人激活转录因子5基因真核表达载体的构建及其生物学功能研究

目的:构建带myc标签的人激活转录因子5(ATF5)的真核表达载体,获得myc-ATF5融合蛋白,并对其生物学功能进行初步检测。方法:以本实验室保存的带有XL5标签的ATF5质粒为模板,采用PCR技术扩增ATF5编码序列,将其插入pXJ-40-myc载体中,Western印迹检测其表达;将重组质粒与空载体分别转染人胚肾293T细胞,通过Western印迹和qRT-PCR检测其下游基因哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在蛋白和mRNA水平的变化。结果:双酶切和测序结果表明myc-ATF5真核表达质粒构建成功,转染293T细胞后获得表达;Western印迹和qRT-PCR证明myc-ATF5可升高mTOR的转录和蛋白水平。结论:构建了带myc标签的人ATF5真核表达载体,为进一步研究ATF5在自噬中的功能奠定了基础。

激活转录因子5在肾癌细胞系中的表达及意义

目的 探讨新基因激活转录因子 5 (ATF5 )在不同肾癌细胞系中的表达及意义。 方法 采用RT PCR及Northernblot方法检测ATF5基因在肾癌细胞系A498、786 O、GRC I和胚肾细胞系2 93及正常肾小管上皮细胞系HK 2中的表达 ,计算机辅助图像分析结果。 结果 RT PCR检测ATF5在肾癌细胞系A498、786 O、GRC I和胚肾细胞系 2 93中呈强表达 ,其灰度面积吸光度A值分别为35 195 .2± 2 8.2、35 70 9.3± 18.3、370 38.5± 2 4.2、33 318.8± 34.2 ,而在正常肾小管上皮细胞系HK 2中表达较弱 ,灰度面积吸光度A值为 2 42 3.6± 3 .3,肾颗粒细胞癌细胞系GRC I中的表达是HK 2的 15倍 ,两者差异有显著性意义 (P <0 .0 1)。Northernblot检测ATF5在不同肾癌细胞系的表达结果与RT PCR方法检测结果一致。 结论 ATF5在肾癌发生和发展中具有一定作用 ,其致病机理可能与协同Wnt信号通路相关。

激活转录因子5的克隆及其在真核细胞中的表达定位

目的克隆激活转录因子(ATF)5,构建其真核表达载体,观察其在细胞中的表达定位。方法根据人ATF5的cDNA序列设计引物,通过巢式PCR扩增ATF5全长及其N端(ATF5/N)和C端(ATF5/C),构建重组表达质粒pCS2MT-ATF5、pCS2MT-ATF5/N和pCS2MT-ATF5/C及融合绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒pEGFP-ATF5。将表达质粒转染293T和Cos7细胞,Westernblot检测其表达情况,荧光显微镜观察ATF5在293T和Hela细胞的定位。结果巢式PCR产物与预期大小一致,重组质粒pCS2MT-ATF5、pCS2MT-ATF5/N和pCS2MT-ATF5/C能表达携带Myc标签的蛋白Myc-ATF5、Myc-ATF5/N和Myc-ATF5/C,分子量分别为52、35和43×103。荧光显微镜观察发现融合了GFP的ATF5蛋白定位在细胞核。结论成功的克隆和表达ATF5基因为进一步研究其在肾肿瘤发生、发展过程中的作用奠定了基础。

