电喷雾检测器高效液相色谱法测定复方北豆根氨酚那敏片中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙

建立电喷雾检测器高效液相色谱法测定复方北豆根氨酚那敏片中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙。选用Waters XBridge C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为分析柱,以甲醇为流动相A,0.05%三氟乙酸溶液为流动相B,梯度洗脱,检测器温度为35℃。灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的质量浓度分别在2.33~291.57μg/mL、2.42~302.40μg/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数分别为0.9996、0.9992,检出限分别为1.17、1.21μg/mL,定量限分别为2.33、2.42μg/mL。测定结果的相对标准偏差分别为2.54%和0.66%(n=6),样品加标平均回收率分别为104.8%和101.5%。该方法简单快捷,可为控制制剂中金银花投料的规范性提供技术支持。

银翘解毒片(胶囊)中灰毡毛忍冬皂苷乙的检查研究

目的 建立银翘解毒片(胶囊)中灰毡毛忍冬皂苷乙的检查方法,考察是否存在山银花掺伪金银花情况。方法 以灰毡毛忍冬皂苷乙为检测指标,采用薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱-蒸发光散射法(HPLC-ELSD)进行定性分析,并运用超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS/MS)进行结果确认。结果 在薄层色谱中,有3批样品出现与灰毡毛忍冬皂苷乙对照品位置和颜色一致的斑点,在液相色谱中,有4批次样品出现与灰毡毛忍冬皂苷乙对照品保留时间一致的色谱峰,通过UPLC-MS/MS法验证,4批样品检出灰毡毛忍冬皂苷乙成分,出现山银花掺伪情况。结论 所建方法能准确甄别银翘解毒片(胶囊)中灰毡毛忍冬皂苷乙的情况,有助于控制该制剂中金银花药味的质量。

灰毡毛忍冬次皂苷乙抑制白血病细胞HL-60的增殖及其机制研究

研究了灰毡毛忍冬次皂苷乙(MB)在体外对白血病细胞HL-60和结肠癌细胞LOVO增殖的抑制作用,并初步探讨其分子机制。采用MTT法检测MB的增殖抑制作用;利用RT2ProfilerTMPCR Array芯片实时定量PCR扩增肿瘤发生中84个关键基因。结果表明MB对两种肿瘤细胞生长均有抑制作用,且对HL-60效果更好。以HL-60作为细胞模型,总共发现差异基因20个,其中上调基因14个,下调基因6个,主要作用是阻滞细胞周期和降低细胞侵袭转移。

不同厂家口炎清产品中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量比较

目的研究不同厂家口炎清的质量情况,为提高药品标准、正确评价药品质量提供理论依据。方法采用高效液相色谱(HPLC)法对4个厂家生产的10批口炎清中的主要成分绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的质量分数进行测定,色谱柱为Waters XBridgeTMC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温为30℃,流速为1 m L/min;流动相为乙腈-0.4%(体积分数)醋酸(梯度洗脱),绿原酸采用二极管阵列检测器(PDAD)检测,检测波长为330 nm,灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙用蒸发光散射检测器(ELSD)检测,检测条件:雾化室温度60℃,漂移管温度65℃,N2的载气流量1.6 L/min,进样量8μL。结果不同厂家口炎清产品中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙质量分数差别较大。口炎清颗粒剂的质量相比胶囊剂和片剂较好;口炎清胶囊中不但灰毡毛忍冬皂苷乙质量分数非常低,而且检测不到川续断皂苷乙;口炎清片样品中灰毡毛忍冬皂苷乙的质量分数却异常高。结论不同厂家的口炎清产品由于原材料质量、制剂工艺等不同,导致了产品中有效成分的质量分数存在较大差异。

