甲状腺激素干扰物二巯基敌枯双生物作用的实验研究Ⅰ 观察指标的探讨

目的 :研究二巯基敌枯双所致甲状腺的形态改变 ,探讨二巯基敌枯双是否属甲状腺激素干扰物。方法 :Wistar大鼠 60只 ,随机分为正常对照组和实验组。正常对照组给予溶剂二甲基亚砜 ,实验组给予二巯基敌枯双二甲基亚砜溶液 ,剂量为 5 0 mg/kg体重。于实验组的给药第 5 d、第 10 d和第 2 0 d,分别放血处死两组动物。测定血清中 T4,TSH的浓度 ;取动物甲状腺称重 ,常规 HE染色 ,光镜下观察。结果 :各时间点实验组血清 T4,TSH的浓度和对照组相比无显著变化 (P>0 .0 5 ) ;实验组动物的甲状腺脏器系数显著高于对照组 ,(P<0 .0 5 ) ;组织学观察到实验组在第 5 d甲状腺滤泡上皮增生 ,有的滤泡出现局灶性增生斑块 ,第 10 d复层化的甲状腺滤泡上皮细胞继续增生 ,并向间质突出 ,形成实心芽 ,第 2 0 d实心芽向继发滤泡分化 ,出现了滤泡腔。结论 :二巯基敌枯双引起甲状腺增生 。

甲状腺激素干扰物体内甄别实验初探

目的 研究二巯基敌枯双对甲状腺的生物作用 ,探讨二巯基敌枯双是否属甲状腺激素干扰物。方法Wistar大鼠 60只 ,随机分为正常对照组 ( n=3 0 )和实验组 ( n=3 0 )。正常对照组给予溶剂二甲基亚砜 ,实验组给予二巯基敌枯双二甲基亚砜溶液 ,剂量为 5 0 m g/kg。于给药第 5 d、第 10 d和第 2 0 d,动物称重后分别放血处死两组动物。测定血清中 T4和 TSH的浓度 ;取动物甲状腺称重测定甲状腺脏器系数 ;常规 HE染色 ,光镜下观察组织学变化 ;用免疫酶法测定核增殖抗原 ( PCNA)在甲状腺中的阳性表达 ;用酶组织化学方法观察甲状腺琥珀酸脱氢酶( SDH)、甲状腺过氧化物酶 ( TPO)活性的变化。结果 实验组各期甲状腺脏器系数显著高于同期对照组 ( P<0 .0 5 ) ;实验组各期甲状腺滤泡上皮增生 ;实验组各期 PCNA表达阳性细胞数明显高于同期对照组 ( P<0 .0 5 ) ;实验组各期甲状腺滤泡上皮内 SDH和 TPO酶活性也明显增高 ( P<0 .0 5 )。

环境水体中甲状腺激素干扰物的研究进展

甲状腺激素在人类和动物的新陈代谢、生长发育与繁殖过程中起着重要的调节作用,环境中甲状腺激素干扰物(TDCs)会影响甲状腺激素的合成、分泌和代谢过程,从而干扰机体中由甲状腺激素调节的各项生理功能,对机体造成危害。主要介绍了环境中TDCs的种类、作用机制和环境水体中TDCs的生物检测方法,并展望了未来环境中TDCs的研究方向。

雌激素干扰物的联合毒性研究进展

生物体对雌激素高度敏感,环境中的雌激素干扰物可以在低浓度下干扰内源雌激素的正常功能,导致雌激素干扰物在数十年间都是环境科学的研究热点之一。所有生物均暴露在复杂的环境污染物中,多种干扰物共同存在产生的混合物效应更应受到关注。为预测和评价环境雌激素干扰物的联合效应,许多研究从数学模型、信号通路分析等方面提出了解决方法并加以应用,本文综述了雌激素污染物混合作用联合毒性研究模型的发展和现存问题,进而对未来的发展进行了展望。

水环境中甲状腺激素干扰物分析方法研究进展

水环境中存在多种内分泌干扰物,对人类和动物的内分泌机能具有极大的破坏性,并可能对生态环境造成严重影响。以对人类与动物影响较大的甲状腺激素干扰物为分析重点,综述了水环境中甲状腺激素干扰物的化学分析和生物测试两类检测方法,并展望了水环境中甲状腺激素干扰物化学分析与生物检测的研究趋势,以期更好地开展对水环境中甲状腺激素干扰物的污染特征及生物学效应评价。

