激肽释放酶相关肽酶5在疾病中的研究进展

激肽释放酶相关肽酶5(KLK5)是一种胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶,在正常生理条件下参与裂解基质底物、激活蛋白酶酶原以及介导皮肤脱屑、精液液化、大脑发育等生命过程。此外,KLK5的异常激活还与肿瘤、皮肤炎症、病毒感染等疾病密切相关。在正常生理条件下,KLK5具有调控细胞生长和分化、皮肤脱屑、精液液化、免疫应答等基本生物学功能。因此,未来深入研究KLK5在疾病中的作用机制,有助于全面揭示KLK5作为生物标志物和潜在靶点的临床应用价值。

激肽释放酶相关肽酶13作为口腔鳞状细胞癌同步放化疗预后标志物的临床研究

目的:评估口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者血浆和组织中激肽释放酶相关肽酶13(KLK13)表达,及其与临床病理因素、同步放化疗反应和总生存期的相关性。方法:收集2016年1月至2019年4月聊城市第四人民医院96例OSCC活检组织样本和32例健康对照组志愿者的正常组织样本,用福尔马林固定后进行免疫组化和实时荧光定量PCR法检测KLK13蛋白和mRNA表达。采用酶联免疫吸附测定法对84例OSCC患者同步放化疗前后血浆样本和对照组血浆KLK13水平进行测定。对患者至少完成2年同步放化疗反应的随访。结果:OSCC肿瘤组织KLK13蛋白阳性率低于对照组正常组织(67.71%vs.93.75%,P=0.004)。OSCC患者同步放化疗前血浆KLK13水平[(1307.91±566.71)pg·ml^(-1)vs.(1869.16±377.36)pg·ml^(-1),P<0.001)]和组织KLK13 mRNA相对表达量[0.126±0.062 vs.1.00±0.082,P<0.001]均低于对照组。而且OSCC患者同步放化疗后血浆KLK13水平较治疗前有所升高[(1533.83±725.04)pg·ml^(-1)vs.(1307.91±566.71)pg·ml^(-1),P=0.026]。OSCC中KLK13蛋白表达阳性的患者对同步放化疗有更好的临床应答率(P<0.001),且2年总生存率更高(P<0.001)。Cox比例风险模型分析表明,同步放化疗反应(P=0.005)和组织KLK13蛋白表达(P=0.035)对总生存期的影响是独立的。结论:KLK13可能是OSCC患者预测同步放化疗反应性和预后的候选生物标志物。

人类激肽释放酶相关肽酶14和纤维连接蛋白与精液液化的关系

目的:探讨人类激肽释放酶相关肽酶14(KLK14)和纤维连接蛋白(FN)与精液液化的关系。方法:采用酶联免疫吸附试验检测42例不液化精液标本(实验组)和40例液化正常的精液标本(对照组)中的KLK14和FN。结果:实验组KLK14水平为(11.68±2.24)μg/L,对照组为(16.84±3.05)μg/L,实验组低于对照组(t=2.617,P=0.011)。实验组FN水平为(156.75±28.21)μg/L,对照组为(125.42±20.45)μg/L,实验组高于对照组(t=2.220,P=0.029)。精液中KLK14与FN水平呈负相关(r=-0.261,P=0.018)。结论:精液中KLK14水平下降,可能间接作用于FN,使其水解减少,造成精液不液化。

Netherton综合征及红斑型天疱疮表皮中激肽释放酶相关肽酶和丝氨酸蛋白酶抑制物的检测

目的探讨激肽释放酶相关肽酶家族(KLKs)和丝氨酸/半胱氨酸蛋白酶抑制物(Serpins)在Netherton综合征(NS)及红斑型天疱疮(PE)患者表皮中的表达。方法选用LEKTI,SLPI,KLK5,KLK7的羊抗人多克隆抗体,以免疫组织化学结合图像分析软件进行半定量分析的方法研究NS,PE患者表皮中KLK5,KLK7,LEKTI,SLPI等的表达情况。结果NS组表皮中KLK5,KLK7,SLPI平均光密度分别高于对照组141.49%,523.88%,134.20%。PE组的KLK5,KLK7,SLPI平均光密度分别高于对照组90.73%,456.42%,77.11%。结论NS和PE表皮中KLK5,KLK7升高,而SLPI则代偿性上调。

