灰花纹鹅膏菌(Amanita fuliginea)子实体发育及核相观察

采用石蜡切片、压片等方法对灰花纹鹅膏菌(Amanita fuliginea)子实体发育过程进行了观察,并用核荧光染料Hoechst 33258对灰花纹鹅膏菌子实体发育过程中的核相变化进行了观察。结果表明,灰花纹鹅膏菌子实体发育是典型的半被果型发育,菌褶是子实层同时发育类型,属于同型菌髓。在子实体发育过程中,单倍的二核担子核配后形成短暂的二倍体单核担子,经过减数分裂形成四核担子,有近40%的担子中核再进行一次有丝分裂形成8核担子,担子进一步发育产生担孢子,其中,二核担孢子约占95%,单核担孢子约2.4%,三核孢子2%左右,4核担孢子约0.4%。灰花纹鹅膏菌基因组中染色体数目2n=10条。

灰花纹鹅膏菌(Amanita fuliginea)子实体发育过程中核相变化及染色体数目观察

首次应用核荧光染料Hoechst33258观察了灰花纹鹅膏(Amanita fuliginea)担子核行为及染色体数目.由于该染料特异性的与核DNA结合,因此排除了染色体观察时常规苏木精或Giemsa法中心粒及核仁的干扰,重现性好.结果表明;灰花纹鹅膏菌子实体发育过程中,单倍的二核体担子核配后形成短暂的二倍体单核担子,经过减数分裂形成四核担子,有近40％的担子中核再进行一次有丝分裂形成八核担子,95％以上的担孢子为二核,少数为单核和三核孢子,偶见四核担孢子.灰花纹鹅膏菌染色体数目2n=10条.

灰花纹鹅膏菌及其生态习性

灰花纹鹅膏菌 Amanita fuliginea Hongo的分类地位和生态习性国内一直没有详细报道 .用形态解剖、HPL C和种群生态学研究方法对其研究表明 :日本学者 Hongo对该菌的分类是正确的 ;它的毒素含量与欧洲的主要种毒鹅膏菌 Amanita phalloides(Fr.∶ Fr.) L ink毒素含量相当 ,甚至更高 .

β-鹅膏毒肽的反相高效液相色谱分离纯化

用反相高效液相色谱,以0.02mol/L醋酸铵-乙腈为流动相的梯度洗脱模式,在295nm吸收值的条件下,灰花纹鹅膏菌Amanitafuliginea的肽类毒素可以被成功的分离和纯化。单个肽类毒素的鉴定是用反相高效液相色谱和质谱同时进行。用这一方法可从灰花纹鹅膏菌中分离纯化出β-鹅膏毒肽(β-amanitin),产量可达到:1158靏/g(干重),产品纯度达98%以上,回收率为95.3%。β-鹅膏毒肽的分子量为919.3Da。这个方法可用于其它鹅膏菌肽类毒素的分离纯化。

水飞蓟煎剂治疗急性鹅膏肽类毒素致肝损伤的实验研究

目的探讨水飞蓟煎剂治疗急性鹅膏肽类毒素所致肝损伤的解毒机制。方法选用健康SD大鼠32只,随机分成4组(每组8只):正常对照组、中毒对照组、水飞蓟煎剂1 g/mL组、水飞蓟煎剂3 g/mL组。除正常对照组外,其余3组均制成急性鹅膏毒蕈中毒鼠模型。造模后每日给予相应药物,3 d后观察大鼠的存活情况,并采血检查谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和用紫外分光光度法测定肝细胞RNA聚合酶活性。结果中毒对照组的血浆ALT和AST较正常对照组明显增加(P<0.01),不同剂量水飞蓟煎剂灌胃治疗3 d后,2组血浆ALT和AST较中毒对照组明显降低,2组间比较差异有统计学意义;中毒对照组肝细胞RNA聚合酶活性明显低于正常对照组(P<0.01),水飞蓟煎剂治疗组肝细胞RNA聚合酶活性明显高于正常对照组(P<0.01),同时治疗组之间呈量-效关系(P<0.01)。结论水飞蓟煎剂对鹅膏毒蕈中毒肝有明显保护作用,且作用呈量-效关系,其机制可能与提高肝细胞RNA聚合酶活性有关。

三羟鹅膏毒肽的反相高效液相色谱分离纯化

用反相高效液相色谱法,以0.02mol醋酸铵-乙腈为流动相和梯度洗脱模式,从灰花纹鹅膏菌中分离纯化出三羟鹅膏毒肽(amanin),产品纯度达96%以上,三羟鹅膏毒肽的分子量为903.3.

