基于网络药理学探讨中药蟾毒灵在骨肉瘤中的抗肿瘤作用机制

目的:本研究运用网络药理学分析方法,了解蟾毒灵(bufalin)在骨肉瘤中的抗肿瘤作用机制,并进一步利用相关实验进行验证。方法:通过PharmMapper数据库预测得到蟾毒灵的潜在作用靶点,借助GeneCards数据库搜索骨肉瘤相关疾病靶点,对两个数据库中的靶点进行Venny分析,随后使用String数据库绘制蛋白互作(PPI)网络,利用David数据库对关键靶点进行基因本体(gene ontology,GO)富集及KEGG信号通路分析。最后运用Cytoscape 3.7.2及Origin 2020软件构建“化合物-通路-靶点-疾病”网络图。最后利用CCK-8实验和Western blot实验进行验证。结果:通过药理学分析一共获得蟾毒灵与骨肉瘤共同靶点107个,KEGG通路富集分析共得到相关信号通路34条,涉及到肿瘤信号通路有:PI3K-AKT信号通路、MAPK信号通路、p53信号通路、VEGF信号通路、ErbB信号通路等。将其进行PPI网络分析表明,MYC、CCND1、IL6、ESR1、CDKN2A、IGF1、CAT、CDKN1A、ANXA5、PTGS2为连接度最高、权重最大的靶点。CCK-8实验证实蟾毒灵具有抑制骨肉瘤细胞增殖的作用;Western blot发现增殖相关蛋白MYC、CCND1蛋白表达下降。回复实验进一步证实,蟾毒灵可能通过调控PI3K-AKT信号通路发挥抗骨肉瘤的作用。结论:基于网络药理学分析以及相关实验发现蟾毒灵可能通过调控PI3K-AKT信号转导通路抑制骨肉瘤的生长。

低分子肝素钠联合保胎灵在复发性流产患者中的应用价值及对CRP与HO-1的影响

目的探讨低分子肝素钠联合保胎灵在复发性流产患者中的应用价值及对C-反应蛋白(CRP)与血红素加氧酶1(HO-1)的影响。方法选取2020年3月至2022年4月在我院接受治疗的108例复发性流产(RSA)患者作为研究对象,采用随机表法,将患者随机分为联合组(n=54)和传统组(n=54),传统组患者予以低分子肝素(LMWH);联合组患者加用保胎灵。比较两组患者激素水平、凝血功能、细胞相关因子水平、血清水平的变化、妊娠结局及其并发症的发生情况。结果治疗后,两组β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)、雌二醇(E 2)和孕酮(P)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、转化生长因子-β(TGF-β)和白细胞介素-10(IL-10)、HO-1均升高,且联合组高于传统组(P<0.05);两组纤溶酶原激活抑制剂1(PAI-1)、白细胞介素-17(IL-17)、CRP均下降,且联合组低于传统组;联合组流产率显著低于传统组,活产率则明显高于传统组(P<0.05)。两组患者的足月产率比较差异无统计学意义(P>0.05)。联合组分娩周数显著长于传统组(P<0.05);两组患者妊娠并发症比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论LMWH联合保胎灵能有效改善RSA患者妊娠期孕激素水平及凝血功能,提升保胎成功率改善妊娠结局,同时可调节细胞平衡,且对并发症无显著影响。

嘧菌酯与甲基硫菌灵在荔枝采后贮藏保鲜中的应用及膳食暴露评估

本文探究了常温条件下不同浓度的嘧菌酯和甲基硫菌灵对采后荔枝果实保鲜效果的影响,在贮藏期间通过对荔枝生理指标进行分析从而筛选出较优的杀菌剂配方,并对筛选后的杀菌剂配方进行验证以及膳食暴露评估,最终获得可以在常温贮藏条件下延长荔枝货架期的保鲜方法。结果发现,在25℃贮藏条件下,采用25%嘧菌酯1600倍稀释液(M1600)、25%嘧菌酯1600倍稀释液复配70%甲基硫菌灵700倍稀释液(M1600+J700)处理荔枝可以显著抑制果实的呼吸强度(P<0.05),降低果皮的相对电导率(P<0.05)和果实的腐烂率(P<0.05),且在一定程度上抑制了果肉中可溶性固形物TSS和维生素C含量的降低,较好地维持了荔枝果实的感官品质和食用价值。经对比发现,两种杀菌剂对荔枝的保鲜效果相当,但单独使用M1600在抑制荔枝果皮褐变方面效果较优。通过对贮藏期间荔枝全果和果肉中杀菌剂残留量的检测以及膳食暴露评估发现,单独使用嘧菌酯处理荔枝后整果中嘧菌酯的风险熵RQ远小于1,可以同时达到满足提高荔枝贮藏品质、安全食用以及降低经济成本的目的。该研究为荔枝等非呼吸跃变型果实采后品质提升的研究提供了技术参考。

