p38丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路在呼吸道粘膜炎性反应中的调控作用

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号传导通路在炎性反应性疾病病理生理过程中调控作用的研究是近10年的新进展。其中p38MAPK信号传导通路在呼吸道粘膜炎性反应中的意义较为重要,本文就其参与炎症反应的机制以及对上皮细胞、炎性细胞和糖皮质激素受体(CR)的调控作用进行综述。

miR-708-5p对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡、炎症因子分泌和TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨miR-708-5p对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡、炎性因子分泌的调控机制。方法:将体外培养的人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A分为对照组(未处理)、miR-NC组(转染miR-NC)和miR-708-5p组(转染miR-708-5p模拟物)。采用qRT-PCR法检测转染48 h后各组细胞中miR-708-5p的表达,CCK-8法检测各组细胞存活率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,ELISA法检测细胞上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α的含量,Western blot法检测细胞中Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、Toll样受体4(TLR4)、NF-κB p65和p-NF-κB p65蛋白的表达。结果:与对照组相比,miR-708-5p组细胞中miR-708-5p的表达水平、细胞凋亡率和Bax、Cleaved Caspase-3蛋白的表达水平均升高,而细胞存活率、细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α的含量以及TLR4、p-NF-κB p65蛋白的表达水平均降低(P<0.05)。结论:miR-708-5p可诱导类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡并减轻细胞炎症损伤,其作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路的活化有关。

miR-192-3p调控PI3K/Akt信号通路对小鼠巨噬细胞免疫细胞因子表达的影响

目的研究miR-192-3p对小鼠巨噬细胞免疫细胞因子表达的影响及机制。方法用HSP40诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7;将RAW264.7+HSP40(10μg/mL)组(10μg/mL HSP40处理)、RAW264.7+HSP40(10μg/mL)+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC并用10μg/mL HSP40处理)、RAW264.7+HSP40(10μg/mL)+anti-miR-192-3p组(转染anti-miR-192-3p并用10μg/mL HSP40处理)、RAW264.7+miR-NC组(转染miR-NC)、RAW264.7+miR-192-3p组(转染miR-192-3p mimics)、RAW264.7+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、RAW264.7+anti-miR-192-3p组(转染anti-miR-192-3p)、RAW264.7+HSP40(10μg/mL)+pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1并用10μg/mL HSP40处理)、RAW264.7+HSP40(10μg/mL)+pcDNA3.1-AKT1组(转染pcDNA3.1-AKT1并用10μg/mL HSP40处理)、RAW264.7+HSP40(10μg/mL)+anti-miR-192-3p+si-NC组(共转染anti-miR-192-3p和si-NC并用10μg/mL HSP40处理)、RAW264.7+HSP40(10μg/mL)+anti-miR-192-3p+si-AKT1组(共转染anti-miR-192-3p和si-AKT1并用10μg/mL HSP40处理),用脂质体法转染至RAW264.7细胞;qmiR-506法检测细胞中miR-192-3p的表达;ELISA实验检测细胞中IL-16、IL-18的含量;Western blot检测细胞中AKT1的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果与RAW264.7相比,HSP40处理的RAW264.7细胞中miR-192-3p的表达显著升高,AKT1的蛋白表达、IL-16、IL-18的含量均显著升高(P<0.05)。抑制miR-192-3p、过表达AKT1可明显下调HSP40诱导的RAW264.7细胞中IL-16、IL-18含量;miR-192-3p可抑制野生型AKT1细胞的荧光活性,并负向调控AKT1的表达。抑制AKT1可逆转抑制miR-192-3p对RAW264.7细胞的炎性因子IL-16、IL-18的抑制作用。结论miR-192-3p可促进小鼠巨噬细胞免疫细胞因子的分泌,其机制可能与直接调控PI3K/Akt信号通路相关,将可为肺炎的治疗提供新靶点。