人激肽释放酶相关肽酶5在卵巢癌中的表达及意义探讨

目的检测人激肽释放酶相关肽酶5(KLK5)在卵巢癌患者血清中的水平,初步评估其作为肿瘤标志物的临床应用价值。方法应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验对40例卵巢癌血清和40例女性健康体检血清标本进行检测,分析KLK5水平与临床病理特征相关性,并对其临床预测价值进行分析。结果临床标本检测结果提示,KLK5在卵巢癌患者血清中表达水平(3.77±1.47)ng/mL,显著高于健康女性血清(0.86±0.45)ng/mL,差异有统计学意义(P<0.05);且KLK5表达水平与肿瘤临床分期呈正相关,即临床Ⅲ期KLK5水平(4.44±2.73)ng/mL显著高于Ⅰ/Ⅱ期血清中KLK5水平(2.14±1.66)ng/mL;中低分化肿瘤血清中KLK5水平高于高分化组;KLK5在淋巴结转移组水平显著高于无转移组。结论 KLK5在卵巢癌血清中表达升高,且KLK5表达与临床分期呈正相关,提示KLK5表达水平检测可以用于肿瘤的诊断与预后判断。

人激肽释放酶相关肽酶在卵巢癌中的研究进展

卵巢癌因早期症状隐匿,缺乏有效可靠的生物学指标,且对化疗具有明显的耐药性,故死亡率较高。寻找灵敏性高、特异性好的生物标志物是现代卵巢肿瘤研究的主要方向。人激肽释放酶相关肽酶(KLK)家族参与癌细胞的增殖、侵袭、转移及血管生成等过程,且与恶性肿瘤的预后相关,并促进疾病的发生和发展。KLK复杂的表达调控机制及其亚型在卵巢癌的诊断、治疗、预后及耐药性等方面具有重要价值。此外,KLK在肿瘤微环境下对卵巢癌进展也起关键作用,深入研究KLK蛋白质水解网络与卵巢癌肿瘤微环境相互作用的机制可能能为寻找卵巢癌新的治疗靶点提供依据。

2型糖尿病患者血管并发症与血浆内皮素和一氧化氮的相关性及胰激肽释放酶干预治疗的研究

目的 探讨 2型糖尿病患者血管并发症与血浆内皮素 (ET)、一氧化氮 (NO)的相关性及胰激肽释放酶 (TPK)干预治疗对其影响。 方法 随机选择 2型糖尿病患者 1 82例及正常对照 4 0名。放射免疫分析测定 (RIA)及酶连免疫吸附测定 (EL ISA)检测血浆 ET、NO水平和 TPK干预治疗后各指标的变化。 结果 2型糖尿病患者血浆 ET较正常人显著升高 (P<0 .0 1 ) ,伴血管并发症患者较单纯 2型糖尿病患者血浆 ET水平显著升高 (P<0 .0 1 )。 2型糖尿病血管并发症组较单纯 2型糖尿病组及正常对照组血浆 NO水平显著降低 (P<0 .0 1 )。2型糖尿病患者经 TPK干预治疗后血浆 ET水平降低 ,NO水平升高 ,尿白蛋白排泄率降低 ,血液流变学有所改善。 结论 内皮系统功能紊乱参与了 2型糖尿病血管并发症的发生。 TPK干预治疗可以改善 2型糖尿病患者内皮系统功能 ,防治糖尿病血管并发症的发生。

硫酸镁联合胰激肽释放酶治疗对重度子痫前期孕妇LXA4、PTX3及免疫学指标的影响

目的:探讨硫酸镁联合胰激肽释放酶治疗对重度子痫前期(PE)孕妇脂氧素A4(LXA4)、五聚素3(PTX3)水平及免疫学指标的影响。方法:选择2014年11月至2017年6月在海南省人民医院就诊的重度PE孕妇88例,按随机数字表法分为观察组和对照组,每组44例,观察组给予硫酸镁联合胰激肽释放酶治疗,对照组单纯给予硫酸镁治疗。观察两组子宫动脉和脐动脉血流状态及血清LXA4和血浆PTX3水平以及免疫功能指标。结果:治疗后,观察组收缩末期峰值/舒张末期峰值(S/D)、血流灌注指数(PI)及血清胱抑素C(CysC)、可溶性血管内皮生长因子受体1(sVEGFR1)水平均显著低于对照组,胎盘生长因子(PIGF)和一氧化氮(NO)水平显著高于对照组(均P<0.05)。治疗前,两组孕妇外周血LXA4、PTX3、CD28、细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)、CD28/CTLA-4及Th1、Th2及Th1/Th2比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);治疗后,观察组外周血LXA4、PTX3、CD28、CD28/CTLA-4、Th2显著高于对照组,CTLA-4、Th1及Th1/Th2显著低于对照组(均P<0.05)。结论:硫酸镁联合胰激肽释放酶治疗可有效改善重度PE孕妇子宫动脉和脐动脉血流状态及外周血LXA4、PTX3水平,减轻炎症反应,促进免疫功能恢复。