甲状腺激素干扰物对鱼类甲状腺轴的干扰效应研究进展

甲状腺激素干扰物(thyroid-disrupting chemicals,简称TDCs)能够通过干扰鱼体甲状腺激素(thyroid hormones,简称THs)的合成、转运、转化及代谢等过程造成其水平紊乱,影响甲状腺组织的结构和生理功能。为更系统地阐述TDCs对鱼类甲状腺轴的干扰,综述各类TDCs对鱼类下丘脑-垂体-甲状腺轴(hypothalamus-pituitarythyroid axis,简称HPT)干扰的最新研究进展,归纳分析TDCs对鱼类甲状腺激素水平、甲状腺组织病理学变化、HPT轴相关基因表达以及生长发育指标的干扰作用,在基因水平上探讨其可能的作用机制,并就水体中TDCs对鱼类HPT轴干扰效应的未来研究方向进行展望。

改进型重组基因酵母TR-GRIP1检测化合物甲状腺激素干扰活性

应用酵母双杂交技术构建重组TR(甲状腺激素受体)基因酵母,用以检测类抗甲状腺激素化合物及环境样品的甲状腺激素干扰活性.提取并纯化含有TR基因的酵母表达质粒pGBT9-TR以及含有TR共激活因子GRIP1基因的酵母表达质粒pGAD424-GRIP1,将pGBT9-TR和pGAD424-GRIP1同时转化至酵母细胞Y187,以营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu)筛选阳性菌落,构建TR-GRIP1双杂交酵母.考察该酵母与天然甲状腺激素——T3(三碘甲状腺原氨酸)的结合情况,确定最佳暴露时间,建立剂量-效应关系曲线.结果表明:TR-GRIP1双杂交酵母能够与T3结合诱导β-半乳糖苷酶活性,选择暴露时间为2 h,T3诱导酶活性的EC50值为1.1×10-7 mol/L;构建的重组基因酵母TR-GRIP1提供了检测化合物甲状腺激素干扰活性的新方法.

污染物对鱼类的甲状腺激素干扰效应及其作用机制

环境中可以影响生物体甲状腺激素合成、运输、作用和代谢等过程的化学污染物称为甲状腺激素干扰物(TDCs),TDCs被认为是继环境雌激素之后最重要的一类内分泌干扰物.鱼类甲状腺的结构、甲状腺激素的转运和功能等与哺乳动物有较大差别.与哺乳动物相比,污染物干扰鱼类甲状腺激素的研究还较为缺乏.在介绍鱼类甲状腺结构、功能以及甲状腺激素在鱼体内动态过程的基础上,分析了污染物对鱼类的甲状腺激素干扰效应及其作用机制,探讨了今后鱼类甲状腺激素干扰研究的主要方向.污染物能对鱼类甲状腺激素水平、相关酶活性及甲状腺结构等产生直接影响;同时,污染物还可以通过干扰鱼类甲状腺系统对由甲状腺激素调节的重要生理过程如生长、繁殖和发育等产生间接影响.污染物主要通过干扰鱼类甲状腺激素的合成与分泌、转运、清除以及与甲状腺激素受体(TR)的相互作用等机制对鱼类产生不利影响.在污染物对鱼类甲状腺激素干扰的研究中,今后应重点关注环境中"新型"卤化有机污染物、鱼类早期发育过程与甲状腺激素干扰效应的关系、TR介导机制以及TDCs的筛选方法等.

H295R细胞系筛选环境类固醇激素干扰物的研究进展

H295R细胞系能表达类固醇激素合成过程中涉及的所有酶类,生成肾上腺皮质合成的所有类固醇激素,且与正常的人肾上腺细胞对毒物的反应水平有很好的相关性,能从基因表达、酶活力和激素三个层面体外筛选环境类固醇激素干扰物和研究其作用机制,已成为体外筛选环境类固醇激素干扰物最具潜力的工具。笔者就H295R细胞系在环境类固醇激素干扰物筛选中的应用及存在的问题进行了综述。

