核因子кB介导病毒基因反式激活途径在激素敏感型单纯性肾病发病中的作用

目的研究核因子кB(NF-кB)介导的病毒基因反式激活途径在激素敏感型单纯性肾病(SRSNS)发病中的作用,探讨呼吸道病毒触发该病的机制。方法采用电泳迁移率改变分析、RT-PCR和ELISA法分别对SRSNS、肾炎性肾病、继发性肾小球疾病、毛细支气管炎和正常儿童外周血单个核细胞(PBMC)NF-кB转录活性、呼吸道病毒基因和抗体表达、血清IL-8水平进行检测。结果1SRSNS活动期NF-кB转录活性增高,与SRSNS恢复期、缓解期和其它组比较差异有统计学意义(P<0.05);2SRSNS活动期血清IL-8水平增高,与NF-кB转录活性呈直线正相关关系(r=0.88,P<0.001),NF-кB活性与呼吸道病毒检出阳性率亦呈正相关趋势。结论NF-кB介导的病毒基因反式激活途径能使IL-8等基因表达增高而致病,这可能是呼吸道病毒触发SRSNS的主要机制之一。

抑制子κBα调控激素敏感型单纯性肾病病毒基因反式激活途径中核因子κB活性的研究

目的研究抑制子κBα基因(IκBα)表达及其对激素敏感型单纯性肾病(SRSNS)病毒基因反式激活途径核因子κB(NF-κB)活性的调控作用。方法采用荧光定量RT-PCR、Western blot和电泳迁移率改变实验分别测定SRSNS活动期、SRSNS缓解期患儿和正常儿童外周血单个核细胞(PBMCs)中IκBα mRNA、蛋白质表达水平和NF-κB活性。同时采用RT-PCR和ELISA分别检测PBMCs呼吸道病毒基因表达和血浆病毒抗体。结果SRSNS活动期PBMCs细胞核中NF-κB活性增加,与SRSNS缓解期和正常儿童比较,差异有统计学意义(P<0.05)。NF-κB活性与呼吸道病毒检出率呈正相关趋势(OR=27,Kappa系数=0.59,P<0.05)。SRSNS活动期PBMCs细胞浆中IκBα蛋白质低于SRSNS缓解期和正常儿童(P<0.05)。SRSNS活动期NF-κB活性与IκBα蛋白质水平呈负相关(r=-0.884,P<0.05)。SRSNS活动期IκBα mRNA水平高于正常儿童,但仍低于SRSNS缓解期(P<0.05)。结论NF-κB介导的病毒基因反式激活过程中存在IκBα异常表达,IκBα对于NF-κB活性具有调控作用。

糖皮质激素抑制激素敏感型单纯性肾病病毒基因反式激活途径中NF-κB活性的研究

[目的]为核因子-κB(NF-κB)介导病毒基因反式激活触发激素敏感型单纯性肾病(SRSNS)提供反面证据,并探讨糖皮质激素对NF-κB活性的抑制作用。[方法]采用电泳迁移率改变实验、RT-PCR和ELISA分别测定SRSNS、肾炎性肾病、继发性肾小球疾病、毛细支气管炎和正常儿童外周血单个核细胞(PBMCs)中NF-κB活性、呼吸道病毒基因和血浆病毒抗体;同时采用Westernblot和实时定量RT-PCR分别检测SRSNS和正常儿童IκBα蛋白质、IκBαmRNA表达水平。[结果]与SRSNS缓解期和其他组比较,SRSNS活动期组NF-κB活性明显增加。SRSNS活动期NF-κB活性与IκBα蛋白质水平呈直线负相关(r=-0.884,P﹤0.05)。SRSNS活动期复发和SRSNS缓解期患儿NF-κB活性低于SRSNS初发患儿,而IκBαmRNA和IκBα蛋白质高于后者。[结论]IκBα在SRSNS病毒基因反式激活中发挥重要作用,糖皮质激素通过诱导IκBα合成来抑制NF-κB活性。

