细胞周期依赖性激酶抑制剂P27、P21在人角膜上皮的表达研究

目的 探讨细胞周期依赖性激酶抑制剂 (CKI) P2 7、P2 1在角膜上皮细胞的表达情况。方法 应用 SP免疫组化法 ,检测 P2 7、P2 1等细胞周期依赖性激酶抑制剂和增殖细胞核抗原 (PCNA)在角膜上皮不同部位的表达情况。结果 角膜缘上皮区 PCNA呈阳性表达 ,主要位于基底细胞层 ,中央区角膜上皮内未见阳性表达 ,差异有显著意义 (P <0 .0 1) ;P2 7、P2 1在中央区角膜上皮内呈阳性表达 ,角膜缘上皮内未见阳性表达 ,差异均有显著意义(P <0 .0 1)。结论 细胞周期依赖性激酶抑制剂 P2 7、P2 1和 PCAN在角膜上皮不同部位的表达差异 ,提示在角膜缘上皮基底层内存在着一群有较高的增殖能力、处于 G1 期的细胞群 。

p21WAF1/CIP1在兔外伤性增生性玻璃体视网膜病变发生和发展中的抑制作用

背景p21是一种细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂，能阻止细胞从G．期进入s期，抑制细胞增生，研究认为内源性p21表达的动态变化可能与细胞增生性病变有关。外伤性增生性玻璃体视网膜病变（PVR）是眼部增生性反应相关性疾病，了解PVR过程中p21表达的动态变化可能为PVR的靶向治疗提供依据。目的检测p21WAF1/CIP1在兔外伤性PVR中的动态变化，探讨其在外伤性PVR发病机制中的作用。方法选取青紫蓝兔54只，采用随机数字表法将实验兔随机分为正常对照组（6只）和造模后7、14、21和28d组（每组12只），每只兔任意选取一眼作为实验眼。各模型组兔眼玻璃体腔注射人富含血小板血浆（PRP）0．4ml，同时于鼻上方角巩膜缘后5mm处行巩膜外冷冻约5s，以建立外伤性PVR模型。各组兔眼行眼部B型超声检查以评估建模情况。分别于造模后7、14、21和28d以过量麻醉法处死实验兔并制备实验眼视网膜组织切片，采用苏木精-伊红染色法检测兔眼视网膜的形态表现，分别采用免疫组织化学染色、Westernbla及逆转录PCR（RT—PCR）法检测兔视网膜中p21WAF1/CIP1蛋白及其mRNA的相对表达。结果正常对照组兔眼眼前后节均正常，模型组兔造模后1～7d兔眼玻璃体中增生条索逐渐变粗，可见视网膜皱褶，造模后14d兔眼出现牵引性视网膜脱离，造模后28d兔眼漏斗状视网膜脱离。视网膜病理组织学检查显示，造模后7d兔眼视网膜表面有增生膜和炎性细胞聚集，造模后28d可见视网膜呈花瓣形固定皱褶，视网膜结构紊乱。免疫组织化学染色显示，p21WAF1/CIP1蛋白在正常对照组兔眼视网膜神经节细胞层及内核层的细胞核内呈强阳性表达，造模后7、14、21和28d表达强度减弱，以造模后14d表达量最低。Westernbla结果显示，正常对照组和造模后7、14、21和28d组兔眼视网膜中p21WAF1/CIP1蛋白相对表达量分别为0．74±0．08、0．60±0．05、0．56±0．03、0．74±0．02和0．65±0．04，组间总体比较差异有统计学意义（F=20．55，P=0．00），造模后7d和14d的表达量均明显低于正常对照组和造模后21d和28d组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。RT—PCR结果显示，正常对照组和造模后7、14、21和28d组兔眼视网膜中p21WAF1/CIP1。mRNA的相对表达量分别为0．65±O．09、0．57±0．05、0．45±0．04、0．46±0．02和0．47±0．04，总体比较差异有统计学意义（F=18．06，P=0．00），造模后14、21和28dp21WAF1/CIP1mRNA的相对表达量均明显低于正常对照组和造模后7d组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论p21WAF1/CIP1在外伤性PVR兔眼视网膜中的动态表达变化与PVR的病程发展过程相吻合，p21可能参与外伤性PVR发生和发展的病理过程，p21WAF1/CIP1表达量的下降与细胞增生的动态变化过程一致，可能促进了PVR的进展。

