经尿道前列腺切除术治疗晚期激素非依赖性前列腺癌可行性分析

目的:探讨经尿道前列腺切除术(TURP)在晚期前列腺癌并下尿路症状(LUTS)治疗中的作用。方法:对2004～2009年诊断为晚期前列腺癌合并LUTS的43例患者进行总结,分析TURP术前及术后3、12个月患者的IPSS评分、最大尿流率、以及疾病相关危险因素。结果:术后3个月,非雄激素依赖性前列腺癌患者的IPSS[(9.58±0.33)分]、最大尿流率[(8.96±0.47)ml/s]与术前[(19.60±0.41)分、(4.93±0.68)ml/s]存在显著差异(P<0.05)。随访12个月后IPSS[(15.73±0.66)分]、最大尿流率[(15.67±0.44)ml/s]与术前相比无显著性差异。多因素分析提示术前表现为急性尿潴留的患者术后预后相对较好,激素非依赖前列腺癌患者预后差。结论:TURP治疗晚期激素非依赖前列腺癌合并LUTS的患者,在短期内可以迅速降低IPSS评分,改善生活质量;远期效果不理想。同时,手术本身也可能带来相关并发症,降低患者生存质量。

雄激素非依赖性前列腺癌细胞亚系模型LNCaP-AI的建立

目的:建立雄激素非依赖性前列腺癌细胞亚系模型LNCaP-AI。方法:长期在去雄激素的血清环境下培养雄激素依赖性LNCaP细胞,培养出能够适应无雄激素环境的LNCaP-AI细胞亚系。MTT、RT-PCR、免疫荧光方法观察LNCaP-AI细胞在无雄激素环境下的增殖能力和表达及分泌前列腺特异性抗原(PSA)的水平。结果:LNCaP前列腺癌细胞在无雄激素中培养3个月后逐渐适应了无雄激素的环境,成为雄激素非依赖的LNCaP-AI细胞亚系。LNCaP-AI细胞在无雄激素的环境下迅速增殖,能够分泌PSA,但其PSA mRNA的表达水平是正常生长LNCaP细胞的44%。结论:成功构建雄激素非依赖性前列腺癌细胞亚系模型LNCaP-AI,可以模拟前列腺癌由雄激素依赖发展为雄激素非依赖的过程。

基于文献挖掘的雄激素非依赖型前列腺癌特异表达基因的生物信息学分析

目的:比较雄激素依赖型与非依赖型前列腺癌的基因表达差异,加深对雄激素非依赖型前列腺癌形成的分子机制的认识,为前列腺癌防治找到新的有效手段。方法:通过FACTA工具从PubMed找出前列腺癌的相关基因进行分类,利用GATHER、PANTHER、STRING和ToppGene等在线工具对雄激素非依赖型前列腺癌特异表达基因进行生物信息学分析。结果:筛选雄激素非依赖型前列腺癌特异基因128个,这些特异表达基因在细胞信号转导、凋亡、肿瘤生成、细胞粘附、细胞增殖和分化等生物学过程起着重要作用。结论:通过生物信息学对雄激素非依赖型前列腺癌特异表达基因的挖掘发现,MMP9、EGFR、MMP2、ADM、MIF、IGFBP3、IL2、MET、BAD、RHOA、SPP1、EP300、SMAD3、RAF1、PTK2、TGFB2等基因在雄激素依赖型转变成非依赖型前列腺癌中可能起着重要作用。

激素递减法成功建立雄激素非依赖性LNCaP细胞亚系

目的:利用激素递减法对LNCaP细胞进行去雄环境培养,建立雄激素非依赖的LNCaP细胞(LNCaP-AI)亚系并予以鉴定。方法:利用活性炭处理的血清培养模拟去雄细胞环境,逐步递减培养基中激素10d,后完全在非雄培养,共连续培养3个月,直到LNCaP细胞重新进入快速生长期,利用CCK-8法、放免法、RT-PCR法分别测定细胞生长曲线、PSA及雄激素(AR)表达情况。结果:LNCaP细胞在激素递减后,生长缓慢,呈神经内分泌样改变和成簇生长,经过共3个月的连续非雄培养,细胞重新恢复以前的形态及生长。CCK-8测定提示LNCaP-AI细胞能够在去雄环境中生长,放免法提示LNCaP-AI细胞能够在去雄环境中恢复分泌PSA功能,RT-PCR方法提示LNCaP-AI细胞显著高表达AR。结论:激素递减方法可以3个月左右有效地建立雄激素非依赖的LNCaP细胞亚系。

