NOD样受体热蛋白结构域3炎性体与心肌缺血再灌注损伤

心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury,MI/RI)是一个多种因素共同参与、相互作用的炎症级联反应过程。NOD样受体热蛋白结构域3(NOD-like receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)炎性体作为固有免疫系统的重要组成部分在MI/RI的炎症损伤过程中扮演关键角色。此外,阻断或抑制NLRP3炎性体激活及其下游炎症因子释放可能成为MI/RI新的治疗靶点。

NLRP3炎性体加重小鼠脑缺血再灌注损伤的机制探讨

目的探讨Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性体(NLRP3蛋白、IL-1β、IL-8)在小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用和机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为对照组和格列本脲(NLRP3抑制剂)组各20只,每组中一半小鼠通过大脑中动脉栓塞法构建缺血再灌注(IR)模型,其余接受假手术处理。格列本脲组术前30 min腹腔注射500 mg/kg格列本脲。造模成功后对小鼠进行神经学评分,2,3,5,-氯化三苯基四氮唑染色,并计算缺血梗死面积,HE染色观察病理变化,TUNEL染色观察各组神经元凋亡情况,Western Blot检测小鼠脑组织NLRP3蛋白表达,ELISA检测小鼠脑组织中IL-1β、IL-18浓度。结果各组IR小鼠脑损伤程度均重于假手术小鼠,但是对照组IR小鼠脑损伤程度比格列本脲组严重。HE染色和TUNEL染色显示,IR小鼠脑组织出现明显损伤,神经元凋亡数量明显增多,格列本脲可减轻IR造成的病理损伤程度。与对照组相比,格列本脲组的脑组织NLRP3蛋白表达及IL-1β、IL-18升高程度明显降低(P均<0.05)。结论 NLRP3炎性体可促进小鼠脑IR损伤,主要通过增加细胞因子释放和促进神经元凋亡实现的。

lncRNA XIST通过NF-κB/NLRP3炎性体通路影响急性肺损伤大鼠炎症反应和细胞凋亡

目的探讨长链非编码RNA-X染色体失活特异转录物(lncRNA XIST)通过核转录因子-κB/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NF-κB/NLRP3)炎性体通路对急性肺损伤(ALI)大鼠炎症反应和细胞凋亡的影响。方法利用脂多糖(LPS)构建ALI模型,将造模成功的SD大鼠分为ALI组、lncRNA XIST-NC组、lncRNA XIST-shRNA组和lncRNA XIST-shRNA+CHPG组,每组12只,另选12只作为Control组。lncRNA XIST-NC组和lncRNA XIST-shRNA组大鼠分别于造模后从尾静脉注射lncRNA XIST-NC和lncRNA XIST-shRNA质粒脂质体复合物,lncRNA XIST-shRNA+CHPG组大鼠在lncRNA XIST-shRNA组大鼠的基础上再注射0.5 mg/kg NF-κB/NLRP3炎性体通路激活剂CHPG,而Control组和ALI组大鼠则注射等量的Opti-MEM培养基。7 d后处死各组大鼠,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测lncRNA XIST水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理变化;检测并计算肺湿/干比(W/D)和髓过氧化物酶(MPO)活力值;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-1β水平;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记技术(TUNEL)染色观察肺组织细胞凋亡;Western印迹检测肺组织中活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Caspase-3、NF-κB p65、p-NF-κB p65、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、NLRP3、Cleaved Caspase-1、Caspase-1表达。结果ALI组大鼠肺组织中lncRNA XIST水平明显高于Control组,lncRNA XIST-shRNA可显著降低lncRNA XIST表达(P<0.05)。与Control组比较,ALI组大鼠肺部炎症细胞明显增多,W/D值和MPO活力值明显增加,血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平显著上升,凋亡率、凋亡蛋白Cleaved caspase-3及NF-κB/NLRP3炎性体通路相关蛋白p-NF-κB p65、ASC、NLRP3和Cleaved caspase-1表达均显著上调(P<0.05)。沉默lncRNA XIST可明显减少ALI大鼠肺部炎症细胞的数量,降低W/D、MPO活力值和肺组织细胞凋亡率,下调凋亡和通路相关蛋白的表达(P<0.05)。而NF-κB/NLRP3炎性体通路激活剂CHPG干预使lncRNA XIST-shRNA对ALI大鼠炎症反应、细胞凋亡和蛋白表达的抑制作用得到逆转(P<0.05)。结论沉默lncRNA XIST可能通过抑制NF-κB/NLRP3炎性体通路,改善ALI大鼠的炎症反应和细胞凋亡。