紫杉醇诱导的胰腺癌SW1990细胞凋亡过程中转录激活因子5和Bax表达水平的变化

目的转录激活因子5(Activating transcription factor 5,ATF5)是一个新的与肿瘤细胞分化、增殖及凋亡密切相关的因子。文中检测胰腺癌SW1990细胞中ATF5的表达,并进一步研究紫杉醇(Paclitaxel,PTX)诱导的人胰腺癌SW1990细胞凋亡的水平,及其与ATF5、Bax表达水平的相关性。方法 RT-PCR检测未经药物处理的SW1990细胞中ATF5 mRNA表达水平;以不同浓度的紫杉醇(0、6.25、12.5、25、50、100、200 nmol/L)作用SW1990细胞不同时间(0、6、12、24、48 h),噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况;用100 nmol/L紫杉醇作用SW1990细胞不同时间(0、12、24、48 h)后,观察形态学变化并用Annexin V/7-AAD双染法,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;采用RT-PCR检测紫杉醇作用不同时间后ATF5、Bax的mRNA表达变化。结果胰腺癌SW1990细胞中表达ATF5。紫杉醇抑制胰腺癌SW1990细胞的增殖,并在一定范围内呈剂量、时间相关性。随着紫杉醇作用时间的增加,流式细胞仪检测凋亡率显著提高。半定量RT-PCR检测结果显示:ATF5、Bax mRNA表达均明显增强,且两者之间存在相关性(r=0.916,P<0.05)。结论 ATF5在胰腺癌SW1990细胞中高表达,并且在紫杉醇诱导的细胞凋亡过程中,表达量进一步上升,其变化趋势与Bax基因相似。提示ATF5参与紫杉醇诱导的细胞凋亡,并可能与Bax的凋亡途径存在相关性。

转录激活因子5参与表没食子儿茶素没食子酸酯诱导的胰腺癌SW1990细胞凋亡

目的:研究转录激活因子5(ATF5)是否参与中国绿茶有效成分——表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)诱导的人胰腺癌SW1990细胞凋亡。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的EGCG作用SW1990细胞不同时间后细胞的增殖情况;以100 mg/L EGCG作用SW1990细胞不同时间,观察细胞的形态学变化,并采用SR-VAD-FMK/7-AAD双染法,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;采用RT-PCR检测100 mg/L EGCG作用不同时间后ATF5mRNA的表达变化。结果:EGCG可抑制胰腺癌SW1990细胞增殖,引起细胞皱缩,诱导细胞凋亡。随着EGCG作用时间的延长,细胞凋亡率显著提高(P<0.05),ATF5 mRNA的表达明显增强(P<0.05)。结论:胰腺癌SW1990细胞中存在ATF5的表达,在EGCG诱导的细胞凋亡过程中,ATF5表达量上升,提示ATF5参与EGCG诱导的细胞凋亡。

白细胞介素-2和信号转导和转录激活因子5在宫颈病变患者血清、宫颈组织和细胞中的表达及意义

目的探讨白细胞介素-2(IL-2)、IL-2受体(IL-2R)和信号转导和转录激活因子5(STAT5)在宫颈病变患者血清、宫颈组织和细胞中的表达变化及其与宫颈病变严重程度的关系。方法选择2020年6月至2021年6月新疆生产建设兵团医院门诊或住院治疗的25例宫颈鳞状细胞癌患者(宫颈鳞状细胞癌组)、40例慢性宫颈炎患者(慢性宫颈炎组)和50例体检健康女性(健康对照组)为研究对象,应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测3组受试者人乳头瘤病毒(HPV)16/18感染情况,酶联免疫吸附试验法检测3组受试者血清和宫颈脱落细胞中IL-2水平,实时荧光定量PCR法检测3组受试者宫颈脱落细胞中IL-2、IL-2R、STAT5a和STAT5b mRNA水平。另外,收集新疆医科大学第一附属医院和新疆生产建设兵团医院病理科石蜡包埋的慢性宫颈炎组织35例和宫颈鳞状细胞癌组织87例(高分化30例,中分化42例,低分化15例),免疫组织化学法检测慢性宫颈炎和宫颈鳞状细胞癌组织中IL-2、IL-2R、STAT5和磷酸化STAT5(p-STAT5)蛋白的表达。结果慢性宫颈炎组和宫颈鳞状细胞癌组患者HPV16/18阳性率高于健康对照组(χ^(2)=6.762、13.868,P<0.05);宫颈鳞状细胞癌组患者HPV16/18阳性率显著高于慢性宫颈炎组(χ^(2)=7.870,P<0.05)。慢性宫颈炎组和宫颈鳞状细胞癌组HPV16/18阳性患者血清和宫颈脱落细胞中IL-2水平低于健康对照组,宫颈鳞状细胞癌组HPV16/18阳性患者血清和宫颈脱落细胞中IL-2水平低于慢性宫颈炎组(P<0.05);慢性宫颈炎组和宫颈鳞状细胞癌组HPV16/18阴性患者血清和宫颈脱落细胞中IL-2水平低于健康对照组,宫颈鳞状细胞癌组HPV16/18阴性患者血清和宫颈脱落细胞中IL-2水平低于慢性宫颈炎组(P<0.05);3组HPV16/18阳性受试者血清和宫颈脱落细胞中IL-2水平低于HPV16/18阴性受试者(P<0.05)。HPV16/18阳性受试者宫颈脱落细胞中与血清中IL-2水平呈正相关(r=0.665,P<0.05)。慢性宫颈炎组和宫颈鳞状细胞癌组患者宫颈脱落细胞中IL-2、IL-2R、STAT5a和STAT5b mRNA相对表达量低于健康对照组,宫颈鳞状细胞癌组患者宫颈脱落细胞中IL-2、IL-2R、STAT5a和STAT5b mRNA相对表达量低于慢性宫颈炎组(P<0.05)。宫颈鳞状细胞癌宫颈组织中IL-2、IL-2R阳性表达率显著低于慢性宫颈炎组织,STAT5和p-STAT5阳性表达率显著高于慢性宫颈炎组织(P<0.05)。高分化型宫颈鳞状细胞癌宫颈组织中IL-2、IL-2R阳性表达率显著高于中分化型和低分化型,STAT5和p-STAT5阳性表达率低于中分化型和低分化型(P<0.05);中分化型宫颈鳞状细胞癌宫颈组织中IL-2、IL-2R阳性表达率显著高于低分化型,STAT5和p-STAT5阳性表达率低于低分化型(P<0.05)。结论HPV16/18阳性者血清和宫颈脱落细胞中IL-2水平低于HPV16/18阴性者,且随宫颈病变程度加重而降低;宫颈病变组织和细胞中IL-2和IL-2R表达随宫颈病变分化程度加重而降低,IL-2可能通过JAK/STAT通路激活STAT家族蛋白STAT5a、STAT5b参与宫颈癌的发生、发展;宫颈脱落细胞和血清IL-2联合检测可预测宫颈病变的进展。

