细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白27基因在胃癌中表达及其与启动子甲基化的关系

目的探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白27（p27^KiP1）在胃癌中的表达及其与基因启动子甲基化的关系。方法采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白．过氧化物酶（SP）法检测97例胃癌标本p27^KiP1蛋白的表达，并选取25例正常胃黏膜组织作对照，同时应用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）方法对启动子甲基化进行检测。结果正常胃黏膜组织中p27^KiP1蛋白表达率明显高于胃癌组（X2=31．02，P〈0．01）。在高／中分化组、黏膜层／黏膜下层组和无淋巴结转移的病例中，p27^KiP1蛋白表达率分别为66．67％（30／45）、92．86％（13／14）、79．07％（34／43），但随着胃癌分化程度的降低，侵及肌层／浆膜层或发生淋巴结转移，p27^KiP1蛋白表达率明显降低，分别为30．77％（16／52）、39．76％（33／83）、22．22％（12／54）（，值分别为12．47、13．55、31．03，P〈0．01）。46例p27^KiP1蛋白高表达病例中仅有5例出现启动子甲基化，而在51例p27^KiP1蛋白低表达病例中启动子甲基化高达21例（X2=11．32，P〈0．01）。结论p27^KiP1与胃癌发生发展密切相关。p27^KiP1蛋白表达降低常提示胃癌的低分化、高侵袭转移能力。p27^KiP1基因启动子甲基化可以引起p27^KiP1蛋白表达下调或缺失．与胃癌的发牛发展密切相关．

B细胞淋巴瘤／白血病-2相关X蛋白和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白27在中心型软骨肉瘤组织的表达及临床意义

目的研究中心型软骨肉瘤（Central chondrosarcoma）中B细胞淋巴瘤／白血病12相关X蛋白（bax）及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白27（p27^kipl）蛋白的表达与病理分级及预后的关系，并探讨两者表达的临床意义。方法选取60例确诊的中心型软骨肉瘤患者，术后随访超过5年，按照病理分型及预后对其病理标本分别进行分组，并选用20例非肿瘤软骨标本作为对照，采用免疫组织化学法检测上述标本中bax和p27^kipl蛋白的表达。结果60例中心型软骨肉瘤中，bax蛋白各级别间阳性表达率分别为Ⅰ级90％、Ⅱ级78．9％、Ⅲ级66．7％，差异有统计学意义（P〈0．05），在不同预后组中bax蛋白阳性表达率分别为治愈组80．0％、复发组75．0％、转移组75．0％，差异无统计学意义（P〉0．05）；p27^kipl州蛋白各级别阳性表达率分别为Ⅰ级90％、Ⅱ级70．9％、Ⅲ级61．9％，差异有统计学意义（P〈0．05），在不同预后分组中p27^kipl蛋白阳性表达率分别为治愈组80．4％、复发组66．7％、转移组37．5％，差异亦有统计学意义（P〈0．05）。结论bax及p27^kipl蛋白的表达与中心型软骨肉瘤的病理分级明显相关，但bax不能作为判断预后的指标，而p27^kipl蛋白则可作为判断预后的指标。

胃癌中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白27基因蛋白表达、基因突变及其与启动子甲基化的关系

目的探讨胃癌中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白27基因（P27^KiPI）蛋白表达、基因突变及启动子甲基化的关系。方法采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法、聚合酶链式反应-单链构象多态性分析（PCR—SSCP）技术、甲基化特异性聚合酶链式反应（MSP）方法分别检测97例胃癌中^KiPI基因蛋白表达、基因突变及启动子甲基化，并选取25例正常胃黏膜组织作对照。结果正常胃黏膜组织中^KiPI蛋白高表达率明显高于胃癌组（χ^2=31．02，P〈0．01）。早期胃癌组中^KiPI蛋白高表达率也高于进展期胃癌组（χ^2=13．55，P〈0．01）。正常胃黏膜组织中未检测到基因突变及启动子甲基化，胃癌组织中检测到^KiPI基因突变及启动子甲基化，但在早期胃癌及进展期胃癌中两者差异无统计学意义（χ^2=0．13、0．32，P〉0．05）。46例^KiPI蛋白高表达病例中仅有5例出现启动子甲基化，而在51例^KiPI蛋白低表达病例中启动子甲基化高达21例，另有5例出现基因突变（χ^2=17．89，P〈0．01）。结论^KiPI蛋白的表达下调或缺失与胃癌的发生发展有关。^KiPI基因突变及启动子甲基化在胃癌的早期阶段就可能已经发生并保存下来。^KiPI基因启动子甲基化及基因突变，特别是启动子甲基化可以引起^KiPI蛋白表达下调或缺失。

