灵芝醇溶酸性组分的抗肿瘤作用

本文探讨了灵芝醇溶酸性组分 (ethanol solubleandacidiccomponents,ESAC)的抗肿瘤作用。用溶剂提取法从灵芝精粉中提取ESAC并利用高效液相色谱对其主要成分进行分析。利用MTT法检测ESAC对 3种细胞系 (人肝癌系BEL74 0 2、人宫颈上皮癌细胞系HeLa和人脐静脉血管内皮细胞系HUVEC)体外生长的影响。同时通过腹腔注射给药测定ESAC对BEL74 0 2瘤株在裸鼠皮下生长的影响。结果显示 ,ESAC对 3种细胞的毒性有较大差异 ,IC50 值分别为 12 .4 μg/mL(BEL 74 0 2 )、12 9.2 μg/mL(HeLa)和 5 2 6 .6 μg/mL(HU VEC)。动物实验表明 ,2 0mg/kg/dESAC组的肿瘤抑制率为 4 3.9% ,而 5mg/kg/d组的肿瘤抑制率高达 74 .9% ,且毒副作用较小。本文结果提示 ,灵芝ESAC组分对肝癌生长有一定的选择性抑制作用。

灵芝发酵液发酵生产灵芝多糖醇工艺的初探

以灵芝菌丝体液为主要基质,添加蔗糖以酵素酵母菌进行厌气发酵生产灵芝多糖醇。对蔗糖的添加量、酵母菌液的接种量、发酵温度和发酵时间分别进行单因素和四因素三水平L9(34)正交试验,检测发酵液中的酒精含量和残糖含量,初步获得灵芝菌丝液发酵生产灵芝多糖醇工芝:在灵芝菌丝体液中添加6%蔗糖,接种2%酵母菌菌液、35℃厌气发醇36 h,产物中酒精和残糖含量分别为7.6%和0.11%。灵芝菌丝体液添加蔗糖接种酵母进行厌气发酵生产灵芝多糖醇是可行的。

灵芝酮三醇对人前列腺癌细胞LNCaP生长的影响及其对5α-还原酶的抑制作用

本文用四唑盐(MTT)比色法和酶联免疫(ELISA)法研究了灵芝酮三醇对雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP细胞增殖和分泌前列腺特异性抗原(PSA)的抑制作用,另外还运用高效液相色谱法研究了灵芝酮三醇对5α-还原酶的抑制作用。结果显示,灵芝酮三醇对LNCaP细胞的增殖和分泌PSA的作用均呈现浓度依赖性抑制。另外,灵芝酮三醇对5α-还原酶的抑制作用也呈现浓度依赖性,作用浓度为2.5 mM时,其对5α-还原酶的抑制率为51.88%。结果表明灵芝酮三醇对LNCaP的抑制用既与其细胞毒性有关也与其对雄激素的抑制作用有关。

灵芝醇提物对改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用

研究讨论灵芝醇提物对地塞米松诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的影响。采用地塞米松诱导脂肪细胞胰岛素抵抗模型,将细胞分成正常组、模型组、灵芝醇提物组、二甲双胍(阳性对照)组,检测各组的葡萄糖消耗量和甘油三酯含量,分析灵芝醇提物对胰岛素抵抗的影响。建立模型的地塞米松处理组与正常组相比,1μmoL/L地塞米松处理72 h显著降低了3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖消耗量(P<0.05),且胰岛素抵抗状态在24 h内维持稳定,脂肪细胞胰岛素抵抗模型构建成功。10、50、100 mg/L灵芝醇提物对细胞活力均无显著影响,灵芝醇提物处理细胞24 h能显著提高脂肪细胞的葡萄糖消耗量和细胞内甘油三酯的含量且呈剂量依赖性。同时灵芝醇提物处理后显著增加了胰岛素受体底物1、葡萄糖转运体-4、磷脂酰肌醇-3-激酶p110亚基、磷脂酰肌醇-3-激酶p85亚基、磷酸化蛋白激酶、磷酸化糖原合酶激酶3β蛋白的表达。结果表明灵芝醇提物通过IRS1/PI3K/AKT信号途径改善地塞米松诱导的脂肪细胞胰岛素抵抗。