激肽释放酶4与釉质发生不全

激肽释放酶4(KLK4)在釉质发生的转换期和成熟早期大量表达,水解基质蛋白,降低牙釉蛋白与羟磷灰石的结合,促进釉质晶体的生长和矿化。如果其基因突变或缺失,将导致釉质发生不全。本文就KLK4的结构、KLK4的表达与生物学功能、KLK4的调控因子、KLK4与釉质发生不全等研究进展作一综述。

人组织激肽释放酶4在子宫内膜癌中的表达和预后的关系

目的 探讨人组织激肽释放酶4（ KLK4）在子宫内膜癌中的表达和对预后的影响，为改善子宫内膜癌的预后提供新的思路。方法 免疫组化法检测81例子宫内膜癌、30例不典型增生的子宫内膜和30例正常子宫内膜中KLK4的表达情况，收集患者临床病理资料，结合随访资料做生存分析，并分析KLK4的表达和子宫内膜癌预后的关系。结果 KLK4在正常内膜、不典型增生内膜和子宫内膜癌中的高表达率分别为30％、53％、67％，差异有统计学意义（χ^212．059，P＝0．002）；KLK4的高表达和子宫内膜癌的分化程度及深肌层浸润相关（χ^2=7．985，P＝0．021；χ^2=4．629，P＝0．031），与年龄、临床分期、淋巴结转移无关（χ^2分别为0．266、1．761、0．277，均P＞0．05）；KLK4高表达组的5年无进展生存率较低表达组更低，差异有统计学意义（P＝0．032）。结论 KLK4的高表达可能与子宫内膜癌细胞的分化和局部侵袭有关，其高表达提示早期复发，KLK4有可能作为预测子宫内膜癌早期复发的标志物。

急性心肌梗塞患者血浆前激肽释放酶和激肽酶动态变化

本文通过测定合成缓激肽的前激肽释放酶活力和使缓激肽灭活的激肽酶活力,探讨缓激肽与急性心肌梗塞时胸痛和低血压发生的关系。结果提示:激肽释放酶被活化,缓激肽产生增多。激肽酶活力下降,缓激肽灭活减少,导致血浆中缓激肽含量增加,可能与急性心肌梗塞时胸痛和低血压的发生关系密切。

人类激肽释放酶基因4、5在卵巢癌中的表达

目的研究人类激肽释放酶基因4(KLK4)与激肽释放酶基因5(KLK5)在卵巢癌组织中的表达水平,探讨其在恶性肿瘤中的作用机制。方法50例卵巢肿瘤组织标本分为恶性肿瘤组(n=23)、交界性肿瘤组(n=6)和正常或良性肿瘤组(对照组,n=21)。采用荧光定量RT-PCR技术对各组卵巢肿瘤组织标本进行检测,获得KLK4与KLK5的表达水平。结果KLK4在卵巢癌中的表达水平显著高于对照组(P<0.05);KLK5在卵巢癌和交界性卵巢肿瘤中的表达水平也显著高于对照组(P<0.001);KLK5在浆液性囊腺癌中的表达水平显著高于其他组织学类型的恶性肿瘤(P<0.05)和对照组(P<0.001),且低分化浆液性囊腺癌的表达水平高于中分化浆液性囊腺癌的表达(P<0.05)。KLK5的表达水平与血清CA125水平呈正相关。结论KLK5在卵巢癌,尤其是浆液性囊腺癌的发生与发展过程中可能具有潜在促进作用。

