养殖环境中砖火丝菌的分离鉴定及抗菌药物筛选

为了解养殖环境真菌污染情况,并筛选相应抗菌药物,本试验刮取养殖环境中墙角等真菌污染严重部位的真菌,用PDA培养基进行分离纯化培养,以ITS1、ITS4为引物进行DNA测序,将所得序列结果与NCBI核酸数据库参考菌株进行相似性比对,确定分离菌株的种属,再分别测定双乙酸钠、山梨酸钾、肉桂醛、苯扎氯铵四种抗真菌药的最小抑菌浓度(MIC),选出最优成分进行复配及联合抑菌试验,并以分级抑菌浓度(FICI)指数作为复配抑菌试验结果评价的判定依据,筛选出联合抗真菌药物的最佳比例。结果得出:墙角分离出的优势真菌鉴定为砖火丝菌(Pyronemadomesticum);肉桂醛、双乙酸钠、山梨酸钾、苯扎氯铵四种药物对砖火丝菌的MIC值分别为128、4、1 mg/mL及4μg/mL;选择双乙酸钠、山梨酸钾、苯扎氯铵进行联合抑菌试验,其中双乙酸钠与山梨酸钾显示出协同作用,双乙酸钠与山梨酸钾、双乙酸钠与苯扎氯铵、山梨酸钾与苯扎氯铵联用均显示无关作用。试验表明双乙酸钠与山梨酸钾联用可以增强对砖火丝菌的清除效果,值得进一步开发与应用。

火木层孔菌菌丝生长最适条件研究

对火木层菌丝培养的最适碳源、氮源、C/N,pH、温度等进行了研究.结果表明,火木层孔菌菌丝生长的最适碳源,氮源,C/N,pH值,温度分别是是果糖,酵母粉,20∶1,6.9,30℃.此条件下,菌丝生长旺盛且不易老化.

火木层孔菌桑黄醇提物的HPLC指纹图谱研究

目的：建立10批不同产地火木层孔菌桑黄醇提物（EEPI）的HPLC指纹图谱,并对其质量进行评价。方法：采用SHISEIDO CAPCELL PAK C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,以0.2%磷酸水溶液-甲醇进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长为395 nm。以Inoscavin A为参比峰建立EEPI特征吸收峰共有模式,并通过峰重叠率计算、相似度评价系统、聚类分析等对其相似度进行评价。结果：在选定的色谱条件下,得到10批不同产地火木层孔菌桑黄指纹图谱,标定了9个共有峰,并建立了火木层孔菌桑黄的指纹图谱共有模式,相似度在0.652~0.995之间,聚类分析结果将10批火木层孔菌桑黄分为3个大类。结论：此方法简单、准确、重复性好,峰分离度较好,为有效地评价火木层孔菌桑黄的综合质量提供了参考依据。

火木层孔菌的脂溶性成分

采用硅胶柱层析法进行分离纯化,从火木层孔菌(Phellinus igniarius)子实体的石油醚提取物和氯仿提取物中得到6种化合物。根据波谱数据,化合物1-6结构分别被鉴定为:9,12-十八烷二烯酸甲酯、3-酮-环菠萝蜜烷、麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮、麦角甾醇过氧化物、麦角甾-7,22-二烯-3-酮和啤酒甾醇。其中3-酮-环菠萝蜜烷和麦角甾-7,22-二烯-3-酮为首次从火木层孔菌子实体中分离得到。

应用聚合酶链反应技术检测梨火疫菌的研究

应用梨火疫菌ＰＣＲ技术可以准确，快速地检测出梨火疫菌潜伏侵染的样品，检出样品中梨火疫菌的最低带菌量为５０个细菌，未发现它与其它植病细菌有交叉反应，从ＰＣＲ扩增、电泳分离到获得最后结果仅需８小时。此法适宜对进口苗木、接穗和水果上的梨火疫菌快速检疫和对引种苗圃和果园里梨火疫病发生进行监测。

