灭蝇胺抗原抗体在豇豆、韭菜、芹菜快速检测中的应用研究

本研究设计并合成了灭蝇胺半抗原,制备得到灭蝇胺完全抗原,并通过动物免疫与细胞融合单克隆筛选技术,成功获得灭蝇胺单克隆抗体,IC_(50)达到5.3μg/L。将完全抗原和单克隆抗体应用于金标免疫层析试纸制备,经优化相关参数,获得一种高灵敏度、高特异性、简便快速的检测方法。将方法应用于豇豆、韭菜、芹菜(以下简称“三棵菜”)样品检测,检测结果与仪器参比方法检测结果的符合率达93.3%。结果表明,建立的“三棵菜”中灭蝇胺金标试纸快检方法具有良好的准确度,可实现定性、半定量检测分析,能在15 min内完成样品检测,并具备小型化、操作方便的特性,可为农药残留现场快速筛查提供技术支持。

清洗对蔬菜中灭蝇胺、咪鲜胺及其代谢物的影响

为研究清洗处理对蔬菜中农药残留的影响,选择3种不同类型的蔬菜品种,设置3个农药浓度组分别为空白、低浓度、高浓度组进行田间喷施试验,在安全间隔期后进行采收,对比3种蔬菜中灭蝇胺、咪鲜胺及其代谢物的去除效果。结果表明,3种蔬菜清洗后的加工因子均小于1,其中灭蝇胺的去除率为25.61%~66.00%,三聚氰胺的去除率为14.69%~89.74%,2,4,6-三氯苯酚的去除率为20.69%~50.73%。综上,清洗可以去除2种农药及其代谢物,但达不到完全去除,其中灭蝇胺的去除效果较咪鲜胺更好。

豇豆中灭蝇胺残留分析与膳食风险评估

该文建立了一种简便、快速、准确的豇豆中灭蝇胺残留的液相色谱-串联质谱分析方法,优化了提取溶剂等提取条件,以乙腈(含15%乙酸,V%)为提取溶剂,利用QuEChERS法进行净化。结果表明,该方法线性范围0.005~1.00 mg/L,检出限为0.001 mg/kg,定量限为0.010 mg/kg。0.010、0.10、0.50、1.00 mg/kg 4个添加水平的回收率为76.2%~82.8%,相对标准偏差为1.0%~5.7%,满足农药残留分析的要求。采用该方法分析了本地市场上112个豇豆样品,灭蝇胺的检出比例为22.3%,超标比例4.5%。长期膳食风险评估结果表明,灭蝇胺的风险熵RQ为10.74%,不会对一般人群健康造成不可接受的风险。在室温(约20℃)或冷藏(4℃)贮藏条件下,灭蝇胺在豇豆样品中的残留消解动态规律符合一级动力学方程,消解半衰期分别为5.0和7.2 d。存放温度、存放时间均对豇豆中灭蝇胺的残留变化有影响,较高的温度有利于残留值降低。

高效液相色谱法测定牛乳中灭蝇胺及其代谢产物三聚氰胺

建立高效液相色谱法测定牛乳中灭蝇胺及其代谢产物三聚氰胺含量的分析方法。采用外标法对线性关系、精密度、回收率、检出限以及定量限等指标定量。结果表明,该方法在0.0~1.0 mg/L线性良好(R2>0.999),灭蝇胺、三聚氰胺检出限分别为0.003、0.004 mg/kg,定量限分别为0.008、0.010 mg/kg,平均加标回收率分别为84.4%~89.5%、83.9%~91.2%,相对标准偏差均小于10%。该研究方法具有灵敏、准确、重现性好等特点,能满足牛乳中灭蝇胺及其代谢产物三聚氰胺的测定需求。

亲水作用色谱-串联质谱测定蔬菜中灭蝇胺及其代谢物三聚氰胺

建立了亲水作用色谱-串联质谱测定蔬菜中灭蝇胺及其代谢物三聚氰胺的方法。蔬菜样品匀浆后经甲醇-水提取,取适量酸化后提取液经阳离子固相萃取柱净化,洗脱液用氮气吹干,残留物用5 mL流动相定容。采用亲水作用色谱(Hilic)分离,在电喷雾-选择反应监测模式下,进行定性和定量分析。以基质校正曲线计算,添加浓度为0.04和0.20 mg/kg时,灭蝇胺的回收率为84.2%～101.3%;相对标准偏差(RSD)为4.5%～10.7%;三聚氰胺的回收率为72.5%～97.1%;RSD为4.3%～10.8%;灭蝇胺和三聚氰胺的定量限分别为0.01和0.005 mg/kg。利用本方法检测了多种蔬菜样品中灭蝇胺、三聚氰胺的含量。

HPLC法检测灭蝇胺在黄瓜和土壤中的残留

建立了高效液相色谱测定灭蝇胺在黄瓜和土壤中残留的方法,灭蝇胺的最小检出量为4×10-10g.对黄瓜样品,在005—50mg·kg-1时,平均回收率为762—862%;变异系数为04—20%,最低检出浓度为002mg·kg-1.对土壤样品,在02—50mg·kg-1时,平均回收率为854—881%;变异系数为06—14%,最低检出浓度为002mg·kg-1.