NLRP3炎性体与代谢综合征的关系

随着对炎症和代谢综合征研究的进展,人们发现二者间的联系越来越紧密。慢性炎症在代谢综合征的发生发展过程中起到重要作用,而且许多炎症因子都参与代谢疾病的发展。其中,促炎因子白细胞介素1β(IL-1β)可在各种代谢性疾病中诱导产生炎症反应。NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎性体是一种可以激活白细胞介素1β家族细胞因子的蛋白复合体。研究表明在高血压、动脉粥样硬化、肥胖和2型糖尿病等疾病中,NOD样受体蛋白3炎性体均被激活。本文主要总结这些研究并讨论它们的影响以便更好地了解NOD样受体蛋白3炎性体与代谢综合征的关系。

加味通苓散联合中药热奄包治疗急性痛风性关节炎的疗效及对NLRP3炎性体的影响

目的观察加味通苓散联合中药热奄包治疗急性痛风性关节炎(GA)湿热痹阻证的疗效及对关节液中NLRP3炎性体的影响。方法将GA患者随机分为两组,对照组(n=72)给予秋水仙碱,观察组(n=74)给予加味通苓散联合中药热奄包。观察两组关节疼痛视觉模拟评分(VAS)、自我感觉的总体评价(PGA)、疼痛数字评价量表(NRS)评分、中医症状、血尿酸(BUA)、关节液尿酸(JUA)、24 h尿酸排出量(UUA)、血沉(ESR)、炎性因子、NLRP炎性体(Nod样受体蛋白(NLRP)3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-1、caspase-12)。比较两组疗效、复发率及安全性。结果观察组总有效率明显高于对照组(P<0.05)。与对照组治疗后比较,观察组VAS、NRS评分、中医症状、BUA、JUA、ESR、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、NLRP3、ASC、caspase-1、caspase-12明显降低(P<0.05),24 h UUA、PGA、干扰素(IFN)-γ、IL-4明显升高(P<0.05)。观察组不良反应发生率明显低于对照组(P<0.05)。结论加味通苓散联合中药热奄包可明显改善急性GA湿热痹阻证患者的临床症状,其作用机制可能与调节关节液中NLRP3炎性体有关。

LncRNA ANRIL对缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞焦亡及NLRP3炎性体通路的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)的INK4基因座中反义非编码RNA(ANRIL)对缺氧/复氧(A/R)诱导的H9c2心肌细胞焦亡及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性体通路的影响。方法qRT-PCR检测LncRNA ANRIL在A/R诱导的H9c2细胞中的表达;通过慢病毒转染构建抑制LncRNA ANRIL的H9c2心肌细胞系,分组为:空白组、si-NC组、si-ANRIL组,转染24 h后,利用荧光显微镜观察荧光变化;qRT-PCR检测LncRNA ANRIL表达以验证转染结果;将慢病毒转染成功的H9c2心肌细胞进行缺氧24 h复氧6 h处理,并分组为,正常对照组(Ctrl组,细胞正常培养,未经任何处理)、A/R组、si-NC+A/R组、si-ANRIL+A/R组,免疫荧光法检测各组细胞中caspase-1蛋白表达;ELISA法检测各组细胞上清液中IL-1β和IL-18的含量;Western blot检测各组细胞中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的表达。结果 LncRNA ANRIL在A/R诱导的H9c2细胞中的表达水平显著高于正常细胞;荧光显微镜可观察到转染慢病毒的H9c2细胞呈现出绿色荧光,且si-ANRIL组H9c2细胞中ANRIL表达水平显著低于空白组和si-NC组(P<0.05),成功构建抑制ANRIL的H9c2心肌细胞系;与Ctrl组比较,A/R组H9c2细胞中IL-1β和IL-18含量、caspase-1、NLRP3、ASC蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与A/R组和si-NC+A/R组比较,siANRIL+A/R组H9c2细胞中IL-1β和IL-18含量、caspase-1、NLRP3、ASC蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论沉默LncRNA ANRIL可能通过抑制NLRP3炎性体通路来改善A/R诱导的H9C2心肌细胞焦亡。

