组织激肽释放酶家族在病原微生物感染中的作用

组织激肽释放酶(tissue kallikrein-related peptidase, KLK)家族是丝氨酸蛋白酶家族中一种具有胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶性质的蛋白水解酶亚群,有15个家族蛋白,分别为KLK1~KLK15。近年来,越来越多的研究表明,KLK家族可通过切割病毒和细菌关键蛋白、激活多种宿主受体、调控激肽系统等方式参与机体的多种生理活动,影响着病毒、细菌和真菌中多种病原微生物感染的进程,作用机制复杂且广泛。本文通过对近年来KLK家族蛋白在微生物感染中的作用和机制进行综述,以更好地探究KLK在微生物感染中的重要作用,特别是为其在结核分枝杆菌感染中的研究提供思路,也为KLK家族蛋白作为抗结核治疗靶点提供理论基础。

老年急性脑梗死患者血清磷酸化tau蛋白181与激肽释放酶6的表达及对发病后睡眠障碍的预测价值

目的观察老年急性脑梗死(ACI)患者血清磷酸化tau蛋白181(P-tau-181)和激肽释放酶6(KLK6)水平变化,并探讨其与患者发病后睡眠障碍的关系。方法选择2020年5月至2022年5月海安市人民医院收治的158例老年ACI患者作为观察对象,根据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分,将其分为轻度组(40例)、中度组(81例)和重度组(37例);患者发病后根据匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)评分,将其分为睡眠障碍组(56例)和睡眠良好组(102例);患者血清P-tau-181和KLK6水平选择酶联免疫吸附法检测;采用logistic回归分析法对老年ACI患者发病后睡眠障碍的影响因素进行分析;采用受试者工作特征曲线分析血清P-tau-181和KLK6水平对老年ACI患者发病后睡眠障碍的诊断价值。结果重度组ACI患者血清P-tau-181、KLK6水平显著高于轻度组和中度组(P<0.05),中度组血清P-tau-181、KLK6水平显著高于轻度组(P<0.05)。与睡眠良好组患者相比较,睡眠障碍组有卒中家族史、有吸烟史以及有饮酒史患者比例及血清P-tau-181、KLK6水平较高(P<0.05)。血清P-tau-181及KLK6水平是影响老年ACI患者发病后睡眠障碍的独立危险因素(P<0.05)。血清P-tau-181、KLK6以及两者联合诊断老年ACI患者发病后发生睡眠障碍的ROC曲线下面积分别为0.844、0.826和0.924,联合诊断效能高于单独检测(Z=2.030,P=0.042;Z=2.340,P=0.019)。结论老年ACI患者血清中P-tau-181及KLK6高表达可能与其发病后睡眠障碍有重要联系,且两者联合预测老年ACI患者发病后睡眠障碍效能高于单独检测。

人类组织激肽释放酶基因14与卵巢癌研究进展

人类组织激肽释放酶14属于人类组织激肽释放酶家族中的一员,由人类组织激肽释放酶基因14编码,定位于人类染色体19q13.3-13.4上,受甾体类激素调节,其功能可能有降解胶原IV等细胞外基质作用,但具体尚不十分清楚。部分研究表明人类组织激肽释放酶基因14与卵巢癌的生长、转移和浸润有关,对卵巢癌的早期诊断、临床监测和判断预后具有一定价值。

人类组织激肽释放酶基因6与卵巢癌研究进展

人类组织激肽释放酶基因6(human tissue kallikreins gene6,KLK6)是组织激肽释放酶基因家族成员之一,位于人类染色体19q13.3-13.4上,编码人类组织激肽释放酶6(human tissue kallikreins,hK6)。近年发现hK6广泛存在于人体组织和体液中,与卵巢癌的生长、转移和浸润有关,hK6过度表达与卵巢癌患者较短存活期相关,可作为一种新的肿瘤标志物,对卵巢癌的早期诊断、临床监测和预后判断有一定价值。