火木层孔菌桑黄对MPP^+诱导SH-SY5Y细胞凋亡的影响

目的评价火木层孔菌桑黄的水提物对MPP^+诱导SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法采用PI染色分析细胞凋亡率,DAPI染色观察细胞核的形态变化,JC-1染色检测线粒体膜电位的变化,C-DCDHF-DA染色观察ROS生成的变化。结果 MPP^+诱导后SH-SY5Y细胞凋亡率明显升高,线粒体膜电位明显下降,ROS生成明显升高;火木层孔菌桑黄作用后能明显降低细胞凋亡率,其中20、10μg·mL^(-1)剂量组与MPP^+组比较具有显著性差异;其对细胞凋亡后细胞核的形态变化具有一定的改善作用;其可以提升线粒体膜电位,其中20、10、5、2.5μg·mL^(-1)剂量组与MPP^+组比较具有显著性差异;其对ROS生成具有明显的抑制作用,其中20、10、5μg·mL^(-1)剂量组与MPP^+组比较具有显著性差异。结论火木层孔菌桑黄水提物对MPP^+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有明显的抑制作用。

内生真菌诱导子对火木层孔菌次级代谢的影响

目的研究桑黄内生真菌作为生物诱导子诱导桑黄的基原菌种火木层孔菌菌株,改变火木层孔菌原有次级代谢产物。方法通过组织块法和反复划线法分离纯化野生桑黄子实体中的内生真菌。将所得内生真菌作为生物诱导子用于调控火木层孔菌的次级代谢,利用HPLC-DAD和HPLC-MS对次级代谢产物进行分析。结果共纯化得到12株内生真菌,其中4株真菌对火木层孔菌诱导调控效果较明显,尤其是菌株SHM-2诱导火木层孔菌代谢产生对卵巢癌细胞(A2708)和人结直肠癌细胞(HCT-8)有细胞毒活性和抗氧化作用的phelligridin G。结论利用内生真菌作为生物诱导子调控改变药用真菌火木层孔菌次级代谢活性成分的方法是可行的,为深入研究调控后代谢产物的差异以及寻找野生桑黄可替代资源奠定理论基础。

紫外诱导对火木层孔菌次级代谢的影响

目的通过诱导改变火木层孔菌的次级代谢产物,考察次级代谢产物中是否有桑黄素类成分产生。方法通过紫外照射火木层孔菌,挑取致死率在95%以上的优势菌株进行液体发酵培养,以桑黄素Ⅰ和二聚桑黄素A作为对照,通过HPLC-DAD和HPLC-MS/MS检测代谢产物。结果发现利用紫外照射火木层孔菌进行诱导23 min时,达到火木层孔菌95%的致死率,从中挑取优势诱导菌株8株,对这8株菌株的液体发酵次级代谢进行分析,发现UV23-7能够产生含量和数量有所增加的桑黄素类成分。结论利用紫外诱导方法改变火木层孔菌的次级代谢这一方法可行。

砖火丝菌对电离辐射抗力测定方法的研究

研究了测定砖火丝菌对电离辐射抗力的方法，并对用美国卫生工业制造者协会“筛选程序”分离自棉制医用敷料的２株砖火丝菌进行了测定。结果表明，对琼脂平板上砖火丝菌培养物，采用沙洗法（以１４０目细沙代替常规法中的玻璃珠）洗脱，效果较好。对悬液中及干燥于纱布和琼脂片表面火丝菌，经剂量率为 １０～ ２０ ｋＧｙ／ ｈ的６０钴γ射线辐照，用剂量－存活曲线法和部分阳性测定法测得γ射线对火丝菌 Ｄ１０值在 ２．０～３．０ ｋＧｙ之间。其中，部分阳性测定法测得 Ｄ１０值较高，干燥于纱布表面砖火丝菌抗力较弱。

亚硝酸诱变对火木层孔菌的影响

目的对火木层孔菌进行诱导改造以提高该种菌的多糖和黄酮等次级代谢产物含量。方法采用亚硝酸诱变方法对火木层孔菌菌株进行诱变处理,研究两种诱变浓度下亚硝酸的诱变时间与火木层孔菌致死率的关系,比较火木层孔菌与0.005mol·L^(-1)亚硝酸诱变后代表菌株PNCM5-1的代谢产物在多糖含量和黄酮含量方面的差异。结果以诱变菌株的稳定性和代谢产物颜色变化为考察指标,确定浓度0.005mol·L^(-1)与0.250mol·L^(-1)亚硝酸的最佳诱变时间分别为60和8min。优势菌株PNCM5-1比原始菌株先到达次级代谢过程,黄酮类化合物的产量在培养12d之前均高于原始菌株。结论通过亚硝酸诱变,菌株的代谢受到调控作用,诱导菌株优先到达次级代谢过程,为桑黄生产黄酮类化合物节省培养时间,为药用桑黄活性成分的进一步开发与利用提供基础。

