卵巢上皮性癌组织中激肽释放酶7及14的表达及临床意义

目的研究激肽释放酶(kallikrein,KLK)7及KLK14在卵巢上皮性癌组织中的表达,并探讨其临床意义。方法采用RT-PCR及Western-blot技术测定KLK7及KLK14在50例不同临床分期、不同组织分级的卵巢上皮性癌中mRNA及蛋白表达。结果KLK7在卵巢癌中表达明显增高,且低分化组织较高分化组织表达高(P<0.01);KLK14在卵巢癌中表达亦增高(P<0.05),且晚期卵巢癌(Ⅲ、Ⅳ期)明显高于早期卵巢癌(Ⅰ、Ⅱ期,P<0.01);G3级卵巢癌高于G1、G2级卵巢癌(P<0.05)。结论KLK7、KLK14在卵巢癌的发生及转移中有潜在促进作用。

前列腺增生间质对上皮细胞组织激肽释放酶7表达的影响

目的:研究前列腺增生间质细胞对上皮细胞组织激肽释放酶7(KLK7)表达的影响。方法:分离良性前列腺增生(BPH)组织的间质细胞与上皮细胞,经细胞形态学及化学发光微粒子免疫分析(CM IA)方法证实后,构建上皮/间质细胞共培养模型;分别提取单独、共培养条件下上皮细胞的mRNA与蛋白;RT-PCR检测KLK7mRNA表达变化,W estern印迹检测KLK7基因编码蛋白(hK7)表达的改变。结果:细胞形态学、CM IA结果显示成功分离上皮与间质细胞,并构建前列腺间质/上皮细胞共培养模型;RT-PCR检测发现,KLK7基因mRNA的表达在有间质细胞共培养的上皮细胞中均高于单独培养的上皮细胞。KLK7/GAPDH的灰度比值分别为1.41±0.04、1.78±0.10,具有显著差异(P<0.01);W estern印迹与RT-PCR结果一致。结论:前列腺增生间质细胞抑制上皮细胞KLK7基因表达,KLK7可能是前列腺上皮细胞应对间质细胞调控的一种效应物质。

组织激肽释放酶7高表达前列腺癌PC-3单克隆细胞株的构建及其侵袭性研究

目的:构建重组人组织激肽释放酶7(KLK7)表达载体,建立稳定过表达KLK7的前列腺癌细胞株PC-3,并研究其细胞侵袭性。方法:将扩增后的KLK7cDNA克隆到表达载体pcDNA3.1上;使用限制性内切酶酶切后,DNA测序验证。然后,通过脂质体法转染人前列腺癌细胞株PC-3;选用G418进行筛选,并扩大培养每个单克隆细胞,进而建立稳定转染后的KLK7单克隆细胞株PC-3;Western blot检测目的蛋白的表达。通过细胞侵袭性试验了解其细胞侵袭性。结果:①通过酶切鉴定、DNA测序分析并证明,成功构建pcDNA3.1-KLK7表达载体;②成功获得稳定过表达KLK7的前列腺癌单克隆细胞株PC-3;③Western blot结果显示:经过pcDNA3.1-KLK7转染后的细胞与未转染的细胞表达量比较有统计学差异(P<0.01);④细胞侵袭性试验结果显示:转染后的细胞侵袭性高于未转染的细胞。结论:成功的建立pcDNA3.1-KLK7表达载体及稳定过表达KLK7的前列腺癌PC-3单克隆细胞株,同时证明其细胞侵袭性,为研究KLK7在前列腺癌发生、发展中的作用奠定了基础。

组织激肽释放酶7在胰腺癌治疗中的研究进展

胰腺癌在所有恶性肿瘤中预后最差,目前尚缺乏高效的综合治疗方案。研究发现,组织激肽释放酶7(KLK7)与胰腺癌的增殖、迁移及侵袭密切相关,是治疗胰腺癌的潜在靶点。因此,探讨KLK7在胰腺癌中的作用机制,促进相关抑制剂的研发将有助于胰腺癌的临床治疗。