硫氧还蛋白相互作用蛋白在大鼠急性肾损伤中的作用

目的探讨硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)在大鼠急性肾损伤中的作用。方法 16只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为假手术组(S),缺血再灌注组(IR),每组8只。采用夹闭双侧肾蒂25 min,再灌注48 h复制大鼠急性肾损伤模型。取大鼠肾脏HE染色观察病理学结果,血标本测定血尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平,比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记法检测细胞凋亡指数,Western blot检测TXNIP和炎性体3蛋白(NLRP3)的表达,酶联免疫吸附测定法检测白细胞介素1β(IL-1β)。结果与S组比较,IR组肾小管肿胀,间质水肿,刷状缘丢失,空泡变性坏死;与S组比较,IR组BUN,Scr,MDA,TXNIP,NLRP3及IL-1β表达增高(P<0.05),凋亡指数增高(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05)。结论 TXNIP可能通过激活NLRP3/IL-1β炎症通路参与大鼠急性肾损伤。

Nod样受体蛋白3炎性体在2型糖尿病脑微血管内皮细胞中的变化及变化机制

目的探讨Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性体在2型糖尿病脑微血管内皮中的变化及机制。方法 3月龄Wistar大鼠和自发性2型糖尿病(GK)大鼠各5只,采用免疫组织化学法观察NLRP3在脑组织中的表达;体外培养小鼠脑微血管内皮细胞(CMEC)。不同糖浓度培养基模拟2型糖尿病内环境,活性氧(ROS)阻断剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)作为抑制剂,将细胞分为对照组(糖浓度5.6 mmol/L)、高糖1组(HG1组,培养基糖浓度10 mmol/L)、高糖2组(HG2组,培养基糖浓度20 mmol/L)、高糖3组(HG3,培养基糖浓度30 mmol/L)及高糖+NAC组(HG+NAC组,目的蛋白表达较明显组的糖浓度)。采用Western blotting法检测各组硫氧还蛋白交互蛋白(TXNIP)和NLRP3的表达,并对TXNIP和NLRP3是否存在相关性进行分析;采用ELISA法检测白介素1β(IL-1β)的含量;采用流式细胞术检测对照组、HG3组、HG+NAC组ROS的含量。结果 NLRP3在脑微血管壁聚集,与Wistar大鼠相比,GK大鼠的阳染强度,阳染血管数均有增加(P<0.05);与对照组相比,HG1组、HG2组、HG3组TXNIP、NLRP3的表达增加(P<0.01),HG3组最明显,细胞内IL-1β水平增高(P<0.01),ROS的含量增加(P<0.01);细胞内TXNIP和NLRP3的表达呈正相关性(r=0.993;P<0.05);给予ROS清除剂后,与HG3组相比,HG+NAC组细胞内ROS含量下降(P<0.01),TXNIP、NLRP3表达水平下降(P<0.01),细胞内IL-1β水平下降(P<0.01)。结论 NLRP3在2型糖尿病脑微血管内皮细胞中经ROS-TXNIP途径被激活,并且促进炎性因子IL-β的释放,在2型糖尿病脑微血管损伤中发挥重要作用。

Nod样受体蛋白3炎性体抑制剂格列苯脲对机械通气致小鼠急性肺损伤的保护作用

目的 探究Nod样受体蛋白3（Nod-like receptor protein-3,NLRP3）炎性体抑制剂格列苯脲对机械通气导致的小鼠急性肺损伤是否具有保护作用. 方法 28只7～9周的清洁级ICR雄性小鼠,按完全随机分组法分为4组：对照组（CON组,6只）、格列苯脲组（GLY组,6只）、机械通气组（VEN组,8只）和格列苯脲＋机械通气组（GLY＋VEN组,8只）.VEN组和GLY＋VEN组机械通气4h后与CON组及GLY组麻醉插管后4h测定肺泡灌洗液中蛋白含量及炎性细胞数量,测量肺组织湿/干重比（wet/dry,W/D）,观察肺组织病理学改变,ELISA法检测肺组织IL-1β、IL-6、TNF-α的含量. 结果 VEN组肺泡灌洗液中蛋白浓度和细胞数量[（0.534±0.104） g/L和（3.4±0.7）×105/ml]比CON组[（0.167±0.021） g/L和（1.9±0.5） ×105/ml]升高（P＜0.01）;GLY＋VEN组肺泡灌洗液中蛋白浓度和细胞数量[（0.425±0.083） g/L和（2.4±0.6） ×105/ml]比VEN组下降（P＜0.05）.VEN组肺组织W/D（5.1±0.5）与CON组（4.4±0.4）比较,差异有统计学意义（P＜0.01）,GLY ＋VEN组肺组织W/D（4.7±0.4）与VEN组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.VEN组和GLY＋VEN组肺组织中IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表达与CON组比较,明显升高（P＜0.05）,GLY＋VEN组IL-1β和IL-6表达与VEN组比较,表达明显降低（P＜0.05）.结论 机械通气前给予格列苯脲可有效减少小鼠肺组织炎症细胞聚集,减轻肺水肿,机制可能与其抑制炎性体的激活有关.

NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3炎性体在急性肺损伤病程中的作用

核苷酸结合寡聚化结构域(nucleotide binding oligomerization domain, NOD)样受体热蛋白结构域相关蛋白3 (NOD-like receptor pyrin domain containing 3, NLRP3)炎性体在固有免疫反应中起关键作用,其活化促进由caspase-1介导的炎症因子(IL-1β和IL-18)的释放及细胞焦亡。许多研究证实NLRP3炎性体在急性肺损伤(acute lung injury, ALI)中发挥重要作用。文章综述NLRP3炎性体及其在ALI起病、进展为急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)及导致肺纤维化中的作用。

基于NLRP3炎性体信号通路研究桂枝芍药知母汤治疗痛风性关节炎的作用机制

目的:探讨桂枝芍药知母汤(GT)对尿酸钠致痛风性关节炎(GA)模型大鼠关节滑膜组织中炎性信号表达的影响。方法:180只雄性SD大鼠随机分配到3个实验,分别为关节滑膜免疫组化实验,酶联免疫吸附测定(ELISA)实验,蛋白质免疫印迹(Western blot)实验。各实验取大鼠60只,按体重随机分为6组,每组10只,分别为模型组,正常组,GT高、中、低剂量组(4,8,16 g·kg^(-1)),秋水仙碱阳性药组(3×10-4g·kg^(-1))。实验组均ig给药,正常组、模型组给予等容积的蒸馏水,每天1次,连续给药7 d。第5天ig前,大鼠足踝关节注射尿酸钠悬液诱导GA。取大鼠关节滑膜组织,免疫组化检测Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性体的表达,Image-Pro Plus6.0图像分析系统测定平均积分吸光度(IA),Western blot检测凋亡相关斑点样蛋白(ASC),半胱氨酸天冬氨酸酶^(-1)(Caspase^(-1))信号衔接蛋白表达,ELISA测定炎性因子白细胞介素^(-1)β(IL^(-1)β),白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),核因子-κB(NF-κB)表达水平。结果:造模72 h后,与正常组比较,模型组大鼠关节滑膜组织中NLRP3,ASC,Caspase^(-1),L^(-1)β,IL-6,TNF-α,NF-κB表达明显升高(P<0.05),Caspase^(-1)2表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,GT高、中剂量组NLRP3,ASC,GT各剂量组Caspase^(-1)表达水平均显著降低(P<0.05),Caspase^(-1)2表达明显升高(P<0.05),GT各组IL^(-1)β,IL-6,TNF-α,NF-κB表达均明显降低(P<0.05)。结论:GT治疗GA的作用机制可能与降低NLRP3,ASC,Caspase^(-1)表达,抑制IL^(-1)β分化成熟及NF-κB活化,降低NLRP3炎性体信号通路炎性因子表达有关。