人激肽释放酶腺相关病毒载体的构建及其在人脐静脉内皮细胞中的表达

目的研究人激肽释放酶腺相关病毒载体的构建,观察重组病毒感染人脐静脉内皮细胞株后人激肽释放酶基因的表达。方法将人激肽释放酶基因定向克隆入AAV载体质粒pAAV-MCS中,并与两种辅助质粒pAAV-RC和pHelper共转染293细胞,包装成带有人激肽释放酶基因的重组腺相关病毒(rAAV);收集病毒颗粒并测定病毒滴度。以不同滴度的病毒分别感染人脐静脉内皮细胞,逆转录聚合酶链反应定量检测人激肽释放酶在该细胞中的表达。酶联免疫吸附法测定人脐静脉内皮细胞内人激肽释放酶的含量。结果成功获得了重组人激肽释放酶基因AAV载体,重组病毒滴度为6.2×1010个/L。以滴度分别为1×109个/L、1×108个/L和1×107个/L的病毒感染人脐静脉内皮细胞,与空白对照组比较,人激肽释放酶的表达均有增加(P<0.05),但以1×109个/L组升高最明显(P<0.001)。结论带有人激肽释放酶的重组腺相关病毒滴度可以稳定地达到1010个/L以上,感染人脐静脉内皮细胞后,人激肽释放酶基因在宿主细胞中的表达明显增强。

激肽释放酶相关肽酶家族在前列腺癌治疗中的研究进展

前列腺癌是世界范围内常见的男性恶性肿瘤之一,近年来发病率逐年升高。激肽释放酶相关肽酶家族(KLKs)广泛参与了前列腺癌的发生、发展过程。本综述总结了最新的KLKs(KLK2-15)治疗前列腺癌的方法。

激肽释放酶腺相关病毒载体的构建及病毒滴度的测定

目的 构建人组织激肽释放酶 (HK)腺相关病毒载体 ,并检测其滴度。为HK的真核表达及其临床研究提供实验基础。方法 从带有人HK基因的pBluescriptⅡKS质粒中扩增出HK cDNA ,并将HK cDNA克隆到腺相关病毒载体pAAV MCS中 ,构建pAAV HK表达质粒。并将此表达质粒和腺相关病毒包装质粒pAAV RC、以及腺病毒辅助质粒pAAV Helper共转染AAV 2 93细胞 ,通过同源重组产生重组HK的腺相关病毒。以pAAV LacZ和pAAV RC、pHelper共转染AAV 2 93细胞 ,对报告基因LacZ用X Gal染色 ,通过蓝染的细胞计算病毒滴度。结果 扩增出的cDNA片段经DNA测序最终确定为HK cDNA。通过LacZ测定HK重组腺相关病毒的滴度为 6 2× 10 7个 /ml。结论 重组HK的腺相关病毒可以在HT 10 80细胞中表达HK ,本实验为今后研究HK的生物学活性及心血管病的基因治疗奠定了基础。

人激肽释放酶相关肽10 ELISA方法建立及其临床应用

目的 建立人激肽释放酶相关肽10(KLK10)双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA),并利用该方法初步探讨KLK10作为乳腺癌肿瘤标志物的临床价值。方法 建立KLK10双抗体夹心ELISA检测方法,对该方法进行方法学评估。采用本方法检测健康正常人群(健康对照组)、乳腺良性病女性患者、乳腺癌女性患者血清中KLK10含量,分析KLK10含量与乳腺癌临床病理特性的相关性及其临床应用价值。结果 利用KLK10 ELISA检测方法检测乳腺癌患者、乳腺良性病患者、健康对照组血清中KLK10含量分别为(0.88±0.45)、(1.35±0.56)、(1.57±0.88)ng/m L,3组比较具有统计学差异(均P<0.05)。KLK10对乳腺癌具有较高的诊断灵敏度、准确率,其检测效能高于现有乳腺癌血清标志物。结论 成功建立了具有高灵敏度和特异性的KLK10双抗体夹心ELISA检测方法,可用于临床血清KLK10检测;KLK10与乳腺肿瘤的发生发展密切相关,有潜力成为乳腺肿瘤标志物。