对神经元氧化应激损伤具有保护活性的灵芝化合物体外筛选及作用机理

【目的】筛选灵芝中具有保护神经元活性的化合物,并探究其相应的作用机理,为研发具有预防和治疗阿尔茨海默病(AD)功效的灵芝功能性食品、保健品和药品提供科学依据。【方法】基于β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的氧化损伤建立细胞模型,对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法、铁离子还原/抗氧化能力检测法和2,2-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除法初步评估得到的抗氧化活性较强的灵芝醇提物进行筛选,并对其神经元保护活性进行评价。进一步利用灵芝醇提物中与抗氧化有关的4种三萜类化合物,验证其活性并通过表面等离子共振技术探究其相关作用机理。【结果】DPPH、ABTS自由基清除及铁离子还原/抗氧化能力等体外理化初筛与细胞水平筛选试验结果表明,6种灵芝醇提物(108、161、106-2、171、173和109)抗氧化保护神经元活性较强,其中108、109和106-2样品对大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤细胞(PC12细胞)氧化应激损伤的保护效果最好;灵芝醇提物可通过缓解细胞周期紊乱、抑制细胞早期凋亡、提高超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)含量,抑制丙二醛(MDA)含量上升来发挥神经元保护作用。灵芝醇提物108、106-2和109中4种三萜类化合物(灵芝醛A、灵芝酸B、灵芝酸C2和灵芝酸LM2)的平均含量占比相对较高。活性验证表明4种化合物对细胞氧化应激损伤均有明显修复效果,其中灵芝醛A与Aβ_(1~42)具有较强的亲和力,其KD值为15.62μmol/L,可通过与Aβ_(1~42)竞争性结合来抑制Aβ_(1~42)与RAGE结合。【结论】灵芝醇提物的抗氧化神经元活性通过灵芝酸C2、灵芝酸B、灵芝酸LM2和灵芝醛A 4种化合物的协同效应来实现。灵芝醛A能通过与RAGE竞争性结合来减轻或抑制Aβ_(1~42)细胞毒性作用。灵芝具有开发防治AD功能性产品的潜力。

灵芝子实体醇提物抗缺血性脑卒中研究

研究灵芝子实体醇提物对大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)损伤模型大鼠的影响。建立SD大鼠MCAO/R大鼠模型,按行为学评分随机分为6组,每组6只,分别为灵芝子实体醇提物高剂量组(20 mg/kg)、灵芝子实体醇提物中剂量组(10 mg/kg)、灵芝子实体醇提物低剂量组(5 mg/kg)、阳性对照氯吡格雷组7.5 mg/kg和假手术组及缺血模型对照组(均给以等容积的生理盐水)。每组复灌之后2 h开始给药,之后每日灌胃给药1次,连续给药7 d。MCAO/R后第2天、第4天及末次给药后30 min,对大鼠进行神经行为学评分,测定大鼠神经功能;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定大鼠脑梗死率和脑含水量。用断尾法和玻片法分别检测小鼠出血时间和凝血时间。灵芝子实体醇提物在MCAO/R后2 h给药,3个剂量组MCAO/R大鼠的神经功能评分均降低脑梗死率和脑含水量,能显著延长小鼠的出血时间和凝血时间。灵芝子实体醇提物及时治疗给药可以降低大鼠脑缺血再灌注损伤脑梗死率和脑含水量,改善大鼠神经运动功能,并表现出较好的抗凝血作用。

松杉灵芝的化学成分研究(Ⅱ)

目的研究松杉灵芝子实体的化学成分。方法采用硅胶、凝胶色谱法进行分离纯化,波谱法进行结构鉴定。结果从乙醇提取物的醋酸乙酯部分分离得到8个三萜类化合物。结构鉴定为:灵芝醇A(ganoderiol A,Ⅰ)、灵芝酮三醇(ganodermanontriol,Ⅱ)、灵芝三醇(ganodermatriol,Ⅲ)、灵芝酸C(ganodericacid C,Ⅳ)、灵芝酸A(gan-odericacid A,Ⅴ)、赤芝酮A(lucidone A,Ⅵ),赤芝酸C(lucidenicacid C,Ⅶ)、赤芝酸LM1(lucidenic acid LM1,Ⅷ)。结论化合物Ⅰ～Ⅷ均为首次从松杉灵芝中分离得到。

灵芝三萜类成分药理活性研究进展

灵芝作为我国药食两用传统名贵中药,化学成分主要有三萜类、多糖、有机酸、生物碱、氨基酸等,其中灵芝三萜类化合物主要包括灵芝酸和灵芝醇。该文总结了近几年灵芝三萜在抗肿瘤、抗炎、保肝、保肾、调节免疫、降血脂、降血糖、抗菌等方面药理活性研究,以期为高品质灵芝核心功效评价提供参考依据;也为灵芝在保健食品和临床医学中的应用提供科学依据。