DIM对人激素非依赖性前列腺癌细胞PC3M的生长抑制作用

目的:探讨3,3-二吲哚基甲烷(3,3-Diindolylmethane,DIM)对人激素非依赖性前列腺癌细胞PC3M的生长抑制作用。方法:应用MTT生长抑制实验观察不同浓度DIM对PC3M细胞增殖活性的影响,流式细胞术观察不同浓度DIM对PC3M细胞的细胞周期及细胞凋亡的影响。结果:不同浓度的DIM对PC3M细胞有显著的增殖抑制作用(P<0.05),药物浓度为10、30、60和120μmol.L-1时,抑制率分别为35.6%、58.8%、76.6%和90.5%。当药物浓度为60μmol.L-1时,细胞周期停滞在G1期,并诱导22.6%的PC3M细胞发生凋亡。结论:DIM可抑制PC3M细胞增殖,并诱导其凋亡,为DIM用于激素非依赖性前列腺癌的治疗提供了实验依据。

前列腺癌非编码RNA1在雄激素非依赖去势抵抗型前列腺癌细胞中的作用

目的探讨长链非编码RNA前列腺癌非编码RNA1(PRNCR1)在雄激素非依赖的前列腺癌细胞中的作用。方法应用实时定量PCR(qRT-PCR)检测雄激素依赖的前列腺癌细胞LNCaP及雄激素非依赖的前列腺癌细胞C4-2中PRNCR1的表达情况,通过RNA干扰技术沉默C4-2细胞中的PRNCR1,Western blot技术检测C4-2细胞中雄激素受体(AR)的表达变化,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,MTT实验检测沉默PRNCR1表达对细胞增殖的影响,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果 PRNCR1在雄激素非依赖的细胞系C4-2中高表达,干扰其表达可以明显降低前列腺癌细胞中AR的表达,抑制前列腺癌细胞的细胞增殖及细胞的侵袭能力,并促进细胞的凋亡。结论 PRNCR1介导AR在前列腺癌去势抵抗中发挥着重要作用。

抗人转铁蛋白受体单克隆抗体增强姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌的抑制效应

目的检测抗人转铁蛋白受体单克隆抗体(TfR mAb)对雄激素非依赖性前列腺癌细胞生物学行为的影响,了解抗人TfR mAb对姜黄素抗瘤作用的协同效应。方法利用杂交瘤细胞株制备抗人TfR mAb,分别采用CFSE染色、AnnexinⅤ-PI染色和PI染色法流式细胞仪检测抗人TfR mAb对PC-3细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。采用FITC标记的鼠抗人TfR mAb检测姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞表面TfR表达的影响。采用流式细胞仪进一步检测抗人TfR mAb联合姜黄素对PC-3细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果抗人TfR mAb对PC-3细胞增殖、凋亡和细胞周期无明显影响(均P>0.05)。姜黄素能够显著上调雄激素非依赖性前列腺癌细胞表面TfR表达(P<0.05)。抗人TfR mAb可显著增强姜黄素对PC-3细胞凋亡的诱导作用(P<0.05),而不影响姜黄素对PC-3细胞增殖和细胞周期的影响(均P>0.05)。结论姜黄素可导致雄激素非依赖性前列腺癌细胞表面TfR表达增高。抗人TfR mAb单独作用对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的生物学行为无显著影响,但抗人TfR mAb可以增强姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的凋亡效应。

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白抑制剂对前列腺癌激素非依赖型细胞株化疗敏感性的影响

目的:研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂CCI-779对激素非依赖型前列腺癌PC-3细胞株化疗敏感性的影响。方法:前列腺癌PC-3细胞培养至对数生长期,CCI-779、紫杉醇单独及联合给药,对照组中加入等体积的培养液;MTT法检测3组药物对PC-3的生长抑制作用,流式细胞术(FCM)检测细胞周期的改变和凋亡率。结果:MTT法显示,与对照组相比,各组药物均可显著抑制PC-3细胞增殖,联合用药能显著增强这种抑制效果;FCM检测发现CCI-779和紫杉醇使PC-3细胞主要阻滞在G1-S期,而联合用药使PC-3细胞主要阻滞在G0/G1期;与对照组相比,药物组PC-3细胞凋亡率均显著增加(P<0.01)。结论:mTOR抑制剂CCI-779能抑制PC-3细胞增殖,增加对前列腺癌的化疗敏感性。