基于p38 MARK信号通路探讨益气生肌合剂联合三乙醇胺乳膏对压疮大鼠模型皮损及血清炎症因子的影响

目的探讨益气生肌合剂联合三乙醇胺乳膏对压疮大鼠模型皮损、血清炎症因子的影响及作用机制。方法50只SPF级SD大鼠(雌雄各半,6~7周龄,180~200 g)按照随机数字表法分为假手术组、模型组、三乙醇胺乳膏组、益气生肌组、联合用药组,每组10只。模型组、三乙醇胺乳膏组、益气生肌组、联合用药组模拟缺血再灌注法造模,假手术组仅同部位埋入磁铁不予加压。假手术组与模型组给予生理盐水0.4 ml灌胃;三乙醇胺乳膏组予三乙醇胺乳膏外用;益气生肌组予12.98 g/(kg·d)益气生肌合剂灌胃;联合用药组予三乙醇胺乳膏外用及益气生肌合剂灌胃,各组均连续给药8 d。记录各组创面情况,血清炎症因子水平及创面p38 MARK信号通路相关蛋白表达情况。结果三乙醇胺乳膏组、益气生肌组、联合用药组造模第8天皮损面积低于模型组,联合用药组造模第8天皮损面积低于三乙醇胺乳膏组、益气生肌组(P<0.05)。模型组白细胞介素(IL)-2、IL-12、C反应蛋白(CRP)血清炎症因子水平高于假手术组(P<0.05);三乙醇胺乳膏组、益气生肌组、联合用药组IL-2、IL-12、CRP血清炎症因子水平均低于模型组且联合用药组IL-2、IL-12、CRP血清炎症因子水平低于三乙醇胺乳膏组与益气生肌组(P<0.05)。假手术组皮损组织p38丝裂素活化蛋白激酶(p38 MARK)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平低于模型组(P<0.05)。三乙醇胺乳膏组、益气生肌组、联合用药组皮损组织p38 MARK、VEGF、MMP-9蛋白表达水平均低于模型组,且联合用药组皮损组织p38 MARK、VEGF、MMP-9蛋白表达水平低于三乙醇胺乳膏组与益气生肌组(P<0.05)。结论益气生肌合剂与三乙醇胺乳膏联用可有效修复压疮大鼠模型皮损,降低血清炎症因子水平。

miR-26a-5p通过靶向KCNJ2在β-淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞炎症及氧化应激损伤

目的揭示miR-26a-5p对β-淀粉样蛋白诱导的炎症及氧化应激损伤的作用机制。方法选取2018-01—2020-01江苏省人民医院老年科实验室70例阿尔茨海默病(AD)患者外周血样本,同时采集80例健康体检者外周血作对照,通过qRT-PCR检测miR-26a-5p在AD患者体内的表达情况,并采用ELISA分析AD患者和健康体检者中炎性因子和活性氧(ROS)水平。通过Aβ_(1-42)(10μmol/L)刺激BV2小胶质细胞构建AD细胞模型,以等体积的DMSO刺激BV2细胞为对照组。采用ELISA检测正常BV2细胞和AD细胞模型的炎性和ROS水平,并通过qRT-PCR检测AD细胞模型中miR-26a-5p的表达趋势。转染miR-26a-5p调控质粒,采用CCK-8和ELISA分析检测miR-26a-5p对BV2细胞增殖、炎性因子表达和氧化应激的影响,生物信息分析和双荧光素酶报告基因预测miR-26a-5p的作用靶点并检测其对靶分子的影响,qRT-PCR、CCK-8和ELISA分析检测KCNJ2对BV2细胞增殖、炎性因子和氧化应激的影响,通过共同调控miR-26a-5ps和KCNJ2的表达,检测PI3K/AKT通路活性、细胞活力和ROS水平变化。结果miR-26a-5p在AD患者血清中的表达量低于健康患者,AD患者血清内炎性因子TNF-α和IL-18水平高于健康体检者,ROS水平也高于健康体检者。通过Aβ_(1-42)刺激构建的AD细胞模型中,TNF-α、IL-18和ROS水平高于正常BV2细胞,miR-26a-5p的表达量在AD细胞模型中低于正常BV2细胞。过表达miR-26a-5p促进AD细胞增殖,降低TNF-α、IL-18和ROS水平;干扰miR-26a-5p表达抑制AD细胞增殖,TNF-α、IL-18和ROS水平升高。生物信息学分析显示miR-26a-5p可靶向KCNJ2;KCNJ2在AD模型中高表达,过表达KCNJ2可抑制AD细胞增殖,提高TNF-α、IL-18和ROS的水平,干扰KCNJ2的表达可提高AD细胞增殖能力并降低TNF-α、IL-18和ROS水平;激活miR-26a-5p的表达可通过靶向降低KCNJ2的表达进而刺激PI3K/AKT通路活性来提高BV2细胞增殖减缓ROS释放水平。结论miR-26a-5p可通过靶向KCNJ2调节PI3K/AKT信号通路影响BV2细胞增殖、炎性反应和氧化应激。