缺氧诱导因子-1α、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白27在胃癌中的表达及其与肿瘤细胞增殖的关系

目的探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白27（P27^KiP1）在胃癌中的表达及其与肿瘤细胞增殖的关系。方法采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白．过氧化物酶（sP）法检测97例胃癌组织中HIF-1α和P27^KiP1的表达，同时应用流式细胞仪检测s期细胞比例（SPF）。结果早期胃癌HIF-1α蛋白阳性率明显低于进展期胃癌（X^2=5．18，P〈0．05）；但前者P27^KiP1蛋白阳性率明显高于后者（X2=13．55，P〈0．01）。两者SPF值分别为18．4±3．2、24．5±3．9，其差异有统计学意义（t=5．189，P〈0．01）。胃癌中HIF-1α、P27^KiP1的表达与SPF值明显相关（t值分别为7．936、7．404，P〈0．01）。胃癌中HIF-1α、P27^KiP1的表达无相关（X2=1．67，P〉0．05）。结论HIF．1cx可以促进胃癌肿瘤细胞的增殖从而促进胃癌的进展，而P27^KiP1能抑制肿瘤细胞的增殖从而抑制胃癌的进展。HIF-1α与P27^KiP1在胃癌的进展中起独立作用。

细胞周期蛋白E和p27在鲍温样丘疹病和外生殖器表皮原位癌中的表达

目的:探讨细胞周期相关因子细胞周期蛋白E及其依赖性蛋白激酶抑制蛋白p27,在高危型人乳头瘤病毒(HPV)相关的鲍温样丘疹病及外生殖器表皮原位癌中的变化及意义。方法:采用通用型引物聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对51例外生殖器部位上述病变进行HPV DNA的检测和分型,应用免疫组化方法检测病变中细胞周期蛋白E和p27的表达。结果:40例鲍温样丘疹病、5例生殖器鲍温病及6例Queyrat增殖性红斑HPV DNA的阳性率分别为55.0％、100.0％和33.3％,HPV16为主要型别;高危型HPV相关的病变中细胞周期蛋白E的表达明显高于正常上皮,且HPV阳性组明显高于HPV阴性组,而p27表达明显低于正常上皮,且HPV阳性组明显低于HPV阴性组。上述疾病中细胞周期蛋白E与p27的表达呈负相关。结论:HPV16感染与鲍温样丘疹病及外生殖器表皮原位癌的发生有密切关系,并可能通过影响细胞周期蛋白E和p27表达及两者的相互作用引起感染上皮的增生及恶变。

skp2、p27^(kip1)在正常胃黏膜和胃癌组织中的表达

[目的]探讨细胞S相激酶相关蛋白2(skp2)和细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白27(p27kip1)表达与胃癌发生的关系。[方法]用免疫组化SP法检测69例胃癌组织中skp2、p27kip1蛋白的表达,并与28例正常胃黏膜作对比;用RT-PCR方法随机检测其中3例胃癌组织中skp2的mRNA表达,并与其正常胃黏膜作对比。[结果]p27kip1蛋白阳性表达率在胃癌中为46.38%,而正常胃组织中为96.43%(P<0.01)。p27kip1蛋白在胃癌中的阳性表达率随肿瘤分化程度的降低、浸润深度的加深、淋巴结转移、病理分期进展而降低(P<0.05)。skp2mRNA在胃癌组织中的表达明显上调(P<0.01)。skp2蛋白阳性表达率在胃癌中为33.33%,而正常胃组织中为10.71%(P<0.05)。skp2蛋白阳性表达率随肿瘤的分化程度降低而升高(P<0.05)。skp2、p27kip1蛋白在胃癌中的表达呈负相关(P<0.01)。[结论]p27kip1、skp2蛋白检测有助于胃癌的临床诊断及判断预后。