HER-2/neu过表达与雄激素非依赖性前列腺癌Gleason分级和临床分期的相关性研究

目的:检测HER-2/neu基因在雄激素依赖与雄激素非依赖性前列腺癌(PCa)组织中的表达情况,推测这一基因在雄激素非依赖性PCa发生中的意义。方法:收集30例雄激素依赖性PCa标本(雄激素依赖组)和24例激素非依赖性PCa标本(雄激素非依赖组),采用免疫组化方法检测HER-2/neu基因的蛋白表达,对照临床分期、Gleason分级进行分析。结果:HER-2/neu在雄激素依赖性PCa标本中的阳性表达率为10%,在雄激素非依赖性PCa的表达为33%;Gleason分级≤7分病例中HER-2/neu阳性表达率显著低于Gleason分级>7分病例组(14.29%vs26.92%,P<0.01);临床分期>T2病例中HER-2/neu阳性表达率显著高于≤T2病例组(34.62%vs7.14%,P<0.01)。结论:HER-2/neu在雄激素非依赖性PCa标本中阳性表达率高,而且随临床分期和Gleason分级的升高其阳性表达率升高。

内皮素-1对紫杉醇诱导激素非依赖性前列腺癌细胞PC3凋亡的影响

目的观察内皮素-1(endothelin-1,ET-1)对紫杉醇诱导激素非依赖性前列腺癌细胞PC3凋亡的影响,并研究其机制。方法采用人激素非依赖性前列腺癌细胞株PC3,设对照组、紫杉醇组、紫杉醇+ET-1组。流式细胞仪测定PC3细胞周期分布和凋亡细胞百分比。免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)及Western blot检测PC3细胞Bcl-2、Bax和Bax/Bcl-2异二聚体的表达。结果紫杉醇+ET-1组PC3细胞的G0-G1(%)高于紫杉醇组,G2-M(%)低于紫杉醇组,凋亡细胞百分比低于紫杉醇组,差异有统计学意义(P<0.05)。紫杉醇+ET-1组PC3细胞的Bcl-2磷酸化水平显著低于紫杉醇组,Bax/Bcl-2异二聚体水平显著高于紫杉醇组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论ET-1能逆转紫杉醇对PC3细胞的G2/M期阻滞,并能通过影响Bcl-2磷酸化作用于细胞凋亡通路,减少细胞凋亡,从而降低激素非依赖性前列腺癌PC3细胞对紫杉醇的敏感性。

冬凌草甲素对雄激素非依赖性前列腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的探讨冬凌草甲素对雄激素非依赖性前列腺癌(AIPCa)裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制。方法雄性裸小鼠20只,皮下接种DU145细胞,随机分成用药组和对照组。于癌细胞种植第2天起,对照组每天喂饲0.9%氯化钠溶液,用药组每天喂饲冬凌草甲素15mg·kg-1·d-1。记录用药第2～7周末时移植瘤的平均体积。7周后处死小鼠,取肿瘤组织,采用反转录聚合酶链反应检测细胞周期的p16基因、细胞增殖转化相关因子白细胞介素(IL)-6、免疫逃逸相关因子吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)的mRNA表达水平。结果用药组裸小鼠移植瘤的生长明显受到抑制,第3周末至第7周末的移植瘤体积均显著小于对照组(P值均<0.001)。第7周结束时与对照组比较,用药组的生长抑制率达到58.12%。7周后,对照组p16mRNA的平均相对表达量为0.46,低于用药组的0.95;对照组IL-6mRNA的平均相对表达量为0.33,高于用药组的0.02;对照组IDOmRNA的平均相对表达量为0.08,而用药组均无明显条带,无法计算相对表达量。结论冬凌草甲素可以显著抑制DU145肿瘤的生长,提示该药对AIPCa有抗癌活性。冬凌草甲素可能是通过阻滞细胞周期,减少其免疫逃逸,以及下调IL-6等抑制AIPCa的生长。