蛇毒类激肽释放酶的研究进展

蛇毒丝氨酸蛋白酶是蛇毒中一类丰富的蛋白水解酶,具有重要的临床应用价值。其中一种丝氨酸蛋白酶-类激肽释放酶,作用于激肽原释放激肽,引起血管舒张,改善微循环,从而逐渐受到关注。对蛇毒中类激肽释放酶的分布、分离制备、生化性质、结构研究和药效研究等方面进行了综述,同时指出了目前存在的问题及今后的发展方向,以期为进一步的基础研究提供理论基础。

氯化锂毛果芸香碱癫癎鼠模型B_1与B_2激肽受体表达研究

目的检测B1与B2激肽受体在氯化锂毛果芸香碱致癫疒间鼠模型海马中的表达变化并探讨其作用机制。方法选择清洁雄性Wistar大鼠35只,随机分为空白对照组5只;实验组15只,将氯化锂毛果芸香碱腹腔注射法制作癫疒间模型,分为6 h,5、60天时间点,每时间点5只;生理盐水对照组15只,腹腔注射剂量相等的生理盐水,按实验组相应的时间点,每时间点5只。相应时间点处死大鼠取海马标本,应用RT-PCR方法检测海马齿状回、CA1、CA3区的B1与B2激肽受体的表达变化,并进行组间比较。结果6 h、5天时间点实验组较生理盐水对照组B1激肽受体mRNA表达均显著上调,差异有显著性意义(P<0.05),60天时差异无显著性意义(P>0.05);实验组各时间点均较60天生理盐水对照组B2激肽受体mRNA表达显著上调,差异有显著性意义(P<0.05);生理盐水对照组与空白对照组比较,B1与B2激肽受体mRNA表达差异无显著性意义(P>0.05)。结论B1与B2激肽受体mRNA表达失衡在癫疒间的发生、发展过程中可能起着重要的作用。

慢性支气管炎激肽形成机制探讨

目的：探讨慢性支气管炎时激肽的生成及其来源。方法：测定慢性支气管炎（ 慢支组） 和健康对照者支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ） 凝胶过滤前后激肽，激肽形成酶活性（ＴＡＭＥｅａ） ，血浆血管舒缓素（ＰＫ） 和α２巨球蛋白（α２Ｍ） ，并进一步鉴定ＴＡＭＥｅａ 分子来源。结果：慢支组ＴＡＭＥｅａ 和激肽水平高于对照组（ Ｐ＜ ０ ．０００ １ ， Ｐ＜ ０ ．００３ ７） ，差异显著；慢支组ＰＫ 和α２Ｍ 与对照组比较（ Ｐ＜ ０ ．００３ ，Ｐ＜ ０ ．０００ ６） ，差异显著。凝胶过滤结果显示：慢支组ＢＡＬＦ 的ＰＫ 和α２Ｍ 峰很小，ＴＡＭＥｅａ 最高峰位于低分子段，ＴＡＭＥｅａ 抑制试验证实低分子段的ＴＡＭＥｅａ 主要来源于ＴＫ。结论： 慢性支气管炎时ＢＡＬＦ 中激肽生成活性和激肽水平明显增高，激肽生成活性主要来源于局部组织腺体分泌的组织血管舒缓素。