高表达重组人组织激肽释放酶7基因的前列腺癌单克隆细胞株的构建

目的建立稳定高表达重组人组织激肽释放酶7基因(KLK7)的前列腺癌细胞株DU145,为前列腺癌发生机制的研究奠定基础。方法 PCR法扩增KLK7 cDNA,并克隆到真核表达载体pcDNA3.1上;经过限制性内切酶酶切、DNA测序验证正确后,以脂质体法转染人前列腺癌DU145细胞;通过G418筛选,每个单克隆细胞扩大培养,建立稳定转染KLK7的DU145单克隆细胞株。采用Western blot法检测DU145细胞株KLK7表达。结果酶切鉴定及DNA测序分析显示pcDNA3.1-KLK7真核表达载体成功构建;转染后,成功获得稳定高表达KLK7的DU145单克隆细胞株。Western blot结果显示,pcDNA3.1-KLK7转染的DU145细胞KLK7表达量明显高于转染空载体组细胞(P<0.01)。结论 pcDNA3.1-KLK7真核表达载体的建立及稳定高表达KLK7的前列腺癌单克隆细胞株的建立,为研究KLK7在前列腺癌发生发展中的作用提供了条件。

人类组织激肽释放酶7在前列腺癌与增生组织中表达的差异及意义

目的研究人类组织激肽释放酶7(human tissue kallikreins 7,hK7)在正常前列腺、前列腺增生和前列腺癌3种组织中表达的差异及其意义。方法采用免疫组化法,利用组织芯片检测正常前列腺、前列腺增生及前列腺癌组织中hK7蛋白的表达情况。结果 hK7的表达在正常前列腺、前列腺增生和前列腺癌3种组织之间差异有统计学意义(P=0.014),在前列腺癌中的表达要比在正常前列腺及前列腺增生中的表达下降(P<0.05);而hK7在正常前列腺和前列腺增生中的表达水平之间差异无统计学意义。结论在前列腺癌组织中hK7的表达较正常和增生前列腺组织降低,hK7可能具有潜在抑制前列腺癌的作用。

卵巢癌组织激肽释放酶7表达的临床意义

目的观察激肽释放酶（KLK）7基因表达与卵巢上皮性癌的关系，探讨卵巢上皮性癌的发生机制及相关基因的功能，寻找卵巢上皮性癌早期诊断、预后检测的新指标。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测40例卵巢上皮性癌、44例卵巢良性肿瘤和40例正常卵巢组织中KLK7的表达，分析KLK7基因表达与卵巢上皮性癌临床病理特征的关系。结果KLK7在正常卵巢组织中未见表达，KLK7在卵巢上皮性癌的阳性表达率为77．50％（31／40），显著高于良性肿瘤的22．73％（10／44），两者比较差异有统计学意义（P〈0．01）。且合并淋巴结转移标本的阳性表达率为91．67％（22／24），高于无合并淋巴结转移标本的56．25％（9／16），两者比较差异有统计学意义（P〈0．05）。但不同临床分期、不同组织类型卵巢癌组织中表达量差异均无统计学意义。结论KLK7在正常卵巢组织中无表达，在卵巢上皮性癌组织中高表达，尤其在合并淋巴结转移的卵巢上皮性癌中显著高表达。提示KLK7可能是一种新的反应卵巢上皮性癌恶性程度和预后的肿瘤标记物。