CyclinD1、p21^(WAF1)、p53及Ki-67在肝细胞癌中的表达及与预后的关系

目的探讨肝细胞癌(HCC)中cyclin D1、p21、p53及Ki-67蛋白的表达及其与HCC预后的关系。方法选择2000年1月-2005年1月在解放军总医院行手术切除的80例HCC患者的肝组织标本,采用EliVision法进行cyclin D1、p21WAF1、p53及Ki-67免疫组化染色,分析其表达水平与HCC病理特征的关系,并进行生存分析。结果 Cyclin D1、p21WAF1、p53及Ki-67在HCC中的阳性表达率分别为38.8%、40.5%、65.4%及80.0%,均明显高于癌旁肝组织(分别为19.0%、11.5%、0.0%、6.3%,P<0.005)。相关分析显示,cyclin D1阳性表达与核分级呈正相关(P=0.041),p21WAF1及p53阳性表达与肿瘤分化程度(P=0.032、P=0.031)和血管浸润(P=0.036、P=0.011)呈正相关,Ki-67阳性表达与肿瘤分化程度(P=0.004)、核分级(P=0.045)和血管浸润(P=0.001)呈正相关。生存分析显示,cyclin D1及Ki-67高表达者预后较差。Ki-67阳性表达与p53(P=0.000)及p21WAF1(P=0.047)阳性表达有明显相关性,其他各蛋白之间表达无明显相关。Cox回归模型分析显示,肿瘤大小(P=0.042)、肿瘤数目(P=0.004)及血管浸润(P=0.000)为HCC的独立预后因素。结论 Cyclin D1、p21WAF1、p53及Ki-67可能参与了HCC的生物学进程;cyclin D1及Ki-67阳性表达对HCC预后的判断有一定价值。

P21基因参与早期诱导RUNX1b过表达抑制人类造血发生

目的探究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1[CDKN1A(P21)]对造血发生过程的影响。方法对RUNX1b诱导过表达hES细胞系(RUNX1b/hESC)与小鼠主动脉-性腺-中肾区(AGM)基质细胞AGM-S3共培养4 d细胞,使用多西环素(DOX)(1μg/mL)与RepSox(0.33μmol/L)或不同浓度DOX(1、0.5、0.2、0.1μg/mL)诱导RUNX1b过表达时,以qRT-PCR技术检测P21与RUNX1b相对表达情况。利用基于转座子载体PiggyBac的PB-tet-on-OE真核诱导过表达系统,建立P21诱导过表达hES细胞系(CDKN1A/hESC)。分别在CDKN1A/hESC与AGM-S3共培养d0、d2、d4、d6添加DOX诱导P21过表达,培养8 d或14 d,通过流式细胞术(FACS)检测血细胞表面分子的变化情况,以判断诱导P21过表达对造血发生产生的影响。结果 qRT-PCR显示:P21表达量随着RUNX1b过表达上调,同时加入RepSox时表达基本处在正常水平,随着DOX浓度降低,RUNX1b与P21表达水平下降。在造血分化的早期,特别是共培养d0开始诱导P21过表达的共培养体系所产生的CD34^-CD43^+、CD34^-CD45^+与CD34^+CD45^+细胞群相较于对照分别降低了85%,94%和78%,当共培养d6后诱导P21过表达上述现象消失。结论 P21可能参与了由RUNX1b诱导过表达所引起的人类早期造血发生的抑制效应;早期诱导P21过表达明显抑制造血细胞产生。

