HMGCS2、PPARγ在炎症性肠病患者肠黏膜的表达活性及临床意义

目的观察HMGCS2、PPARγ在溃疡性结肠炎(UC)及克隆恩病(CD)中的表达情况,通过对UC、CD及健康对照组比较,分析其在IBD发生发展的分子学基础。方法收集南方医院消化科病房及门诊2010年2月～2011年1月间所行常规全结肠镜检查后内镜下活检的73例UC、42例CD、89例健康对照者的肠黏膜。比较UC组和CD组之间一般临床特点和检查资料的差异。结果 73例UC中发生在直肠的28例(38.4%),发生在直乙状结肠9例(12.3%),发生在左半结肠的11例(15.1%),发生在全结肠的25例(34.2%);42例CD患者有29例发生在回末和小肠(69.0%)。HMGCS2、PPARγ在73例UC患者肠黏膜中阳性表达分别为48例(65.8%)和36例(49.3%);在42例CD患者肠黏膜中阳性表达分别为37例(88.1%)和30例(71.4%);在89例正常对照组肠黏膜阳性表达占82例(92.1%)和66例(74.2%)。结论 HMGCS2、PPARγ在UC、CD、健康对照组均有表达,在UC患者肠黏膜明显下调,而在CD和健康者无明显变化。

hsa-miR-150-5p抑制序列慢病毒载体的构建、转染和表达

目的构建携带抑制表达hsa-miR-150-5p的慢病毒载体,建立稳定表达该载体的HT-29细胞。方法设计并合成hsa-miR-150-5p抑制序列,并克隆到工具载体GV-280(h U6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin)构建重组载体,将重组载体与p Helper1.0载体和p Helper2.0载体共转染293T细胞,得到所需的病毒液LV-hsa-miR-150-5p-down,最后感染HT-29细胞,并通过嘌呤霉素筛选出稳定感染的细胞株。荧光显微镜观察HT-29细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达,RT-PCR检测hsa-miR-150-5p在HT-29细胞中的表达水平。结果测序结果证明成功构建重组质粒,并成功包装成慢病毒,实验组(转染过表达LV-hsa-miR-150-5p-down病毒)病毒滴度为5×10~8TU/ml,阴性对照组(转染阴性LV-NC病毒)病毒滴度为8×10~8TU/ml。所得病毒液感染HT-29细胞并筛选出稳定细胞株HT29-150-5p-down。荧光显微镜观察带有绿色荧光蛋白的目的重组质粒在人结肠癌HT-29细胞中高表达,PCR进一步验证了这一结果。结论 LV-hsa-miR-150-5p-down慢病毒载体构建成功,HT-29细胞稳定表达该载体,为后续miR-150的功能研究奠定基础。