右美托咪定对高氧诱导急性肺损伤大鼠肺损伤及肺组织NLRP3炎性体水平的影响

目的探讨右美托咪定(Dex)对高氧诱导急性肺损伤大鼠肺损伤及肺组织NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性体水平的影响。方法70只成年SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、高Dex组、中Dex组、低Dex组,每组14只。除对照组外,其余各组通过暴露高氧环境建立急性肺损伤大鼠模型。高Dex组、中Dex组、低Dex组大鼠分别腹腔注射15.0、10.0、7.5μg/kg的Dex,对照组、模型组腹腔注射等量25µl的生理盐水,1次/d,连续干预7 d后处死取材。采用HE染色检测大鼠肺组织病理变化并评估肺损伤;检测大鼠全肺组织的湿/干重比(W/D)及肺功能;采用Western blotting实验检测大鼠肺组织NLRP3炎性体相关蛋白[NLRP3、胱天蛋白酶-1(caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)]的相对表达量;采用ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)炎症细胞因子[白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6]的表达水平。结果与对照组比较,模型组大鼠肺组织病变明显,Dex各组大鼠肺组织病变较模型组均明显改善,Dex剂量越大,改善越明显(P<0.05)。肺损伤、W/D及肺功能比较,对照组大鼠明显优于模型组、各Dex组,各Dex组大鼠明显优于模型组,Dex剂量越大,差异越明显(P<0.05)。NLRP3、caspase-1、ASC蛋白相对表达量比较,模型组、各Dex组大鼠明显高于对照组,各Dex组大鼠明显低于模型组,Dex剂量越大,降低越明显(P<0.05)。IL-6、IL-1β、TNF-α水平比较,模型组、各Dex组大鼠明显高于对照组,各Dex组大鼠明显低于模型组,Dex剂量越大,降低越明显(P<0.05)。结论Dex能保护高氧所致急性肺损伤大鼠的肺功能,减少肺组织损伤,抑制NLRP3炎性体表达,降低机体炎症反应。

基于 NLRP3 炎性体轴探讨土茯苓总黄酮对痛风性关节炎的作用和机制

目的：研究土茯苓总黄酮（TFSG）对急性痛风性关节炎小鼠的抗炎作用,并初步探讨其作用机制。方法：将90只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组,模型组,秋水仙碱组（0.65 mg·kg^-1）,土茯苓总黄酮低、中、高剂量组（100,300,500 mg·kg^-1）,每组15只。除正常组外,其余各组采用尿酸钠结晶复制小鼠痛风性关节炎模型,测定小鼠踝关节肿胀度;酶联免疫吸附法（ELISA）检测不同组别滑膜组织中白细胞介素-1β（IL-1β）,IL-6,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）测定滑膜组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）,凋亡相关斑点样蛋白（ASC）,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）的蛋白表达,实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA水平的表达。结果：与正常组比较,模型组小鼠踝关节肿胀度明显增加（P〈0.01）,模型组小鼠滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平显著升高（P〈0.01）,NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达和mRNA水平显著升高（P〈0.01）;与模型组比较,土茯苓总黄酮组能够显著降低小鼠踝关节肿胀度（P〈0.01）,滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平以及NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白水平和mRNA水平显著降低（P〈0.01）。结论：土茯苓总黄酮具有一定的抗痛风性关节炎作用,其作用机制与NLRP3炎性体轴有关。

痛风宁对急性痛风性关节炎模型大鼠IL-1β,TNF-α及NALP3炎性体的影响

目的：从核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NALP3）炎性体角度探讨痛风宁的抗炎作用机制。方法：将48只SD大鼠随机分为造模大鼠36只、正常大鼠12只。造模大鼠采用踝关节局部注射O．2mL尿酸钠（monosodium urate，MSU）混悬液建立急性痛风性关节炎（acute outyarthritis，AGA）模型，正常大鼠予相同部位注射生理盐水。造模成功后，随机分为模型组、痛风宁组、秋水仙碱组，分别用生理盐水、痛风宁药液、秋水仙碱混悬液灌胃，每天2次，共3d。正常大鼠为正常组，同时予等量生理盐水灌胃。造模成功后72h，行腹腔注射麻醉后取踝关节液及滑膜组织。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠踝关节液白细胞介素-1β（IL-lβ），肿瘤坏死因子-a（TNF-a）含量；蛋白免疫印迹法（Westernblot）及实时荧光定量PCR（Real-timePCR）检测滑膜组织NALP3炎性体相关蛋白与mRNA表达。结果：与正常组比较，模型组大鼠踝关节液IL-1β，TNF-α含量显著升高，滑膜组织NALP3，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1），凋亡相关斑点样蛋白（ASC）蛋白及mRNA表达均显著增加（P〈0．01）；与模型组比较，痛风宁组与秋水仙碱组大鼠踝关节液IL-1β，TNF-1β含量显著下降，且滑膜组织中NALP3，Caspase-1，ASC蛋白及mRNA表达均显著降低（P〈0．01）；与秋水仙碱组比较，痛风宁组大鼠踝关节液IL-1β ，TNF-a含量仍较高（P〈0．05），但滑膜组织中NALP3，Caspase-1，ASC蛋白及mRNA表达均较低（P〈0．05，P〈0．01）。结论：痛风宁对AGA的抗炎作用机制可能是通过抑制NALP3炎性体相关蛋白及mRNA表达，从而减少IL-1β，TNF-α的生成，减轻关节炎症反应。