应用磁共振技术观察人尿激肽原酶对急性脑梗死患者脑血流灌注的影响

目的应用磁共振技术观察人尿激肽原酶（尤瑞克林）对急性脑梗死患者脑梗死灶大小、脑血流等的影响，进一步阐明药物的可能作用机制。方法选取发病48h内的急性脑梗死患者41例，随机分为尤瑞克林组（23例）和丹参组（18例）。根据美国国立卫生院卒中量表（NIHSS），将患者分成轻、中、重三度。尤瑞克林组，给予0．15PNA单位尤瑞克林，丹参组给予400mg丹参，均为静脉滴注．1次／d，10d为一疗程。于治疗前及治疗后10d对患者进行头部磁共振多序列的检查。发病后30、90d采用改良Rankin量表评定患者的临床预后。结果①两组治疗后NIHSS分值，均较治疗前降低（P〈0．01）；NIHSS〉10的中、重度患者，尤瑞克林组、丹参组治疗前后NIHSS差值中位数分别为4．0（3．0～7．0），2．0（2．0～3．0），差异有统计学意义（P=0．037），尤瑞克林组对中、重度患者疗效更好；②尤瑞克林组、丹参组梗死灶增大的比率分别为42．9％（9／21）和41．2％（7／17）．差异无统计学意义（P=0．92），两组梗死灶渗血率分别为38．1％（8／21）和11．8％（2／17），差异无统计学意义（P=0．14）；③尤瑞克林组及丹参组在治疗后，梗死区局部脑血流量均较治疗前增加，差异有统计学意义（P〈0．001）；尤瑞克林组在治疗后相对局部脑血流星（梗死区脑血容量／镜像区脑血容量）增加较丹参组明显，分别为1．26±0．13和1．05±0．26，差异有统计学意义（t=2．18，P〈0．05）；④MRA显示两组患者的大血管再通比例分别为5／7和3／6，差异无统计学意义（P=0．59）。结论尤瑞克林能增加急性脑梗死患者的梗死区血液供应；与丹参组比较对中、重度患者疗效更好。

激肽释放酶5、9与CA125在卵巢癌中的表达及意义

选择卵巢良性、交界性、恶性上皮性肿瘤患者共82例,术前应用免疫荧光法对血清CA125检测,对术后标本运用免疫组化SP法检测KLK5及KLK9的表达。发现KLK5及KLK9在恶性肿瘤中的阳性表达率分别为86.2%、89.3%,均高于良性及交界性肿瘤(P<0.05);KLK5的表达强度随临床分期及病理分级的升高而增强,而KLK9的表达趋势与之相反;在Ⅰ期卵巢癌中,KLK5、KLK9的阳性表达率均显著高于CA125(P<0.05)。认为KLK5及KLK9在卵巢癌中表达具有重要意义,与CA125联合测定可提高卵巢癌早期诊断的灵敏度。

卵巢癌患者血清激肽释放酶10检测的临床应用

目的:探讨卵巢癌患者血清激肽释放酶10(hK10)检测的临床价值。方法:用ELISA法测定30例卵巢癌患者、26例卵巢良性肿瘤患者及32例正常妇女血清中的hK10水平并以正常对照组95%可信区间的上限值为阳性标准,分析hK10在3组之间和卵巢癌患者不同临床分期间的水平和阳性率的差异。结果:正常对照组血清hK10水平的95%可信区间的上限值为0.846ng/mL;卵巢癌患者血清hK10水平及阳性率[(1.312±1.399)ng/mL、73.3%]显著高于卵巢良性肿瘤组[(0.508±0.236)ng/mL、7.7%]和正常对照组[(0.517±0.168)ng/mL、6.3%](t>2.89,χ2>24.5,P<0.01),而卵巢良性肿瘤组和正常对照组之间无明显差异(t=0.17,χ2=0.05;P>0.05)。Ⅰ/Ⅱ期与Ⅲ/Ⅳ期卵巢癌患者血清中hK10水平相比较,差异有显著性(t=1.21,P<0.05)。hK10联合CA125诊断卵巢癌的灵敏度为86.7%,特异性为87.9%,阳性预测值为78.8%,阴性预测值为92.7%,总有效率为87.5%;诊断Ⅰ/Ⅱ期卵巢癌的灵敏度从hK10或CA125单指标的40%提高到60%。结论:血清hk10是一种新的卵巢癌肿瘤标志物,对卵巢癌的诊断和临床分期有较高的临床价值,hK10与CA125联合应用可提高其早期诊断的灵敏度。