JAK-STAT参与血管平滑肌细胞血管紧张素原和心钠素基因的转录激活

为探讨Janus蛋白酪氨酸激酶2-转导及转录激活因子5(JAK2-STAT5)途径在介导血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)血管舒-缩肽表达调节的作用及分子机制,以AngⅡ为诱发因素刺激培养的大鼠VSMC,用免疫共沉淀、Western印迹分析和激光共聚焦显微镜观察STAT5磷酸化及其核转位,用电泳迁移率改变分析(EMSA)确定STAT5与血管活性肽基因调控区顺式调控元件的结合活性.结果显示,STAT5磷酸化水平分别于AngⅡ刺激10 min和12 h出现两个高峰,增加的磷酸化STAT5主要分布在细胞核内.AngⅡ诱导的STAT5活化与核转位可被JAK2的特异抑制剂AG490所抑制.EMSA结果显示,用AngⅡ刺激VSMC后,核蛋白与含有血管紧张素原基因启动子STAT5识别序列的探针结合活性显著升高;而核蛋白与含有心钠素(ANF)基因启动子STAT5识别序列的探针结合活性则呈下降趋势,核蛋白与两种探针的结合活性均可被JAK2抑制剂AG490所消除,并且加入抗STAT5抗体后均可出现滞后的超迁移带.结果提示,AngⅡ通过激活JAK2-STAT5介导信号向胞核内传递,STAT5与相应的顺式元件结合是启动血管紧张素原和心钠素基因表达所必需的转录调控机制之一.

ATF5在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义

目的研究激活转录因子5(ATF5)在子宫内膜癌组织中的表达情况,并探讨其临床意义。方法利用生物信息学分析ATF5在子宫内膜癌组织中的表达及与预后的关系。应用免疫组化法检测ATF5蛋白在子宫内膜癌组织、子宫内膜非典型增生组织及正常增殖期子宫内膜组织中的表达情况。采用Kaplan-Meier生存分析法比较不同ATF5蛋白表达水平患者的总生存率,并分析其与子宫内膜癌患者相关临床病理特征的关系。结果ATF5 mRNA在子宫内膜癌组织中的表达显著增加(P<0.05)。免疫组化结果显示ATF5蛋白在子宫内膜癌组织中的表达显著高于子宫内膜非典型增生组织及正常增殖期子宫内膜组织(P<0.05)。不同年龄、组织分化程度和临床分期的子宫内膜癌患者ATF5蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Cox回归分析表明年龄、临床分期和ATF5蛋白表达可作为子宫内膜癌患者总体生存的独立相关危险因素(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示ATF5高表达子宫内膜癌患者的5年生存率显著低于低表达患者(P<0.05)。结论ATF5在子宫内膜癌组织中表达上调,且与年龄、组织分化程度、临床分期及预后关系密切。