P_(21)在肾小球系膜细胞的表达变化及意义

目的:探讨高糖、胰岛素对肾小球系膜细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂P21表达的影响及其与系膜细胞肥大的关系。方法:将培养的大鼠1097系膜细胞株分为8组:正常对照组,高糖组,甘露醇组,不同浓度胰岛素组,高糖加不同浓度胰岛素组。用RT-PCR法检测各组系膜细胞P21mRNA表达。流式细胞仪定量检测各组系膜细胞前向角度散射光(FSC)大小。结果:正常对照组系膜细胞中P21mRNA有一定表达。高糖组P21mRNA表达明显增加为正常对照组的3.89倍(P<0.01);FSC为正常对照组的1.42倍(P<0.01)。不同浓度胰岛素组系膜细胞P21mRNA表达及FSC大小随胰岛素浓度增加而增加,但无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)P21mRNA在正常肾小球系膜细胞有一定表达。(2)高糖刺激可使系膜细胞P21mRNA表达上调,且与渗透压无明显关系。(3)P21mRNA表达上调可导致系膜细胞肥大,在糖尿病肾病发病机制中起重要作用。

牛磺酸对胰腺癌细胞系BxPC-3和PANC-1细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨牛磺酸(Tau)对胰腺癌导管细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法体外培养胰腺癌BxPC-3和PANC-1细胞,采用不同浓度Tau(0、10、20、40、80、160 mmol/L)进行预处理。采用CCK-8、细胞划痕实验、TUNEL法观察Tau对BxPC-3和PANC-1细胞增殖、迁移和凋亡的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质免疫印迹法检测Tau影响BxPC-3和PANC-1细胞中相关细胞凋亡及细胞周期分子mRNA和蛋白表达的情况。结果Tau可抑制BxPC-3和PANC-1的细胞增殖和迁移活性;同时,Tau能够促进BxPC-3和PANC-1细胞凋亡。与对照组相比,Tau处理后的BxPC-3细胞中相关凋亡因子P53、P21、Bcl-2关联X蛋白(BAX)表达水平呈上升趋势,而增殖细胞核抗原(PCNA)的表达降低;Tau处理后的PANC-1细胞中B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、PCNA、细胞周期蛋白CyclinA2、CyclinB1、CyclinE、周期蛋白依赖性激酶CDK1、CDK2、CDK4、CDK6等的表达较对照组均下降,而相关凋亡蛋白P53、P21的表达水平升高。结论Tau可抑制胰腺癌细胞BxPC-3和PANC-1的增殖和迁移活性,并促进细胞凋亡,可能是通过影响相关细胞凋亡基因和细胞周期蛋白来抑制胰腺癌细胞的活性。

P21P27和P53蛋白在结肠癌组织中的表达

目的分析研究P21、P27和P53蛋白在结肠癌组织中的表达水平及关联。方法选择2011年2月至2014年11月来我院就诊的144例经外科手术切除的原发性结肠癌组织标本进行分析研究。采用免疫组织化学染色方法进行染色,根据相关评价标准计算出阳性细胞率和染色强度,并最终确定阳性率等级。结果P21蛋白在有淋巴结转移的结肠癌组织中的阳性率达70.5%,高于无淋巴结转移的结肠癌的阳性率(30.3%),差异具有统计学意义(P<0.05),与其他临床病理因素的关联性很小(P>0.05)。P27蛋白在无淋巴结转移的结肠癌组织中的阳性率达84.8%,高于有淋巴结转移的结肠癌的阳性率(55.1%),差异具有统计学意义(P<0.05);在结肠癌高中分化阳性率(80.6%)高于低分化阳性率(69.4%),差异具有统计学意义(P<0.05),但是与其他临床病理因素的关联性很小(P>0.05)。P53蛋白在结肠癌组织的阳性表达率与TNM分期、分化程度及浸润深度相关性大(P<0.05),但是与其他临床病理因素的关联性小(P>0.05)。结论 P21、P27、P53蛋白表达可以作为结肠癌的辅助诊断指标,3种蛋白在判断结肠癌的生物学行为上具有协同作用。