运用爪蟾变态实验检测镉的甲状腺激素干扰效应

将NF51阶段非洲爪蟾(Xenopus laevis)蝌蚪暴露于Cd2+浓度为0.01,0.1和1mg.L-1的溶液中21d,观测Cd2+对爪蟾的生长、变态和甲状腺组织结构的影响.1mg.L-1Cd2+暴露组爪蟾蝌蚪与对照组相比,7d后,平均体重减少了0.39倍,体长和后肢长分别减少了0.17倍和0.27倍,发育阶段稍有延缓;21d后,1mg.L-1Cd2+暴露组爪蟾蝌蚪后肢长减小了0.11倍,延缓了1个发育阶段.其余各浓度组在7d和21d暴露后,体重、体长、后肢长和发育阶段与对照组无显著差异.21d后,Cd2+各浓度组甲状腺组织结构出现滤泡数目减少、胶质减少甚至空泡化等现象,1mg.L-1Cd2+暴露组甲状腺滤泡之间还出现溶通现象.结果表明CdCl2具有甲状腺激素干扰效应,并可能是由于该化合物直接作用于甲状腺组织引起.由此可见,爪蟾变态实验可以有效检测重金属盐的甲状腺激素干扰效应.

全氟辛磺酸对于爪蟾的甲状腺激素干扰效应

运用两栖类变态实验（AMA）研究了全氟辛磺酸（PFOS）对于非洲爪蟾（Xenopuslaevis）蝌蚪的生长、变态和甲状腺组织结构的影响．结果显示，与对照组相比，7d后，10，50和250μμg·L^-1。PFOS暴露组蝌蚪的后肢长分别减小了17％，11％和18％，蝌蚪的发育延缓了1～2个阶段；19d后，10，50和250μg·L^-1PFOS组蝌蚪的体重分别增加了17％，10％和20％，体长分别增加了5％，4％和6％，而10μg·L^-1和250μg·L^-1。PFOS组蝌蚪的后肢长分别减小了12％和13％；暴露组甲状腺组织结构出现滤泡数目减少、上皮细胞增生、胶质减少甚至滤泡溶通等现象．结论是，在本实验浓度下，PFOS对于非洲爪蟾的蝌蚪生长有促进作用，对于变态发育过程却有抑制作用．参照AMA的方法，可以判断PFOS为抗甲状腺激素干扰物．

丙硫氧嘧啶干扰甲状腺功能的亚急性毒性研究

[目的]研究丙硫氧嘧啶(Propylthiouracil,PTU)干扰甲状腺功能的亚急性毒性状况,为PTU致甲状腺肿的组织发生学研究提供实验室基础数据。[方法]SD大鼠150只,随机分为15组,包括3、6、9、12、15、18、21d的试验组和同期对照组,对照组用玉米油灌胃,试验组用PTU的玉米油溶液灌胃,于每个实验期结束的d2麻醉后股动脉放血处死动物,取甲状腺、肝、肾、脾、胸腺,称重后进行组织病理学观察。[结果]试验组血清TT3、TT4浓度先降低再进入平缓期,TSH浓度是先升高再进入平缓期,甲状腺绝对重量和脏器系数均持续升高,和对照组相比,6d时差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]PTU5mg/(kg.day)的剂量染毒大鼠21d,除干扰甲状腺功能,未见其他毒性反应,甲状腺在持续增生,功能尚未代偿。因此用该方法研究甲状腺的组织发生学是可行的。

二巯基敌枯双生物作用的实验研究Ⅱ:组织化学观察

目的 :研究甲状腺激素干扰物二巯基敌枯双所致甲状腺组织化学的改变 ,并探讨所致甲状腺增生的最佳取材时间和敏感指标。方法 :Wistar大鼠 6 0只 ,随机分成正常对照组和实验组 ,每组各 30只。正常对照组给予溶剂二甲基亚砜 ,实验组给予二巯基敌枯双的二甲基亚砜溶液 ,剂量为 5 0 m g/ kg体重。于实验组的给药第 5 d、第 10 d和第 2 0 d,分别放血处死两组动物。用酶组织化学方法观察甲状腺琥珀酸脱氢酶 (SDH)、甲状腺过氧化酶酶活性的变化 (TPO) ;用免疫酶法测定核增殖抗原 (PCNA)在甲状腺中的阳性表达。结果 :实验组各期甲状腺滤泡上皮内 SDH和 TPO酶活性明显增高 (P<0 .0 5 ) ,实验组的各期 PCNA表达阳性细胞数也明显高于同期对照组 (P<0 .0 5 )。结论 :甲状腺激素干扰物二巯基敌枯双所致甲状腺滤泡上皮内 SDH和 TPO酶活性增高是 TSH刺激的结果 ,其最佳取材时间应是 5 d以前 ,而敏感指标应该是核增殖抗原 (PC-NA)。