白介素-18及信号转导和转录激活因子5在糖尿病大鼠视网膜的表达

目的观察白介素-18(IL-18)及信号转导和转录激活因子5(STAT5)在4～24周糖尿病大鼠视网膜的表达,初步探讨其在糖尿病视网膜病变(DR)中可能的分子机制。方法用限制性片段差异显示聚合酶链反应(RFDD-PCR)技术,建立正常大鼠和糖尿病8周大鼠视网膜基因表达谱。以生物信息学分析两者差异,筛选出候补基因IL-18及STAT5。以半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察IL-18及STAT5在4、8、24周糖尿病大鼠视网膜的表达。结果RFDD-PCR结果显示,正常组IL-18表达明显强于糖尿病组;正常组STAT5无表达,糖尿病组较强表达。RT-PCR结果显示,与正常相比,糖尿病4周时,视网膜高表达IL-18,8周IL-18表达降低,24周表达最低。STAT5在正常及糖尿病4周视网膜未见表达;8周开始表达,24周时最强。结论IL-18表达变化及STAT5的活化与DR发生有关。IL-18的表达不依赖于STAT5的活化。

Notch信号通路通过ATF5调控脊髓神经干祖细胞分化

目的探讨Notch信号通路在调控成年小鼠脊髓来源神经干祖细胞(spNSPCs)分化中的作用及其机制。方法分离和原代培养成年小鼠spNSPCs,将spNSPCs分为对照组和DAPT组,贴壁培养spNSPCs并采用定向培养基进行分化,用神经元和星形胶质细胞的标志物对两组spNSPCs进行免疫荧光染色,并统计神经元和星形胶质细胞分化比例。用免疫细胞荧光染色观察Notch1和转录激活因子5(ATF5)共表达的情况,免疫印迹和实时定量PCR法分析ATF5蛋白和mRNA表达情况。结果成功分离成年小鼠spNSPCs,其表达神经干细胞标志物Nestin,并且具有向神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞分化的潜能。与对照组对比,DAPT组神经元标志物Tuj1的阳性比例从8.6%上升到23.3%(P<0.05),而星形胶质细胞标志物GFAP的阳性比例从65.7%下降到42.1%(P<0.05)。Notch受体与ATF5共表达,DAPT组Notch1胞内段的表达较对照组下降了26%(P<0.05),ATF5蛋白水平上升了60%(P<0.05),mRNA水平上升了108%(P<0.05)。结论Notch信号通路可能通过ATF5调控脊髓神经干祖细胞分化。

卵白蛋白诱导哮喘小鼠脾细胞增殖中STAT5的变化

目的 :研究卵白蛋白 (OVA)在哮喘小鼠脾细胞增殖中信号转导蛋白和转录激活因子 5 (STAT5 )的变化 ,探讨STAT5在OVA诱导哮喘小鼠脾细胞增殖中的作用。方法 :经腹腔注射与雾化吸入OVA诱发小鼠哮喘发作。激发后分离小鼠脾细胞 ,采用MTT比色法测定经OVA诱导的脾细胞增殖 ;用双染免疫组化法检查脾细胞中STAT5磷酸化与STAT5抗原的定位。用电泳迁移率变动分析 (EMSA)测定STAT5与DNA探针的结合力。结果 :OVA在体外能明显诱导哮喘小鼠脾细胞增殖 (平均A值为 0 .5 4 3± 0 .112 ) ,呈剂量依赖性 ,与对照组相 (平均A值为 0 .2 0 3± 0 .0 32 )比较差异明显 (P <0 .0 1)。OVA诱导 1、3h ,能诱导哮喘小鼠脾细胞中的STAT5磷酸化 ,脾细胞中出现STAT5 DNA结合带。结论 :OVA能诱导哮喘小鼠脾细胞增殖和脾细胞中的STAT5磷酸化 ,增加STAT5与DNA探针的结合力 。