CD1d通过信号调节蛋白α抑制核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3等炎性因子的表达

背景:核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)炎性因子被证实与多种炎症性疾病相关,调控其表达将成为治疗相关疾病的关键。目的:验证CD1d参与了调控NLRP3炎性因子表达,并且进一步证明CD1d是通过信号调节蛋白α(signal regulatory protein-α,SIRPα)来达到调控目的。方法:①使用Flag-CD1d、HA-SIRPα慢病毒过表达载体转染293T细胞进行免疫共沉淀实验,验证CD1d与SIRPα的相互作用;②使用Flag-CD1d慢病毒过表达载体转染RAW264.7细胞,RT-qPCR检测NLRP3等基因表达;③使用HA-SIRPα慢病毒过表达载体转染RAW264.7细胞,在脂多糖刺激后RT-qPCR、Western blot检测NLRP3等基因和蛋白表达;④使用SIRPα慢病毒RNAi载体转染RAW264.7细胞,在脂多糖刺激后RT-qPCR、Western blot检测NLRP3等基因和蛋白表达。结果与结论:①免疫共沉淀实验证实CD1d与SIRPα存在相互作用;②过表达CD1d基因后,NLRP3、pro-IL-1β、pro-IL-18基因表达明显低于正常组(P<0.05);③在脂多糖刺激后过表达SIRPα组NLRP3基因表达明显低于正常组(P<0.05);pro-IL-1β、pro-IL-18基因表达与正常组差异无显著性意义(P>0.05);过表达SIRPα组p38、p-p38、NLRP3、pro-IL-1β、pro-IL-18蛋白表达明显低于SIRPα干扰组(P<0.01);④脂多糖刺激后干扰SIRPα组NLRP3、pro-IL-1β、pro-IL-18基因表达明显高于正常组(P<0.05);干扰SIRPα组p38、p-p38、NLRP3、pro-IL-1β、pro-IL-18蛋白表达明显高于过表达SIRPα组(P<0.01);⑤结果表明,CD1d与细胞膜上SIRPα形成复合物,通过SIRPα抑制下游p38MAPK/NF-κB通路,最终达到抑制NLRP3等炎性因子表达的目的。

复方钩藤降压片对自发性高血压大鼠P13K/Akt信号通路及其下游细胞炎性因子的影响

目的研究复方钩藤降压片对P13K/Akt信号通路调节作用以及CRP、IL-6、IL-8、TNF-ɑ相关炎症因子表达的影响,探讨复方钩藤降压片对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensire rats, SHR)的可能降压机制。方法将40只8周龄雄性SPF级SHR随机分为:模型组(A组)、复方钩藤组(B组)、西药组(C组)、阻断剂组(D组)、阻断剂+复方钩藤组(E组),另取8只雄性Wistar(WKY)大鼠为空白对照组(F组)。所有大鼠给予相应干预,6周后采用ELISA方法检测血清中CRP、IL-6、IL-8、TNF-ɑ的含量;采用Western blot和RT-PCR方法检测胸主动脉组织PI3K、Akt、p-Akt的蛋白和基因水平。结果各组实验大鼠血清CRP、IL-6、IL-8、TNF-ɑ表达明显升高,均明显高于F组(P<0.05),且各组间差异明显。其中,A、D组表达最高,与其他组别相比差异有统计学意义(P<0.05);B、C组较A、D组表达为低,差异有统计学意义(P<0.05)。A、B、C、D、E组实验大鼠胸主动脉组织PI3K、p-Akt蛋白表达明显下调,与F组相比差异具有统计学意义(P<0.05),其中A、D、E组表达最低,与其他各组相比差异有统计学意义(P<0.05)。B、C组下调程度稍缓,其中B组下调程度C组更为缓慢,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。各组实验大鼠胸主动脉组织PI3K基因表达明显下调,与F组相比差异具有统计学意义(P<0.05),其中A、D、E组表达最低,与其他各组相比差异有统计学意义(P<0.05)。各组胸主动脉组织Akt基因的表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论复方钩藤降压片能有效降低SHR的血压,降低心率,且可通过上调PI3K蛋白和基因的表达,调控Akt及下游CRP、TNF-ɑ、IL-6等炎症因子的表达,抑制炎症反应,从而改善高血压病炎症状态。