激素敏感型单纯性肾病病毒基因反式激活过程中核因子κB活化及IκBα表达研究

[目的]研究核因子κB(nuclear factor-kappa B alpha,NF-κB)及抑制子κBα(inhibitory kappaB alpha,IκB)α在激素敏感型单纯性肾病(responsive simple nephrotic syndrome,SRSNS)病毒基因反式激活中的作用。[方法]采用电泳迁移率改变实验、RT-PCR和ELISA分别测定SRSNS、肾炎性肾病、继发性肾小球疾病、毛细支气管炎和正常儿童外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells PBMCs)中NF-κB活性、呼吸道病毒基因和血浆病毒抗体;实时定量RT-PCR、Western blot和ELISA分别检测SRSNS和正常儿童IκBα基因表达、蛋白质表达和血浆IL-8水平。[结果]与SRSNS缓解期和其他组比较,SRSNS活动期NF-κB活性明显增加。NF-κB活性与呼吸道病毒检出阳性率呈正相关趋势。SRSNS活动期血浆IL-8水平增高,并且与NF-κB活性呈直线正相关关系。SRSNS活动期IκBα蛋白质低于SRSNS缓解期患儿和正常儿童,与NF-κB活性呈直线负相关。而SRSNS活动期IκBαmRNA水平高于正常儿童,但仍低于SRSNS缓解期患儿。[结论]病毒基因反式激活过程中NF-κB活化及IκBα蛋白质表达降低可能是呼吸道病毒触发SRSNS主要机制之一。

激素敏感型单纯性肾病病毒基因反式激活及病毒反义寡核苷酸的阻遏作用

目的从正反两方面探讨NF-κB介导的病毒基因反式激活在呼吸道病毒感染触发激素敏感型单纯性肾病(steroid responsive simple nephrotic syndrome,SRSNS)中的作用。方法采用电泳迁移率改变实验、RT-PCR和ELISA分别测定42例SRSNS(包括32例活动期和10例缓解期)、15例肾炎性肾病、15例继发性肾小球疾病、20例毛细支气管炎和12例正常儿童外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)核因子-κB(nuclear factor kappaB,NF-κB)活性、呼吸道病毒(包括呼吸道合胞病毒和流感病毒)基因表达和血浆病毒抗体;将呼吸道病毒反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASONs)转染至SRSNS活动期患儿PBMCs,再检测呼吸道病毒基因表达和NF-κB活性。结果与SRSNS缓解期和其他组比较,SRSNS活动期组NF-κB活性明显增加。NF-κB活性与呼吸道病毒检出阳性率呈正相关趋势。SRSNS活动期PBMCs中呼吸道病毒基因的表达能被其相应的ASONs所抑制,同时NF-κB活性也降低。结论NF-κB介导的病毒基因反式激活是呼吸道病毒触发SRSNS的重要机制。

核因子-κB/抑制蛋白-κB信号通路介导的激素敏感型单纯性肾病患儿病毒基因反式激活

目的研究核因子-κB(NF-κB)/抑制蛋白-κB(IκB)信号通路在激素敏感型单纯性肾病(SRSNS)患儿病毒基因反式激活中的作用。方法采用电泳迁移率改变实验、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶标记免疫吸附分析法(ELISA)分别测定SRSNS、肾炎性肾病、继发性肾小球疾病、毛细支气管炎和正常儿童外周血单个核细胞(PBMCs)NF-κB活性、呼吸道病毒基因和血浆病毒抗体;同时采用Western blot和ELISA分别检测SRSNS和正常儿童IκBα蛋白质表达和血浆IL-8水平。结果与SRSNS缓解期和其他组比较,SRSNS活动期组NF-κB活性明显增加。NF-κB活性与呼吸道病毒检出阳性率呈正相关趋势。SRSNS活动期血浆IL-8水平增高,且与NF-κB活性呈正相关(r=0.88 P<0.001)。SRSNS活动期患儿IκBα蛋白质明显低于SRSNS缓解期和正常儿童,IκBα蛋白质水平与NF-κB活性呈负相关(r=-0.884 P<0.05)。结论NF-κB/IκB信号通路介导的病毒基因反式激活过程,可能是呼吸道病毒触发SRSNS的主要机制之一。

激素敏感型单纯性肾病综合征单个核细胞病毒基因表达的研究

目的 探讨外周血单个核细胞 (PBMC)呼吸道病毒感染与激素敏感型单纯性肾病综合征 (SRSNS)发病的相关性。方法 采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、APAAP法和ELISA法 ,分别对42例SRSNS患儿 (活动期 2 4例、缓解期 1 8例 )、2 0例肾炎性肾病、2 5例毛细支气管炎和 1 9例健康对照儿童单个核细胞 (PBMC)呼吸道病毒基因、病毒抗原及血清病毒抗体进行检测。结果 (1 )SRSNS患儿活动期组PBMC中呼吸道病毒基因、病毒抗原及血清病毒抗体检出率均高于RSNS患儿缓解期组、肾炎性肾病组及正常对照组 ,差异有显著意义 (P <0 0 5)。 (2 )SRSNS患儿活动期组PBMC中呼吸道合胞病毒检出率最高 ,其次为流感病毒。 (3)SRSNS患儿病毒基因、抗原的表达检出率与激素应用无关 ,血清病毒抗体的检出率降低与激素应用有关。 (4)病毒基因与病毒抗原检查结果有较好一致性(χ2 =5 71 4 ,P <0 0 5)。