HPLC-ELSD测定绥阳山银花中绿原酸和灰毡毛忍冬皂苷乙的含量

目的 采用HPLC-ELSD联用的方法对绥阳山银花中绿原酸和灰毡毛忍冬皂苷乙进行含量测定.方法 采用Phenomenex Luna C1s（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱,柱温30℃,以乙腈为流动相A,0.4％醋酸溶液为流动相B,梯度洗脱（0～10 min,11.5％ A→15％A;10～12min,15％A→29％A;12～18 min,29％ A→33％ A; 18～30min,33％ A→45％A）,流速为0.8 mL/min,蒸发光散射检测器漂移管温度40℃.结果 绿原酸和灰毡毛忍冬皂苷乙的回归方程依次是y=4 609x-300.53（R2=0.9995）和y=5 810.1x-421.19（R2 =0.998 8）,其线性范围依次是0.0 804～ 0.6 432 mg/mL,0.0966～0.7728 mg/mL.平均加样回收率依次为100.5％,101.6％.结论 该方法操作简单,结果准确,绥阳山银花中绿原酸与灰毡毛忍冬皂苷乙的平均含量分别为4.45％、7.94％,均高于2010版《中国药典》的规定2.0％、5.0％,具有潜在的开发价值.

灰毡毛忍冬皂苷乙的化学结构和波谱特征

灰毡毛忍冬皂苷乙{Macranthoidin B,3-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基-28-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-常春藤皂苷}进行了1H和13C NMR检测,纠正了文献结构式错误,补充和纠正了文献1HNMR数据,明确区分该化合物19个羟基的归属,通过DEPT、1 H-1H COSY、HSQC、HMBC等1D、2D NMR技术,对该化合物所有的1H和13C NMR信号进行了全归属和详细解析.

UPLC-QTRAP-MS/MS法同时测定连花清瘟胶囊(颗粒)中18种成分及山银花中灰毡毛忍冬皂苷乙

目的建立UPLC-QTRAP-MS/MS法同时测定连花清瘟胶囊(颗粒)中连翘苷、连翘酯苷A、绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、(R,S)-告依春、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸、红景天苷、甘草苷、甘草酸铵,以及山银花中灰毡毛忍冬皂苷乙的含量。方法该药物40%甲醇提取液的分析采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm);流动相(5 mmol/L乙酸铵+0.1%甲酸)-甲醇,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温35℃;电喷雾离子源;正负离子模式扫描;多反应监测模式。结果19种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.9990),平均加样回收率89.37%~102.19%,RSD 2.03%~3.75%。各批样品均未检出灰毡毛忍冬皂苷乙。结论该方法简便、准确、高效,可用于连花清瘟胶囊(颗粒)的质量控制及山银花的掺伪鉴别。

HPLC-ELSD法测定山银花中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙

目的为了建立高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)检测法测定山银花中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的方法。方法采用ZORBAX SB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1%甲酸为流动相梯度洗脱,以蒸发光散射检测器检测绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙。结果绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙的回归曲线分别在3.00～6.40μg,4.24～9.33μg,0.40～2.00μg的质量范围内线性关系良好,r2分别为0.999、0.993、0.999。结论该方法操作简便,结果准确,专属性强,分离效果和重复性好,可有效缩短总分析时间,为较全面控制山银花药材的质量控制提供了简便可靠的方法。

水银花中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量测定方法

目的建立水银花中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量测定方法。方法对高效液相色谱法(HPLC)的色谱条件进行摸索,并采用正交设计法考察供试品溶液的制备条件。结果 HPLC色谱条件为:Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.4%醋酸(B)梯度洗脱,流速1.0 mL/min。样品供试液制备条件为:药材破碎度过四号筛,药材称样量为0.4 g,甲醇浓度为50%,提取时间为40 min。结论建立的HPLC含量测定方法准确可靠,可作为水银花中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙总量的测定方法。