薯蓣皂苷元改善类风湿关节炎模型大鼠关节肿胀的效果及作用机制研究

目的:探讨薯蓣皂苷元改善类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)模型大鼠关节肿胀的效果及可能的作用机制。方法:从70只6周龄SPF级雄性SD大鼠中随机选取55只,建立Ⅱ型胶原诱导的RA大鼠模型,剩余15只纳入空白组。将造模成功的48只大鼠随机分为模型组、激活剂组和薯蓣皂苷元组,每组各16只。薯蓣皂苷元组以薯蓣皂苷元干预,激活剂组以尼日利亚菌素钠盐干预,空白组、模型组仅给予生理盐水。每天干预1次,共干预2周。干预结束后,采用关节炎指数评定各组大鼠的关节肿胀情况,检测外周血炎症因子[白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)]和氧化应激因子[丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)]含量,取大鼠关节滑膜组织HE染色后进行病理学观察,并测定大鼠滑膜组织中Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3)炎性体信号通路相关蛋白[IL^(-1)β、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)及NLRP3]含量。结果:①关节肿胀情况。模型组、激活剂组及薯蓣皂苷元组大鼠的关节炎指数比较,差异有统计学意义[(3.43±0.32)分,(2.44±0.20)分,(0.86±0.10)分,F=14.974,P=0.000]。激活剂组和薯蓣皂苷元组的关节炎指数均低于模型组(P=0.001,P=0.000),薯蓣皂苷元组的关节炎指数低于激活剂组(P=0.000)。②外周血炎症因子含量。空白组、模型组、激活剂组及薯蓣皂苷元组大鼠的血清IL^(-1)β、IL-6、TNF-α含量比较,组间差异均有统计学意义[IL^(-1)β:(128.82±13.71)μg·mL^(-1),(279.44±28.21)μg·mL^(-1),(213.12±20.65)μg·mL^(-1),(176.76±19.25)μg·mL^(-1),F=36.554,P=0.000;IL-6:(119.56±12.42)μg·mL^(-1),(271.18±27.11)μg·mL^(-1),(198.43±21.36)μg·mL^(-1),(146.85±15.72)μg·mL^(-1),F=28.643,P=0.000;TNF-α:(203.63±22.08)μg·mL^(-1),(328.91±36.22)μg·mL^(-1),(275.88±27.52)μg·mL^(-1),(237.89±23.12)μg·mL^(-1),F=41.832,P=0.000]。模型组、激活剂组及薯蓣皂苷元组的血清IL^(-1)β、IL-6、TNF-α含量均高于空白组(IL^(-1)β:P=0.001,P=0.000,P=0.002;IL-6:P=0.001,P=0.000,P=0.016;TNF-α:P=0.000,P=0.002,P=0.043);激活剂组和薯蓣皂苷元组的血清IL^(-1)β、IL-6、TNF-α含量均低于模型组(IL^(-1)β:P=0.003,P=0.000;IL-6:P=0.002,P=0.000;TNF-α:P=0.031,P=0.001);薯蓣皂苷元组的血清IL^(-1)β、IL-6、TNF-α含量均低于激活剂组(P=0.021,P=0.002,P=0.046)。③外周血氧化应激因子含量。空白组、模型组、激活剂组及薯蓣皂苷元组大鼠的血浆MDA、SOD、GSH含量比较,组间差异均有统计学意义[MDA:(10.24±1.87)μmol·L^(-1),(36.51±3.63)μmol·L^(-1),(21.33±2.42)μmol·L^(-1),(16.37±1.85)μmol·L^(-1),F=15.632,P=0.000;SOD:(145.52±14.72)U·mL^(-1),(40.41±6.96)U·mL^(-1),(79.42±8.32)U·mL^(-1),(106.12±10.22)U·mL^(-1),F=21.334,P=0.000;GSH:(38.54±3.82)U·mL^(-1),(14.77±2.12)U·mL^(-1),(21.63±2.19)U·mL^(-1),(28.63±2.97)U·mL^(-1),F=13.213,P=0.000]。模型组、激活剂组及薯蓣皂苷元组的血浆MDA含量均高于空白组(P=0.000,P=0.000,P=0.001),血浆SOD、GSH含量均低于空白组(SOD:P=0.000,P=0.000,P=0.001;GSH:P=0.000,P=0.000,P=0.002);激活剂组及薯蓣皂苷元组的血浆MDA含量均低于模型组(P=0.000,P=0.000),血浆SOD、GSH含量均高于模型组(SOD:P=0.000,P=0.000;GSH:P=0.001,P=0.000);激活剂组的血浆MDA含量高于薯蓣皂苷元组(P=0.007),血浆SOD、GSH含量均低于薯蓣皂苷元组(P=0.002,P=0.003)。④滑膜组织病理学观察结果。空白组关节滑膜组织结构、形态正常;模型组关节滑膜组织有炎性细胞浸润,滑膜细胞增生,血管扩张,形成血栓;激活剂组关节滑膜组织病理变化较模型组改善,但有轻微滑膜细胞增生;薯蓣皂苷元组关节滑膜组织病理变化明显改善。⑤滑膜组织NLRP3炎性体信号通路相关蛋白含量。空白组、模型组、激活剂组及薯蓣皂苷元组大鼠关节滑膜组织IL^(-1)β、Caspase-1、NLRP3含量比较,组间差异均有统计学意义(IL^(-1)β:0.46±0.07,1.02±0.10,0.72±0.08,0.56±0.06,F=31.025,P=0.000;Caspase-1:0.54±0.08,1.16±0.12,0.90±0.10,0.73±0.08,F=23.658,P=0.000;NLRP3:0.69±0.08,1.27±0.12,1.01±0.11,0.88±0.09,F=28.754,P=0.000);模型组、激活剂组及薯蓣皂苷元组滑膜组织IL^(-1)β、Caspase-1、NLRP3含量均高于空白组(IL^(-1)β:P=0.000,P=0.001,P=0.042;Caspase-1:P=0.000,P=0.000,P=0.006;NLRP3:P=0.000,P=0.001,P=0.013);激活剂组和薯蓣皂苷元组的IL^(-1)β、Caspase-1、NLRP3含量均低于模型组(IL^(-1)β:P=0.001,P=0.000;Caspase-1:P=0.006,P=0.000;NLRP3:P=0.007,P=0.000);薯蓣皂苷元组的IL^(-1)β、Caspase-1、NLRP3含量均低于激活剂组(P=0.007,P=0.018,P=0.046)。结论:薯蓣皂苷元能有效改善RA模型大鼠的关节肿胀,其作用机制可能是通过下调IL^(-1)β、Caspase-1、NLRP3的表达,抑制NLRP3炎性体信号通路介导的炎性反应。