赤灵芝提取物对小鼠免疫功能系统的影响

目的旨在赤灵芝提取物对细胞、体液及非特异性免疫功能的影响。方法以520、260mg/kg赤灵芝提取物给昆明种雄性小鼠灌胃15d,分别进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验、足跖增厚法测定小鼠迟发型变态反应、半数溶血值(HC50)测定、抗体形成细胞(AFC)检测、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力和网状内皮系统吞噬碳廓清功能测定。结果赤灵芝提取物可明显增强小鼠脾淋巴细胞的转化能力(P<0.001,P<0.01,P<0.05)及体液免疫能力(P<0.01,P<0.05);明显抑制由SRBC引起的小鼠DTH反应(P<0.01,P<0.05);增强腹腔巨噬细胞吞噬功能(P<0.001);对碳廓清无明显影响。结论赤灵芝提取物具有免疫调节作用,可明显增强小鼠脾淋巴细胞的转化能力及体液免疫能力。

基于网络药理学及分子对接技术研究灵芝治疗抑郁症的活性成分及其作用机制

目的:基于网络药理学方法与分子对接技术对灵芝发挥抗抑郁作用的活性成分及其作用机制进行研究。方法:通过TCMSP、BATMAN-TCM数据库检索得到灵芝活性成分及相关靶点,通过DisGeNET、GeneCards、OMIM、DrugBank、TTD数据库以获取抑郁症的相关靶点。利用Venny2.1.0在线软件取抑郁症与灵芝靶点的交集,将共有靶点输入STRING在线分析平台得到灵芝与抑郁症蛋白质相互作用网络,再导入Cytoscape3.8.0软件构建灵芝活性成分–灵芝与抑郁症共有靶点关系网络,并进行模块化分析。利用DAVID6.8软件进行GO生物进程与KEGG通路富集分析,并使用R Studio软件画出通路的气泡图。最后通过分子对接验证网络分析结果,在已有数据中筛选灵芝抗抑郁作用的关键成分及靶点。结果:通过构建灵芝活性成分–灵芝与抑郁症共有靶点网络分析发现:灵芝与抑郁症相关的活性成分有40种,对应的基因靶点有210个,为潜在的抗抑郁症靶点。根据PPI网络可知:灵芝发挥抗抑郁作用主要与INS、TNF、FOS、PPARG、IL1B、ESR1、JUN、SLC6A4、LEP、CASP3 10个靶点有关。麦角胺、灵芝醇D、富马酸、灵芝酸甲酯F、5,6-麦角淄醇、赤灵芝酸D2甲酯、灵芝酸C、甲基灵芝F、麦角固醇、灵芝萜酮三醇10种为主要的活性成分。通过GO功能富集得到细胞组成73个,生物进程692个,分子功能131个,KEGG通路分析获得76条。GO与KEGG通路主要富集于信号传导、质膜的组成部分、药物反应、细胞增殖的正调控、c-AMP信号通路、神经活性配体–受体相互作用,提示灵芝可能通过以上多种通路达到治疗抑郁症的效果。分子对接结果提示麦角胺、灵芝醇D作为灵芝潜在的活性成分,与靶点FOS均有良好的结合力。结论:根据本次研究结果推测灵芝治疗抑郁症主要与其活性成分麦角胺、灵芝醇D有关。并且,首次将灵芝发挥抗抑郁作用与麦角胺、灵芝醇D和FOS的良好结合能力联系起来,预测麦角胺可作用于FOS以调节单胺类神经递质假说5-HT而发挥作用,灵芝醇D可作用于FOS以调控胆碱能肾上腺素能功能平衡失调而发挥作用。

HPLC-ESI-MS和HPLC法分析测定灵芝醇提物中3种灵芝酸

目的:对灵芝醇提物中灵芝酸A、B、C2的含量进行测定,为灵芝醇提物的质量控制提供依据。方法:采用高效液相色谱-电喷雾-质谱(HPLC-ESI-MS)法对灵芝醇提物中的灵芝酸A、B、C2进行定性分析,采用HPLC法对3种灵芝酸的含量进行测定。结果:HPLC-ESI-MS法测定结果显示,灵芝醇提物含有灵芝酸A、B、C2。HPLC法测定结果显示,灵芝酸A、B、C2分别在3.50～525.60μg.mL-1(r=1.0000)、3.23～484.80μg.mL-1(r=1.0000)、2.04～203.6μg.mL-1(r=0.9999)浓度范围内呈现良好的线性。平均回收率分别为98.2%,101.5%,98.7%(n=9)。不同来源的赤芝、紫芝醇提物中灵芝酸A、B、C2总含量差异较大,灵芝酸A在3种灵芝酸中含量最高,紫芝醇提物中灵芝酸A、B、C2的总含量较赤芝醇提物的低。结论:该方法稳定性、耐用性良好,可用于灵芝醇提物的质量控制。