当归多糖诱导K562细胞向红系样细胞分化及其信号转导通路研究

目的探讨当归多糖(APS)诱导K562细胞向红系样细胞分化相关的信号转导通路。方法实验分组:对照组采用常规方法培养;APS组在常规培养基础上加入APS(终浓度100～500mg/L),分别培养12h、1d、2d、3d。联苯胺染色与分光光度法检测经APS诱导后K562细胞向红系样细胞分化的血红蛋白表达;激光扫描共焦显微镜观察JAK2、信号转导和转录激活因子5(STAT5)在各组细胞内的分布;Westernblotting检测细胞核、质蛋白中JAK2、STAT5的表达变化;免疫沉淀法检测质蛋白中JAK2的磷酸化改变。结果经APS诱导后K562细胞的联苯胺染色阳性率增高,随着APS诱导浓度增加K562细胞合成血红蛋白也增加;APS诱导K562细胞12h、24h和48h,核蛋白中STAT5表达较对照组增加,质蛋白中STAT5表达减少;APS组与对照组K562细胞的JAK2表达未见显著差异,但APS组的JAK2磷酸化强于对照组。结论APS可诱导K562细胞向红系样细胞分化,其机制可能与APS启动JAK2的酪氨酸磷酸化,继而引起STAT5核转位,通过信号转导通路的调控影响细胞的增殖分化。

哮喘小鼠肺组织STAT5、STAT6表达及阿奇霉素的影响

目的观察阿奇霉素(AZM)对哮喘小鼠信号转导和转录激活因子5、6(STAT5、STAT6)的影响。方法 BALB/c小鼠24只随机分为三组,A组(哮喘模型组)、B组(阿奇霉素治疗组)、C组(正常对照组)。其中A、B组小鼠于第0、13天分别给予卵清蛋白(OVA)20μg和氢氧化铝1 mg的混悬液致敏,于第21-30天每天给予雾化吸入2%OVA建立哮喘模型,B组于15-30天给予阿奇霉素100 mg/kg/d腹腔注射,C组以0.9%生理盐水代替OVA致敏和激发。所有动物于31天处死,制备肺组织石蜡切片,应用免疫组化方法检测支气管肺组织STAT5、STAT6的表达水平。结果哮喘模型组STAT5、STAT6蛋白表达分别为(23.25±3.28)和(26.11±3.95)明显高于正常对照组(2.33±0.78)和(2.78±0.32)(P<0.01),阿奇霉素治疗组STAT5、STAT6蛋白表达分别为(10.83±1.96)和(11.32±2.03)明显低于哮喘组(P<0.01)。结论 STAT5S、TAT6与哮喘发病相关,阿奇霉素可通过下调STAT5、STAT6的表达抑制气道炎症。

有氧运动干预非酒精性脂肪肝小鼠肝脏JAK2/STAT5信号通路的变化

背景:酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路在脂质代谢中起重要作用,运动有效预防与治疗非酒精性脂肪肝与改善内脏脂质沉积和脂质代谢密切相关。目的:探讨有氧运动对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路的影响及可能作用机制。方法:6周龄C57BL/6雄性小鼠48只,分为普通膳食组及高脂膳食诱导组(n=24),第10周末2组各随机抽取4只进行油红O染色观察肝脏病理形态变化。确定造模成功后,普通膳食组随机分为普通膳食+安静组、普通膳食+运动组(n=10);高脂膳食诱导组随机分为非酒精性脂肪肝+安静组、非酒精性脂肪肝+运动组(n=10),连续干预8周,直至实验结束。观察小鼠肝脏病理形态变化,检测小鼠肝脏组织泌乳素受体、肝脏酪氨酸激酶2、信号传导及转录激活因子5a、肝脏酪氨酸激酶2磷酸化、信号传导及转录激活因子5磷酸化蛋白表达量。结果与结论:(1)与普通膳食+安静组相比,非酒精性脂肪肝+安静组肝细胞脂肪变性加重,肝脏内酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子信号通路蛋白表达量降低;(2)与非酒精性脂肪肝+安静组相比,非酒精性脂肪肝+运动组的肝细胞脂肪变性减轻,肝脏内酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路蛋白表达量升高;(3)肝脏病理形态指标与催乳素受体、肝脏酪氨酸激酶2、肝脏酪氨酸激酶2磷酸化、信号传导及转录激活因子5磷酸化均呈显著负相关(P<0.05);(4)提示有氧运动干预可通过调节非酒精性脂肪肝小鼠肝脏酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路,改善肝内脂质沉积及肝脏脂肪变性程度。