LC-MS/MS测定氨磺乐灵在水和土壤中的残留量

采用高效液相色谱质谱联用法建立氨磺乐灵在水和土壤等环境介质中的残留检测方法,为该除草剂在环境中的安全监测提供科学指导。样品经Agilent ZORBAX Extend C_(18)(2.1 mm×50 mm,3.5μm)色谱柱分离,以乙腈/0.1%甲酸水溶液(80∶20,体积比)为流动相,流速为0.4 mL/min,柱温为30℃,采用ESI MRM Negative的扫描模式进行检测。加标回收试验结果表明,在0.5~50.0μg/L范围内,线性关系良好,相关系数r大于0.999,定量限为0.5μg/L,水中平均加标回收率为104%~109%,RSD为2.40%~4.62%;土壤中平均加标回收率为85.4%~94.8%,RSD为3.53%~4.78%。该方法前处理简单、快速,检测结果准确、可靠、方法选择性强、灵敏度高,为农药污染及其有害因素监测提供技术支持。

蟾毒灵在大鼠吗啡成瘾消退和重建中的作用

研究蟾毒灵在吗啡成瘾消退和重建中的药理作用。方法:大鼠随机分为溶酶组和蟾毒灵组,每组12只。腹腔注射盐酸吗啡并通过条件性位置偏爱装置建立吗啡成瘾模型,两组分别注射溶酶和蟾毒灵(0.6mg/kg),并检测其偏爱分值变化,探究蟾毒灵对大鼠吗啡成瘾消退和重建的影响。结果:蟾毒灵组在注射蟾毒灵后,偏爱分值降低,与后测值比较,差异有统计学意义(P<0.05),而且效应持续三天以上;溶媒组的偏爱分值与后测值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。成瘾消退后采用半剂量吗啡注射重建吗啡成瘾,蟾毒灵组和溶媒组的偏爱分值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:蟾毒灵可促进大鼠吗啡成瘾的消退,但不影响成瘾消退后的重建。

哒螨灵在苹果上的残留量检测与消解动态

研究了哒螨灵在苹果上的残留分析方法及其在苹果中的消解动态和最终残留量。哒螨灵经乙酸乙酯-丙酮（1：1，体积比）提取后，用弗罗里硅土净化、浓缩、定容，用带ECD检测器的气相色谱仪测定。哒螨灵的最小检出量为1．0×10^-11 g，最低检出浓度为0．02mg／kg，回收率在83．6％-104．1％之间，变异系数为3．0％-4．3％。2006年在山东两地的田间残留试验结果表明，哒螨灵在莱州和五莲苹果中的消解半衰期分别为4．1和3．8d，最终残留量分别为0．059和0．040mg／kg。

蟾蜍灵在诱导HL-60细胞凋亡过程中对Bcl-2和PKC的影响

为了研究蟾蜍灵在诱导HL-60细胞凋亡过程中对Bcl-2表达与裂解和磷酸化的作用,及对蛋白激酶C(PKC)活性与PKCs亚细胞定位的影响,分别采用台盼蓝拒染法检测细胞生存率,细胞染色法观察凋亡形态,流式细胞术分析细胞周期,琼脂糖凝胶电泳检测凋亡DNA片段化,[γ-32P]同位素掺入法测定PKC活性,Westernblot分析Bcl-2及PKC蛋白表达。结果表明:①蟾蜍灵抑制HL-60细胞增殖,24、48及72小时的IC50分别为(25.8±2·1)、(8.0±1.2)及(2.3±0.3)nmol/L;②50nmol/L蟾蜍灵作用24小时可诱导HL-60细胞凋亡;③50nmol/L蟾蜍灵处理HL-60细胞6-24小时,Bcl-2蛋白表达水平明显下调,并出现23kD的裂解片段,磷酸化水平逐渐降低;④1-100nmol/L蟾蜍灵分别作用30分钟,对PKC总活性无影响,但可促使PKCβⅡ膜转位。结论:蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡可能与Bcl-2表达降低、裂解及脱磷酸化有关。