二巯基敌枯双生物作用的实验研究Ⅲ:时效关系的探讨

目的 :研究甲状腺激素干扰物二巯基敌枯双所致甲状腺的形态、血清 T4 和 TSH改变 ,探讨二巯基敌枯双生物作用的时效关系。方法 :Wistar大鼠 78只 ,随机分为正常对照组和实验组。正常对照组给予溶剂二甲基亚砜 ,实验组给予二巯基敌枯双的二甲基亚砜溶液 ,剂量为 5 0 mg/ kg体重。于实验组的给药第 1d、第 3d和第 5 d,分别放血处死两组动物。测定血清中 T4 ,TSH的浓度 ;取动物甲状腺称重 ,同时光镜下观察其形态学的变化。结果 :第 3d和第 5 d实验组血浆 TSH的浓度和对照组相比 ,显著增高 (P<0 .0 5 ) ,第 5 d实验组动物的甲状腺脏器系数显著高于对照组 (P<0 .0 5 ) ,组织学观察到该组甲状腺滤泡上皮局灶增生成增生斑。第 3d实验组甲状腺脏器系数与对照组比较尽管无差异 ,但组织学观察到该组甲状腺滤泡上皮已增生成复层。结论 :TSH、甲状腺的脏器系数和甲状腺的组织学观察在本实验中呈现明显的时间效应关系 ,而且最早出现生物学指标变化的时间是实验第 3d。

镉对大鼠睾丸生精功能与性激素含量影响

目的观察镉对大鼠睾丸生精功能与性激素含量的影响,为镉的精子毒性机制研究提供依据。方法40只SD雄性大鼠分为对照组、低、中和高剂量染镉组,各组大鼠分别以镉0,0.25,0.5,1.0 mg/(kg.bw)连续腹腔注射染毒7 d,测定大鼠睾丸脏器系数、每日精子生成量、附睾尾精子数;用放射免疫法测定血清与睾丸组织中的睾酮和雌激素的含量。结果中、高剂量组大鼠的左、右侧睾丸重量和睾丸脏器系数均低于对照组,差异有统计学意义。低、中和高剂量组附睾尾精子计数[(538±151)×106个,(242±143)106个,(39±4)×106个]均剂量依赖性方式低于对照组[(727±242)×106个],差异均有统计学意义。中和高剂量组每日精子生成量[(6.2±4.8)×106个/g,(4.0±3.0)×106个/g]也均低于对照组[(12.7±6.4)×106个/g],差异有统计学意义。中剂量组大鼠血清睾酮含量[(0.8±1.1)ng/ml]和睾丸组织中睾酮含量[(11.6±3.5)ng/ml]均低于对照组[血清(3.2±2.7)ng/ml,组织(20.9±3.8)ng/ml],差异有统计学意义。所有染毒剂量组血清和睾丸组织中雌激素含量与对照组比较,差异均无统计学意义。结论镉对睾丸产生明显的毒性,造成精子数量明显下降,睾酮水平下降是镉减弱睾丸生精功能的主要机制之一;镉未对雄性大鼠的雌激素生成产生影响,雌激素含量可能与镉削弱大鼠生精功能无关。

内分泌干扰物对雄激素受体功能的干扰

内分泌干扰物(Endocrine disrupting chemicals,EDC)是指干扰内源激素的生物合成、代谢和功能,从而干扰动物内分泌系统的外源活性物质。本文特别介绍了做为EDC类物质之一的雄激素干扰物(Androgen disruptors,AD)的不同种类和生理效应。AD可与雄激素受体(Androgen receptor,AR)结合发挥AR激动剂或拮抗剂作用,其中做为激动剂的AD主要有1,2-二溴-4-环己烷(TBECH);做为拮抗剂的AD主要有氟他胺类、有机氯杀虫剂类、二苯甲烷类、双酚A、邻苯二甲酸酯、烷基酚类等。它们通过多种分子机制干扰AR的功能,进而对动物的生殖和发育等功能产生严重影响。本文认为在国内应加强对AD的深入研究,并重视AD对鱼类等非哺乳类动物的影响的研究;同时应注重从源头上阻止AD在环境中的扩散和二次污染,并大力发展生物植被降解技术、光催化技术、新型纳米材料吸附、人工生态系等生态修复技术,建立无毒、无内分泌干扰效应的AD高通量筛选技术,以消除AD对生态系统的不良影响。