灰毡毛忍冬皂苷乙抑制人肝癌Hepal-6细胞的分子机制的研究

目的 探讨灰毡毛忍冬皂苷乙(MB)在体外对人肝癌细胞株Hepal-6的抑制作用及可能机制的研究。方法 不同浓度的MB(0、 100、 200、 400μmol/L)作用肝癌Hepal-6细胞后,CCK-8法检测肝癌细胞株Hepal-6的存活率;通过测定了Hepal-6细胞中ROS的含量、MDA水平以及SOD、GSH、GSH-px的活性,探讨不同浓度的MB对Hepal-6细胞氧化应激水平的影响;通过检测FADD、Caspase8、RIPK1、RIPK3和MLKL的mRNA表达水平来检测不同浓度的MB对Hepal-6细胞坏死性凋亡相关基因的影响。结果 MB对肝癌Hepal-6细胞的抑制作用呈明显的剂量依赖性。结论 MB对肝癌细胞Hepal-6抑制存活率作用明显;MB破坏Hepal-6细胞内氧化还原系统的动态平衡,最终启动凋亡程序。另外,MB对坏死性凋亡相关基因表达影响,进而诱导肝癌细胞的坏死性凋亡而实现。

RP-HPLC法测定山银花及其提取物中灰毡毛忍冬皂苷乙的研究

目的:建立山银花及其提取物中灰毡毛忍冬皂苷乙的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱条件为:CS-120-5-C18-13IO(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温35℃,紫外检测器,检测波长210 nm,流动相:乙腈-0.4%冰乙酸(30:70),流速:1.0 m L·min-1。结果:灰毡毛忍冬皂苷乙的回归方程是y=223 019x+4 168.2,R2=0.9997,其线性范围0.52~10.4μg,平均加样回收率100.7%,RSD=0.86%。结论:该方法简单,准确可行,可用于山银花及其提取物中灰毡毛忍冬皂苷乙含量的的测定。

UPLC-MS/MS检测小儿咳喘灵颗粒中4种黄曲霉毒素及灰毡毛忍冬皂苷乙

目的:分别建立小儿咳喘灵颗粒中黄曲霉毒素 B_(1)、B_(2)、G_(1)、G_(2)及灰毡毛忍冬皂苷乙的 UPLC-MS/MS 测定方法,以期将小儿咳喘灵颗粒检验标准提升。方法:两者均采用 UPLC-MS/MS 法,色谱柱均为 UPLC ACQUITY BEH(100mm×2.1 mm,1.7 μm)。样品经免疫亲和柱前处理,以乙腈 -0.2% 甲酸溶液为流动相,采用 MRM 扫描、ESI+ 模式,选择 4 种黄曲霉毒素,成分响应最佳的质谱参数测定;灰毡毛忍冬皂苷乙以乙腈 -0.1% 甲酸溶液作为流动相,采用 MRM扫描、ESI- 模式,优化质谱参数测定。结果:黄曲霉毒素 B_(1)、B_(2)、G_(1)和 G_(2)各自在 0.186~9.300 ng/m L、0.060~3.000 ng/m L、0.186~9.300 ng/m L、0.070~3.500 ng/m L 检测范围内线性良好,r ≥ 0.995 9;加样回收率在 81.2%~91.9%;样品中 4种黄曲霉毒素浓度均低于检测限。灰毡毛忍冬皂苷乙在 0.083~2.501 ng 检测范围内线性良好,r=0.999 0;加样平均回收率为 100.9%;有 3 批样品检出。结论:基于 UPLC-MS/MS 建立的两种方法定性定量快速、准确,能有效提高小儿咳喘灵颗粒检验标准。

灰毡毛忍冬化学成分的研究

从灰毡毛忍冬(Lonicera mocranthoide Hand. -Mazz.)花的乙醇提取物的正丁醇溶解部分分得三个常春藤皂甙元的双糖链甙,其中一个为已知化合物川续断皂甙乙(dipsacoside B,Ⅰ);另外两个为新化合物,分别命名为灰毡毛忍冬皂甙甲(macranthoidin A,Ⅱ)和灰毡毛忍冬皂甙(nmcranthoidin B,Ⅲ),两者的次级皂甙灰毡毛忍冬次皂甙甲(macranthoside A,Ⅱb)和灰毡毛忍冬次皂甙乙(macranthoside B,Ⅲb),亦未见报道。