雄激素非依赖性前列腺癌细胞雄激素受体靶向降解的实验研究

目的:研究合成的嵌合分子DHT-PROTAC通过泛素蛋白酶体途径对雄激素非依赖性前列腺癌C4-2B细胞表达雄激素受体(AR)的靶向降解作用,以及AR降解后该细胞分泌、增殖和凋亡的变化。方法:实验细胞分3组:空白对照组(RPMI1640培养液)、溶剂对照组[0.1%二甲基亚砜(DMSO)]及实验组(100μmol/LDHT-PRO-TAC);制备细胞爬片,免疫组化和Western印迹检测C4-2B细胞中AR蛋白和Caspase-3表达情况的改变;ELISA法测定细胞培养液上清中PSA的浓度改变。噻唑兰(MTT)比色法检测细胞增殖抑制,细胞计数并绘制生长曲线观察细胞增殖能力。结果:与空白对照组和溶剂对照组相比,DHT-PROTAC处理后,C4-2B细胞中表达的AR蛋白明显减少,Western印迹检测结果表现为信号减弱(P<0.05);免疫组化见AR阳性细胞明显减少,阳性率降低达40%;与空白对照组和溶剂对照组相比,DHT-PROTAC处理后细胞培养上清液中PSA浓度降低约60%(P<0.05)。MTT试验显示随着DHT-PROTAC处理时间延长,对C4-2B细胞的抑制率逐渐增大,细胞生长呈时间依赖性抑制(P<0.05)。结论:嵌合分子DHT-PROTAC能靶向降解C4-2B细胞表达的AR,抑制细胞分泌PSA,并抑制该细胞的体外生长和增殖。

常规剂量比卡鲁胺治疗雄激素非依赖性前列腺癌

2000年1月～2000年10月用比卡鲁胺(BicaIutamide)治疗雄激素非依赖性前列腺癌4例,有一定疗效,报告如下.

PC-SPESⅡ对雄激素非依赖性前列腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:观察PC-SPESⅡ对雄激素非依赖性前列腺癌(AIPCa)DU145和PC-3裸鼠移植瘤的疗效及血清IL-6表达的影响。方法:雄性Balb/c-nu/nu裸小鼠128只,随机分成DU145、PC-3两组,每组再分为对照、PC-SPESⅡ125、250、500 mg·kg^(-1)·d^(-1)4个剂量组,每组各16只。接种第2天起按体重给药,共8周。观察成瘤潜伏期;每周测量肿瘤直径,根据体积(L×W×H×π/6)变化.绘制肿瘤生长曲线;第2、4、8周用双抗体夹心ABC-ELISA法检测血清IL-6浓度,并取重要脏器观察不良反应;8周末取肿瘤组织作病理学和透射电镜观察。结果:PC-SPESⅡ可延长DU145成瘤潜伏期(P=0.021),并显著抑制DU145肿瘤生长(P=0.0009),第8周125、250、500 mg·kg^(-1)·d^(-1)组的生长抑制率分别为29.41%、44.2%和66.15%。对PC-3肿瘤的抑制作用随着剂量升高呈增强趋势,但无统计学差异(P=0.0787)。DU145和PC-3组血清IL-6均呈剂量依赖性降低(P≤0.002或P<0.0001)。用药后DU145细胞表现为典型的凋亡征像,PC-3组线粒体显著减少。实验过程中未观察到明显的不良反应。结论:PC-SPESⅡ对AIPCa有抗癌活性,抑制IL-6分泌、诱导凋亡可能是其重要的作用机理。

miRNAs在前列腺癌激素非依赖性进展中的研究

微小RNA(miRNAs)是一族内源性非编码单链小RNA,通过结合靶基因mRNA的3'端非翻译区在转录后水平负性调节基因的表达。研究发现某些miRNAs(miR-221/222、146a和miR-125b等)的异常表达与前列腺癌激素非依赖性进展密切相关,通过分析激素非依赖性前列腺癌(AIPC)患者的细胞株、组织和血清中多种miRNAs的异常表达,并探讨其具体机制,可为临床AIPC的诊断及治疗提供新的理论依据。