上调miR-155-5p对脊柱结核病模型小鼠的干预作用

目的探究上调miR-155-5p对小鼠脊柱结核病小鼠的影响并探究破骨相关信号通路RANK/NF-κB信号通路及其磷酸化在此过程中发挥的作用。方法将40只C57BL/6小鼠分为对照组(n=10),模型组(n=10),NC组(n=10)和实验组(n=10),小鼠脊柱局部注射浓度为108 CFU/ml的H37Rv标准菌株悬液0.1 ml建立脊柱结核病模型,对照组注射等体积0.9%氯化钠溶液。NC组和实验组在模型建立后分别通过尾静脉注射miR-NC及miR-155-5p agomir,对照组和模型组注射等量0.9%氯化钠溶液,饲养8周后取脊柱标本送Micro-CT扫描检测计骨小梁数目和厚度,抗酒石酸酸性磷酸酶(Trap)染色观察破骨细胞数量,qPCR检测各组小鼠外周血中miR-155-5p表达水平,酶联免疫吸附剂测定法(Elisa)检测外周血白介素1-β(IL-1β),白介素-6(IL-6),白介素21(IL-17),肿瘤坏死因子α(TNF-α),Western blot检测结核病灶组织破骨相关蛋白核因子kB受体激活剂(RANK),核因子κB(NF-κB)及磷酸化核因子κB(p-NF-κB)蛋白的表达水平。结果qPCR结果表明与对照组比较,模型组和NC组小鼠miR-155-5p表达显著降低,实验组小鼠miR-155-5p显著升高(P<0.01),与对照组比较,模型组和NC组小鼠骨小梁数目和厚度均显著降低,实验组小鼠骨小梁数目和厚度均显著显著升高(P<0.01),Trap染色结果表明与对照组比较,模型组和NC组小鼠破骨细胞比例显著升高,而实验组破骨细胞显著降低。Elisa结果表明与对照组比较,模型组和NC组小鼠外周血炎性因子表达水平显著升高,实验组组外周血炎性因子表达显著降低(P<0.01)。Westernblot结果表明与对照组比较,模型组和NC组小鼠RANK、NF-κB及p-NF-κB蛋白表达具有升高趋势(P<0.01),实验组则有下降趋势(P<0.01)。结论脊柱结核病小鼠外周血miR-155-5p表达显著降低,上调miR-155-5p表达可以对小鼠脊柱结核具有保护作用,其机制可能与抑制炎性因子的释放及RANK/NF-κB信号通路的调控和磷酸化相关。

食管癌与螺杆菌感染及炎性信号通路关系

目的研究食管癌中是否存在螺杆菌感染及其与炎性信号通路的关系，探讨螺杆菌感染以及所产生的慢性炎症在人食管癌发生发展中的作用。方法随机收集食管癌标本37例和正常食管标本10例，采用聚合酶链反应（PCR）扩增螺杆菌16S rDNA，并进行基因测序及与幽门螺杆菌（Hp）同源性比较。阳性者再扩增Hp特异性毒力基因（cagA，babA2，vacA）。随后将Hp标准株NCTC11639和NCTC11637分别与食管鳞癌细胞株EC109共培养不同的时间，蛋白印迹（Westem blot）检测炎性信号通路中P—IκB—α蛋白表达的变化。结果食管癌组织中螺杆菌16S rRNA基因的检出率为31．6％（12／37），正常人食管组织均元阳性表达。对阳性标本16S rRNA基因测序及同源性比较，食管癌组织中螺杆菌序列与Hp的16S rDNA序列同源性达99％～100％。12例阳性标本中分别有cagA阳性4例，babA2阳性8例，vacA阳性3例，阳性率分别为33％，67％，25％。EC109与Hp标准株共培养不同时间后，P—IκB-α显著升高。结论食管癌组织中存在螺杆菌感染，该螺杆菌可能为Hp或者其他亚种。螺杆菌感染导致食管粘膜慢性炎症在食管癌的发生发展中可能发挥重要的作用，其中P—IκB-α炎性信号通路的持续作用可能为分子机制之一。