UPLC-ELSD法测定山银花中的灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙的含量

建立以 UPLC-ELSD 法测定山银花中的灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙含量的方法。 方法:采用 Waters 公司的 ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7 μm)色谱柱以 0.4 % 醋酸水溶液-乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,柱温45℃,进样量 1.0 μL,流速 0.15 mL / min,载气为氮气,增益 100,喷雾器模式为冷却,漂移管温度 90.0 ℃,气体压力 50.0 psi。 结果: 整个洗脱在 5.0 min 之内完成,且峰型较好,灰毡毛忍冬皂苷乙在 0.06~ 3mg / mL(R2 = 0.9991),川续断皂苷乙在 0.04~ 2mg /mL(R2 = 0.9998)范围内均呈良好的线性关系,平均回收率分别为 96.3% 、95.2% ,RSD 值(% )分别为 3.0、3.6(n= 5)。 结论:该方法操作简便、快速,灵敏度高,重复性好,可用于监测山银花及其制成方剂中灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙的含量。

灰毡毛忍冬花蕾提取物及其两种主要皂苷的溶血性研究

目的评价灰毡毛忍冬花蕾提取物、灰毡毛忍冬皂苷乙与川续断皂苷乙的体内外溶血作用。方法采用肉眼观察法和紫外分光光度法,观察灰毡毛忍冬花蕾提取物、灰毡毛忍冬皂苷乙与川续断皂苷乙浓度梯度为5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100 mg·L-1的溶液在体外对2%兔红细胞悬浮液的溶血反应;采用血液生化指标测定方法,分别检测灰毡毛忍冬花蕾提取物2.275 g·kg-1(生药)和1.137 g·kg-1(生药)组、灰毡毛忍冬皂苷乙0.110 g·kg-1和0.055 g·kg-1组、川续断皂苷乙0.020 g·kg-1和0.010 g·kg-1组以及生理盐水组,在小鼠尾静脉给药前及连续给药7 d后,血液中红细胞数、网织红细胞数、血红蛋白含量。结果在体外溶血试验中,各给药组溶血率均<5%,与对照组相比均未见明显的溶血现象(P>0.05);在体内溶血试验中,各组小鼠用药前后,血液红细胞数、网织红细胞数、血红蛋白含量均处于正常范围内,且其数值在给药前后无差异(P>0.05)。结论在本试验条件下,灰毡毛忍冬花蕾提取物、灰毡毛忍冬皂苷乙与川续断皂苷乙,在体外和体内试验均未导致溶血。

不同干燥方法对灰毡毛忍冬花蕾中活性成分含量的影响

目的:比较不同干燥方法对灰毡毛忍冬花蕾中4种活性成分含量的影响。方法:采用生晒法、烘干法、蒸制生晒法和蒸制烘干法对灰毡毛忍冬花蕾进行干燥处理。参照《中国药典》,利用高效液相色谱(HPLC)-紫外扫描(UV)法测定干燥样品中绿原酸和木犀草苷的含量;利用HPLC–蒸发光散射检测器(ELSD)法测定干燥样品中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量。结果:蒸制烘干法处理的灰毡毛忍冬花蕾中绿原酸含量和皂苷总量最高,分别为3.705%和11.834%,木犀草苷含量为0.103%,均高于《中国药典》对山银花和金银花指标物质含量的规定。结论:不同干燥方法对灰毡毛忍冬花蕾中活性成分的含量有较大影响,以蒸制烘干法最优。

HPLC-UV-ELSD测定山银花中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量

目的：建立同时测定传统中药山银花中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量的HPLC分析方法。方法：采用Phenomenex Luna C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,流动相0.4%醋酸（A）-乙腈（B）,梯度洗脱（0-12 min,80%A;12-13min,80%A→67%A;13-30 min,67%A→65%A;30-35 min,65%A→80%A）,流速0.5 mL.min-1;UV检测：检测绿原酸,λ=326nm;ELSD检测：检测灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙,雾化室温度88℃,漂移管温度108℃,N2气流量1.0 L·min^-1。结果：线性范围内3个化合物呈良好的线性关系（R^2〉0.9959）,加样回收率在99%-101%之间（n=6）,该方法精密度、稳定性和重复性良好,RSD〈2%。结论：该方法能够方便、准确地测定山银花中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量。