雄激素非依赖性前列腺癌的治疗进展

前列腺癌是男性泌尿生殖系常见的恶性肿瘤之一,在我国发病率虽较低,但近年来随着人口老龄化及生活条件的改善,发病率有明显增加的趋势。几乎所有一开始对内分泌治疗敏感的前列腺癌最终都将发展成雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)。AIPC是指对内分泌治疗无反应或内分泌治疗后反而促进疾病进展,导致不可逆的临床进展恶化,直至患者死亡。有关AIPC的发病机制以及治疗策略仍缺乏统一的认识,现就此作一综述。

前列腺癌细胞激素非依赖性转化过程中microRNA的差异化表达

目的对比观察雄激素依赖前列腺癌细胞(LNCaP)与雄激素非依赖前列腺癌细胞(LNCaP-AI)中microRNA的表达差异,探讨前列腺癌激素依赖向非依赖转化的转录后调控机制。方法利用Agilent基因芯片检测LNCaP及LNCaP-AI细胞microRNA的表达,用RT-PCR方法对其中6个microRNA进行验证,并对差异表达的microRNA所调控靶基因功能进行生物信息学分析。结果基因芯片检测发现:与LNCaP相比,LNCaP-AI细胞有27个microRNA表达降低,11个microRNA表达升高。对其中6个microRNA进行RT-PCR验证,结果与基因芯片结果一致。通过检索http://www.mir-base.org/针对microRNA调控的靶基因,并参考已知的与雄激素非依赖相关基因的功能,发现LNCaP细胞转化为激素非依赖的LNCaP-AI细胞过程中,差异表达的microRNA主要调控表皮生长因子受体(EGFR)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Bcl-2及雄激素相关代谢酶。结论前列腺癌激素非依赖转化过程中存在microRNA的差异表达,可能涉及雄激素受体(AR)旁路信号通路、金属酶、抗凋亡基因及雄激素相关代谢酶基因等。

京尼平对激素非依赖性前列腺癌裸鼠模型的抑瘤作用研究

目的建立激素非依赖性前列腺癌裸鼠模型,评价京尼平的抗肿瘤作用,并探讨其可能的治疗机制。方法采用颈背部皮下种植肿瘤细胞的方法建立激素非依赖性前列腺癌裸鼠模型,随机分为京尼平低、中、高剂量组及对照组;分别给予20 mg/kg、40 mg/kg、80mg/kg京尼平灌胃及生理盐水灌胃;测量裸鼠体质量、肿瘤体积并计算抑瘤率,流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡情况。聚合酶链反应检测解偶联蛋白2(UCP2)的基因表达情况。结果各组裸鼠肿瘤体积在干预前比较差异均无统计学意义(P均>0.05);京尼平能显著抑制肿瘤生长,并随着给药浓度的增高,肿瘤生长抑制率、增殖抑制作用及凋亡率逐渐增高;京尼平能抑制肿瘤细胞中UCP2的表达,中、高剂量组UCP2的基因及蛋白的表达显著低于低剂量组及对照组(P均<0.05)。结论京尼平对激素非依赖性前列腺癌裸鼠模型有明显的抑瘤作用,其作用机制可能与抑制UCP2的表达有关。

氟他胺联合去雄激素环境诱导的雄激素非依赖性前列腺癌细胞模型的建立

采用氟他胺联合去雄激素环境联合诱导培养的方法在体外建立一株雄激素非依赖性前列腺癌细胞系。倒置显微镜下观察细胞形态学变化;采用CCK-8法测定细胞生长率;流式细胞技术检测细胞周期和Bcl-2、Bax的表达变化。结果显示,第1～20代实验组细胞形态瘦长,第30代后细胞大部分呈扁平状,同时呈聚集生长,而对照组细胞形态始终呈长梭形;不同代数的实验组LNCaP细胞在氟他胺浓度为5.0×10-6mol/L的去雄激素培养液中的细胞生长率总体呈上升趋势;氟他胺和去雄激素环境对实验组LNCaP细胞的细胞周期均无明显影响,而对照组LNCaP细胞的生长受氟他胺和去雄激素环境影响而受到抑制;实验组第60代LNCaP细胞Bcl-2平均荧光强度明显高于对照组,而Bax平均荧光强度与对照组间无显著差异。结果表明LNCaP细胞在氟他胺和去雄激素环境下能形成雄激素非依赖性前列腺癌细胞,这为其发病机制的研究提供了合适的实验对象。