灵芝酸Me提高多药耐药性KB-A-1/Dox细胞对阿霉素敏感性的初步研究

通过多药耐药性KB-A-1/Dox细胞,研究了灵芝酸Me逆转其多药耐药性的效果及可能机理。结果表明:灵芝酸Me对耐药型肿瘤细胞有细胞毒性并诱导细胞凋亡,具有剂量依赖性。经5μg/mL灵芝酸Me处理后,可部分逆转KB-A-1/Dox细胞对阿霉素的多药耐药性。12μg/mL灵芝酸Me处理可使多药耐药性细胞内阿霉素和Rhodamin123含量分别增加100%。以上结果提示灵芝酸Me能提高多药耐药性肿瘤细胞对阿霉素的敏感性,其机制可能与通过膜转运蛋白P-gp提高细胞内药物的累积量和诱导细胞的凋亡有关。本结论为辅助肿瘤化疗的功能食品研究或逆转多药耐药性药物的先导化合物研究提供了理论依据。

灵芝酸A对非小细胞肺癌PC9细胞糖酵解及其关键限速酶的影响

目的:探讨不同剂量灵芝酸A(GAA)对非小细胞肺癌(NSCLC) PC9细胞的生物活性、糖酵解及其限速酶表达的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养NSCLC PC9细胞,将PC9细胞分为空白对照组、低剂量(25μmol·L^(-1)) GAA组、中剂量(50μmol·L^(-1)) GAA组和高剂量(100μmol·L^(-1)) GAA组。采用噻唑蓝(MTT)法检测各组PC9细胞存活率,Transwell小室实验检测各组PC9细胞迁移细胞数,葡萄糖检测试剂盒检测各组PC9细胞葡萄糖摄取量,三磷酸腺苷(ATP)检测试剂盒检测各组PC9细胞中ATP水平,乳酸检测试剂盒检测各组PC9细胞中乳酸水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组PC9细胞中己糖激酶2(HK2)和M2型丙酮酸激酶(PKM2) mRNA表达水平,Westernblotting法检测各组PC9细胞中HK2和PKM2蛋白表达水平。结果:MTT法,培养24、48和72 h时,与空白对照组比较,中和高剂量GAA组PC9细胞存活率明显降低(P<0.05);培养72 h时,与低剂量GAA组比较,高剂量GAA组细胞存活率明显降低(P<0.05)。Transwell小室实验,与空白对照组比较,中和高剂量GAA组细胞迁移数明显减少(P<0.05);与低剂量GAA组比较,高剂量GAA组细胞迁移数明显减少(P<0.05)。与空白对照组比较,中和高剂量GAA组PC9细胞中葡萄糖摄取量和乳酸水平均明显降低(P<0.05),高剂量GAA组PC9细胞中ATP水平明显降低(P<0.05)。RT-qPCR法,与空白对照组比较,中和高剂量GAA组PC9细胞中HK2和PKM2 mRNA表达水平均明显降低(P<0.05)。Western blotting法,与空白对照组比较,中和高剂量GAA组PC9细胞中HK2和PKM2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:中和高剂量GAA可抑制PC9细胞增殖及迁移的生物活性,降低糖酵解作用,其作用机制可能与抑制关键限速酶HK2和PKM2的表达有关。

灵芝酸抗炎作用及其分子机制研究进展

炎症是具有血管系统的活体组织对外源性和内源性损伤因子的刺激,所发生的以防御反应为主的基本病理过程,虽然自限性炎症可以促进致病因素的清除和受损组织的愈合,但持续性的炎症会损害发生炎症的器官甚至其他器官。近年来,中草药的抗炎作用成为新药研发的主要热点之一。灵芝酸属于灵芝三萜类化合物,是灵芝中主要的生物活性物质,其抗炎作用十分显著,可用于治疗癫痫、抑郁症、动脉粥样硬化、哮喘等炎症性疾病。本文基于现代医学研究及中医药传统理论,从调控NO及其合酶活性、调控细胞炎症因子和炎症信号通路、调控某些特定受体等方面出发,综述国内外灵芝酸抗炎作用机制的研究进展,以期为其深入研究及相关抗炎新药开发提供参考。