灵芝醇提物对记忆障碍模型小鼠学习记忆的影响

目的:观察灵芝醇提物对记忆障碍模型小鼠学习记忆的作用并探讨其作用机制。方法:连续灌服灵芝醇提物15 d后,以东莨菪碱、戊巴比妥钠建立不同的记忆障碍动物模型,采用跳台法、穿梭箱法、Morris水迷宫法检测动物学习记忆能力,ELISA法测定小鼠脑组织ACh水平。结果:与模型对照组比较,灵芝醇提物6、12 g(生药)/kg可显著延长小鼠跳台潜伏期、减少跳台错误次数;缩短水迷宫上台潜伏期、上台路程;提高小鼠脑内ACh水平。灵芝醇提物1.5、3、6 g(生药)/kg可显著缩短大鼠穿梭回避反应潜伏期、提高反应阳性率。结论:灵芝醇提物有明显改善记忆障碍模型动物学习记忆能力的作用,作用机制可能与中枢胆碱能系统的功能有关。

赤芝中脂溶性化合物的体外抗肿瘤活性

从赤芝中分离获得3个化合物:灵芝萜烯酮醇(Ⅰ)、麦角甾-7,22-二烯-3β-醇(Ⅱ)、过氧化麦角甾醇(Ⅲ)。化疗药物顺氯氨铂(DDP)作为阳性对照,用MTT(microculture tetrazolium)法和形态学方法评定了它们对人肝癌细胞株BEL-7402、人胃癌细胞株MGC-803的增殖抑制作用。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、DDP对BEL-7402的半数抑制浓度IC50值分别为:20.15、5.05、24.35、7.67μmol/L;对MGC-803的IC50值分别为:6.32、10.09、9.88、3.52μmol/L。Ⅰ和Ⅱ分别与DDP以质量比1∶1混合处理BEL-7402细胞有正协同作用,效果明显优于单独使用DDP。化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ对HMEC人微血管内皮细胞的毒性很小,质量浓度6.25 mg/L的Ⅰ甚至能促其增殖,增长率为0.93%,Ⅱ、Ⅲ的抑制率仅为21.14%和2.86%。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是极具潜力的抗肿瘤药物。

灵芝中灵芝酮二醇的分离鉴定及抗肿瘤活性

目的:从灵芝提取物中分离纯化灵芝酮二醇,并探讨其对8种肿瘤细胞的抑制作用。方法:灵芝氯仿提取部分经反复硅胶柱层析得到一个白色针晶,经熔点测定1、H-NMR和13C-NMR数据分析以及与已知化合物比较,确定其化学结构。利用MTT法检测其对人Burkitt淋巴瘤细胞株CA46、人胃癌细胞株SGC7901、人结肠癌细胞株SW1116、人结肠癌细胞株SW480、人肝癌细胞株SMMC7221、人肝癌细胞株HepG2、人髓系白血病细胞株HL60、人慢性粒细胞白血病细胞株K562的生长抑制情况。结果:经理化性质鉴定、波谱分析,确定白色针晶结构为24(S),25-二羟基-5α-羊毛甾-7,9(11)-二烯-3-酮,即灵芝酮二醇。MTT结果表明,灵芝酮二醇对HL60和K562 2种瘤株有较强抑制作用,对CA46、SMMC7221、HepG2、SW480、SW1116及SH-SY5Y6种瘤株抑制作用较弱。结论:灵芝三萜类成分灵芝酮二醇对人白血病肿瘤细胞HL60及K562的增殖有一定的抑制作用,初步确定灵芝酮二醇为灵芝抗白血病的活性成分之一。