乳腺癌组织中PTEN、MMP-9及p27^(kip1)表达及意义分析

目的分析第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白(phosphatase and tensin homolog deleted on chro-mosome ten,PTEN)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白27(cyclin dependent kinase inhibitor protein 27,p27^(kip1))在乳腺癌组织中的表达情况,讨论其在乳腺癌发生、发展中的意义。方法选取2014年2月至2016年2月本院肿瘤科和乳腺外科收治的55例乳腺癌患者(乳腺癌组)和35例乳腺良性病变患者(乳腺良性病变组)为研究对象。采用免疫组织化学SP法检测入选患者PTEN、MMP-9、p27^(kip1)的表达水平。结果乳腺良性病变组PTEN和p27^(kip1)的表达率(82.86%,85.71%)均显著高于乳腺癌组(45.45%,43.64%)(P<0.05),MMP-9的表达率(42.86%)显著低于乳腺癌组(69.09%)(P<0.05)。乳腺癌组织中PTEN的表达与MMP-9的表达呈负相关(r=-0.587,P<0.05),与p27^(kip1)的表达呈正相关(r=0.532,P<0.05)。结论 PTEN与p27^(kip1)表达异常可能与乳腺癌的发生、发展及预后相关。MMP-9参与乳腺癌的发生、发展,可作为评估乳腺癌浸润和转移的生物学指标。

叉头蛋白转录因子3a／p27激酶抑制蛋白1及氧化应激介导紫铆因抗肺腺癌的机制

目的观察紫铆因（Butein）的抗肺腺癌作用及叉头蛋白转录因子3a（FOX03a）／p27激酶抑制蛋白1（p27kipl）和氧化应激在该过程中的作用。方法常规培养A549细胞，分别给予25、50、100μmol／L的Butein处理24h后，检测细胞活力、细胞迁移能力、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3活性、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶活性、活性氧（ROS）含量、总谷胱甘肽（GSH）水平，从而明确Butein通过激活氧化应激抑制A549细胞。Westernblot法检测FOX03a、p27kipl、B淋巴细胞瘤-2（bcl-2）、bcl-2相关x蛋白（bax）的表达水平。进而采用小干扰RNA（siRNA）干扰法敲减FOX03a表达并检测FOX03a、p27kipl以及bax、bcl-2的表达水平，从而明确FOX03a／p27kipl通路在该过程中的作用。结果25、50、100μmol／L的Butein处理A549细胞24h后，细胞活力分别下降到（78．3±4．6）％、（63．5±4．8）％和（40．1±4．1）％（t=10．330，P=0．000），细胞划痕间距增大到（120．0±8．4）％、（150．0±10．6）％和（175．0±11.1）％（t=4．777，P=0．001）。Butein处理后Caspase-3、NADPH氧化酶的活性增强，ROS含量增多，总GSH减少。Westernblot结果显示Butein激活了FOX03a／p27kipl通路，上调了bax／bcl-2的比值。siRNA处理后阻断了FOX03a／p27kip1通路，逆转了Butein引起的bax的增多和bcl-2的减少。结论Butein能显著抑制肺腺癌A549细胞增殖和迁移，该作用可能是通过激活FOX03a／p27kipl信号通路和细胞内氧化应激进而诱导细胞凋亡实现的。

