灵芝烯酸B诱导Oct4去SUMO化激活G0期胃癌侧群细胞

[目的]从蛋白质类泛素化修饰角度研究灵芝烯酸B(GAB)对静息期G0胃癌侧群细胞的活化作用,为胃癌侧群细胞靶向治疗提供新策略。[方法]流式细胞术分离CD133+的SGC-7901胃癌侧群细胞,培养细胞克隆球,给予GAB处理96 h,于不同时间点检测克隆球大小,绘制克隆球变化曲线;流式细胞术检测胃癌侧群细胞周期变化;蛋白免疫印迹(Western Blot)方法检测小泛素样修饰蛋白-1(SUMO-1)、八聚体结合转录因子4(Oct4)、细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin E1、Cyclin A2和Cyclin B1的表达水平;四甲基噻唑蓝(MTT)法检测顺铂对CD133+胃癌侧群细胞的半数致死量(IC50)。[结果] GAB组胃癌侧群细胞克隆球生长速度明显低于对照组;对照组CD133+胃癌侧群细胞主要集中于G0/G1期,而GAB组CD133+则主要集中于G2/M期;与对照组比较,GAB组胃癌侧群细胞的SUMO-1、Oct4和Cyclin D1蛋白表达水平降低,而Cyclin E1、Cyclin A2和Cyclin B1蛋白表达水平升高(P<0.05);GAB处理使顺铂对胃癌侧群细胞IC50从69.84μg/mL下降至35.67μg/mL。[结论] GAB能够通过诱导Oct4去SUMO化激活G0期胃癌侧群细胞,增加胃癌侧群细胞对顺铂的化疗敏感性。

UPLC-QqQ-MS法测定福建灵芝中灵芝烯酸D的含量及其在产地追溯中的应用

目的建立一种超高效液相色谱串联三重四极杆质谱(UPLC-QqQ-MS)法测定福建灵芝中灵芝烯酸D的含量,并对比不同产地的含量。方法采用Waters UPLC CORTECS C18(4.6 mm×100 mm,1.6μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相,进行梯度洗脱,流速0.25 mL/min,柱温40℃,进样量2μL。质谱采用电喷雾离子源(ESI),用多反应监测(MRM)模式进行含量测定。结果福建灵芝药材样品中灵芝烯酸D在考察的质量浓度范围内与峰响应值呈良好的线性关系r>0.999,加样回收率为98.01%~103.95%,RSD为2.6%。结论本研究建立的UPLC-QqQ-MS方法测定福建灵芝中灵芝烯酸D的含量,分析方法灵敏、准确,可为福建灵芝的质量追溯提供参考。

基于UPLC-QTOF-MS和多元统计分析的赤芝道地性研究

目的:研究不同产地、不同栽培方式对赤芝中三萜类成分的影响,为赤芝的道地性研究提供依据。方法:采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱法(UPLC-QTOF-MS)对120批赤芝样品进行化学成分分析。将赤芝样品按照浙产/非浙产、浙产段木/非浙产段木、浙产段木/浙产野生、不同发育时期进行模式分类,应用正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对赤芝样品进行多元统计分析,用变量重要性投影(VIP)值、t检验筛选出组间差异显著的指标性成分。结果:从供试样品中鉴定出13种响应高、分离度好的灵芝酸类成分。筛选发现,浙产赤芝中灵芝酸D、灵芝烯酸D显著高于非浙产赤芝,可作为浙产赤芝的标志性成分;浙产段木赤芝中灵芝酸D、灵芝酸B、灵芝酸C1、灵芝酸G的含量显著高于非浙产段木赤芝;段木赤芝中灵芝酸A等6个成分均显著高于野生赤芝;随着赤芝子实体逐渐成熟(现蕾期→开伞期→成熟期→采摘期),多数灵芝酸含量呈现下降趋势,但部分样品采摘期(喷孢后)灵芝酸含量较成熟期(喷孢前)高,值得进一步研究。结论:浙产与非浙产赤芝成分差异较明显,且浙产段木赤芝与非浙产段木赤芝成分也存在明显差异,可能与生态环境、种植方式有关。

南方灵芝子实体的化学成分

南方灵芝[Ganoderma australe(Fr.)Pat.,Bull.]为一种常见的生长在阔叶树枯立木、倒木和伐桩上的灵芝属真菌,具有很好的药用和保健价值.采用硅胶、凝胶柱色谱、反相ODS柱和高效液相色谱等方法从野生南方灵芝子实体的乙醇提取物中分离到14个化合物,结合核磁共振(1H-NMR,13C-NMR)、质谱(MS)、红外(IR)、紫外(UV)等波谱技术将其分别鉴定为灵芝烯酸G甲酯(Methyl ganoderenate G,1)、灵芝烯酸G(Ganoderenic acid G,2)、灵芝烯酸A(Ganoderenic acid A,3)、灵芝烯酸A甲酯(Methyl ganoderenate A,4)、灵芝烯酸D(Ganoderenic acid D,5)、灵芝烯酸F(Ganoderenic acid F,6)、灵芝酸AP(Ganoderic acid AP,7)、7β,23α-dihydroxy-3,11,15-trioxolanosta-8,20E(22)-dien-26-oic acid(8)、Elfvingic acid A(9)、3β,5α-dihydroxy-(22E,24R)-ergosta-7,22-dien-6-one(10)、对羟基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid,11)、3-羟基-4-甲氧基苯甲酸(3-hydroxy-4-methoxybenzoic acid,12)、油酸-α-单甘油酯(9-octadecenoic acid-2,3-dihydroxypropyl ester,13)及谷甾醇(β-sitosterol,14).其中,化合物1为新化合物,化合物1-9为从南方灵芝中首次分离得到的羊毛甾烷型三萜化合物.

HPLC同时测定赤芝中4种三萜酸的含量

目的：建立HPLC同时测定赤芝药材中灵芝酸C2、灵芝烯酸A、灵芝酸A和灵芝酸D含量的方法。方法：采用Kromasil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.03%磷酸水溶液采用梯度洗脱，流速1.0 mL·min-1，检测波长252 nm，柱温35 ℃。结果：灵芝酸C2、灵芝烯酸A、灵芝酸A和灵芝酸D的线性范围分别为：5.0～50.0 mg·L-1（r=0.999 9），7.2～72 mg·L-1（r=0.999 9），11.67～116.7 mg·L-1（r=0.999 9）和5.32～53.2 mg·L-1（r=0.999 8）；平均回收率（n=3）分别为98.8%（RSD1.5%），99.1%（RSD1.9%），99.5%（RSD1.4%）和98.5%（RSD1.9%）。结论：该方法简便、准确，重复性好，为赤芝药材的质量控制提供了实验依据。