哒螨灵在柑桔上的残留动态研究

为评价哒螨灵在柑桔上使用后的残留行为及环境安全性,采用丙酮提取柑桔和土壤中残留的哒螨灵,经液-液分配和柱层析净化后,用GC/ ECD方法对哒螨灵在柑桔和土壤中的残留进行了研究.仪器最小检出限为1×10-11g,方法最低检出浓度为0.005 mg/ kg,样本添加回收率在91.0 %～105.27 %.研究结果表明,哒螨灵在云南柑桔和土壤中的半衰期分别为11.9和22.3 d,在湖南柑桔和土壤中的半衰期分别为24.9和22.5 d.按推荐浓度150 mg/ L使用,安全间隔期20 d,在柑桔全果中最终残留量＜0.136 mg/ kg.测定结果还表明,哒螨灵在柑桔中主要残留在桔皮里,桔肉中仅有少量残留,其残留分布因品种不同而有差异.

噻菌灵在柑橘、香蕉和芒果贮藏期的残留降解研究

为了解柑橘、香蕉和芒果贮藏期间使用噻菌灵后的降解情况及其对果实安全性的影响,用高效液相色谱法对果肉中噻菌灵的残留水平进行了分析。样品中的噻菌灵经乙腈提取,乙二胺-N丙基硅烷(PSA)吸附剂、C18吸附剂(ODS)和无水硫酸镁净化后,测定残留量。添加0.2～1.0 mg/kg浓度水平噻菌灵,在3种水果中的平均添加回收率为87.6%～104.8%,相对标准偏差(RSD)均在7%以下,噻菌灵最低检出限为0.002 5 mg/kg,满足残留分析的要求。结果表明,贮藏期间使用噻菌灵后,果肉中噻菌灵残留量随时间延长先增加后减少;在试验使用水平下,果肉中噻菌灵残留低于我国、国际食品法典委员会(CAC)欧盟和美国规定的最大残留限量要求,其残留污染性较小,不会对果实安全质量造成负面影响。

蟾蜍灵在诱导HL-60细胞凋亡时对SYK和CBL家族蛋白的影响

为了探讨酪氨酸蛋白激酶SYK和CBL家族泛素连接酶在蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡过程中的作用机制,采用台盼蓝染色检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用Western blot和免疫沉降技术检测CBL、CBL-b表达和SYK的磷酸化。结果显示,蟾蜍灵以时间和剂量依赖方式抑制HL-60细胞增殖,24、48和72小时抑制细胞活力的IC50浓度分别约为26.3,7.8和2.0 nmol/L。高剂量蟾蜍灵从8小时即开始诱导HL-60细胞凋亡;与此同时蟾蜍灵快速活化SYK,并以时间依赖的方式下调CBL和CBL-b表达。结论:SYK活化及CBL家族蛋白表达下调可能参与蟾蜍灵对HL-60细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用。

甲基硫菌灵及其代谢产物多菌灵在芒果上的残留测定及膳食风险评估

为芒果的质量安全提供参考,采用高效液相色谱-串联质谱分析方法对芒果中甲基硫菌灵及代谢产物多菌灵残留进行测定,观测甲基硫菌灵(以多菌灵计)的消解动态,并对芒果中甲基硫菌灵(以多菌灵计)残留带来的慢性膳食摄入和急性膳食摄入风险进行评估。结果表明:在0.05~1.0mg/L范围内甲基硫菌灵的质量浓度与对应的峰面积间线性关系良好,方法的检出限(LOD)为4pg,在芒果中的定量限(LOQ)为0.01mg/kg。在0.01mg/kg、0.10mg/kg和1.0mg/kg3个添加水平下,甲基硫菌灵及其代谢产物多菌灵在芒果中的回收率分别为84.7%~112.0%和79.2%~103.0%,相对标准偏差为2.7%~5.8%和3.0%~4.4%,测定方法准确可靠。甲基硫菌灵及其代谢产物多菌灵的消解规律符合一级动力学方程,海南台农和云南金凤凰在2015年、2016年的半衰期分别为9.5d、9.9d和12.6d、9.8d,安全收获期芒果中甲基硫菌灵的最大残留量为0.993mg/kg。芒果中甲基硫菌灵残留的慢性膳食摄入风险概率为40.10%,急性膳食摄入暴露量为0.0025~0.0130mg/(kg·bw·d),仅占ARfD的0.25%~1.30%,在可接受范围内,芒果中甲基硫菌灵残留带来的膳食摄入风险极低。