激肽释放酶相关肽6对乳腺癌细胞迁移侵袭的影响及其组织表达意义

目的研究激肽释放酶相关肽6(KLK6)对体外乳腺癌细胞迁移及侵袭能力的作用,并探讨其在肿瘤组织中高表达的临床意义。方法运用划痕试验及Transwell细胞侵袭试验,评价人重组KLK6对乳腺癌细胞株MDA-MB-231的迁移及侵袭运动的影响,半定量反转录-聚合酶链反应检测激肽释放酶相关肽6在乳腺癌组织的表达水平,统计学方法分析其高表达的临床意义。结果 KLK6明显增强MDA-MB-231细胞的体外迁移及侵袭能力,KLK6与淋巴转移相关。结论 KLK6是一个潜在的预测乳腺癌肿瘤转移的分子诊断标志物及肿瘤治疗的基因靶点。

人激肽释放酶10、DJ-1、糖类抗原125、人附睾蛋白4在卵巢癌患者血清中的表达及其临床意义

目的探讨人激肽释放酶10(HK10)、DJ-1、糖类抗原125(CA125)及人附睾蛋白4(HE4)在卵巢癌患者血清中的表达及其临床意义。方法选取86例卵巢癌患者和50例卵巢良性病变患者,检测并比较卵巢癌和卵巢良性病变患者的血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平。比较不同临床特征卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平,采用Pearson相关分析法分析卵巢癌患者血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清HK10、DJ-1、CA125、HE4单独及联合检测对卵巢癌的诊断价值。结果卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平均明显高于卵巢良性病变患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。国际妇产科联盟分期(FIGO)为Ⅲ~Ⅳ期卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平均明显高于FIGO分期为Ⅰ~Ⅱ期的卵巢癌患者(P﹤0.01),低分化卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1水平均明显高于中高分化卵巢癌患者(P<0.01)。卵巢癌患者的血清HK10和DJ-1水平呈正相关(r=0.648,P<0.05)。血清HK10、DJ-1、CA125、HE4单独及联合检测诊断卵巢癌的ROC曲线下面积分别为0.857、0.873、0.852、0.794、0.930,灵敏度分别为74.00%、76.00%、74.50%、71.20%、79.50%,特异度分别为70.00%、74.00%、69.50%、65.50%、76.00%。结论卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平均较高,且与患者的临床特征有关。

组织激肽释放酶及其抑制剂与皮肤相关性疾病的研究进展

组织激肽释放酶(kallikreins,KLKs)家族是一类包含15个成员的丝氨酸蛋白酶,广泛表达于各种组织中,参与机体各种生理与病理进程。随着对KLKs研究的深入,发现其异常表达与多种皮肤相关性疾病的发生、发展有关,KLKs作为皮肤疾病药物干预新的潜在靶点,其抑制剂成为近年来国内外研究的热点,并取得了丰硕的成果。本文主要介绍了KLKs在皮肤中的生理与病理作用,并对KLKs抑制剂在皮肤病中的研究进展进行了综述。

重组人组织激肽释放酶基因转染人脐静脉内皮细胞

目的 探讨重组人组织型激肽释放酶 (HK)基因腺相关病毒载体 (rAVV/HK)对体外培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)作用。方法 将HK基因定向克隆入腺相关病毒质粒 pAAV MCS中 ,形成重组腺相关病毒 (rAAV HK)质粒 ,经聚合酶链反应 (PCR)检测和DNA测序后 ,将rAAV HK、pAAV Helper和 pAAV RC 3种质粒通过脂质体共转染 2 93细胞 ,包装成带有HK目的基因的重组rAVV/HK ,采用 β半乳糖苷酶原位染色法测定报告基因rAVV/LacZ在HT10 80中的表达 ,间接计算病毒滴度 ,并观察转染基因在传代细胞中的表达。在相同的条件下体外分别培养HUVECs(对照组 )和rAVV/HK转染的HUVEC(HK转染组 ) 4 8h ,采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测两组HUVECsHKmRAN的表达 ,并利用硝酸还原酶法和分光光度法分别检测两组HUVECs一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶 (NOS)活性。结果 rAVV/HK病毒滴度为 6 .2× 10 7个 /mL ,LacZ基因能够在第一传代和第六代HT10 80细胞内稳定持续表达。与对照组比 ,HK转染组HUVECsHKmRNA表达增加 (P <0 0 0 1) ;而且HK转染组HUVECs细胞培养液中NO的含量和NOS活性明显增高 ,P值分别 <0 0 1和 <0 0 5。结论 HK基因通过重组腺相关病毒载体可成功转染体外培养的HU VECs ,使其HKmRNA表达增加 。