浅析医院供应室消毒灭菌质量控制

目的为提高医院供应室消毒灭菌的整体水平，使供应室为临床科室提供合格的灭菌物品，预防和控制医院感染。方法分析、总结我院建院以来供应室物品的清洗、消毒灭菌、质量检测等流程。结果自2007年新院建院以来未发生因供应室消毒灭菌原因所造成的医院感染。结论加强业务学习，严格操作规程、制度，加强消毒灭菌操作和质量监测，能确保消毒灭菌效果，预防医院感染发生。

Fuzzy-PID在一种灭菌器温度控制中的仿真研究及应用

针对野战灭菌器温度控制系统的数学模型具有非线性、大惯性、线性滞后以及时变等特点,文章用现代控制理论分析了该系统,建立了系统的状态空间方程,并提出了先用模糊控制使温度快速稳定在目标温度阈值内,然后通过PID寻优达到目标温度的Fuzzy-PID最优控制算法。仿真研究表明,该算法具有使系统超调量小、调整时间短、鲁棒性好且算法简单等优点。最后以C8051F330为核心具体实现了一个基于该算法的野战灭菌器控制系统。

药用真菌桑黄种类研究

桑黄作为著名传统药用真菌在中国已经有2000多年的历史,但是这个真菌种类曾经被误认为裂蹄纤孔菌和鲍姆纤孔菌多年,直到2012年才发现该种实际应为一个新种,即桑黄纤孔菌(简称桑黄)。目前中国有桑黄类群的种类7种,但只有生长在桑树树木上的多年生、木栓质的纤孔菌才是真正的桑黄,本文提供了这7个种的主要特性和生境照片。在热带美洲有裂蹄纤孔菌类群5个种,这5个种和亚洲的种类不重复。火木层孔菌类群作为另外一个类群的药用真菌也曾经广泛被报道为所谓的"桑黄",但是该类群的种类具有无色的担孢子,而桑黄类群的担孢子为黄褐色。另外这2个类群在系统发育上不相关。本文也提供了美洲裂蹄纤孔菌类群和中国火木层孔菌类群种类的生境照片。此外,基于ITS序列对中国桑黄类群和中国火木层孔菌类群所有种类的系统发育进行了分析。

药用真菌针层孔菌的研究进展

目的综述近30年药用真菌针层孔菌在菌丝培养、化学成分、药理作用等方面的研究进展。方法查阅近30年国内外有关针层孔菌的研究文献,并进行分析、总结。结果已有学者对针层孔菌的菌丝培养、化学成分和药理活性等方面进行了一系列的研究,发现该真菌含有多种化学成分,且具有抗肿瘤、保护肝脏等多种药理活性。结论针层孔菌是一种极具研究和开发价值的药用真菌,应在生物学特性、人工栽培、化学、药理等方面进一步研究。

不同“桑黄”类真菌水提取物的抗肿瘤活性研究

用H22荷瘤小鼠对6种"桑黄"类真菌的水提取物进行了抗肿瘤活性研究。结果表明,除鲍姆木层孔菌水提取物低剂量组外,粗毛纤孔菌、椭圆嗜蓝孢孔菌、山野木层孔菌的水提取物高、低剂量组以及火木层孔菌、鲍姆木孔菌、瓦尼木层孔菌的水提取物高剂量组均具有显著抑瘤作用,抑瘤率均大于40%,其中;椭圆嗜蓝孢孔菌水提取物高剂量组(1 000 mg/kg)的抑瘤效果最佳。与阳性组和生理盐水组相比,粗毛纤孔菌高剂量组小鼠的胸腺指数均有极显著性差异(P<0.01),其余各组小鼠胸腺指数无显著性差异。6种"桑黄"类真菌水提取物均对提高小鼠肿瘤细胞中Bax的表达起到了促进作用;对Bcl-2的表达起到了抑制作用。