哒螨灵在茶叶中残留量的研究

从１９９３～１９９４年哒螨灵残留量降解的研究表明，哒螨灵农药在正常用量下（每亩用哒螨灵有效成分３７５克，合１５％乳油４０００倍液）喷药后３天成茶中残留量平均低于１００ｐｐｍ，５天成茶中残留量平均低于０５ｐｐｍ。饮茶过程中哒螨灵浸出率较低，平均为６８６％，对人体是安全的。其成茶的半衰期春茶为０８４±００４天。

甲基硫菌灵及其代谢物多菌灵在猕猴桃上的残留及安全性评价

为了评估甲基硫菌灵在猕猴桃上使用的安全性,采用QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱分析方法,对甲基硫菌灵及其代谢物多菌灵在猕猴桃上的残留量进行了分析,明确了其消解规律及半衰期,通过进行膳食摄入风险评估,以推荐甲基硫菌灵在猕猴桃上的最大残留限量(MRL),并对其代谢物多菌灵的残留量进行了安全性评价。结果表明:在0.01、0.1和1.0 mg/kg 3个添加水平下,甲基硫菌灵的回收率为85%~102%,相对标准偏差(RSD)为1.0%~7.1%;多菌灵的回收率为86%~101%,RSD为2.1%~5.2%;两者的定量限均为0.01 mg/kg。甲基硫菌灵在猕猴桃上的消解符合一级反应动力学方程,半衰期为10.1~10.5 d,属易消解农药。70%甲基硫菌灵可湿性粉剂在猕猴桃上按照推荐剂量及1.5倍推荐剂量(875和1166.7 mg/kg)分别施药3次和4次,推荐采收间隔期为21 d,膳食风险商为78.7%,推荐MRL值为5 mg/kg,该结果通常不会对一般人群健康产生不可接受的风险。依据GB 2763多菌灵在猕猴桃上的MRL值0.5 mg/kg,代谢物多菌灵存在较大的超标风险。建议有关部门制定甲基硫菌灵在猕猴桃上的MRL值,并重新评估多菌灵在猕猴桃上的MRL值。

固相萃取-高效液相色谱法同时测定噻菌灵和多菌灵在浓缩菠萝汁中的残留量

建立了一种可同时测定浓缩菠萝汁中噻菌灵和多菌灵残留量的反相高效液相色谱分析法.浓缩菠萝汁样品与水按一定比例稀释后,经过调节溶液的pH值、离心、过滤,用混合相固相萃取小柱（Mixed-mode SPE）进行提取、净化,并用配有二极管阵列检测器（DAD）的液相色谱仪检测,外标法定量.使用噻菌灵和多菌灵对照品进行添加回收率测定,结果显示,本方法对噻菌灵的检出限为0.020 mg/kg,回收率为75.7%～93.3%;对多菌灵的检出限为0.020 mg/kg,回收率为80.8%～99.2%;测定的相对标准偏差均不大于5.7%.本方法简单、快速、准确,能满足常规噻菌灵和多菌灵残留量检测的需要.