微RNA-132-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖与凋亡

目的 研究微RNA(miR)-132-3p在葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡中的作用及其作用机制。方法 该研究起止时间为2018年2月至2019年7月。定量聚合酶链反应(qPCR)检测正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19和葡萄膜黑色素瘤细胞SP6.5、M23中miR-132-3p表达。SP6.5细胞中转染miR-132-3p干扰质粒(anti-miR-132-3p)、第10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)过表达质粒(pcDNA3.1-PTEN)或共转染anti-miR-132-3p和PTEN干扰质粒(si-PTEN),MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法检测PTEN、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,生物信息学预测结合双萤光素酶报告实验分析miR-132-3p与PTEN的靶向关系。结果 与ARPE-19细胞相比,SP6.5、M23细胞中miR-132-3p表达量(0.26±0.02比0.94±0.09、0.81±0.08)明显升高(P<0.05)。与anti-miR-132-3p阴性对照(anti-miR-NC)组相比,anti-miR-132-3p组24 h、48 h、72 h的细胞活性(0.51±0.05比0.30±0.03、0.97±0.09比0.45±0.05、1.40±0.14比0.76±0.07)、cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量显著降低(P<0.05),细胞凋亡率[(8.03±0.68)%比(21.51±2.06)%]、P21、Bax水平明显提高(P<0.05),与过表达PTEN相同。miR-132-3p与PTEN之间有靶向调控关系。抑制PTEN能逆转抑制miR-132-3p对SP6.5细胞增殖的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用。结论 miR-132-3p通过直接靶向PTEN调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖与凋亡。

PTTG和p21作为无功能垂体瘤放射治疗预后的分子标志物

目的研究垂体瘤转化基因(PTTG)和细胞周期依赖性激酶抑制剂1A(p21)蛋白表达对无功能垂体瘤(NFPAs)患者放射治疗(简称放疗)预后的预测作用。方法收集2003年至2013年垂体瘤手术后并行伽马刀放射外科治疗(GKRS)的患者,共计89例样本。根据GKRS时间分为研究组和验证组;依据随访磁共振影像,肿瘤体积缩小≥20%的被认作放疗敏感;利用组织芯片(TMA)检测14种蛋白标志物在NFPAs中的表达。结果无论研究组还是验证组,COX回归分析显示细胞核PTTG(HR:1.355;P<0.05或HR:1.637;P<0.01)和细胞质p21(HR:1.174;P<0.01或HR:1.378;P<0.01)的高表达与放射治疗耐受显著相关;在研究组,卡普兰迈耶(KM)曲线分析显示PTTG核阴性(P<0.01)和p21细胞质低表达(P<0.01)的患者,具有更高的放疗敏感性,并在验证组中得到了印证(PTTG,P<0.05;p21,P<0.01)。结论细胞核PTTG或细胞质p21表达升高的NFPAs患者,更倾向于放射治疗耐受;PTTG和p21是预测NFPAs放射治疗效果的潜在分子标志物。

粗毛豚草素对人肺癌细胞A-549的抑制作用研究

目的探讨粗毛豚草素体外对人肺癌细胞A-549增殖的抑制作用及其作用机制。方法粗毛豚草素作用人肺癌细胞A-549后,应用MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测周期蛋白cyclin D1,细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21和p27的表达;免疫细胞化学技术检测增殖细胞核抗原(PCNA)的阳性表达。结果 A-549细胞经不同浓度(15、30、60、120μmol/L)粗毛豚草素作用72h后,细胞存活率分别为(57.30±3.92)%、(43.91±4.32)%、(17.82±2.73)%和(13.20±2.46)%,均低于对照组(96.30±2.08)%,差异有统计学意义(P﹤0.01)。粗毛豚草素(15、30μmol/L)作用A-549细胞24h,可使细胞发生G1/S期阻滞。3种浓度(15、30、60μmol/L)的粗毛豚草素作用24h,可抑制A-549细胞周期蛋白cyclinD1、CDK4的表达,使p21蛋白表达增高,但对p27蛋白表达无明显影响。粗毛豚草素(15、30、60μmol/L)可显著抑制PCNA表达,其表达强度分别为(35.7±2.3)%、(26.6±2.1)%和(14.1±2.2)%,均低于对照组(45.2±3.3)%(P﹤0.01)。结论粗毛豚草素可抑制肺癌细胞A-549增殖,其机制可能与改变细胞周期分布,下调cyclinD1、CDK4表达,上调p21的表达等有关。