医院供应室消毒及灭菌质量分析

目的:为提高医院供应室消毒灭菌的整体水平,使供应室为临床科室提供合格的灭菌物品,预防和控制医院感染。方法:分析、总结我院建院以来供应室物品的清洗、消毒灭菌、质量检测等流程。结果:自2007年新院建院以来未发生因供应室消毒灭菌原因所造成的医院感染。结论:加强业务学习,严格操作规程、制度,加强消毒灭菌操作和质量监测,能确保消毒灭菌效果,预防医院感染发生。

火木层孔菌液体培养物的化学成分研究

目的： 研究针层孔属火木层孔菌Phellinus igniarius液体培养物的化学成分并对其在多种体外药理模型上进行随机活性筛选。 方法 ：分别对发酵液及菌丝体的化学成分进行研究,采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱以及反相HPLC柱色谱等分离方法进行分离纯化;运用光谱数据解析鉴定化合物结构;在细胞水平模型上, 筛选化合物在肿瘤细胞毒、神经保护、肝保护、抗炎和抗HIV等方面的活性。 结果 ：从发酵液和菌丝体2部分共分离鉴定了29个化合物,分别为3个倍半萜：3S,9R,10S-3-羟基-11,12-O-异丙基血苋烷烯（ 1 ）,3S,9R,10S-3,11,12-三羟基血苋烷烯（ 2 ）和3S,4S,9R,10S-11,12,14-三羟基血苋烷烯（ 3 ）;3个甾体：24R-麦角甾-4,6,8（ 14 ）,22-四烯-3-酮（ 4 ）,豆甾-7,22-二烯-3β,5α,6α-三醇（ 5 ）和麦角甾5α,8α-过氧-6,22-二烯-3β-醇（ 6 ）;14个环二肽：环（L-脯氨酸-L-缬氨酸）（ 7 ）,环（L-亮氨酸-D-脯氨酸）（ 8 ）,环（L-亮氨酸-L-脯氨酸）（ 9 ）,环（异亮氨酸-脯氨酸）（ 10 ）,环（甘氨酸-亮氨酸）（ 11 ）,环（苯丙氨酸-丝氨酸）（ 12 ）,环（丙氨酸-脯氨酸）（ 13 ）,环（丙氨酸-苯丙氨酸）（ 14 ）,环（4-羟基-脯氨酸-苯丙氨酸）（ 15 ）,环（L-苯丙氨酸-D-脯氨酸）（ 16 ）,环（D-苯丙氨酸-D-脯氨酸）（ 17 ）,环（6-羟基-脯氨酸-苯丙氨酸）（ 18 ）,环（谷氨酰氨-脯氨酸）（ 19 ）和环（天冬氨酸-亮氨酸）（ 20 ）;9个其他类化合物：乙酰氨基苯丙氨酸（ 21 ）、腺苷（ 22 ）、苯乙二醇（ 23 ）、邻-羟基苯乙醇（ 24 ）、苯甲酸（ 25 ）、对-甲氧基苯甲酸（ 26 ）、间-甲氧基苯甲酸（ 27 ）、十六烷酸（ 28 ）和3-吡啶羧酸（ 29 ）。化合物 5和8 在1×10-5 mol·L-1时能够有效地抑制MPP＋诱导的PC12-syn细胞损伤,相对保护率分别为90.3%和87.5%,与模型组比较有显著性差异（P〈0.05）。在1×10-5 mol·L-1浓度下,化合物 12和18 可较好地保护DL-半乳糖胺诱导的WB-F344细胞损伤,细胞成活率分别为25%和24%（双环醇作为对照,细胞成活率为24%）。 结论 ：化合物 1~29 均为首次从针层孔属火木层孔菌液体培养物中分离鉴定;化合物 5和8 有神经细胞保护活性,化合物 12和18 具有肝细胞损伤保护活性,其他化合物在测试浓度下在以上筛选模型中未显示明确活性。