不同外源激素对灰毡毛忍冬‘渝蕾1号’愈伤组织生物量生长和绿原酸含量的影响

为探索外源激素对灰毡毛忍冬‘渝蕾1号’愈伤组织生长及其代谢产物绿原酸含量的影响,该研究通过在培养基中添加不同种类和浓度的外源激素,以诱导其愈伤组织的产生及增殖生长,并采用称量法和高效液相色谱法分别检测愈伤组织生物量和绿原酸含量。结果表明:不同外源激素及其组合对愈伤组织生物量和绿原酸含量的积累产生不同的影响;培养基中添加单一外源激素时,对愈伤组织生物量影响最大的为TDZ激素;和对照相比,不同浓度的TDZ均使生物量显著提高,其中0.5 mg·L-1的TDZ使生物量达最大,为0.62 g;对绿原酸积累影响的结果不太一致,除TDZ激素影响最小以外,0.5 mg·L-1的NAA使愈伤组织中的绿原酸含量积累最多,为11.18 mg·g-1;外源激素组合中,含有TDZ激素的组合生物量偏高,但绿原酸含量偏低,这与单一外源激素的结果一致。MS+0.5 mg·L-1TDZ+0.5 mg·L-12,4-D培养基使愈伤组织中绿原酸含量积累较多,为15.53 mg·g-1,且生物量达最高,为0.65 g,因此该激素组合为该研究最适培养基组合。通过筛选适宜的外源激素及其组合能促进灰毡毛忍冬‘渝蕾1号’愈伤组织生物量的提高和次生代谢产物绿原酸的积累。研究结果对从灰毡毛忍冬‘渝蕾1号’愈伤组织中获得大量的绿原酸提供了重要依据。

不同种类无机盐对灰毡毛忍冬“渝蕾1号”悬浮培养体系中细胞生长和绿原酸含量的影响

为提高灰毡毛忍冬"渝蕾1号"悬浮培养体系中绿原酸的含量,该研究探讨了B_5培养基中不同浓度的无机盐对灰毡毛忍冬"渝蕾1号"悬浮培养细胞生物量及绿原酸含量的影响,通过在悬浮培养体系中添加不同浓度的无机盐,采用重量法测定灰毡毛忍冬"渝蕾1号"悬浮培养细胞的生物量及采用高效液相色谱法测定绿原酸的含量。结果表明:当硝态氮和铵态氮配比与B_5培养基中硝态氮和铵态氮配比一致时,即NO_3^-/NH_4^+摩尔比值为13∶1时,培养体系有利于细胞的生长和绿原酸的积累。当KNO_3浓度为3.5 g·L^(-1)时,细胞生物量达到最大,为19.26 g·L^(-1);当KNO_3在较低浓度(0.5 g·L^(-1)和1.5 g·L^(-1))时,积累较多的绿原酸。NO_3^-的两项研究结果均与对照浓度(2.5g·L^(-1))有一定的差异。另外,对(NH_4)_2SO_4来说,在高于对照浓度0.134 g·L^(-1),即浓度为0.268 g·L^(-1)时,生物量和绿原酸含量都达到了最大。P、Ca、Mg三种矿质元素的研究结果表明,当Na H_2PO_4·2H_2O浓度为0.10 g·L^(-1)、Ca Cl_2的浓度为0.20 g·L^(-1)时,细胞的生长和绿原酸的积累均可达到最大值;而对Mg^(2+)来说,低浓度促进细胞的生长,高浓度促进绿原酸的积累。兼顾细胞生物量和绿原酸含量两个指标,需选择适中的浓度。这些结果均与对照浓度有一定的差异。这说明灰毡毛忍冬"渝蕾1号"悬浮细胞所需无机盐的浓度与B_5培养基无机盐的浓度有一定的差异,选择适宜的浓度可促进其悬浮细胞的生长及次生代谢产物绿原酸的积累。该研究结果为绿原酸的工业化生产打下了基础。

灰毡毛忍冬新品种‘渝蕾一号’的组织培养研究

目的：建立灰毡毛忍冬新品种‘渝蕾一号’Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.‘Yulei1’组培快繁体系,为实现其工厂化育苗提供理论依据。方法：以‘渝蕾一号’幼嫩茎段和叶片为外植体,以MS为基本培养基,在组织培养的不同阶段添加不同浓度的NAA、6-BA、TDZ、IBA等植物生长调节物质,对愈伤组织的诱导、增殖及分化,茎段腋芽诱导、增殖及生根炼苗进行系统研究。结果：外植体的最佳灭菌时间：茎段为2~3 min,叶片为1~2 min;愈伤组织诱导最佳培养基为MS＋2,4-D 1.0 mg/L＋6-BA 0.1 mg/L;腋芽诱导最佳培养基为MS＋6-BA 1.0 mg/L＋NAA0.5 mg/L;愈伤组织增殖最佳培养基为MS＋TDZ（0.2~1.0）mg/L＋NAA（0.02~0.05）mg/L;愈伤组织分化最佳培养基为MS＋6-BA（0.5~1.0）mg/L＋NAA（0.02~0.05）mg/L;芽增殖最佳培养基为MS＋6-BA 1.5 mg/L＋NAA0.5 mg/L;最佳生根培养为1/2MS＋IBA 1.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L。试管苗在珍珠岩和腐殖质（1∶1）基质中炼苗,成活率达75%以上。结论：筛选出了外植体适宜的消毒方法及愈伤组织诱导、增殖、分化及芽增殖、生根的适宜培养基,建立了‘渝蕾一号’组培快繁体系。

灰毡毛忍冬‘渝蕾1号’内生菌对其悬浮细胞生物量及绿原酸含量的影响

从灰毡毛忍冬‘渝蕾1号’中分离出17株内生菌,并采用16S r DNA和18S r DNA分子鉴定结合形态特征鉴定出其中6株。将获得的6株内生菌作为诱导子添加至‘渝蕾1号’悬浮培养体系中,探讨其对‘渝蕾1号’悬浮细胞生物量及绿原酸含量的影响。结果表明,分离得到的6株菌分别为根瘤菌(cc2)、荧光假单孢菌(cc4)、盾壳霉菌(cc5)、高地芽孢杆菌(cc13)、同温层芽孢杆菌(cc14)及短小芽孢杆菌(cc15)。同时,6株内生菌均不同程度地影响‘渝蕾1号’悬浮细胞生物量及次生代谢产物绿原酸含量。对生物量来说,6种内生菌均在浓度为25 mg·L-1时,生物量达到最大值。对绿原酸来说,根瘤菌、荧光假单孢菌、盾壳霉菌及同温层芽孢杆菌均在浓度为25 mg·L-1时,绿原酸含量达到最大,而高地芽孢杆菌和短小芽孢杆菌在浓度为12.5mg·L-1时,绿原酸含量达到最大。总结以上结果,与对照相比,细胞生物量和绿原酸含量会在菌株的某个浓度下大大提高,该结果为绿原酸的工业化生产打下了基础。