以p53为靶点的新型抗肿瘤化合物细胞筛选模型的构建与应用

目的构建含有p53蛋白结合位点的p21或survivin基因启动子区的荧光素酶报告基因重组质粒,并获得稳定转染的细胞模型用于抗肿瘤化合物筛选。方法将含有p53蛋白结合位点的p21或survivin启动子区序列连接到pGL4.17-basic载体上,分别获得报告基因重组质粒pGL4.17-p21和pGL4.17-survivin;将两种重组质粒分别转染A549细胞,经G418筛选获得稳定转染细胞株A549-p21和A549-survivin;对该细胞模型进行条件优化,并将可调节p53蛋白表达的多种抗肿瘤药物作用于稳定转染细胞,通过荧光素酶检测和western blot方法验证细胞模型用于药物筛选的可行性。结果成功建立了分别含有p21或survivin启动子报告基因的A549-p21和A549-survivin稳定细胞模型,多种抗肿瘤药物作用该细胞后能够通过调节p53蛋白表达而影响报告基因荧光素酶活性。结论构建的稳定转染细胞模型可以用于筛选以p53为靶点的抗肿瘤化合物。

血小板衍生生长因子-BB通过转化生长因子-β信号系统调节大鼠血管平滑肌细胞内p21^WAF1表达

目的探讨血小板衍生生长因子（PDGF）-BB是否通过诱导转化生长因子（TGF）-β1表达及其信号系统调节p21^WAF1表达。方法采取8～9周龄雄性Sprague-Dawley大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）进行体外培养，分为对照组、中和性抗TGF-β1抗体组（20μg/ml，抗体组）、PDCF—BB组（40ng／ml）、PDGF-BB＋中和性抗TGF-β1抗体组（PDGF-BB＋抗体组），实验时间为48h。逆转录酶-聚合酶链式反应检测TGF-β1 mRNA的表达，ELISA方法检测TGF-β1蛋白的表达。Western blot检测p21^WAF1及TGF-β1信号系统下游蛋白表达，后者包括TGF-β1 Ⅰ类受体（在VSMC内表现为ALK-5）、Smurf2、pSmad2／3、Smad4、Smad7。结果PDGF—BB组的TGF-β1 mRNA（24h）和TGF-β1（48h）蛋白分子表达水平分别为（447．716±23．911）和（0．309±0．034）ng／ml，明显高于对照组（250．435±17．869）和（0．104±0．013）ng／ml（P均〈0．01）。p21^WAF1蛋白表达在对照组0．621±0．046和抗体组0．657±0．058之间差异无统计学意义，PDGF—BB组表达仅为0．204±0．033，与对照组和抗体组比较差异均有统计学意义（P均〈0．01），PDGF—BB＋抗体组表达为0．530±0．043，与对照组和抗体组相比差异均有统计学意义（P均〈0．05），与PDGF—BB组比较差异亦有统计学意义（P〈0．01）。PDGF—BB组ALK-50．634±0．060、pSmad2／3 1．894±0．184、Smad41．129±0．136及Smurf20．559±0．047的表达水平分别高于对照组和抗体组0．288±0．049和0．300±0．047、0．972±0．096和0．887±0．059、0．665±0．055和0．709±0．058、0．158±0．040和0．224±0．064（P均〈0．01），对照组与抗体组之间差异无统计学意义，以上蛋白PDGF—BB＋抗体组的表达分别比PDGF—BB组低了（85±9．5）％、（79±12）％、（91±17）％和（84±5）％。Smad7蛋白表达在对照组0．461±0.035与抗体组0．458±0．031之间差异无统计学意义，PDGF—BB组0．160±0．028与对照组和抗体组比较差异均有统计学意义（P均〈0．01）。PDGF—BB＋抗体组0．375±0．039与PDGF—BB组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论PDGF—BB调节p21^WAF1的表达部分通过TGF-β1及其信号系统。

p21在氧诱导视网膜新生血管模型小鼠视网膜中的表达

视网膜新生血管（RNV）生成主要依赖于血管内皮细胞的不断分裂、增生。p21是细胞周期中重要的负性调控因子，能够广泛结合并抑制各种细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）复合物的磷酸化活性，主要参与细胞周期中G1／S期的调控，使细胞阻滞于G1期进而抑制细胞增生。