藏药十八味党参丸提取物对脂多糖诱导的RAW264.7细胞Akt/p38MAPK信号通路及M1/M2极化影响的探究

目的探究藏药十八味党参丸(TEP)的提取物调控脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7的炎性反应及M1/M2极化分型的探究。方法 Alarmarblue法评价RAW 264.7活力;荧光酶标定量分析细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平;Griess法检测上清液中细胞一氧化氮(NO)的分泌情况;流式细胞术检测表面标志物CD206和CCR7蛋白的表达;RT-qPCR法检测细胞白介素(IL)-1β、IL-6、趋化因子2(CCL2)、一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶(ARG)-1和肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达的情况;Western blot法检测TEP调控细胞合成iNOS、蛋白激酶B(Akt)和p38丝裂原活化激酶(p38MAPK)信号通路相关蛋白的表达情况。结果与模型组相比,TEP组一定程度上提高了RAW 264.7的细胞活性,同时抑制了LPS诱导的细胞内ROS水平的升高。经过LPS刺激后,模型组NO表达量显著升高,在24 h后表达量达到最高,而TEP组NO表达显著降低。模型组的CCR7表达升高,CD206表达下降,TEP干预后CCR7表达下降,CD206表达升高,且趋势呈现浓度依赖。与模型组相比,TEP组的IL-1β、IL-6、CCL2、iNOS、ARG和TNF-α基因表达以及iNOS、Akt和p38MAPK蛋白表达水平均显著降低。结论 TEP能够抑制细胞内ROS水平,降低NO分泌和炎性基因的表达水平,抑制细胞的M1表型,促进M2表型,其机制可能与细胞内iNOS、Akt和p38MAPK信号通路蛋白表达被抑制有关。

甘草查尔酮A对大鼠骨关节炎的作用及其与p38-MAPK炎症信号通路的关系

目的研究甘草查尔酮A对大鼠骨关节炎的作用及其与p38-MAPK炎症信号通路的关系。方法将雄性Wistar 大鼠160只采用区组随机化方法随机分为空白-未干预组,空白-干预组,关节炎-未干预组,关节炎-干预组,每组40只。关节炎组大鼠以单侧膝关节前交叉韧带切断术处理,空白组大鼠仅做皮肤切开缝合;甘草查尔酮A干预组大鼠予以10 μmol/L 甘草查尔酮A 1 mL 关节腔内注射,干预实施8周。8周后番红染色各组大鼠的软骨,并进行光镜下骨关节炎软组织病理(OARSI)评分;将软骨培养在5% 胎牛血清低糖细胞培养基内48 h,用化学显色法测定培养基一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2)、硫酸化糖胺聚糖(sGAG)和二型胶原(Collagen Ⅱ)含量;以蛋白质印迹法检测大鼠软骨组织中p38、磷酸化的p38(p-p38)和基质金属蛋白酶(MMP)表达。结果甘草查尔酮A干预的大鼠骨关节炎进展缓慢,关节炎-干预组OARSI 评分为(3.8±1.7)分,低于关节炎-未干预组的(9.7±1.2)分,差异有统计学意义(P=0.006);关节炎-干预组NO释放量为(77.84±17.65)μmol/mg,PGE2释放量为(6.78±1.76)ng/mg,sGAG丢失量为(89.78±9.76)μg/mg,Collagen Ⅱ丢失量为(1.78±0.76)μg/mg,分别显著低于关节炎-未干预组的(107.56±18.74)μmol/mg、(10.756±1.87)ng/mg、(125.75±8.87) μg/mg、(3.76±0.88)μg/mg,差异均有统计学意义(NO:P=0.002;PGE2:P<0.001;sGAG:P<0.001;Collagen Ⅱ:P<0.001)。蛋白质印迹结果表明,关节炎-干预组p38相对表达量(3 454±421)、p-p38相对表达量(2072±175)、p-p38占总p38比值为(0.65±0.14)、MMP相对表达量(1 776±765),与关节炎-未干预组p38相对表达量(5 322±323)、p-p38相对表达量(4 257±184),p-p38占总p38比值(0.89±0.11)、MMP相对表达量(3 865±874)相比均减少,且差异有统计学意义(p38:P<0.001;p-p38:P<0.001;p-p38/p38:P=0.002;MMP:P=0.001)。结论甘草查尔酮A可以通过抑制炎性反应和和抑制软骨基质降解来延缓实验骨关节炎大鼠的骨关节炎进展,p38-MAPK信号通路可能参与了其中的调控过程。