人组织激肽释放酶基因对2型糖尿病大鼠血压的影响及机制

目的:探讨人组织激肽释放酶(HK)基因对2型糖尿病大鼠血压的影响及其机制。方法:高脂高糖饮食加小剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病动物模型。以重组腺相关病毒为载体介导HK基因(HK组)或对照基因LacZ(LacZ组)在糖尿病大鼠体内表达,观察实验动物血压变化及离体主动脉对乙酰胆碱(Ach)依赖性血管舒张反应和一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、内皮素受体A(ETA-R)表达。结果:(1)HK组第2周开始出现血压下降,并一直持续到实验结束(12周时),而LacZ组血压无明显下降。(2)LacZ组离体主动脉对乙酰胆碱(Ach)依赖性血管舒张反应明显低于HK组。(3)HK组大鼠主动脉NO2-/NO3-浓度明显高于LacZ组,而ET-1和ETA-RmRNA明显低于LacZ组。结论:重组腺相关病毒介导HK基因表达明显降低2型糖尿病大鼠血压,改善内皮依赖性血管舒张功能,原因可能与增加动脉NO释放,减少ET-1和ETA-R的表达有关。

前列腺素E1联合胰激肽原酶治疗老年糖尿病下肢血管病变疗效观察

目的观察前列腺素E1（前列地尔凯时）与胰激肽原酶（怡开）联合应用治疗糖尿病下肢血管病变（PDA）疗效。方法将120例PDA患者随机分为治疗组、对照组，治疗组应用前列腺素E1联合胰激肽原酶及灯盏细辛注射液治疗，对照组单用灯盏细辛注射液治疗。共四周，观察治疗前后症状缓解情况，检测下肢血管踝肱指数（ABI）和足背动脉血流量变化。结果治疗组治疗后下肢ABI指数和足背动脉血流量较治疗前明显改善，与对照组相比较具有统计学意义。与治疗前比较，差异有统计学意义（P均〈001），结论前列腺素E1与胰激肽原酶联合应用具有改善糖尿病下肢血管病变的作用。二者均能有效改善PDA，两药联用效果更佳，是治疗PDA及糖尿病下肢血管病变的有效方法之一。

胰激肽原酶联合银杏达莫治疗早期糖尿病肾病尿白蛋白的疗效观察

目的探讨胰激肽原酶联合银杏达莫防治早期糖尿病肾病的作用。方法 60例患者随机分成治疗组和对照组,每组30例。治疗组给予胰激肽原酶240U口服,3次/d,银杏达莫注射液30ml+液0.9%氯化钠溶液250ml缓慢静脉滴注,1次/d。对照组给予胰激肽原酶240U口服,3次/d,疗程为4周;分别观察2组治疗前后尿白蛋白排泄率(UAER)、空腹血糖(FBS)、糖化血红蛋白(HbA1c)、胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血液流变学变化。结果 2组治疗前后UAER、TC、TG、全血黏度均有明显下降(P<0.01);治疗后UAER、TC、TG、全血黏度、血浆黏度、纤维蛋白原下降A组较B组明显(P<0.01)。结论胰激肽原酶联合银杏达莫治疗糖尿病肾病,除了可以降尿蛋白外,还具有降血脂,降低血液黏度,纠正血液高凝状态的作用,能有效延缓肾功能恶化。

人腺体激肽释放酶基因重组表达载体pPICZαChK2的构建

目的 :构建人腺体激肽释放酶 (h K2 )基因的酵母表达载体。方法 :利用 RT- PCR法从人正常前列腺组织中扩增出 h K2基因 ,先将其克隆到 p GEM- T载体 ,进行序列测定和分析 ,然后将 h K2基因亚克隆至酵母p PICZαC表达载体上 ,进行鉴定。结果 :获得一个核苷酸长度为 738bp的基因 ,同源比较结果表明 ,与 Gen Bank(NCBI:AF18874 6 )公布的 h K2的基因序列有 99%的同源性 ,序列分析表明有一个氨基酸出现变异。酶切表明 h K2基因正确插入酵母表达载体 p PICZαC。结论 :成功构建出 h K2基因的酵母表达载体 p PICZαCh K2。