高氧诱导新生鼠肺纤维化中CDK2及P27的表达和意义

目的探讨细胞周期依赖蛋白激酶2(CDK2)及细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子(P27)在高氧致慢性肺疾病(CLD)新生鼠肺纤维化中的动态表达规律及作用。方法采用高浓度氧诱导新生鼠CLD模型,应用免疫组织化学法、实时定量PCR法及Western blot技术,检测肺组织CDK2及P27蛋白和基因的表达,并同时测定肺组织纤维化评分。结果与对照组相比,实验组14、21dCDK2蛋白和基因的表达明显升高(P<0.05),P27的表达明显降低(P<0.05)。CDK2的动态表达变化与纤维化程度呈正相关(r=0.702),P27与纤维化程度呈负相关(r=-0.765)(P<0.05)。结论 CDK2及P27的异常表达与高氧致CLD肺纤维化密切相关。

藻蓝蛋白对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察藻蓝蛋白对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法将48只SPF级SD大鼠左冠状动脉前降支用丝线结扎30 min后恢复灌注的方法建立急性心肌缺血再灌注损伤模型,术后随机分为模型对照组和藻蓝蛋白A、B组,另取8只不造模作为空白对照组。藻蓝蛋白A、B两组用藻蓝蛋白混悬液[100、400 mg/(kg·d)]灌胃给药治疗10 d,空白对照组和模型对照组等量生理盐水灌胃。检测静脉血总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性及大鼠左心室缺血区心肌组织丙二醛(MDA)含量,免疫组化技术检测各组大鼠心肌细胞内诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的表达,图像分析法检测冠状动脉细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子P21和P27的表达。结果经藻蓝蛋白治疗后,藻蓝蛋白A、B两组T-SOD和GSH-PX活性明显提高,MDA显著降低,冠状动脉P21和P27基因高表达,i NOS阳性细胞数明显减少,与模型组和本组成模后比较,差异均有统计学意义(P<0.05);藻蓝蛋白A、B组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论藻蓝蛋白通过促进蛋白依赖激酶抑制因子P21和P27基因表达,提高T-SOD和GSH-PX酶活性,抑制缺血心肌产生i NOS及脂质过氧化反应对心肌细胞的破坏,降低心肌细胞病理性血管重构而达到心肌保护作用。

Skp2、C-myc、p27在宫颈癌组织中的表达及其意义

目的:探讨S期激酶相关蛋白2(Skp2)、C-myc及p27蛋白在正常宫颈、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)、宫颈癌组织中表达及其临床意义。方法:利用免疫组化S-P法检测Skp2,p27和C-myc在正常宫颈、CIN、宫颈癌石蜡组织中的表达情况,分析Skp2、C-myc蛋白与宫颈癌临床病理特征的关系,并且分析3者在宫颈癌组织中表达相互关系。结果:Skp2、C-myc在正常宫颈、CIN、宫颈癌组织中阳性表达率表达逐渐增高(Skp2:0%,15.38%,57.5%;C-myc:13.33%、15.38%、55.00%);而p27则相反(73.33%,69.23%,35.00%);Skp2的表达与临床分期,分化程度,淋巴结转移有关;C-myc的表达与肌层浸润深度有关;Skp2和p27在宫颈癌中表达呈负相关(r=-0.641,P<0.05);Skp2和C-myc在宫颈癌中表达呈正相关(r=0.646,P<0.05);C-myc和p27在宫颈癌中表达无相关性(r=0.032,P>0.05)。结论:Skp2及C-myc在正常宫颈、CIN、宫颈癌发展中表达逐渐升高,而p27表达逐渐降低;Skp2与C-myc表达呈正相关,Skp2与p27呈负相关。C-myc、Skp2、p27联合检测对判断宫颈癌的发生、发展及预后有重要意义。