乔松素对肠缺血/再灌注小鼠发挥肠黏膜保护作用

目的探究乔松素(pinocembrin,Pin)对肠缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)小鼠肠黏膜的影响及其机制。方法40只小鼠分为Sham组、I/R组、I/R+15mg/kg Pin组和I/R+45mg/kg Pin组,每组10只小鼠。HE染色观察肠黏膜病理学形态,试剂盒法检测血清二胺氧化酶(DAO)活性以及肠组织中TNF-α、IL-1β、丙二醛(MDA)水平、髓过氧化物酶(MPO)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,TUNEL染色分析肠组织的细胞凋亡水平,Western blot检测肠组织中occludin、ZO-1、cleaved caspase-3、p38 MAPK水平。结果肠I/R致肠黏膜明显损伤、TUNEL阳性细胞数增加、occludin和ZO-1水平降低、血清DAO活性和MDA水平上升、SOD和GSH-Px活性降低、TNF-α、IL-1β、p38 MAPK和cleaved caspase-3水平升高,Pin处理明显减轻或抑制肠I/R所致的上述改变,45mg/kg Pin较15mg/kg Pin效果更为明显。结论Pin对肠I/R小鼠的肠黏膜发挥保护作用,且这一作用与其抗炎、抗氧化和抑制p38 MAPK信号活性相关。

肾上腺素联合针刺疗法可通过NF—κB信号通路治疗过敏性休克:小鼠的实验结果

目的探讨肾上腺素联合针刺疗法治疗过敏性休克的疗效和机制。方法将60只昆明种雄性小鼠按随机数字表法分为生理盐水(NS)对照组、过敏性休克模型组和中西医结合治疗组,每组20只。腹腔注射0.01mmol/L卵蛋白0.25mL,1周后重复注射1次,第3周经尾静脉注射卵蛋白0.5mL,诱发过敏性休克;NS对照组均注射等量NS;治疗组于制模后立即皮下注射0.1%肾上腺素0.2μg,同时腹腔注射氨茶碱注射液0.2mg,并配合针刺水沟、内关、合谷穴治疗。分别于制模后1、6、12h观察各组小鼠死亡率。于12h处死小鼠取血标本,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清类胰蛋白酶、免疫球蛋白E(IgE)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-1、IL-6)水平;取肺标本,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肺组织p65、磷酸化p65(p-p65)、磷酸化核转录因子一κB抑制因子α(p-IκBα)的蛋白表达。结果NS对照组12h内无小鼠死亡;治疗组小鼠12h内死亡率明显低于模型组(10%比80%,P<0.01)。模型组小鼠类胰蛋白酶和IgE较NS对照组明显升高[类胰蛋白酶(μg/L):1.53±0.28比0.91±0.23,IgE(μg/L):33.3±3.1比21.3±1.9,均P<0.01],治疗组小鼠两者水平明显低于模型组[类胰蛋白酶(μg/L):1.31±0.26比1.53±0.28,IgE(μg/L):25.6±2.2比33.3±3.1,均P<0.05]。模型组小鼠血清TNF-μ、IL-1、IL-6水平明显高于NS对照组[TNF-α(ng/L):35.3±4.7比16.4±3.5,IL-1(ng/L):13.8±3.3比4.2±1.8,IL-6(ng/L):15.3±4.8比5.5±2.1,均P<0.01];治疗组小鼠血清各炎性因子水平明显低于模型组[TNF-α(ng/L):26.1±4.3比35.3±4.7,IL-1(ng/L):7.2±2.7比13.8±3.3,IL-6(ng/L):8.8±3.8比15.3±4.8,均P<0.05]。Western Blot检测结果显示,3组肺组织p65蛋白表达无明显差异;NS对照组肺组织细胞核内p-p65蛋白表达量极低,模型组显著增加,治疗组明显低于模型组;p-IκBα蛋白表达趋势与p-p65结果一致。结论肾上腺素联合针刺疗法可能通过抑制NF-κB信号通路的活化,对过敏性休克小鼠起到治疗作用。

白芍总苷对慢性肾小球肾炎模型大鼠的肾脏保护作用及机制研究

目的探讨白芍总苷(TGP)对慢性肾小球肾炎(CGN)大鼠的肾脏保护作用及机制。方法通过注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)诱导CGN大鼠模型。将SD大鼠随机分成空白组、模型组、醋酸泼尼松组(5 mg·kg^(-1))及白芍总苷高、低剂量组(200、100 mg·kg^(-1)),灌胃给药,连续给药4周。给药结束后,检测大鼠24 h尿蛋白及血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平;采用免疫荧光法检测肾脏组织中IgG和C3的沉积情况;Western Blot法检测肾脏组织中白细胞介素(IL)1β、转化生长因子(TGF)β、p62、TRAF6及核因子κB(NF-κB)蛋白表达情况。结果与空白组比较,模型组大鼠的24 h尿蛋白排泄量及血清中Scr、BUN含量显著升高(P<0.01),肾脏中IgG和C3沉积增多,IL-1β、TGF-β、p62、NF-κB及TRAF6蛋白表达明显上调(P<0.01)。与模型组比较,白芍总苷高、低剂量组大鼠的24 h尿蛋白排泄量及血清中Scr、BUN含量明显降低(P<0.05,P<0.01),肾脏组织中IgG和C3沉积明显减少,IL-1β、TGF-β、p62、NF-κB及TRAF6蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论白芍总苷对CGN大鼠具有肾脏保护作用,其机制可能与下调IL-1β、TGF-β表达,影响p62/TRAF6/NF-κB信号通路激活有关。