组织激肽释放酶7在宫颈上皮内瘤样病变组织表达的分析及临床意义

目的通过检测组织激肽释放酶7（KLK7）在不同级别宫颈病变组织中的表达，探讨KLK7在宫颈癌前病变进展中的作用，筛选高危个体，指导临床上对CIN 的个体化治疗。方法收集深圳市人民医院妇科2012至2014年手术切除标本120例，通过免疫组化方法检测CIN 组织中KLK7的表达，并以慢性宫颈炎组织，宫颈鳞癌作对照，分析宫颈癌前病变组织中 KLK7的表达水平，对其表达水平与CIN 不同级别的相关性进行分析。结果本研究证实KLK7广泛存在于CIN 的细胞浆和细胞核中，慢性宫颈炎组和CIN 组及宫颈癌组间差异有统计学意义，CIN 分级后有显著性差异。高级别CIN 及宫颈癌中KLK7阳性率显著高于低级别CIN 及慢性宫颈炎。慢性宫颈炎组织中KLK7有表达，但阳性结果中以低表达为主，阳性率52.5%。且随着CIN 级别升高，阳性细胞数显著增多，染色逐渐加深，阳性率从CIN1的77.5%增加到CIN3的97.5%。结论 KLK7在 CIN 的发生、发展连续过程中的表达逐渐增强，可能参与宫颈癌前病变的发生发展，KLK7高表达可能与宫颈癌发生相关。KLK7检测可能预测宫颈癌前病变预后。

激肽释放酶KLK7小分子抑制剂的筛选及活性初步研究

根据KLK7的晶体结构,采用美国ChemDiv化合物数据库进行计算机模拟筛选和人工挑选,并对获得的化合物进行KLK7活性抑制实验。结果表明,有4个化合物对KLK7活性具有较好的抑制作用,其IC50分别为37.166μM,25.32μM,28.955μM,36.078μM,可用于进一步的研究。

组织激肽释放酶7在前列腺癌组织中的低表达

近来有证据表明，人组织激肽释放酶7基因（碰K7）在不同的肿瘤中存在不同的调控。本研究的目的是确定组织激肽释放酶7和玉zK7基因在我们这项大样本量前列腺组织中的表达情况。从2010年8月到1012年12月，共116例和92例患者以组织学方法分别被确诊为前列腺癌和良性前列腺增生症。我们用免疫组化、定量逆转录聚合酶链式反应（RT_PCR）UweSternblot的方法，在mRNA和蛋白质层面上明确组织激肽释放酶7分别在良性增生前列腺和前列腺癌组织中的表达。并分析KLK7mRNA表达和临床病理学特征之间的关系。总计92例良性前列腺组织中的64例（69．57％）和1i6例恶性前列腺癌组织中的23例（19．83％）显示了组织激肽释放酶7阳性染色。两者之间有统计学显著性差异（氏0．001）。在前列腺癌组织中，KLK7mRNA较良性增生和正常前列腺组织中的表达显著降低。根据前列腺癌组织病理分类的不同，KLK7mRNA的表达也呈不同的表现方式。类似地，我们的westernblot蛋白分析提示了组织激肽释放酶7在前列腺癌组织中要较良性增生和正常前列腺组织的表达水平低。组织激肽释放酶7和KLK7mRNA在前列腺癌中的表达下调和低表达与前列腺癌的高Gleason评分和高前列腺特异性抗原水平密切相关。