ATF5基因siRNA对肺癌细胞凋亡及化疗增敏的机制

目的探讨转录激活因子(ATF5)基因siRNA对肺癌细胞活力、凋亡及化疗敏感性的影响。方法将ATF5的特异性siRNA(ATF5-siRNA组)转染人肺癌A549细胞,同时转染阴性对照siRNA(阴性组),并设置空白组。采用Western印迹检测ATF5表达沉默效果。噻唑蓝(MTT)、流式细胞术、Western印迹分别检测沉默ATF5表达后的细胞活力、凋亡率、紫杉醇敏感性及相关蛋白表达。结果 ATF5-siRNA组ATF5表达显著低于空白组(P<0.05)。ATF5-siRNA组A549细胞活力明显降低,细胞凋亡率明显升高,增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达明显降低,Bcl-2相关X蛋白(Bax)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved caspase)3蛋白表达显著升高,细胞对紫杉醇敏感性显著升高,多药耐受相关蛋白基因(MRP)1蛋白表达明显降低,与空白组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论利用siRNA沉默ATF5基因表达可抑制A549细胞活力,诱导细胞凋亡,增强紫杉醇敏感性,机制可能与下调PCNA和MRP1表达,上调Bax和cleaved caspase3表达有关。

STAT5、VEGF和EGFR在非小细胞肺癌中表达的相关性研究

目的:检测信号转导与转录激活因子5(STAT5)、血管内皮生长因子(VEGF)和表皮生长因子受体(EGFR)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况,探讨三者与NSCLC临床病理特征之间的关系及三者彼此的关系。方法:采用免疫组化(SP法)检测STAT5、VEGF和EGFR在68例NSCLC及26例癌旁正常对照组织中的表达情况。结果:(1)STAT5、VEGF及EGFR在NSCLC组织中的阳性表达明显高于肺正常组织(P<0.05);(2)STAT5的阳性表达与NSCLC组织学类型有关,在腺癌中的表达明显高于鳞癌,与组织分化程度、TNM分期及淋巴结转移无关;(3)VEGF的阳性表达与NSCLC的分化程度、淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.01),与NSCLC的组织学类型无关(P>0.05);(4)EGFR的阳性表达与NSCLC的TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.01),与NSCLC的组织学类型和分化程度无关(P>0.05);(5)Spearman相关分析显示STAT5、VEGF和EGFR在NSCLC中的阳性表达两两比较(秩和检验方法)均呈正相关。结论:STAT5、VEGF、EGFR可能在肺癌的发生、侵袭和转移中起重要的作用,抑制STAT5信号通路可望成为非小细胞肺癌的治疗靶点。

HCMV感染对下调ATF5的人胶质瘤U251细胞干性的影响

研究HCMV感染对下调ATF5的U251细胞干性标记物CD133的表达、细胞增殖能力和克隆形成能力的影响。采用荧光定量PCR及Western-blot方法检测HCMV(MOI=1)感染的U251细胞IE、CD133基因及蛋白表达水平的变化,结果表明,随IE表达量的增加U251细胞中CD133表达量显著增加;成功构建沉默ATF5细胞系siATF5-U251,HCMV感染siATF5-U251细胞后使细胞增殖活性减弱,克隆形成率降低;荧光定量PCR及Western-blot检测HCMV感染显著抑制了siATF5-U251细胞内CD133的表达。因此,抑制ATF5的表达可成为恶性胶质瘤预防和治疗的新的作用靶点。