灵芝酸A对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的改善作用及机制

目的探讨灵芝酸A(ganoderic acid A,GAA)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导急性肺损伤(acute lung injury,ALI)小鼠的影响及作用机制。方法将小鼠随机分为对照组、模型组、低剂量GAA组(GAA-L组)、高剂量GAA组(GAA-H组),每组12只。气管内滴注LPS(5 mg·kg^(-1))构建ALI小鼠模型,GAA-L组和GAA-H组小鼠分别在ALI造模前30 min腹腔注射50或150 mg·kg^(-1)GAA。造模后12 h,收集肺泡灌洗液(BALF),计数BALF中总细胞和中性粒细胞含量并检测TNF-α和IL-1β含量。收集肝脏,称重法获取肺湿重/干重比值,HE染色观察肺组织形态学表现,检测肺组织中MDA、ROS、GSH和SOD水平,免疫荧光染色检测肺组织中CD31和VCAM-1表达,Western blot法检测肺组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD蛋白表达。结果与模型组比较,低和高剂量GAA组小鼠肺组织ALI评分和肺组织的湿/干重比均降低(P<0.05),病理损伤减轻,BALF中总细胞、中性粒细胞、IL-1β、TNF-α含量均下降(P<0.05),肺组织中MDA、NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD蛋白表达均下调(P<0.05),GSH和SOD水平升高(P<0.05),且高剂量组的效果显著优于低剂量组(P<0.05)。结论GAA对ALI小鼠具有肺保护作用,其机制可能与其抑制NLRP3/GSDMD信号通路,减轻炎症反应、降低氧化应激和抑制细胞焦亡有关。

灵芝酸A药理作用及其机制研究新进展

灵芝被广泛应用于食品(保健)、药品和化妆品等领域。灵芝酸A是一种具有重要药理活性的灵芝三萜类化合物。现代药理研究表明,灵芝酸A具有抗肿瘤、抗神经精神系统疾病、肝保护作用、降血脂作用、抗炎和肾保护作用等多种药理作用。本文对灵芝酸A的药理学作用及其机制研究新进展进行梳理与总结,为其进一步开发和应用提供参考。

灵芝中有效成分灵芝酸的抑制肿瘤作用研究

本文采用了体外肿瘤细胞培养增殖抑制试验与体内肿瘤细胞抑制试验,结果显示灵芝酸在体外对肿瘤细胞株SW620、LS180、S180的增殖具有明显的抑制作用,体内抗肿瘤疗效试验显示灵芝酸对Lewis肺癌(足趾接种)具有一定的疗效,对荷Lewis肺癌的小鼠IL-2的生成及NK细胞的免疫活性均有一定的促进作用。因此可以认为灵芝酸通过直接细胞毒作用与激活免疫体系实现抑制肿瘤作用。

赤芝子实体中灵芝酸类成分的研究

自赤芝［Ｇａｎｏｄｅｒｍａｌｕｃｉｄｕｍ（Ｆｒ．）Ｋａｒｓｔ．］子实体的二氯甲烷提取物中分离得到一个新的四环三萜化合物，命名为灵芝酸ＤＭ（ｇａｎｏｄｅｒｉｃａｃｉｄＤＭ，Ｉ）。根据光谱（ＵＶ，ＩＲ，１ＨＮＭＲ，１３ＣＮＭＲ，ＭＳ２ＤＮＭＲ）分析，确定其结构为Ｉ式。同时还分离得到二个已知的灵芝酸类化合物，即灵芝酸Ａ（ｇａｎｏｄｅｒｉｃａｃｉｄＡ，Ｉ）和灵芝酸Ｃ（ｇａｎｏｄｅｒｉｃａｃｉｄＣ，ＩＩ）。

灵芝深层发酵生产胞外多糖和灵芝酸的动力学分析

利用Sigmoid函数构建了灵芝深层发酵生产胞外多糖和灵芝酸的非结构动力学模型，并根据Boltzmann拟合求解出模型参数，模型预测值能够较好地吻合实验所测值．细胞最大比生长速率μmax为4．63×10^-2h^-1，葡萄糖最大比消耗速率qs，max为6．70×10^-2h^-1，胞外多糖最大比合成速率qEPS,max为4．65×10^-3h^-1，灵芝酸最大比合成速率qGA,max为9．09×10^-4h^-1．灵芝胞外多糖的合成与细胞的生长呈现部分偶联关系；灵芝酸的合成与细胞的生长呈现偶联关系，偶联系数αGA为0．0204g g^-1．胞外多糖对葡萄糖的最大得率系数（YEPS/S）为0．214gg^-1；灵芝发酵40～80h代谢碳流迅速从菌体自身生长迁移至胞外多糖合成，用于合成胞外多糖的最大碳流为23．6％．