自噬及焦亡在糖尿病性心肌病中作用的研究进展

糖尿病性心肌病是糖尿病病人常见的慢性并发症之一,是导致糖尿病病人死亡的主要原因之一。糖尿病性心肌病导致心肌氧化应激增加、心肌纤维化和肥大、心脏舒张功能障碍,并最终导致收缩性心力衰竭。研究发现,自噬损伤和焦亡激活可能在糖尿病性心肌病发生发展中起一定作用。Sirtuin蛋白质家族(SIRTs)对自噬具有调控作用。SIRTs通过恢复自噬减轻糖尿病对心肌的损伤。核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体可以启动细胞焦亡。抑制NLRP3炎性小体可能会减缓糖尿病心肌细胞焦亡。综述自噬和焦亡在糖尿病性心肌病发生发展中的作用。恢复自噬和抑制NLRP3炎性小体有望为糖尿病性心肌病的防治提供新方向。

基于NLRP3炎症信号通路探讨山核桃叶总黄酮抗高尿酸血症作用机制研究

目的探讨山核桃叶总黄酮对高尿酸血症模型小鼠NLRP3炎性信号表达的影响。方法 ICR雄鼠腹腔注射氧嗪酸钾建立高尿酸血症动物模型,并将造模成功后的小鼠按体质量随机分为6组,每组8只,分别为模型组、Caspase-1抑制剂组、苯溴马隆组、山核桃叶总黄酮低剂量、中剂量、高剂量(50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg)组,另设正常组。用ELISA法检测各组血清IL-1β前体、IL-1β、IL-18炎性因子水平;Western blot检测肾脏组织NLRP3、Caspase-1、ASC表达情况。结果与正常组比较,模型组NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β前体、IL-1β、IL-18表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,山核桃叶总黄酮高剂量组IL-1β和IL-18的水平显著降低(P<0.01),肾脏组织NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白相对表达量均显著降低(P<0.01)。结论山核桃叶总黄酮可通过干预高尿酸血症模型小鼠体内NLRP3信号的传导,降低炎性因子的表达,减轻炎症反应。