灵芝提取物3种中性三萜及麦角甾醇的定量分析

目的建立灵芝提取物中中性三萜——灵芝醇A、灵芝醛A、灵芝酮三醇及麦角甾醇的超高效液相色谱(UPLC)定量分析方法及一测多评法。方法甲醇超声提取法制备灵芝提取物;超高效液相色谱(UPLC)法采用Phenomenex Luna Omega PS C18色谱柱(150 mm×2.1 mm,1.6μm),流动相为乙腈-0.04%甲酸溶液,梯度洗脱,检测波长254 nm,柱温30℃;一测多评法应用灵芝醇A作为内参物,计算灵芝醛A、灵芝酮三醇及麦角甾醇的相对校正因子;精密吸取10批灵芝供试品溶液进样检测,比较建立的外标法与一测多评法结果是否一致。结果4种成分在设定的质量范围内线性关系良好(r≥0.9988),方法的精密度、重复性、稳定性的RSD均小于2.13%,加样回收率在92%~105%、RSD均小于1.99%,准确度良好;灵芝醛A、灵芝酮三醇及麦角甾醇的相对校正因子分别为1.02、0.99、1.80,一测多评法和外标法测定结果差异不大。结论建立的测定灵芝中灵芝醇A、灵芝醛A、灵芝酮三醇和麦角甾醇UPLC外标法和一测多评法的专属性强,便捷高效,结果准确,适用于灵芝提取物中性三萜的定量分析。

拟鹿角灵芝子实体的化学成分研究

目的为研究拟鹿角灵芝Ganoderma amboinense中的化学成分及其生理活性。方法采用各种柱色谱与高效液相色谱相结合的方法进行分离纯化,通过光谱分析(UV、IR、HR-ESI-MS及1D、2D-NMR)鉴定了它们的结构;采用四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazol)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法及4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷(4-nitrophenyl-β-D-glucopyranoside,PNPG)法测定化合物的体外抗肿瘤活性以及α-糖苷酶抑制活性。结果从拟鹿角灵芝子实体的乙醇提取物中分离得到10个化合物,分别鉴定为lanosta-7,9(11)-dien-3β-acetyloxy-24-methoxy-25,26-dihydroxy (1)、赤芝萜醇B (2)、灵芝萜酮二醇(3)、11-oxo-赤芝二醇(4)、lanosta-7,9(11)-dien-3β-acetyloxy-24,26-dihydroxy-25-methoxy(5)、灵芝醇B (6)、灵芝醇A (7)、3α-acetyloxy-15α-hydroxylanosta-7,9 (11),24E-trien-26-oic acid (8)、(24S,25R)-25-methoxylanosta-7,9 (11)-dien-3β,24,26-triol(9)、灵芝醇F(10)。化合物1~5对α-糖苷酶的抑制率分别为86.0%、50.8%、52.8%、76.9%和88.0%;化合物7对人宫颈癌HeLa细胞的抑制率分别为57.9%,化合物5对人胃癌SGC-7901细胞抑制率为67.2%。结论所分离鉴定的化合物均为灵芝三萜类结构,所有化合物均为首次从拟鹿角灵芝种中分离得到,其中化合物1为新化合物,命名为拟鹿角灵芝醇A。化合物1~5对α-糖苷酶有一定抑制活性,化合物7和5有较弱的肿瘤细胞毒活性。

赤芝中羊毛脂烷型三萜类化合物及其α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

目的研究赤芝Ganoderma lucidum的干燥子实体乙醇提取物的化学成分及其活性。方法运用硅胶柱色谱、中压液相色谱、HPLC等色谱技术对赤芝95%乙醇提取物进行系统分离,并结合UV、HR-ESI-MS、ESI-MS、1D-NMR、2D-NMR等波谱学手段对所得到的化合物进行结构鉴定;考察化合物的α-葡萄糖苷酶抑制活性。结果从赤芝95%乙醇提取物中分离得到11个三萜类化合物,分别鉴定为灵芝醇A(1)、灵芝酸H(2)、灵芝酸AM1(3)、灵芝酸D(4)、灵芝酸D甲酯(5)、ganolucidic acid E(6)、11α-hydroxy-3,7-dioxo-5α-lanosta-8,24(E)-dien-26-oic acid(7)、灵芝烯酸D(8)、赤芝酸A(9)、赤芝酸F甲酯(10)、赤芝酸B(11)。结论化合物1为新化合物,化合物1和5显示了一定的α-葡萄糖苷酶抑制作用。

赤芝子实体中一个新的三萜化合物(英文)

赤芝(Ganoderma lucidum)是我国及东亚地区常用的民间草药,具有良好的治疗及保健作用。本文对赤芝子实体的化学成分进行了研究,从中分离并鉴定了两个羊毛甾烷型三萜类化合物,其中化合物1为新化合物,鉴定为(24S)-羊毛甾-7-氧-8-烯-3β,24,25-三醇,并命名为灵芝三醇M(1);化合物2为灵芝酸ε。