灵芝功能成分酸奶营养品质与风味物质分析

以灵芝酸、灵芝多糖和脱脂乳为原料,制备灵芝多糖酸奶和灵芝酸酸奶,采用固相微萃取-气相色谱-质谱(solid-phase micro extraction-gas chromatography-mass spectrometry,SPME-GC-MS)联用技术对不同灵芝功能成分添加的酸奶的挥发性风味物质进行分析。结果表明,与空白对照酸奶相比,灵芝多糖酸奶和灵芝酸酸奶乳酸活菌数分别增加3.1倍和1.5倍,灵芝多糖可显著促进嗜热链球菌、植物乳杆菌增殖生长。经SPME-GC-MS测定,空白对照酸奶中检测出24种挥发性风味化合物,质量分数0.12%灵芝多糖酸奶中检测出37种挥发性风味化合物,质量分数0.09%灵芝酸酸奶中检测出30种挥发性风味化合物,3种酸奶的风味特征为酮、醛、酸、醇、酯类等化合物综合作用结果。与空白对照酸奶相比,灵芝多糖酸奶中酮类、醛类、醇类相对含量降低14.15%、3.00%、10.35%,酯、烃类相对含量提高14.01%、10.42%;灵芝酸酸奶中酮、酸、醇类化合物相对含量分别降低4.78%、2.22%、8.93%,醛、酯类相对含量增加5.31%、10.61%。结果表明灵芝酸、灵芝多糖酸奶中风味物质种类增加,功能品质提高。

灵芝酸A对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响（英文）

目的探讨灵芝酸A对骨肉瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法体外培养人骨肉瘤HOS和mg-63细胞与0.1、0.25和0.5 mmol/L的灵芝酸A孵育,采用CCK8检测HOS和MG-63细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell检测细胞的迁移和侵袭。Western blot检测细胞中p-STAT3、STAT3、p-p38、p38和NF-ΚB1蛋白的表达变化。结果灵芝酸A能够显著抑制人类骨肉瘤HOS和MG-63细胞的增殖,促进细胞凋亡以及抑制细胞迁移,并且这种效应存在剂量依赖性。与0.5 mmol/L灵芝酸A孵育能够显著降低HOS和MG-63细胞中STAT3的磷酸化水平,增加p38磷酸化水平,同时增加NF-κB1的表达水平。结论灵芝酸A能够杀死人类骨肉瘤HOS和MG-63细胞,可以作为抗骨肉瘤的药物进行开发。

RP-HPLC法测定不同部位灵芝中灵芝酸B含量

目的 测定灵芝中具有苦味的成分灵芝酸 B在灵芝中不同部位的含量。方法 采用 RP- HPL C法测定灵芝菌盖的表皮层、木栓层、菌柄、孢子粉、菌盖子实体等部位中灵芝酸 B的含量。结果 灵芝药材中灵芝酸 B主要集中在灵芝的表皮部位 ,其它部位则较少。结论 为寻找灵芝的有效成分分布规律提供了客观依据。

赤芝中灵芝酸类生物活性成分含量的测定方法

为了研究不同地区栽培赤芝及野生赤芝中灵芝酸类成分含量的差异 ,建立了赤芝中灵芝酸类活性成分含量的反相高效液相色谱 ( RP-HPLC)测定方法。该方法采用 YWG-C1 8色谱柱 ( 2 50 mm× 4 .6 mm ID,1 0μm) ,甲醇 -水 -乙酸 ( 49.5∶ 4 9.5∶ 1 )为流动相 ,流速 1 .0 m L/ min,柱温为室温 ,检测波长 2 50 nm。结果 ,灵芝酸 A( ) ,灵芝酸 C( ) ,灵芝酸 D( ) ,灵芝酸 E( ) 4种成分的线性范围分别为 0 .0 98～ 3.1 38、0 .0 91～2 .91 3、0 .0 89～ 2 .850、0 .0 89～ 2 .850μg,方法灵敏、准确 ,重复性好 ,回收率分别为 93.93%、96 .83%、93.0 1 %、90 .4 0 %。栽培赤芝和野生赤芝子实体中 4种灵芝酸成分的总含量分别为 0 .799～ 3.555、1 .6 1 9～2 .36 0 mg/ g。

pH值控制灵芝发酵产生灵芝酸的研究

研究pH值对灵芝液体深层发酵产生灵芝酸的影响及提高灵芝酸类物质产量的工艺。采用pH值控制法液体深层发酵生产灵芝酸,HPLC法测定灵芝酸,硫酸-苯酚法测定灵芝多糖。胞内灵芝酸的合成与菌丝体生长呈偶联型,胞外灵芝酸形成与菌丝体生长呈部分偶联型。菌丝体生长及胞内灵芝酸生成的最适pH值为5.5,胞外灵芝酸产生最适pH值为4.5,本实验按优化的pH值控制条件,胞外灵芝酸产量达到0.86g/L,比自然发酵工艺提高了34.4%;并提高了胞内灵芝酸的产量,达到0.364g/kg湿菌体。pH值控制发酵法可有效提高灵芝酸的产量。