组织型激肽释放酶对脑缺血再灌注大鼠细胞凋亡和炎性反应的影响

目的探讨组织型激肽释放酶(TK)对脑缺血再灌注大鼠的治疗作用和对细胞凋亡、炎性反应的影响。方法将36只SD大鼠随机分为3组,A组:假手术;B组:生理盐水2ml·kg-1·d-1干预;C组:脑缺血再灌注后8h给予TK17.5×10-3U·kg-1·d-1治疗,每组12只。连续给药3天后分别进行神经功能缺损评分,脑梗死体积测定,梗死组织HE染色。对脑梗死组织进行TUNEL染色和细胞凋亡蛋白酶-3(caspase-3)、TNF-α、白细胞介素-1(IL-1)免疫组织化学检测。结果与A组和B组比较,C组能明显降低神经功能缺损,使脑梗死的体积变小(P<0.05);减轻脑梗死的病理改变;使缺血区内TUNEL、caspase-3、TNF-α、IL-1阳性细胞减少(P<0.05)。结论TK对脑缺血再灌注大鼠有治疗作用,能明显减轻缺血区内的细胞凋亡和炎性反应。

胰激肽原酶对自发性高血压大鼠肾脏结构与功能的保护作用

目的:观察胰激肽原酶干预对自发性高血压大鼠(SHR)肾脏结构与功能的影响,探讨激肽释放酶-激肽系统在高血压及肾脏保护方面的作用。方法:12只36周龄SPF级雄性SHR随机分成2组,治疗组给予胰激肽原酶(800U/kg/d)灌胃治疗12周,观察大鼠血压、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)及尿微量白蛋白(mALB)、尿β2微球蛋白(β2-MG)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)浓度及肾脏组织病理改变,并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定肾皮质组织型激肽释放酶 mRNA的表达。结果:较之SHR对照组胰激肽原酶治疗后血压明显下降(P<0.01);尿mALB、β2-MG、NAG定量明显降低(P<0.01);肾皮质组织型激肽释放酶 mRNA表达水平增加(P<0.05)。病理上SHR对照组大鼠肾小球小动脉管壁增厚,管腔狭窄,个别小球硬化;胰激肽原酶治疗组肾小动脉结构正常,未见肾动脉硬化。结论:胰激肽原酶能显著减少尿微量蛋白、逆转肾小动脉硬化改变,保护肾功能,其机制可能与降低血压,增加肾脏中组织激肽释放酶水平有关。

小剂量丙咪嗪和胰激肽原酶联合治疗糖尿病痛性神经病变

目的评价小剂量丙咪嗪和胰激肽原酶联合治疗糖尿病痛性神经病变的疗效。方法采用丙咪嗪12．5mg，3次／d，疼痛症状消失的继续用药半个月，逐渐减量停用。胰激肽原酶针剂30单位加入0．9％氯化钠250—500ml液体中静滴，1次／d，连续用药两周后改为口服胰激肽原酶片120单位，3次／d维持巩固治疗，总疗程两个月。结果治疗5—7d疼痛症状消失者10例，症状减轻好转4例，无效1例。随访半年，1例疼痛症状复发，再次用药仍然有效。治疗过程中个别病例出现腹部不适、腹泻症状外，未见其他副作用。结论小剂量丙咪嗪联用胰激肽原酶治疗糖尿病痛性神经病变，镇痛作用起效快，疗效较好，无明显副作用，具有临床使用价值。