高效液相色谱法测定含脂羊毛中灭蝇胺和环虫腈

建立了高效液相色谱法(HPLC)测定含脂羊毛中的灭蝇胺和环虫腈的方法及HPLC-MS/MS确证方法。样品用80mL1%三氯乙酸溶液超声提取,MCX柱净化,Hypersil NH2色谱柱分离,水-乙腈为流动相梯度洗脱,214nm检测,HPLC-MS/MS确证。在正离子电喷雾电离(ESI+)模式下,环虫腈[M+H]+及2个主要的特征离子分别为m/z191.0,150.0和163.0;灭蝇胺[M+H]+及2个主要的特征离子分别为m/z167.0,85.0和125.0。在0.05～5.0mg/L范围内,灭蝇胺和环虫腈均有良好的线性关系,相关系数均为0.9999。本方法的检出限灭蝇胺为0.02mg/kg,环虫腈为0.01mg/kg。方法的平均加标回收率:灭蝇胺为95.0%～99.9%,环虫腈为83.6%～92.2%。

超高效液相色谱-串联质谱法快速检测菜豆及土壤中的灭蝇胺残留

建立了采用超高效液相色谱-串联质谱仪(UPLC-MS/MS)快速检测分析菜豆及其土壤中灭蝇胺残留的方法。样品经5 mmol/L的乙酸铵-乙腈溶液[V(乙酸铵)∶V(乙腈)=1∶4]提取、定容,N-丙基乙二胺(PSA)净化后用UPLC-MS/MS在正离子模式下以多反应监测扫描方式进行测定,外标法定量。结果表明:在0.05～1 mg/kg添加水平范围内,灭蝇胺在菜豆和土壤中的平均回收率为80.1%～95.2%,相对标准偏差(RSD)为1.9%～9.1%,检出限(LOD)为3.8～5.9μg/kg,定量限(LOQ)为50μg/kg。该方法操作简单、灵敏度高、定量准确且测定浓度范围宽,适用于菜豆及土壤中灭蝇胺的残留分析。

灭蝇胺及其代谢物三聚氰胺在银耳及银耳培养料中的消解和残留

为了研究灭蝇胺在银耳及银耳培养料中的降解残留规律,建立了同时测定银耳、银耳培养料中灭蝇胺和三聚氰胺残留量的高效液相色谱法,测得灭蝇胺在银耳和银耳培养料中的平均回收率为81.9%—95.5%,三聚氰胺在银耳和银耳培养料中的平均回收率为80.8%—98.6%,相对标准偏差(RSD)均低于9.0%.田间试验结果表明,灭蝇胺在降解过程中可转化为三聚氰胺;灭蝇胺和三聚氰胺在银耳培养料中的降解半衰期分别为5.5 d、34.9 d;推荐剂量低浓度直接对银耳子实体施药,灭蝇胺在银耳中的降解半衰期为5.3 d,银耳采收时灭蝇胺的残留量为0.39 mg.kg-1,三聚氰胺的残留量为0.32 mg.kg-1;菌袋扩穴后按推荐剂量高浓度对菌袋施药,灭蝇胺在银耳中的降解半衰期为5.6 d,银耳采收时灭蝇胺残留量别为0.14 mg.kg-1,三聚氰胺的残留量为0.15 mg.kg-1.两种施药方式,银耳中三聚氰胺的残留量均符合我国残留限量的要求,灭蝇胺的残留量符合日本肯定列表制度要求.