UPLC-PDA-ELSD测定贵州山银花中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量

目的：建立超高效液相色谱-紫外检测器-蒸发光检测器联用（UPLC-PDA-ELSD）同时测定山银花中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量的方法,并考察贵州地区山银花的质量。方法：采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（2.1mm×100 mm,1.7μm）,流动相乙腈（A）-0.4%乙酸水（B）,梯度洗脱（0-2 min,7%A;2-2.3 min,7%-28%A;2.3-10 min,28%A;10-10.5 min,28%-7%A）,梯度流速（0-2 min,0.35 mL·min^-1;2-2.3 min,0.35-0.25 mL·min^-1;2.3-2.6 min,0.25-0.15 mL·min^-1;2.6-2.8 min,0.15-0.1 mL·min^-1;2.8-4 min,0.1-0.2 mL·min^-1;4-4.3 min,0.2-0.3 mL·min^-1;4.3-4.5 min,0.3-0.35 mL·min^-1;4.5-10.5 min,0.35 mL·min^-1）,PDA（紫外检测器）检测绿原酸（330 nm）;ELSD（蒸发光散射检测器）检测灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙,漂移管温度60℃,喷雾器温度48℃,气体压力20 psi,色谱柱温度50℃。结果：绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙3种成分分别在0.304 5-1.522 5（R^2=0.999 4）,0.449-1.436 8（R^2=0.999 3）,0.044 6-0.223μg（R^2=0.999 4）呈良好的线性关系。结论：该方法能方便准确的测定贵州山银花中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量,并能有效缩短测量时间和节省试剂。此方法适用于测定考察贵州地区山银花的质量。

山银花(灰毡毛忍冬)适宜采收期研究

为了确定山银花(灰毡毛忍冬)的适宜采收期,测定不同发育时期的花蕾外观形态、产量和质量,比较一日内不同时段采摘花蕾的质量。结果表明,开花型和花蕾型灰毡毛忍冬不同发育阶段的花蕾外观形态具有较大的差异;随着花蕾发育,产量逐渐增加;开花型灰毡毛忍冬花蕾开放后(银花期、金花期)绿原酸含量极显著降低,开花前(幼蕾期、青色期、大白期)质量无显著差异;花蕾型灰毡毛忍冬黄白期灰毡毛忍冬皂苷乙显著降低,幼蕾期和青白期质量无显著差异。一日内不同时段采摘的灰毡毛忍冬绿原酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸含量有显著差异。开花型灰毡毛忍冬的适宜采收期为大白期,采摘时段为10:00以前和18:00以后,花蕾型灰毡毛忍冬的适宜采收期为青白期,采摘时段为8:00以前和18:00以后。

一测多评法同时测定山银花药材中5种皂苷类成分的含量

目的:建立同时测定山银花药材中5种皂苷类成分含量的方法。方法:采用高效液相色谱法,以灰毡毛忍冬皂苷乙为内标,计算其对灰毡毛忍冬皂苷甲、川续断皂苷乙、灰毡毛忍冬次皂苷甲和灰毡毛忍冬次皂苷乙的相对校正因子(RCF),通过RCF计算上述4种皂苷类成分的含量;以外标法测定的上述皂苷类成分含量作实测值,比较计算值与实测值的差异。结果:灰毡毛忍冬皂苷甲、灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙、灰毡毛忍冬次皂苷甲和灰毡毛忍冬次皂苷乙检测进样量线性范围分别为0.316~6.32μg(r=0.997 3)、0.453~9.06μg(r=0.998 2)、0.231~4.62μg(r=0.999 6)、0.342~6.84μg(r=0.998 4)、0.147~2.94μg(r=0.996 1);精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2.0%;加样回收率试验的RSD分别为97.74%~104.51%(RSD=2.37%,n=6)、96.70%~103.20%(RSD=2.37%,n=6)、96.12%~103.61%(RSD=2.45%,n=6)、98.80%~104.70%(RSD=2.32%,n=6)、99.21%~102.92%(RSD=1.39%,n=6)。计算值与实测值差异无统计学意义(P>0.05)。结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于山银花药材中5种皂苷类成分含量的同时测定。