激素敏感型单纯性肾病外周血白细胞乙酰肝素酶基因表达的研究

目的 研究激素敏感型单纯性肾病 (SRSNS)外周血白细胞中乙酰肝素酶 (Hpa)基因表达水平及其与尿蛋白定量之间的关系 ,探讨肾小球基底膜电荷屏障破坏的机制。方法 采用逆转录 聚合酶链反应的方法 ,分别对 4 3例SRSNS患儿 (活动期 2 3例、恢复期 10例、缓解期 10例 )、2 3例肾炎性肾病、15例紫癜性肾炎 (肾病型 )和 15例正常对照儿童外周血白细胞中Hpa基因表达水平进行半定量研究。结果 (1)SRSNS活动期Hpa表达量 (1 2 7± 0 36 )高于肾炎性肾病、紫癜性肾炎 (肾病型 )和正常对照组 (0 36± 0 13) ,差异有显著意义 (P <0 0 0 1)。 (2 )不同阶段的SRSNS患者之间Hpa表达量活动期 >恢复期 >缓解期 ,差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ;缓解期 (0 34± 0 18)与正常对照组之间差异无显著意义。 (3)SRSNS组活动期、恢复期和缓解期Hpa表达水平与尿蛋白定量之间呈正相关 (rs=0 75 1,P <0 0 0 1)。结论 外周血白细胞Hpa表达的增高可能与SRSNS大量蛋白尿的产生有关。

反义寡核苷酸对激素敏感型单纯性肾病患儿外周血单个核细胞病毒基因表达的抑制作用

目的通过设计反义寡核苷酸(ASONs)抑制激素敏感型单纯性肾病(SRSNS)呼吸道病毒基因的表达,提供激素敏感型单纯性肾病呼吸道病毒感染的证据。方法将ASONs转染至外周血单个核细胞(PBMC)后,通过RT-PCR的方法检测呼吸道病毒基因的表达。结果SRSNS活动期PBMC中呼吸道病毒基因的表达能被其相应的ASONs所抑制。呼吸道合胞病毒基因表达受抑制率为93·9%(14/15),流感病毒受抑制率为87·5%(7/8),总抑制率为91·3%(21/23)。结论呼吸道病毒确实存在于SRSNS活动期病人体内,呼吸道病毒感染作为主要触发因素,可能为SRSNS的重要发病机制。

呼吸道病毒基因在儿童肾病综合征白细胞的表达和抑制研究

目的通过研究呼吸道病毒基因在外周血单个核细胞(PBMC)的表达和抑制,探讨呼吸道病毒感染与激素敏感型单纯性肾病综合征(SRSNS)发病的相关性。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法,分别在反义寡核苷酸(ASONs)转染至外周血单个核细胞前后检测呼吸道病毒基因的表达。结果SRSNS组患儿PBMC中呼吸道病毒基因检出率均高于肾炎性肾病组、紫癜性肾炎及正常对照组,SRSNS患儿PBMC中呼吸道病毒基因的表达其相应的反义寡核苷酸所抑制。结论呼吸道病毒确实存在于SRSNS患儿体内,其基因的表达能被能被其相应的反义寡核苷酸所抑制。呼吸道病毒感染作为主要触发因素,可能为SRSNS的重要发病机制。

小儿肾病综合征与呼吸道病毒基因表达关系的研究

目的通过研究呼吸道病毒基因在激素敏感型单纯性肾病综合征患儿外周血单个核细胞(PBMC)的表达,探讨呼吸道病毒感染与其发病的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测外周血单个核细胞呼吸道病毒基因的表达。结果32例SRSNS组患儿PBMC中有23例检测到呼吸道病毒RNA,检出的阳性率(71.9%)高于肾炎性肾病组、紫癜性肾炎及正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论呼吸道病毒确实存在于SRSNS患儿体内,呼吸道病毒感染可能为SRSNS的重要发病机制。