同位素内标法检测灭蝇胺及其代谢物三聚氰胺在双孢蘑菇子实体和覆土中的残留

采用超高效液相色谱-串联质谱内标法检测灭蝇胺及其代谢物三聚氰胺在双孢蘑菇Agaricus bisporus子实体和覆土中的残留量,以及两者在双孢蘑菇工厂化栽培中的变化规律。样品经V（甲醇）：V（水）=4：1混合溶液提取,MCX固相萃取柱净化,HILIC色谱柱分离,超高效液相色谱-串联质谱测定,三聚氰胺-^13C同位素内标法定量。结果表明：灭蝇胺和三聚氰胺的检出限均为0.001 mg/kg。在0.02~1 mg/kg添加水平下,灭蝇胺在双孢蘑菇子实体和覆土样品中的回收率为86%~102%,相对标准偏差（RSD）为2.7%~5.3%;三聚氰胺在子实体和覆土样品中的回收率为98%~103%,RSD为1.5%~2.4%。在有效成分为1、10、50和250 mg/kg施药水平下,灭蝇胺消解规律符合一级反应动力学,在覆土中的平均半衰期为31.3 d。在覆土中灭蝇胺会转化为三聚氰胺,第2潮蘑菇采摘结束后,覆土中灭蝇胺的转化率为8.58%~13.87%。在施药水平较高（50、250 mg/kg）时,灭蝇胺和三聚氰胺在第1潮菇中的残留量高于在第2潮菇中的,其最高检出量灭蝇胺为2.36 mg/kg,三聚氰胺为1.75 mg/kg。综合考虑环境和产品安全,建议灭蝇胺的使用量不宜超过50 mg/kg。

SPE-HPLC法测定鸡蛋中灭蝇胺—环丙氨嗪

本试验研究建立了用NH2柱和97%乙腈水溶液做流动相洗脱测定鸡蛋中灭蝇胺-环丙氨嗪残留量的高效液相色谱法,鸡蛋均质后经20%氨水乙腈溶液重复提取2次、浓缩、过C18固相萃取小柱净化等处理后上机检测,环丙氨嗪在0.02～1.0 μg/ml浓度范围内呈线性相关,标准曲线的相关系数(r)为0.9998,在0.02,0.05,0.10 mg/kg添加浓度,回收率为84.5%～95.2%,变异系数为3.9%～6.8%.检测限为0.02 mg/kg,定量限低于0.05 mg/kg.

蔬菜中灭蝇胺残留的强阳离子交换固相萃取柱净化-液相色谱分析

建立了简单、快速测定蔬菜中灭蝇胺残留量的方法。蔬菜样品经乙酸胺-乙腈（1∶4,体积比）混合溶液提取,强阳离子交换固相萃取（SCX-SPE）柱净化后,采用高效液相色谱仪在波长215nm处测定,所用色谱柱为Agilent NH2,流动相为乙腈-水溶液（97∶3,体积比）,以1.0mL/min的流速等梯度洗脱。结果表明,在浓度为0.02～2mg/L范围内,线性相关系数为0.999 9。灭蝇胺的添加浓度在0.05～0.4mg/kg范围内,平均回收率为83.4%～104%,相对标准偏差为1.7%～8.4%,均在农药残留测定所允许的范围内。该方法的最低检出限（LOD）为0.02mg/kg,最低检测浓度（LOQ）为0.05mg/kg。

灭蝇胺和阿维菌素对家蝇生长发育的影响研究

目的 了解灭蝇胺和阿维菌素对家蝇生长发育的影响。方法 人工饲料混药法。结果 灭蝇胺对家蝇 1日龄幼虫的 48h的LC5 0 值为 43 .896mg/L ,对 3日龄幼虫和成蝇的毒杀效果较差 ,但可引起幼虫化蛹率、羽化率以及雌成蝇产卵量和卵孵化率明显下降 ;阿维菌素对家蝇 1日龄、3日龄幼虫和成蝇表现出较强的急性毒杀作用 ,其 48hLC5 0 值分别为 0 .162 1mg/L、1.5546mg/L和 0 .2 10 3mg/L ,而对家蝇生长发育无不良影响。结论 灭蝇胺不仅可作为一种主要的农用杀虫剂 。

表面增强拉曼光谱法快速定量分析食品中福美双、二氰蒽醌和灭蝇胺的残留

基于表面增强拉曼光谱（SERS）技术,以Au@SiO2和Au纳米增强粒子建立了食品中福美双、二氰蒽醌和灭蝇胺的快速定量分析方法,3种农药的检出限分别为1.4μg/L、0.020mg/L和0.030mg/L。采用加标回收试验对方法进行评价,福美双在生活饮用水和碳酸梨汁饮料中的回收率在104.5%~107.1%之间,相对标准偏差为4.0%~6.2%;二氰蒽醌在生活饮用水中的回收率在81.1%~100.0%之间,相对标准偏差为4.1%~7.8%,灭蝇胺在碳酸饮料和果皮中测定的相对标准偏差均小于11.0%,结果表明该方法准确可靠,精密度高。方法成功用于加标碳酸果汁饮料、果皮表面二氰蒽醌及灭蝇胺的检测,为快速定量检测食品中农残提供了SERS方法。