MicroRNA-143对白介素13诱导的人角质形成细胞组织激肽释放酶7表达的影响

目的 探讨microRNA-143（miR-143）对白介素13（IL-13）诱导的人角质形成细胞组织激肽释放酶7（KLK7）表达的影响。方法 取对数生长期人皮肤原代角质形成细胞（NHEK），分别用0、2、10、50 μg/L IL-13处理24 h，或用50 μg/L IL-13分别处理0、6、12、24、48 h后，收集细胞，提取细胞总RNA，实时荧光定量PCR检测KLK7基因mRNA水平。再取部分NHEK，分为4组，即NHEK组（空白对照组，既不转染也不用IL-13刺激）、IL-13组（仅用50 μg/L IL-13处理）、miR-NC组（转染microRNA mimics阴性对照后用50 μg/L IL-13处理）和miR-143组（转染miR-143 mimics后用50 μg/L IL-13处理），IL-13处理24 h后，实时荧光定量PCR检测各组中KLK7 mRNA的相对表达水平，Western免疫印迹检测KLK7蛋白表达水平。结果 0、2、10、50 μg/L IL-13处理NHEK 24 h后，KLK7 mRNA的相对表达水平分别为1.00 ± 0.12、0.89 ± 0.04、1.15 ± 0.09和1.70 ± 0.10，随着IL-13浓度的升高，KLK7 mRNA相对表达水平有上升趋势（F = 92.48，P＜0.05）。50 μg/L IL-13分别处理NHEK 0、6、12、24、48 h后，KLK7 mRNA相对表达水平分别为1.00 ± 0.05、1.05 ± 0.12、1.71 ± 0.20、1.97 ± 0.19和2.48 ± 0.13，随着IL-13处理时间延长，KLK7 mRNA的相对表达水平有上升趋势（F = 206.44，P＜0.05）。与miR-NC组KLK7 的mRNA和蛋白相对表达水平相比，miR-143组均降低，差异有统计学意义（t值分别为6.76、4.23，均P＜0.05）。结论 在人角质形成细胞中，IL-13上调KLK7的表达可能与miR-143的调控相关。

激肽释放酶与特应性皮炎的关系研究进展

特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)是一种反复发作的皮肤炎症性疾病,其发病机制复杂,与遗传、免疫、环境等因素有关。研究表明激肽释放酶5(kallikrein5,KLK5)和激肽释放酶7(kallikrein7,KLK7)在AD患者的表皮中表达上调,且激肽释放酶的抑制剂LEKTI(lympho-epithelial Kazal-type-related inhibitor,LEKTI)表达水平降低,表明激肽释放酶KLK5,KLK7可能与特应性皮炎的发病有关。

KLK7蛋白及E-钙黏蛋白在子宫内膜癌中的表达及意义

目的:本实验通过研究E-钙黏蛋白及KLK7蛋白在子宫内膜癌中的表达,探讨其表达与子宫内膜癌的关系及临床意义。方法:将实验分为3组:16例增生期子宫内膜为正常组,30例不典型增生子宫内膜,35例子宫内膜癌,应用免疫组化SP染色方法检测E-Cad蛋白及KLK7蛋白在子宫内膜癌的表达及两者的关系。结果:与正常组比较,KLK7蛋白在不典型增生内膜及子宫内膜癌中的表达逐渐增高(P<0.05)。E-cad蛋白在不典型增生内膜及子宫内膜癌中的表达逐渐降低(P<0.05)。结论:通过本实验研究可知:KLK7蛋白和E-cad蛋白在子宫内膜癌的表达呈夫相关性,与子宫内膜癌的发生,发展密切相关,并为临床诊断及预后提出理论基础。

hK7多克隆抗体的制备及其在前列腺中的初步应用

目的:构建KLK7原核表达载体,诱导hK7蛋白表达,制备抗hK7多克隆抗体。并利用此抗体研究hK7在正常前列腺,前列腺增生和前列腺癌三种组织中表达的差异及其意义。方法:PCR扩增KLK7基因,和pET-21a载体构建pET-21a-KLK7重组表达质粒。转化大肠杆菌,筛选阳性克隆,IPTG诱导表达,纯化融合蛋白并鉴定,免疫家兔获得抗血清,ELISA检测抗体的效价。免疫组化检测组织芯片中正常前列腺,前列腺增生及前列腺癌组织中hK7蛋白的表达情况。结果:成功构建了pET-21a-KLK7重组表达质粒,经转化、诱导表达和纯化,SDS-PAGE证实重组hK7蛋白与预期结果一致。免疫家兔,得到抗血清,ELISA检测抗体效价为1:200万以上。免疫组化显示在前列腺癌中的表达要比在正常前列腺及前列腺增生中的表达下降(P<0.05)。结论:获得了高纯度的hK7蛋白,及高效价的多克隆抗体,前列腺癌中hK7的表达较正常和增生前列腺组织降低,hK7可能有潜在抑制前列腺癌的作用。

