质粒组G_0/G_1期细胞比例显著升高(P<0.05),S期细胞比例显著降低(P<0.05),G_2/M期细胞比例无统计学差异(P>0.970)。结论过表达TFAP2α能明显降低肾透明细胞癌细胞系786-O和Caki-2细胞增殖能力,影响细胞周期变化,停留在G_0/G_1期的细胞明显增加,而S期的细胞明显减少,使其发生G_1/S期阻滞从而抑制细胞增殖。

多沙唑嗪通过转录因子激活蛋白-2α诱导HeLa细胞凋亡

目的研究α1-肾上腺素受体拮抗剂多沙唑嗪对HeLa细胞凋亡的影响以及转录因子激活蛋白-2α(activator protein-2α,AP-2α)在多沙唑嗪诱导HeLa细胞凋亡中发挥的作用。方法HeLa细胞经过多沙唑嗪处理、过表达AP-2α或反义寡核苷酸干扰AP-2α表达后,通过流式分析检测凋亡;以相对定量PCR和Western blot分析检测AP-2α和caspase-3的表达。结果多沙唑嗪以剂量依赖性方式增加HeLa细胞的凋亡率和总细胞死亡率,上调AP-2α和caspase-3的表达。AP-2α的过表达导致多沙唑嗪诱导的HeLa细胞的凋亡率和总细胞死亡率增加,增强caspase-3的表达;而反义AP-2α却导致多沙唑嗪诱导的HeLa细胞的凋亡率和总细胞死亡率降低,部分地阻断了多沙唑嗪对caspase-3表达的增强效应。结论多沙唑嗪以剂量依赖性方式诱导HeLa细胞凋亡,转录因子AP-2α在多沙唑嗪诱导的HeLa细胞凋亡中发挥了作用。

Ku70协同激活蛋白2α促进乳腺癌基因Her-2高表达的研究

目的探讨激活蛋白2α(activator protein 2alpha,AP-2α)和Ku70对乳腺癌基因人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,Her-2)表达的影响及意义。方法免疫组织化学分析70例乳腺癌组织中Ku70、AP-2α与Her-2蛋白的相关性;免疫共沉淀检测Ku70和AP-2α在乳腺癌细胞中的相互作用;siRNA抑制乳腺癌细胞MDA-MB-453中Ku70或/和AP-2α的表达,检测Her-2的表达及细胞增殖率变化。结果免疫组织化学分析显示,70例乳腺癌组织中,AP-2α高表达与Her-2表达相关(r=0.9399),Ku70的表达和Her-2水平弱相关(r=0.4363),Ku70与AP-2α均高表达时与Her-2表达相关(r=0.9563)。免疫共沉淀提示,Ku70和AP-2α在乳腺癌细胞中有相互作用;在基因和蛋白水平上,siRNA单独抑制AP-2α或Ku70的表达时,乳腺癌细胞Her-2mRNA和Her-2蛋白水平下降,同时抑制Ku70和AP-2α的表达时,Her-2mRNA和Her-2蛋白水平下降最显著(P<0.05);同时抑制Ku70和AP-2α的表达时细胞增值率明显低于单独抑制AP-2α或Ku70的表达(P<0.01)。结论本研究表明Ku70与AP-2α存在相互作用,在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中,Ku70协同AP-2α促进乳腺癌基因Her-2高表达,抑制Ku70或/和AP-2α可显著降低乳腺癌细胞的增殖,提示Ku70和AP-2α有望成为Her-2高表达乳腺癌治疗的新靶点。

转录因子激活蛋白-2α在肿瘤中的作用与研究进展

转录因子激活蛋白-2α(transcription factor AP-2 alpha,TFAP2α)是一种能与DNA特异性结合的转录因子,它参与调节正常细胞增殖分化及胚胎发育,并通过调控信号转导来开启、关闭、增强或减弱多种靶基因的表达,对肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭及转移发挥重要调控作用。近年来国内外对TFAP2α基因在肿瘤中的作用进行了大量研究,TFAP2α在多种肿瘤组织中存在异常表达,且表达程度与肿瘤类型、临床分期、病理分化程度等有着密切的关系,它在不同肿瘤中发挥促癌或抑癌的作用。本文重点介绍TFAP2α基因的结构和功能及其在肿瘤发生发展中的作用。

激活蛋白-2转录因子在乳腺癌中的作用

激活蛋白-2(AP-2)转录因子家族包括AP-2α、β、γ、δ和ε5个成员,在调节细胞增殖、分化和凋亡以及哺乳动物的胚胎发育中起到重要作用;近年研究发现激活蛋白-2与乳腺癌的发生相关,至少3个AP-2家族成员AP-2α、AP-2β和A P-2γ在乳腺癌中表达;抑制癌基因P53和WWox、转录共激活物、癌基因HER2的表达、以及AP-2蛋白质的翻译后修饰都参与调控AP-2在乳腺癌中的作用。