响应面法优化灵芝菌丝体胞内灵芝酸的提取(英文)

利用单因子试验和响应面法优化了影响灵芝菌丝体灵芝酸的提取过程。基于3因素3水平的中心组合设计,得到了描述胞内灵芝酸提取得率与操作参数之间的二次响应面模型。在乙醇浓度为93.6%(v/v)、提取温度79.1℃、提取液固比42.2∶1、提取次数2次、每次提取时间2 h的条件下,最大灵芝酸理论提取得率为28.36 mg胞内灵芝酸每克干菌丝。模型优化条件下的实际灵芝酸提取得率(28.72 mg/g干菌丝)与理论灵芝酸提取得率(28.36 mg/g干菌丝)相符。

较高温度对灵芝培养特性及灵芝酸产量的影响

灵芝具有重要的药用价值,培养条件的优化可提高灵芝中各种活性成分的含量。探讨了较高温度对灵芝发酵过程中的生理指标及灵芝酸产量的影响。结果表明,较高的发酵温度虽然降低了灵芝生物量,但提高了淀粉酶﹑漆酶﹑纤维素酶的酶活。发酵第4天,36℃培养条件下淀粉酶酶活达到最大值,比30℃发酵条件下的酶活提高了22.61%。发酵第10天,34℃培养条件下的漆酶酶活﹑纤维素酶酶活﹑可溶性糖含量和灵芝酸产量都达到最大值,相对于30℃的培养条件,分别提高了51.12%、30.41%、13.21%和45.23%。结果表明较高温度发酵有利于酶活和灵芝酸含量的提高,该研究为灵芝的高温发酵提供了新的思路和理论指导。

苦荞对灵芝发酵生产灵芝酸的影响

研究了苦荞的添加对灵芝酸发酵的影响。结果证明 ,苦荞有利于灵芝发酵液中灵芝酸的产生 。

灵芝酸抗癌机制的分子模拟研究

目的分析灵芝酸与肿瘤靶酶的相互作用模式,研究灵芝酸的抗肿瘤机制。方法根据灵芝酸结构寻找可能的肿瘤靶点,并基于靶点结构,利用分子对接,探讨灵芝酸与靶酶的相互作用模式以及作用强度。结果与结论预测了灵芝酸与肿瘤靶标的结合方式,有助于理解灵芝酸的抗肿瘤机制。

灵芝真菌发酵生产灵芝多糖和灵芝酸

提出了灵芝真菌同时高效生产灵芝多糖和灵芝酸的发酵过程。在摇瓶中考察了氮源、接种量、起始葡萄糖浓度和装液量对灵芝细胞生长及灵芝多糖和灵芝酸生产的影响。结果表明 ,酵母膏和蛋白胨复配作为氮源有利于细胞生长。接种量对细胞量有一定影响 ,但是对产物积累量影响更大。在 50 g/ L起始糖浓度下 ,细胞干重达到 1 6.7g/ L,胞内多糖、胞外多糖和灵芝酸分别达 1 .1 9g/ L,0 .854g/ L和 2 1 2 .3mg/ L。考察装液量发现 。

灵芝深层发酵生产四环三萜酸的研究

从灵芝深层发酵产物中分离得到三种四环三萜酸 ,命名为灵芝酸M 1 ,M 2 ,M 3。在 2 5L发酵罐上研究了发酵条件对灵芝酸产量的影响 ,以及灵芝酸的代谢形成特征。结果表明最适发酵条件是 :温度 30℃ ;通风量 1∶0 .75v/v/m ;搅拌转速 1 80r/min ;发酵时间 80h ,此时灵芝酸的最高产量是 0 .36 g/L发酵液。抑菌实验表明上述灵芝酸能够抑制大肠杆菌、产气杆菌、肠炎杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的生长。

树舌灵芝发酵液中灵芝酸的提取及测定

利用有机溶剂萃取法提取树舌灵芝MP-01发酵液中灵芝酸,并用分光光度法测定提取液中灵芝酸的含量,确定了分光光度法测定的最佳比色条件为:比色波长为520 nm,5%香草醛-冰醋酸和高氯酸用量分别为0.2 mL和1.0 mL(在反应系统中浓度分别为1.0%和83%),显色温度70℃,显色时间为25 min,在此条件下测得醇溶物和醇沉物提取液中灵芝酸含量分别为0.022 mg/g和0.049 mg/g。