雄激素受体干扰物的活性预测模型的研究

目的在于定量预测雄激素受体干扰物活性,并确定最佳建模方法。选择150个分子作为数据集,随机选38个分子作为检验集,其它分子为训练集。每个化合物分子计算了193个分子参数。通过采用多元线性回归和主成分回归等方法,建立数学模型,并用验证集检验了所建模型的预测能力。结果发现逐步筛选法和主成分分析方法所建模型都表现出较强的预测能力(应用于检验集的相关系数分别为R=0.61,R=0.52)。以上研究将有助于新药雄激素受体抑制剂的筛选和开发。

多氯联苯(Aroclor 1254)对非洲爪蟾变态发育的影响

为了研究多氯联苯(Aroclor 1254)对非洲爪蟾变态发育的影响,将非洲爪蟾受精卵暴露在一定浓度(0、400ng·L-1、2μg·L-1、10μg·L-1、20μg·L-1)的Aroclor 1254中,直至完全变态.结果表明,20μg·L-1Aroclor1254暴露可使变态所需时间显著延长(p<0.05),低于20μg·L-1的各组变态所需时间与对照组无显著差异.2μg·L-1以上的Aroclor1254暴露可使蝌蚪甲状腺发生明显的组织学改变,包括甲状腺组织滤泡扩张、胶体面积相对缩小,滤泡细胞增殖、高度增加,并且这种变化随暴露剂量的增加而愈发明显.提示多氯联苯可干扰非洲爪蟾的变态发育,引起甲状腺组织学改变.采用定量组织病理学技术检测甲状腺激素干扰物较为灵敏,方法简单易行,是一种切实可行的筛选和确证甲状腺干扰物的体内方法.

三丁基锡对非洲爪蟾甲状腺组织结构的影响

幼龄非洲爪蟾(Xenopus laevis)暴露于低浓度三丁基锡(25ng.L-1TBTCl)中2个月,运用组织学切片的方法观测甲状腺组织结构的变化.结果表明,TBT暴露1个月能引起爪蟾甲状腺滤泡胶质减少甚至空泡化,暴露2个月后,甲状腺滤泡的变形率也显著增加,相对甲状腺横截面积和滤泡面积仅为平行对照的35.3%和45.6%,而滤泡数目没有明显变化.空白组和暴露组均未观察到明显的滤泡上皮增厚或肥大等现象.由此可见,甲状腺萎缩是由于滤泡面积减小而不是滤泡数目减少所引起的;滤泡中胶质的减少和变形等与常见的滤泡上皮代偿性增生或肥大无关.所用低浓度的TBT能对爪蟾甲状腺组织结构造成严重损伤,TBT可以被认定为一种环境甲状腺激素干扰物.

丙硫氧嘧啶致甲状腺增生的量效关系初探

[目的]研究丙硫氧嘧啶(propylthiouracil,PTU)致甲状腺增生的量效关系,为以PTU为模型药物的甲状腺激素干扰物体内短期甄别方法体系的建立提供实验室依据。[方法]SD大鼠100只,雌雄各半,随机分为1个对照组和4个实验组。对照组用玉米油灌胃;实验组用不同剂量的PTU的玉米油溶液灌胃。于实验期11d麻醉后股动脉放血处死动物,甲状腺组织称重后进行组织病理学观察。[结果]在PTU剂量为5mg/(kg·d)的实验组,雌雄鼠甲状腺脏器系数均高于对照组(P﹤0.05);组织学观察发现随着PTU剂量增加,甲状腺增生程度有所加重;组织学观察到的最小有作用剂量分别比脏器系数提前3和2个剂量组。[结论]选择甲状腺增生的组织学早期改变为实验观察敏感性终点,建立以PTU为模型药物的甲状腺激素干扰物体内短期甄别方法体系是可行的。