瓜氨酸预处理对脂多糖致小鼠急性肺损伤的作用机制研究

目的探讨瓜氨酸(citrulline,Cit)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)导致的小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是否具有保护作用。方法42只7~9周的C57雄性小鼠,进行2批实验,每批小鼠按完全随机分组法分为3组(每组7只):正常对照组(Con组)、LPS组和LPS+Cit组。首先对小鼠腹腔注射Cit 900 mg·kg^−1·d^−1(LPS+Cit组)或等容量生理盐水(Con组、LPS组)进行预处理7 d,第8天腹腔注射LPS 10 mg/kg(LPS组、LPS+Cit组)或等容量生理盐水(Con组),LPS干预后6 h麻醉插管检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中蛋白浓度和细胞数量,测定肺组织湿/干重比(wet/dry weight ratio,W/D),观察肺组织病理改变,Western blot法检测肺组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NOD‑like receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)炎性体、半胱氨酸蛋白酶‑1(cysteine aspartate‑specific protease‑1,caspase‑1)蛋白水平,ELISA法检测肺组织中IL‑1β、IL‑18水平。结果与Con组比较,LPS组BALF中蛋白浓度、细胞数量及肺组织W/D明显升高(P<0.05),NLRP3、caspase‑1蛋白水平及IL‑1β、IL‑18蛋白含量明显升高(P<0.05);与LPS组比较,LPS+Cit组BALF中蛋白浓度、细胞数量及肺组织W/D明显降低(P<0.05),NLRP3、caspase‑1蛋白水平及IL‑1β、IL‑18蛋白含量明显降低(P<0.05)。结论Cit可能通过抑制NLRP3炎性体激活,降低炎症因子释放,从而发挥对肺损伤的保护作用。

微RNA-21在原发性痛风患者中的变化及意义

目的探索微RNA-21(miR-21)在原发性痛风患者中的变化及意义。方法收集急性期痛风(AG)35例、间歇期痛风(IG)50例,慢性期痛风(CG)25例和健康对照组39名患者外周血及实验室检查指标,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测PBMCs中miR-21(探针法)以及Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)mRNA(染料法)表达量;收集5名健康体检者外周血,以100 μg/ml尿酸盐晶体(MSU)刺激1 h,等体积PBS为对照组,RT-qPCR检测miR-21、NLRP3以及IL-1β mRNA表达水平变化。组间差异采用秩和检验,变量间的相关关系采用Spearman相关分析。结果在痛风患者PBMCs中,miR-21在AG[12×10^-4(8.0×10^-4)]、IG[9.4×10^-4(6.9×10-4)]、CG[7.3×10^-4(5.6×10^-4)]组表达水平高于健康对照组[1.0×10^-4(2.0×10^-4)](Z=9.83,P=0.02),而NLRP3在AG[0.044 4(0.023 3)]、IG[0.058 1(0.032 6)]、CG[0.031 4(0.019 8)]组表达水平显著低于健康对照组[0.088 6(0.035 9)](Z=13.82,P<0.01);在原发性痛风IG组,miR-21与NLRP3 mRNA表达呈正相关(r=0.449,P=0.016);健康体检者外周血经100 μg/ml MSU刺激1 h后,miR-21表达水平在刺激组[8.78×10^-4(14×10-4)]高于对照组[6.25×10^-4(6×10^-4)](Z=-2.203,P<0.05),IL-1β表达水平在刺激组[3.06(2.00)]高于对照组[2.64(1.22)](Z=-2.203,P<0.05);miR-21在原发性痛风患者中表达量分别与尿酸、AST、ALT水平呈正相关(r=0.473,P<0.05;r=0.639,P<0.05;r=0.487,P<0.05)。结论原发性痛风患者中miR-21表达升高提示miR-21的异常表达可能参与了痛风的炎症反应。