蟾蜍灵在诱导K562细胞凋亡过程中下调TOPO-Ⅱα蛋白表达

目的探讨蟾蜍灵(bufalin)诱导K562细胞凋亡的分子机制。方法用流式细胞仪和形态学检测细胞凋亡;用免疫组化SP法检测TOPO-Ⅱα蛋白表达。结果蟾蜍灵在诱导K562细胞凋亡过程中,下调TOPO-Ⅱα蛋白表达;细胞外信号转导激酶抑制剂(extra-cellularsignal-regulatedkinase,ERK)PD98059能协同蟾蜍灵下调TOPO-Ⅱα蛋白表达;而四癸酰佛波酯(TPA)却拮抗蟾蜍灵的作用。结论蟾蜍灵诱导K562细胞凋亡可能与抑制ERK信号途径以及下调TOPO-Ⅱα蛋白表达有关。

恶霉灵在西瓜和土壤中的残留及消解动态研究

[目的]监测恶霉灵在西瓜和土壤中的残留量。[方法]采用气相色谱法测定了恶霉灵在西瓜全果和土壤中的残留。[结果]恶霉灵在西瓜全果中的平均回收率为80.02%～83.25%,变异系数为1.12%～3.25%;在土壤中的平均回收率为80.11%～84.23%,变异系数为1.25%～3.08%。恶霉灵在西瓜和土壤中的消解动态以及最终残留结果表明,在湖南长沙和北京两地西瓜中的消解半衰期分别为3.40、3.13 d,在土壤中的消解半衰期分别为3.66、3.67 d。[结论]在西瓜上使用0.1%恶霉灵颗粒剂兑水剂,按照推荐使用剂量为600kg/hm2施药1次时,恶霉灵在西瓜上的安全期为14 d。

花信灵在粳稻不育系繁殖中的应用研究

花信灵对粳稻不育系开花具有明显的诱导效应,能提早不育系的始花时间和盛花时间,提高异交结实率及繁殖产量。研究结果表明:在不育系榆密15A抽穗5%和40%时各喷1次花信灵,并且在抽穗5%和10%时各喷1次"九二○",始花时间和盛花时间均比对照提早23 4min,与保持系的始花时差和盛花时差分别缩短为19 4、11min;异交结实率和产量分别比对照提高4 70%、377 40kg/hm2,产量差异达极显著水平。花信灵与"九二○"适时适量地配合使用,具有较高的投入产出比,是粳稻不育系繁殖缩短父母本花时差较为有效且经济的使用方法。

嗪胺灵在西瓜土壤和西瓜中的降解动态和最终残留量

采用气相色谱法研究19％嗪胺灵乳油在广东、广西地区西瓜田中的降解动态和最终残留量。结果表明：嗪胺灵的最小检出量为5．0×10^-3mg，在土壤和西瓜中的最低检出质量分数分别为0．005、0．010mg／kg；嗪胺灵在土壤和西瓜中的添加回收率分别为71．81％～101．45％和77．63％～100．23％，相对标准偏差（RSD）分别为2．27％～3．59％和4．08％～10．43％，其结果均符合一级动力学指数模型；嗪胺灵在广东和广西土壤中的半衰期分别为4．12、4．52d，在西瓜中的半衰期分别为1．81、1．90d；嗪胺灵在西瓜中的降解较土壤中的快，属于易降解农药（T1／2〈30d）；分别按推荐剂量（300g／hm^2）和1．5倍推荐剂量施药3-4次，测得收获期嗪胺灵在土壤和西瓜中的最终残留量分别为0．0499～0．6822、0．0285-0．5141mg／kg，其残留量均低于马来西亚规定的最大残留限量（MRL）1．0mg／kg。

增瓜灵在薄皮甜瓜上的应用研究

以薄皮甜瓜品种蜜宝为供试材料,研究喷施不同次数增瓜灵对甜瓜雌花分化、坐瓜节位、增产增收的影响。结果表明:使用增瓜灵后,甜瓜植株节间长度明显变短,侧蔓数量减少,每667m2减少整枝用工8个,雌花在子蔓连续发生,果实发育期缩短了3d。喷施1次和喷施2次增瓜灵处理的甜瓜产量分别比对照增产11.4%和19.2%,增收3553.61元·(667m2)-1和4772.80元·(667m2)-1。因此,合理使用增瓜灵,能有效抑制植株营养生长,促进生殖生长,从而满足增产增收和简约化栽培的生产需求。

氯苯胺灵在马铃薯中残留及降解动态的研究

通过不同品种马铃薯中氯苯胺灵的降解试验,揭示氯苯胺灵残留量的变化规律及其降解动态。试验结果表明,氯苯胺灵在薯皮上的残留量远大于全薯,而且在降解过程中具有明显的吸收特点;氯苯胺灵在全薯上的平均半衰期约为44天,在薯皮上的平均半衰期约为31天。