细胞因子信号转导抑制因子2和信号转导与转录激活因子5在肝细胞肝癌组织中的表达及意义

目的 探讨细胞因子信号转导抑制因子2 （SOCS2）和信号转导与转录激活因子5（STAT5） mRNA及其蛋白在肝细胞肝癌中的表达及与临床病理特征的关系.方法 采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学法检测84例患者肝细胞肝癌、癌旁组织中SOCS2和STAT5 mRNA和蛋白表达水平,并与临床病理资料进行相关分析.结果 肝癌组织及癌旁组织中SOCS2 mRNA相对量分别为0.089±0.034、0.340±0.083,SOCS2 mRNA在肝癌组织中的表达明显低于癌旁组织（P＜0.05）.肝癌组织及癌旁组织中STAT5 mRNA相对量分别为0.532±0.094、0.276±0.065,STAT5 mRNA在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织（P＜0.05）.本实验对肝癌组织和癌旁组织中SOCS2和STAT5蛋白表达进行定性分析,在肝癌和癌旁组织中均有两种蛋白的表达,但在肝癌组织中SOCS2的表达明显低于癌旁组织,而STATS在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织.SOCS2和STAT5表达呈负相关,mRNA比较r=-0.612,P＜0.05;蛋白比较r=-0.574,P＜0.05.结论 在肝癌组织中SOCS2、STAT5 mRNA和蛋白的表达一致,SOCS2在肝癌组织中为低表达,STAT5在肝癌组织中为高表达,两者可能单独或共同参与HCC的发生发展过程.

靶向STAT5的RNAi重组质粒的构建与鉴定

目的构建靶向信号转导及转录激活因子5(STAT5)的RNAi重组质粒并进行鉴定。方法设计针对STAT5编码区的有短发夹结构的3对DNA序列,克隆到质粒载体Pgenesil-1中构建重组质粒,再对其进行酶切鉴定、DNA测序分析。脂质体法转染重组质粒至SMMC7721细胞株中,western-blot、RT-PCR检测STAT5基因表达。结果酶切鉴定和测序分析提示,靶向STAT5的RNAi重组质粒构建成功,3条靶向STAT5的序列特异性小发夹状RNA(shRNA)可有效抑制SMMC7721细胞STAT5表达,mRNA表达抑制率分别为70.43%、43.02%、45.07%,蛋白质表达抑制率分别为67.45%、37.36%、41.86%(P<0.05)。其中以Pgenesil-1-STAT5A1抑制效应最强。结论成功构建靶向STAT5的RNAi重组质粒,为进一步用该重组干扰载体进行体内肿瘤基因治疗的研究奠定了基础。

STAT5与CyclinB1、CyclinD1、C-fos、C-myc在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:探讨信号转导和转录激活因子-5(signal transducer and activator of transcripton5,STAT5)、细胞周期素B1(cy-clinB1)、细胞周期素D1(cyclinD1)蛋白、原癌基因c-fos和c-myc蛋白在非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及意义。方法:用免疫组化SP、SABC法检测38例手术切除的非小细胞肺癌组织和20例正常肺组织中STAT5、cyclinB1、cyclinD1、c-fos和c-myc的蛋白表达。结果:STAT5、cyclinB1、cyclinD1、c-fos和c-myc在非小细胞肺癌中的表达明显高于正常肺组织,差异有统计学意义(P<0.01);STAT5在非小细胞肺癌中的表达,与患者的年龄、肿瘤大小、组织分化程度、淋巴结转移及TNM分期等病理因素无关(P>0.05),同样,在非小细胞肺癌中cyclinB1、cyclinD1、c-fos和c-myc的表达与上述临床病理因素也无关;STAT5和cyclinB1、cyclinD1在NSCLC组织中的表达均呈显著正相关(P<0.05);STAT5与c-fos、c-myc的表达均呈无相关(P>0.05)。结论:研究结果显示在非小细胞肺癌中存在STAT5、cyclinB1、cyclinD1、c-fos和c-myc的过度表达,但是与临床病理因素无关,提示它们参与了非小细胞肺癌的发生,但与肿瘤的进展可能无关。CyclinB1和cyclinD1的表达可能由STAT5调控;在NSCLC的发生中,STAT5可能通过上调cyclinB1和cyclinD1的表达,促进细胞周期进展和细胞的恶性转化,促进肿瘤的形成,而c-fos和c-myc可能不是通过STAT5信号途径来诱导肿瘤的发生。