SDF-1在大鼠颞下颌关节骨关节炎相关性的研究

目的:观察SDF-1在大鼠颞下颌关节骨关节炎中的表达以及其与MMP-13、IL-1β和P38MAPK的相关性。方法:48只wistar大鼠随机分为对照组、模型组、高浓度抑制剂组和低浓度抑制剂组,采用关节腔注射碘乙酸钠溶液建立大鼠TMJOA模型。抑制剂组大鼠在建模后分别注射0.1μg/μL及1μg/μL SDF-1/CXCR4信号轴抑制剂AMD3100。后处死各组大鼠,取双侧颞下颌关节组织进行HE染色、番红固绿染色(S.O)以评价关节炎症水平;通过RT-PCR及免疫组化检测MMP-13、IL-1β的表达量;通过免疫组化染色检测p38MAPK。结果:对照组、高浓度抑制剂组、低浓度抑制剂组及模型组组织评分为:0.75±0.43、5±0.71、8±0.71、11.5±0.5。p-p38表达量为:(14.3±2.2)%、(41.5±2.2)%、(60.0±3.8)%、(74.9±3.5)%。IL-1β表达量为(12.8±1.0)%、(40.1±2.3)%、(64.2±4.4)%、(81.2±3.5)%;IL-1βm RNA为0.97±0.11、3.38±0.48、5.03±0.23、6.35±0.35。MMP-13表达量为(13.2±1.2)%、(38.2±2.3)%、(62.1±3.3)%、(80.9±3.0)%;MMP-13m RNA为0.96±0.18、2.54±0.41、5.24±0.45、6.31±0.35。对照组及模型组中SDF-1表达量为(26.1±3.2)%、(75.2±4.5)%;SDF-1m RNA为1.02±0.14、6.26±0.45。结果表明,随抑制剂剂量增加,关节炎症水平明显降低,MMP-13、IL-1β、p38MAPK表达量显著下调(P<0.05)。结论:SDF-1在颞下颌关节骨关节病的作用与促进MMP-13及IL-1β的表达和p38MAPK通路的激活相关。

miR-212-3p在乙肝病毒感染诱导的巨噬细胞激活中的作用机制

目的探究miR-212-3p在乙肝病毒感染诱导的巨噬细胞激活中的作用及其机制。方法CCK-8法检测不同浓度乙型肝炎E抗原(HBeAg)刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞活力,分别转染miR-212-3p mimic和miR-212-3p inhibitor,检测miR-212-3p mRNA相对表达量、细胞活性、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平及mRNA相对表达量,采用磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂预处理细胞后再用HBeAg刺激,检测PI3K/蛋白激酶B(Akt)信号通路蛋白表达。结果RAW264.7细胞活力随HBeAg浓度增加而上升(P<0.05),HBeAg浓度为2000 ng/ml时细胞活力最高,miR-212-3p mRNA相对表达量上调,24 h时达到峰值,随后降低(P<0.05);HBeAg刺激后,转染miR-212-3p mimic的细胞中miR-212-3p的mRNA相对表达量上调(P<0.05),且IL-6、TNF-α水平和mRNA相对表达量上升(P<0.05);渥曼青霉素预处理RAW264.7细胞后miR-212-3p的mRNA相对表达量上调(P<0.05),p-PI3K、p-Akt蛋白表达下调(P<0.05)。结论miR-212-3p在HBeAg刺激巨噬细胞中表达上调,过表达miR-212-3p可能通过PI3K/Akt信号通路,抑制HBeAg诱导的炎性细胞因子产生。