人激肽释放酶重组腺相关病毒对人脐静脉内皮细胞的影响

目的:构建携带人激肽释放酶(kallikrein,KK)基因的重组腺相关病毒载体,并导入体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),观察其对缓激肽(BK)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)水平和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的影响。方法:(1)将KK基因定向克隆入腺相关病毒载体质粒pAAV-MCS中,构建成pAAV-KK;(2)分别将pAAV-KK及pAAV-LacZ与另外两种质粒pHelper、pAAV-RC通过脂质体共同转染AAV-293细胞,包装出rAAV-KK和rAAV-LacZ重组腺相关病毒。将rAAV-LacZ原液稀释成不同浓度梯度并感染HT-1080细胞,通过β-半乳糖苷酶染色测定病毒感染滴度,并观察LacZ传代HT-1080细胞的表达情况;(3)将rAAV-KK感染HUVEC,检测其对缓激肽、NO、ET-1水平和eNOS基因表达的影响。结果:(1)成功构建了带有KK目的基因的重组腺相关病毒载体和带有LacZ报告基因的重组腺相关病毒载体(对照载体);(2)rAAV-LacZ重组病毒以感染滴度6.2×107I U/ml感染HT-1080细胞后,LacZ基因能够在连续传代的HT-1080细胞内稳定持续表达;(3)与空白组、LacZ组(对照组)相比,KK感染组的HUVEC细胞培养液中BK[(2.864±1.36)pmol/ml∶(2.782±1.48)pmol/ml∶(6.576±2.08)pmol/ml]、NO[(16.42±1.02)μmol/L∶(16.46±1.25)μmol/L∶(21.28±1.46)μmol/L]水平明显增加,eNOS基因[(0.353±0.031)∶(0.364±0.049)∶(0.423±0.038)]表达明显增强,ET-1[(262.91±17.85)pg/ml∶(263.56±15.87)pg/ml∶(199.48±16.99)pg/ml]水平显著下降(P均<0.01)。结论:(1)成功构建了携带有人激肽释放酶基因的重组腺相关病毒,rAAV-KK感染体外培养的人脐静脉内皮细胞;(2)可使细胞分泌BK、NO,以及表达eNOS基因增加,ET-1减少,改善内皮细胞功能。

缓激肽受体在糖尿病血管病变中的作用

糖尿病性血管病变（diabetic angiopathies,DA）是指因糖尿病引起的大、中、小动脉狭窄或闭塞,由此导致靶器官或组织的缺血性病变。DA作为糖尿病的重要并发症,是糖尿病致残和致死的主要原因,临床上以糖尿病性心血管病、脑血管病、肾病、视网膜病及外周血管病为主要表现。

人尿激肽原酶治疗急性脑梗死的疗效及对患者脑代谢产物的影响

【目的】应用磁共振波谱（MRS）定量分析评价人尿激肽原酶（HUK）治疗急性缺血性脑梗死（AIS）的疗效及对患者脑代谢物变化的影响。【方法】发病在72 h内经核磁共振成像（MRI）确诊为AIS的患者38例,随机分为两组,对照组给予对症支持治疗,观察组在对照组的基础上给予HUK治疗。治疗前后应用MRS测定患者脑梗死周围区N- 乙酰基天门冬氨酸（NAA）、肌酸（Cr）浓度,并应用美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）、改良Rankin量表（mRS）评分,Barthel 指数（BI）评价临床疗效。【结果】治疗前,两组梗死周围区NAA、NAA/Cr、两组NIHSS评分,mRS评分,BI指数相比较差异无显著性（P〉0.05）;治疗1周后,两组梗死周围区NAA、NAA/Cr均高于治疗前（P〈0.05）,且观察组梗死周围区治疗后NAA、NAA/Cr增加幅度高于对照组（P〈0.05）。两组治疗后较治疗前NIHSS评分和mRS评分降低、而BI指数升高（P〈0.05）,且观察组改善程度优于对照组（P〈0.05）。【结论】HUK治疗AIS可以改善患者梗死周围区脑细胞的代谢及临床功能,产生保护神经细胞的作用。