分子印迹固相萃取/高效液相色谱法检测黄瓜中灭蝇胺

以灭蝇胺为模板分子,甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为交联剂,甲苯和异辛烷为二元致孔剂,采用低温光引发、本体聚合法制备了灭蝇胺的分子印迹聚合物。通过平衡吸附实验、扫描电镜、红外光谱以及压汞仪等多种手段对制备的印迹和非印迹聚合物进行了测定与表征,结果表明所制备的印迹聚合物对模板分子具有明显的特异性吸附作用。Scatchard分析证明灭蝇胺分子印迹聚合物对灭蝇胺分子的吸附存在两类不同结合位点,最大表观结合量(Qmax)和平衡解离常数(Kd)分别为Qmax1=1.19μmol/g,Kd1=1.31μmol/L;Qmax2=2.46μmol/g,Kd2=4.84μmol/L。用该聚合物制备的灭蝇胺分子印迹固相萃取柱处理样品,结合高效液相色谱法可快速有效地检测黄瓜样品中的灭蝇胺,线性范围为0.1～10 mg/L(r=0.999 1),检出限(S/N=3)为0.05 mg/L。该方法快速简便,效果优于商品化的固相萃取柱。

灭蝇胺、除虫脲拌料处理防治古田山多菌蚊

采用拌料处理的方法探讨不同浓度的灭蝇胺和除虫脲在常压和高压灭菌后对秀珍菇(Pleurotus geesteranus)古田山多菌蚊(Docosia gutiuushana)的防治效果。出菇实验结果表明:试验范围内,灭蝇胺最低浓度62.5 mg/L在常压灭菌、高压灭菌后防治效果分别为75%、50%;除虫脲最低浓度15 mg/L在常压灭菌、高压灭菌后防治效果分别为74%、80%;除虫脲的防治效果好于灭蝇胺,两者残留量均符合美国、日本最低残留限量标准。

灭蝇胺的毒性研究

大鼠经口LD50 雄性为 >4640mg/kg,雌性为 31 60 (1 860～ 5386)mg/kg ,大鼠经皮LD50 >2 0 0 0mg/kg,对家兔眼有轻度刺激作用 ,但无皮肤刺激作用。Ames试验、微核试验阴性 ,无致突变性 ,大鼠三个月亚慢性毒性试验未见异常的组织病理学改变 ,最大无作用剂量雄、雌性分别为 1 3.39± 1 2 6mg/kg和1 4 56± 1 0 8mg/kg。灭蝇胺属低毒农药。

50%灭蝇胺可溶性粉剂对菜豆美洲斑潜蝇的防治效果评价

2007～2008年田间试验表明,50%灭蝇胺可溶性粉剂(SP)有效成分用量75.0、112.5和150.0g.hm-2,药后3～10d对菜豆美洲斑潜蝇的防效分别为85.34%～88.02%、91.00%～92.01%和92.59%～95.06%。对照药剂50%灭蝇胺可湿性粉剂(WP)有效成分用量150.0g.hm-2,药后3～10d的防效为90.01%～93.71%。50%灭蝇胺SP有效成分用量75.0g.hm-2处理药后3、7、10d的防效显著低于对照药剂,而112.5、150.0g.hm-2处理药后3、7、10d的防效与对照药剂差异均不显著。2007年和2008年两年间的防治效果没有显著差异,并与8a和4a前的试验结果基本一致,灭蝇胺对美洲斑潜蝇北京种群的敏感性和防效优良。

灭蝇胺对蝴蝶兰迟眼蕈蚊幼虫的生物活性

研究了灭蝇胺等几种杀虫剂对蝴蝶兰迟眼蕈蚊幼虫的生物活性。结果表明:灭蝇胺对迟眼蕈蚊5日龄幼虫的活性随处理时间的延长而提高,100 mg/L浓度处理后72 h后校正死亡率为52.58%。对不同龄期的幼虫活性不同,低龄幼虫对灭蝇胺敏感,随着龄期增加,敏感性降低,100 mg/L浓度处理对2日、4日和6日龄幼虫的校正死亡率分别为97.24%、81.88%和67.94%。对同一龄期幼虫的毒杀效果随质量浓度的增加而增加。灭蝇胺对迟眼蕈蚊幼虫的生长发育有明显抑制,处理后幼虫出现畸形,化蛹率和羽化率降低,幼虫历期延长。

高效液相色谱法同时测定杀虫单·灭蝇胺可溶性粉剂

采用反相液相色谱法 ,Nova -PaKC18色谱柱 ,流动相为甲醇∶水 =4 5∶5 5 (V/V) ,检测波长 2 4 5nm ,在 5min内同时分析杀虫单·灭蝇胺可溶性粉剂中两种有效成分的含量。该方法简便、快速、准确 ,灭蝇胺含量的标准偏差为0 .0 33,变异系数为 0 .6 5 % ,杀虫单的标准偏差为 0 .111,变异系数为 0 .4 4 % ,回收率均达到 98%～ 10 2 %。