金丝桃苷对慢性阻塞性肺疾病大鼠骨质疏松的骨代谢、生物力学的影响

目的探讨金丝桃苷对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠骨质疏松(OP)的影响及作用机制。方法用香烟联合细菌的方法构建COPD合并OP大鼠模型。将大鼠随机分为对照组、模型组(构建COPD合并OP模型)、低剂量实验组(构建COPD合并OP模型后灌胃给予50 mg·kg^(-1)金丝桃苷)、高剂量实验组(构建COPD合并OP模型后灌胃给予100 mg·kg^(-1)金丝桃苷)、阳性组(构建COPD合并OP模型后皮下注射16 U·kg^(-1)鲑降钙素),每组12只,连续给药90 d。用肺功能仪检测仪大鼠肺功能,用micro-计算机体层成像(CT)仪检测大鼠骨密度(BMD),用酶联免疫吸附试验(ELISA)实验检测大鼠血清骨代谢、炎性因子相关指标水平,用蛋白质印迹实验检测通路相关指标。结果对照组、模型组、高剂量实验组、阳性组大鼠用力肺活量(FVC)水平分别为(10.42±1.40)、(4.10±0.60)、(6.75±0.37)、(4.18±0.33)mL,BMD水平分别为(0.31±0.04)、(0.12±0.02)、(0.28±0.03)、(0.29±0.04)g·mm^(-3),骨碱性磷酸酶(BALP)水平分别为(200.04±20.03)、(80.80±6.00)、(148.16±14.23)、(173.97±23.55)U·L^(-1),白细胞介素-1β(IL-1β)水平分别为(122.60±8.70)、(695.59±74.84)、(422.41±44.86)、(527.90±39.36)pg·mL^(-1),磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-P38)蛋白相对表达水平分别为0.99±0.11、0.36±0.05、0.79±0.08、0.36±0.04。模型组的上述指标与对照组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05);高剂量组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论金丝桃苷可抑制炎性反应、改善骨代谢及生物力学。

粒细胞集落刺激因子通过mTOR/p70S6K途径调节新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后炎症反应

目的观察粒细胞集落刺激因子（G-CSF）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后炎症反应的影响及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/p70核糖体S6蛋白激酶（mTOR/p70S6K）信号通路在其中发挥的作用。方法7日龄新生SD大鼠90只按随机数字表法随机分为假手术组、缺氧缺血（HI）模型组、G-CSF组、雷帕霉素组及对照组，改良Rice法建立新生大鼠HIBD模型。HI前1 h，雷帕霉素组腹腔注射雷帕霉素250 μg/kg，对照组予等体积乙醇腹腔注射。HI 1 h后，G-CSF组、雷帕霉素组及对照组腹腔注射G-CSF 50 μg/kg，HI模型组及假手术组予等体积9 g/L盐水腹腔注射。HI 48 h后，Western blot检测脑组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-10及mTOR/p70S6K信号通路蛋白水平，尼氏染色评估海马CA1区及皮质神经元损伤情况，2，3，5-氯化三苯基四氮唑染色检测脑梗死面积。结果与HI模型组比较，G-CSF组及对照组脑梗死面积减少[（12.87±1.54）%、（11.90±1.31）%比（24.21±3.28）%]，尼氏染色阳性神经元计数增多[海马CA1区：（61.00±4.90）个/视野、（61.67±6.40）个/视野比（42.67±4.46）个/视野；皮质：（92.67±6.68）个/视野、（90.17±4.45）个/视野比（70.83±6.97）个/视野]，TNF-α及IL-1β水平降低（TNF-α：0.67±0.07、0.55±0.05比0.86±0.05；IL-1β：0.65±0.06、0.52±0.10比0.86±0.06），IL-10、p-mTOR/mTOR及p-p70S6K/p70S6K水平升高（IL-10：0.68±0.04、0.62±0.05比0.34±0.02；p-mTOR/mTOR：0.53±0.02、0.51±0.01比0.26±0.01；p-p70S6K/p70S6K：0.89±0.03、0.90±0.03比0.55±0.02），差异均有统计学意义（均P〈0.05）。与G-CSF组及对照组比较，雷帕霉素组脑梗死面积增加[（25.70±1.50）%]，尼氏染色阳性神经元计数减少[海马CA1区：（40.67±3.50）个/视野；皮质：（68.33±8.17）个/视野]，TNF-α及IL-1β水平升高（分别为0.97±0.06、0.98±0.10），IL-10、p-mTOR/mTOR及p-p70S6K/p70S6K水平降低（分别为0.21±0.02、0.30±0.01、0.55±0.01），差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论G-CSF可能通过上调mTOR/p70S6K信号通路抑制HIBD后的炎症反应。