散发性乳腺癌COMT、p21和NuMA基因多态性研究

目的探讨山东省内女性人群中,儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)、细胞周期循环激酶抑制基因p21WAF1、核有丝分裂器蛋白(NuMA)单核苷酸多态性与散发性乳腺癌发生的关系。方法采用等位基因特异性扩增法(ASA)对山东省122例正常对照者和140例乳腺癌患者的COMT基因Val158Met、p21WAF1基因Ser31Arg、NuMA基因Ala794Gly单核苷酸多态性进行检测,比较两组中各种基因型分布频率的差异,并进行统计学分析。结果 27.1%(38/140)散发性乳腺癌患者和8.2%(10/122)正常对照者的COMT基因发生纯合变异,两组间Met/Met纯合基因型分布频率的差异有统计学意义(χ2=15.638,P<0.001);随着乳腺癌临床分期(OR=5.00,P<0.001)、组织学分级(OR=5.40,P<0.001)的升高及淋巴结转移增多(OR=3.00,P=0.002),COMT突变基因型所占比例明显增大。而p21WAF1基因与NuMA基因各基因型分布频率在病例组和对照组间的差异无统计学意义(χ2=0.373,P=0.541;χ2=0.020,P=0.886)。结论 COMT基因Val158Met单核苷酸多态性可能与散发性乳腺癌的发生有关,可作为乳腺癌早期基因诊断的一个指标。

细胞周期调控基因p21和p27单核苷酸多态性与卵巢上皮性癌的关系

目的探讨细胞周期调控基因p21和p27的单核苷酸多态性（SNP）与卵巢上皮性癌（卵巢癌）发病风险的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测234例卵巢癌患者（卵巢癌组）和284例健康妇女（对照组）p21基因C／T和p27基因V／G SNP位点基因型和等位基因的频率分布。结果（1）对照组妇女p21基因的C／C、C／T和T／T基因型频率分别为34．2％、49．6％和16．2％，C和T等位基因频率分别为59．0％和41．0％；卵巢癌组患者3种基因型频率分别为28．2％、53．0％和18．8％，C和T等位基因频率分别为54．7％和45．3％。两组基因型频率和等位基因频率分别比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。3种基因型频率在4种病理类型的卵巢癌中的分布有明显差异（P=0．02），C／C基因型降低子宫内膜样癌的发病风险（OR为0．56，95％CI为0．32—0．98）。（2）对照组妇女p27基因、V/V、V／G和G／G基因型频率分别为88．4％、10．9％和0．7％，V和G等位基因频率分别为93．8％和6．2％；卵巢癌组患者的基因型频率分别为93．6％、5．1％和1．3％，V和G等位基因频率分别为96．2％和3．8％。两组基因型频率分布比较，差异有统计学意义（P=0．04），等位基因频率分布比较，差异则无统计学意义（P=0．09）。与V／G和G／G基因型比较，V/V基因型增加卵巢癌的发病风险（OR为1．92，95％C1为1．02-3．63）。结论021基因C／T多态性的C／C基因型可能降低子宫内膜样癌的发病风险，p27基因的V／V基因型可能是卵巢癌发病的潜在危险因素。

ts-SV40LT抗原转基因干细胞增殖活性的温度调控机制分析

目的:研究温度敏感性猿猴病毒40大T抗原(ts-SV40LT)转基因干细胞增殖活性的温度调控机制。方法:用含ts-SV40LT抗原的表达质粒转染脐带间充质干细胞(UCMSCs),将其分别置于33℃和37℃培养,细胞免疫荧光方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)活性,PCR-ELISA端粒酶检测法检测端粒酶活性及细胞周期,WesternBlot法检测周期素(Cyclin)D1、CyclinE、周期素依赖性蛋白激酶(CDK)2、CDK4、CDK6、P16和P21的蛋白表达情况,免疫荧光方法检测巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:细胞在33℃时培养24、48、72h的PCNA阳性表达百分率均高于37℃时,差异有统计学意义(P<0.01)。转染tsSV40LT抗原基因后,细胞在33℃培养箱时的端粒酶活性和PIx值高于37℃时,差异有统计学意义(P<0.01)。33℃时的CyclinD1、CyclinE、CDK2、CDK4、CDK6及Nestin表达量高于37℃时,P16、P21、NSE和GFAP的表达量低于37℃时,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:通过tsSV40LT抗原基因的有效转染可实现干细胞在不同温度环境下的增殖调控。