外阴上皮内非瘤样病变女性患者细胞周期蛋白D1、周期素依赖性蛋白激酶4和周期素依赖性蛋白激酶抑制因子P27的表达及意义

目的探讨外阴上皮内非瘤样病变(NNEDV)女性患者细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)、周期素依赖性蛋白激酶4(CDK4)和周期素依赖性蛋白激酶抑制因子P27 (P27)的表达及意义,为临床诊治提供参考依据。方法采用免疫组织化学(SP)法研究NNEDV患者皮损中Cyclin D1,CDK4及P27蛋白的表达。结果①NNEDV组织的3组病理类型[外阴鳞状上皮增生(SH)组、外阴硬化性苔癣(LS)组、SH合并LS组]中Cyclin D1、CDK4蛋白阳性表达率明显高于正常组,差异有统计学意义(均P<0. 05),P27蛋白阳性表达率低于正常组,但差异无统计学意义(均P>0. 05);而病变的3组病理类型之间Cyclin D1、CDK4及P27蛋白阳性表达率差异无统计学意义(均P>0. 05)。②Cyclin D1和CDK4在NNEDV组中棘细胞层/基底细胞层阳性表达率的比值高于正常组,差异有统计学意义(均P<0. 01); P27的棘细胞层/基底细胞层阳性表达率比值在两组中差异无统计学意义(P>0. 05)。结论①Cyclin D1及CDK4蛋白的高表达可能是NNEDV发病的原因之一。②NNEDV的3种病理类型可能具有共同的或相似的发病机制。③NNEDV组织各层上皮细胞增殖不平衡说明NNEDV存在恶变的可能性。④本研究认为在NNEDV的随访中P27蛋白作为随访病变恶变的指标比Cyclin D1及CDK4的意义更大。

藻蓝蛋白降低大鼠心肌缺血-再灌注损伤的机制研究

目的观察藻蓝蛋白对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的影响并分析可能机制。方法选取大鼠36只,用随机数字表法均分为空白对照组、模型组和治疗组。模型组和治疗组采用反复3次丝线结扎、复灌左冠状动脉前降支45 min的方法建模。建模后治疗组用10%藻蓝蛋白混悬液以200 mg/(kg·d)分2次灌胃治疗7 d,空白对照组和模型组用等体积生理盐水灌胃。采用图像分析法检测大鼠冠状动脉细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p27、p21表达;采用免疫组织化学染色后检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS);酶联免疫吸附法检测大鼠心室内动脉血清超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)。结果治疗组大鼠冠状动脉细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p27、p21高表达,iNOS阳性细胞及SOD、NO水平升高,CK-MB、MDA水平均明显降低,与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论藻蓝蛋白具有抑制心肌缺血-再灌注损伤的效应。

细胞周期调控基因p21和p27单核苷酸多态性与卵巢上皮性癌的关系

目的探讨细胞周期调控基因p21和p27的单核苷酸多态性（SNP）与卵巢上皮性癌（卵巢癌）发病风险的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测234例卵巢癌患者（卵巢癌组）和284例健康妇女（对照组）p21基因C／T和p27基因V／G SNP位点基因型和等位基因的频率分布。结果（1）对照组妇女p21基因的C／C、C／T和T／T基因型频率分别为34．2％、49．6％和16．2％，C和T等位基因频率分别为59．0％和41．0％；卵巢癌组患者3种基因型频率分别为28．2％、53．0％和18．8％，C和T等位基因频率分别为54．7％和45．3％。两组基因型频率和等位基因频率分别比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。3种基因型频率在4种病理类型的卵巢癌中的分布有明显差异（P=0．02），C／C基因型降低子宫内膜样癌的发病风险（OR为0．56，95％CI为0．32—0．98）。（2）对照组妇女p27基因、V/V、V／G和G／G基因型频率分别为88．4％、10．9％和0．7％，V和G等位基因频率分别为93．8％和6．2％；卵巢癌组患者的基因型频率分别为93．6％、5．1％和1．3％，V和G等位基因频率分别为96．2％和3．8％。两组基因型频率分布比较，差异有统计学意义（P=0．04），等位基因频率分布比较，差异则无统计学意义（P=0．09）。与V／G和G／G基因型比较，V/V基因型增加卵巢癌的发病风险（OR为1．92，95％C1为1．02-3．63）。结论021基因C／T多态性的C／C基因型可能降低子宫内膜样癌的发病风险，p27基因的V／V基因型可能是卵巢癌发病的潜在危险因素。