转录因子激活蛋白-2α在大肠癌组织的表达及意义

目的研究转录因子激活蛋白-2α(AP-2α)的表达在大肠癌发生发展过程中的作用。方法以60例大肠癌手术标本为研究对象,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法分别检测大肠癌和癌旁正常组织中AP-2α基因的mRNA表达水平;以60例大肠癌组织AP-2αmRNA的表达均值为界限,将大肠癌组织AP-2αmRNA表达分为高、低表达,比较不同临床资料、病理参数下大肠癌组织AP-2αmRNA的表达率。结果大肠癌组织中AP-2αmRNA表达水平显著低于癌旁正常组织(P<0.01);大肠癌组织AP-2αmRNA低表达率在不同性别、年龄、肿瘤部位患者差异均无统计学意义(P>0.05),但其表达降低或缺失与大肠癌的组织学分级、Duke's分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05,P<0.01)。结论转录因子AP-2α在大肠癌的发生发展过程中起重要作用,可能成为大肠癌防治的一个新靶点。

T淋巴细胞激活蛋白家族2对白细胞的调控作用

T淋巴细胞激活蛋白家族2(the linker for activator of T-cells family member 2,LAT2)蛋白是一个跨膜转接蛋白(transmembrane adaptor proteins,TRAPs),具有多个酪氨酸磷酸化位点和支架功能,可捕获细胞内下游转接蛋白和效应蛋白,发挥生物学作用。LAT2在白细胞中呈现“表达二分法”,参与白细胞的成熟分化和免疫应答。LAT2的差异性表达与白细胞的分化成熟,髓性白血病的类型和药物敏感度以及肿瘤的预后有关。本文就LAT2的基因克隆和表达、蛋白结构和功能及其在细胞中的作用以及可能机制进行综述。

转录因子激活蛋白-2在Buerger’s病中的表达与意义

目的:观察转录因子激活蛋白-2(transcription factor activator protein-2,AP-2)在Buerger’s病中的表达与分布。方法:临床收集2011年1月至2012年3月共23例行腰交感神经节切除术Buerger’s病患者腰交感神经节标本,应用RT-PCR、Western blot方法检测AP-2在Buerger’s病组中基因和蛋白的表达变化,使用免疫组化的方法检测AP-2在Buerger’s病组中的表达分布规律,以观察在该组中的表达特点。临床收集12例正常病例标本以同样方法处理。结果:RT-PCR和Western blot结果显示,与正常对照组中相比,Buerger’s病组中AP-2基因和蛋白表达水平具有统计学差异(P<0.05),免疫组化显示病理组AP-2表达高于正常组,主要分布在细胞核。结论:Buerger’s病组中AP-2水平升高,表明AP-2在Buerger’s病的发生与发展过程中可能发挥了重要作用。

转录因子激活蛋白-2α在急性肺损伤大鼠肺组织中的表达

目的观察转录因子激活蛋白-2α(AP-2α)在急性肺损伤(ALI)大鼠模型肺组织中的表达差异,为ALI的治疗提供新的思路。方法将40只健康SPF级成年SD大鼠,随机分成对照组(A组)、油酸组(B组)、盐酸组(C组)和脂多糖(LPS)组(D组)。A组:不做任何处理;B组:尾静脉注射高浓度(99%)油酸0.04 mL/kg;C组:经气管导管给予0.1 mol/L的盐酸1.0 mL/kg;D组:经气管导管给予LPS 16 mg/kg。均在4 h后,取动脉血清测定转化生长因子-β1(TGF-β1)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的浓度,立即处死大鼠后取肺组织光镜下进行病理学分析,并用免疫组化和Western blot方法检测AP-2α的阳性表达。结果 (1)在光镜下,与A组比较,B、C、D组均可见肺泡间隔增宽,有明显肺间质及肺泡水肿,肺泡腔内有浆液性渗出物及大量炎性反应细胞、红细胞渗出,部分可见"透明膜"样改变;B、C、D组肺组织光镜下病理评分均高于A组。(2)B、C、D组肺组织中AP-2α的表达较A组明显升高(P<0.05)。(3)B、C、D组动脉血清中TGF-β1和MCP-1浓度较A组明显升高(P<0.05)。结论 ALI大鼠模型动脉血清中的TGF-β1和MCP-1的含量明显升高;AP-2α的表达在ALI大鼠模型肺组织中存在明显升高,可能与ALI的发生、发展有关,为ALI的治疗提供新的思路。

人转录因子激活蛋白TFAP_2γ促进乳腺癌细胞生长

目的:构建带Flag标签的人转录因子激活蛋白2γ(TFAP_2γ)基因真核表达载体,获得Flag-TFAP_2γ蛋白,检测其对乳腺癌细胞生长的影响。方法:采用PCR技术从乳腺文库中扩增出人TFAP_2γ基因,并将其正确插入Flag载体;将重组质粒与空载体转染人乳腺癌细胞系ZR75-1和MCF-7细胞后,Western印迹检测表达情况,并进行生长曲线实验。结果:双酶切和测序鉴定表明,Flag-TFAP_2γ真核表达质粒构建成功,转染ZR75-1和MCF-7细胞后获得表达;生长曲线实验结果表明,TFAP_2γ可促进乳腺癌细胞的生长。结论:构建了带Flag标签的人TFAP_2γ基因真核表达载体,并能在乳腺癌细胞ZR75-1和MCF-7中表达,且能促进细胞的生长。本实验为进一步研究TFAP_2γ在乳腺癌中的功能奠定了基础。