p21和p27在肿瘤发生机制中的作用与耐药性

人类肿瘤的发生是由于细胞生长和死亡的不平衡导致的.控制这个平衡的关键是调节细胞周期的蛋白.目前发现的与密切调节细胞周期特定阶段效应分子包括细胞周期蛋白,细胞周期蛋白依赖性激酶（cyclin-dependent kinases CDKs）和CDK抑制因子.G1期检测点的CDK抑制因子-p21（CDKN1 A）和p27（CDKN1 B）影响许多恶性肿瘤的发生发展.越来越多的证据表明p21或p27功能的缺失可以促进耐药.而另外一些实验证明p21和p27能促进肿瘤的发生发展.在本文中,我们将讨论这两个CDK抑制因子的功能,在肿瘤发生机制以及在耐药性中的作用.

补脾益肾中药对阿霉素诱导大鼠慢性肾损害肾组织p21和TGF-β1的影响

目的 研究补脾益肾中药对阿霉素诱导大鼠慢性肾损害肾脏病变的影响,探讨其对肾间质纤维化和肾小球硬化的延缓作用.方法 健康雄性SD大鼠36只,随机分为模型组和空白对照组；模型建立后,模型组大鼠又随机分为模型对照组、苯那普利组和中药低、中、高剂量组;观察造模后第14天、第28天、第42天各组大鼠的一般情况、生化指标,第42天实验结束时处死大鼠取肾,用免疫组织化学染色方法测定各组大鼠肾组织中p21、TGF-β1表达的变化.结果 阿霉素诱导大鼠慢性肾损害的大鼠7天后出现蛋白尿,14d尿蛋白排泄达到高峰；中药治疗组、苯那普利组均明显降低阿霉素肾病大鼠的24 h尿蛋白量（P＜0.05）,其中中药高剂量组疗效更显著；肾组织病理切片示模型组大鼠肾组织中p21 （518886.35±6810.89）和TGF-β1 （222012.95±50484.73）表达明显增加（P＜0.05）;中药高剂量治疗组p21 （288627.66±97021.65）和TGF-β1（98405.14±19216.89）表达明显低于模型对照组（P＜0.05）.结论 补脾益肾法中药复方制剂可能通过调节肾组织中p21和TGF-β1的表达以减少蛋白尿从而保护肾脏,延缓肾脏病的进展.

氧诱导视网膜病变小鼠模型中参与p21调控的miRNA表达谱分析

目的观察氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠视网膜组织中miRNA的表达,筛选与p21及视网膜新生血管(RNV)形成相关的miRNA。方法实验研究。40只健康7日龄C57BL/6J小鼠随机分为正常组和OIR组,每组20只。OIR组构建氧诱导RNV模型,正常组不做任何处理。小鼠17日龄时,处死小鼠,视网膜荧光铺片观察小鼠RNV发生情况;光学显微镜下计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核。取视网膜组织行miRNA芯片分析,检测正常组与OIR组之间差异表达的miRNA。所得差异miRNA靶基因分别进行基于基因注释(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)的富集分析;通过Targetscan、MiRanda、MicroT-CDS数据库比对筛选可能与p21有关的miRNA及通路。组间两两比较采用独立样本t检验。结果与正常组比较,OIR组小鼠视网膜无灌注区面积、RNV及突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量增加,差异均有统计学意义(t=18.800、9.025,P<0.05)。与正常组比较,OIR组有统计学差异表达的miRNA 54个,其中,上调、下调者分别为47、7个。从3个数据库与所得差异miRNA的比对结果中共筛选到与p21相关miRNA 13个,按差异倍数从高到低分别为miR-7218-5p、miR-322-5p、miR-224-5p、miR-335-5p、miR-329-3p、miR-362-3p、miR-532-5p、miR-20b-5p、miR-20a-5p、miR-195a-5p、miR-423-5p、miR-497a-5p、miR-129-5p。差异miRNA靶基因富集分析,得到1112个GO条目及50条KEGG通路,其中50个GO条目和13条KEGG通路与p21相关。结论在OIR模型中共筛选出13个与P21相关的miRNA。