人KLK7基因的表达及其对细胞增殖与凋亡的影响

本研究旨在对人激肽释放酶7(KLK7)基因进行原核与真核表达,研究其功能,并为后续KLK7新型生物抑制剂的研制提供基础材料。采用PCR扩增KLK7基因,将其克隆至原核表达载体pGEX4T-1和真核表达载体pEGFP-C1,构建重组表达质粒pGEX4T-1-KLK7和pEGFP-C1-KLK7,分别转化Transetta(DE3)和DH5α感受态细胞,筛选阳性菌株,用IPTG诱导重组KLK7蛋白(rKLK7)表达,SDS-PAGE和Westernblot分析表达情况。将pEGFP-C1-KLK7转染人角质形成细胞HaCaT,观察KLK7在细胞中的定位,检测KLK7基因过表达对角质化细胞增殖的影响。KLK7基因开放阅读框为762 bp,编码254个aa。原核系统表达的rKLK7分子量为53.5 kDa。EGFP-KLK7融合蛋白定位在细胞质。KLK7的过表达对HaCaT细胞的增殖有一定的抑制作用,但差异不显著(P>0.05)。DNA检测表明,KLK7过表达可促进HaCaT细胞的凋亡。KLK7在原核表达系统和真核细胞中均成功表达,KLK7蛋白过表达对HaCaT细胞的增殖有一定的抑制作用,而对细胞凋亡有一定的促进作用。

多囊卵巢综合征血清中vaspin、KLK7表达水平及其与胰岛素抵抗相关性分析

目的检测多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者血清中人内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)和人组织激肽释放酶7(human kallikrein related petidase,KLK7)表达水平,比较PCOS患者与非PCOS患者血清中两者的表达差异,并分析两者与胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)之间的相关性。方法选取2021年4月至2022年8月就诊于山西医科大学第二医院且符合2003年鹿特丹诊断标准的18~35岁PCOS患者94例纳入PCOS组,将年龄相匹配的健康体检女性和(或)由于男方因素和(或)女方单纯因输卵管原因导致不孕的31例患者纳入NC组。根据胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)分为IR组和NIR组,PCOS患者分为PCOS伴IR组(PCOS+IR组)和PCOS不伴IR组(PCOS+NIR组)。比较各组间vaspin、KLK7的表达水平,并分析两者与HOMA-IR之间的关系。结果①PCOS组中vaspin、KLK7、HOMA-IR、FINS水平高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。②与NIR组比较,IR组中FBG、PBG、FINS、HOMA-IR、vaspin、KLK7水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。③PCOS+IR组中FBG、PBG、FINS、HOMA-IR、vaspin、KLK7显著高于PCOS+NIR组,差异有统计学意义(P<0.05)。④Vaspin与PBG、FINS、HOMA-IR、TG、LDL-C、KLK7呈正相关,与HDL-C呈负相关(P<0.05);KLK7与LH、T、PBG、FINS、HOMA-IR、vaspin呈正相关,且与HDL-C呈负相关(P<0.05)。⑤矫正其他变量之后行二元Logistic回归分析得出KLK7、LH是PCOS的独立危险因素(PKLK7=0.01、PLH=0.003)。⑥通过ROC曲线分析,KLK7和LH在诊断PCOS方面有一定的价值,二者联合具有更高的诊断价值。结论PCOS患者血清中vaspin、KLK7不同程度升高,且vaspin、KLK7与HOMA-IR呈正相关,提示vaspin、KLK7高表达参与了PCOS中IR发生发展;升高的vaspin与KLK7具有相关性;KLK7还可能具有预测PCOS的价值,联合LH预测价值更高。