混合酶液灌注消化揉搓法分离和培养人脐静脉内皮细胞

目的：建立简便、稳定的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分离和培养方法。方法：采用胰蛋白酶／胶原酶（1：1，V：V）混合酶液灌注消化揉搓方法分离获得HUVECs，简化完全培养液的组成成分（不添加血管内皮细胞生长因子、肝素等辅助因子），以含20％的胎牛血清（FBS）M199液进行培养；采用细胞形态学和Ⅷ因子免疫组织化学染色法及荧光DiI-Ac-LDL法进行鉴定。结果：接种培养的血管内皮细胞（VECs）4h开始铺展贴壁，3～7d生长最快，8～10d汇合呈单层“铺路石”样外观，免疫组织化学染色法和荧光法鉴定纯度达95％以上。结论：混合酶液灌注消化揉搓方法获得了足够数目和纯度的VECs，保持了细胞的同源同代性。