一羟鬼笔毒肽(PHN)的制备及其毒理研究

利用反相高效液相色谱技术对灰花纹鹅膏菌(Amanita fuliginea)的肽类毒素进行分离,并对保留时间为60.807 min的成分进行了纯化,纯度达到99%.通过环肽检测、紫外光谱和质谱鉴定为一羟鬼笔毒肽(PHN),其相对分子质量为772.36 Da.一羟鬼笔毒肽(PHN)能引起植物细胞坏死,对小白鼠的LD50为1 414μg.kg-1,能引起小白鼠肝脏充血,血液循环衰竭.

水飞蓟煎剂对急性毒蕈中毒鼠肾损害的保护作用

目的:探讨水飞蓟煎剂对急性鹅膏毒蕈中毒鼠肾损害的保护作用。方法:将32只健康SD大鼠随机分为空白对照组、中毒模型组、水飞蓟煎剂1 g/mL组、水飞蓟煎剂3 g/mL组,每组8只。除空白对照组外,其余3组均制成急性鹅膏毒蕈中毒鼠模型。造模后每日给予相应药物3 d后观察大鼠的存活情况、活动情况、尿颜色、尿量、尿红细胞、尿白细胞、尿蛋白、尿NAG酶、血浆尿素氮、血浆肌酐、以及肾脏病理检查等指标。结果:实验所观测的指标包括动物的存活情况、活动情况、尿颜色、尿量、尿红细胞、尿白细胞、尿蛋白、NAG酶、尿素氮、肌酐等,水飞蓟煎剂各治疗组与模型组比较差异显著(P<0.01);病理检查结果提示,水飞蓟煎剂各治疗的肾脏组织结构损害较中毒模型组明显减轻,3 g/mL组比治疗1 g/mL组大鼠的肾损害更轻。结论:水飞蓟煎剂对急性毒蕈中毒大鼠肾有明显的保护作用,且作用呈量效关系。

Amanin的制备与活性检测

为解决蘑菇中毒的检测问题,从灰花纹鹅膏菌(Amanita fuliginea)中分离鹅膏肽类毒素Amanin,寻找该毒素的活性单体物质。利用反相高效液相色谱、紫外光谱、质谱等分离检测技术,以及毒素对绿豆种子萌发、小白鼠毒理试验及LD50等毒理分析方法。对保留时间为43.207 min的成分进行了纯化,纯度达到95%以上。紫外光谱测得其最大吸收波长为285.79 nm,质谱分析得到其分子量为903.390 0 Da,经初步鉴定为Amanin毒素,其对小白鼠的肝脏毒害明显,LD50为565μg/kg。可见用高效液相色谱法分离Amanin毒素是可行的,分离得到的毒素具有很好的生物学活性。

湖南省桂阳县四起毒蘑菇中毒事件的调查分析

目的 调查分析湖南省桂阳县 1996～ 2 0 0 2年发生的四起毒蘑菇中毒事件 ,了解导致中毒死亡的毒蘑菇种类 ,以防事故的再次发生。 方法 采用宏观形态和显微观察鉴定蘑菇。 结果 在这四起毒蘑菇中毒事件中 ,中毒人数93人 ,死亡 16人 ,死亡者主要集中在 15岁以下和 5 0岁以上年龄组 ,占 13人 ,说明年龄小和年龄大的中毒者对蘑菇毒素的抵抗力明显低于身强体壮的中青年人 ;导致中毒死亡主要由两类蘑菇所引起 ,一类是鹅膏菌 ,主要由灰花纹鹅膏菌所引起 ,病程长 ,具有潜伏期 ;一类是红菇属 ,主要由亚稀褶黑菇所引起 ,发病快 ,病程短。 结论 灰花纹鹅膏菌和亚稀褶黑菇为剧毒蘑菇 ,由于它们与一些可食的种类极为相似 ,毫无识别毒菌经验者不要采食是预防毒菌中毒发生的最根本的方法 ,万一发生误食中毒要尽快进行催吐、洗胃。