急性冠脉综合征患者血清ANGPTL3与炎症激活、糖脂代谢紊乱的相关性研究

目的探讨急性冠脉综合征(ACS)患者血清血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)水平及其与ACS患者炎症激活、糖脂代谢紊乱的相关性。方法纳入ACS患者60例,分为不稳定心绞痛组(UA,n=29)和急性心肌梗死组(AMI,n=31),对照组选取同期冠脉造影阴性者(Control,n=30)。收集所有患者的血清,检测血清ANGPTL3水平、炎症指标(包括超敏C反应蛋白hs-CRP、肿瘤坏死因子TNF-α和白介素IL-6)和糖脂代谢指标[包括空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)],并探讨ACS患者血清ANGPTL3与炎症指标、糖脂代谢紊乱的相关性。结果与Control组相比,UA和AMI组患者血清ANGPTL3的水平升高(P<0.05),且AMI组升高更明显(P<0.05)。与Control组相比,UA和AMI组患者血清炎症因子hs-CRP、TNF-α和IL-6水平明显升高(P<0.05),且AMI患者升高更明显(P<0.05)。与Control组相比,UA和AMI组患者糖脂代谢指标包括FPG、TC、TG和LDL-C水平明显升高(P<0.05),AMI患者升高更明显(P<0.05);而UA和AMI组的HDL-C水平降低(P<0.05)。相关性分析发现ACS患者血清ANGPTL3与炎症因子hs-CRP(r=0.603,P<0.001)、TNF-α(r=0.890,P<0.001)和IL-6(r=0.793,P<0.001)水平、糖脂代谢指标FPG(r=0.706,P<0.001)、TC(r=0.729,P<0.001)、TG(r=0.756,P<0.001)和LDL-C(r=0.736,P<0.001)呈正相关;而与HDL-C(r=-0.828,P<0.001)呈负相关。结论ACS患者血清ANGPTL3水平升高,与激活的炎症反应、糖脂代谢紊乱严重程度密切相关,未来联合检测ANGPTL3对早期判断ACS患者炎症状态和糖脂代谢紊乱的严重程度具有一定的临床应用价值。

BML-111通过调节NLRP3炎症激活ROS产生来介导慢性阻塞性肺疾病的抗炎作用

目的探讨脂氧素受体激动剂(BML-111)通过调节核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)炎症激活活性氧(ROS)产生来介导COPD的对于抗炎的作用的影响。方法SPF级雄性小鼠32只随机数字法分成4组,正常组、COPD模型组、BML-111低剂量组、BML-111高剂量组,每组8只,应用脂多糖和烟熏的方式建模,观察小鼠的COPD情况,通过HE染色观察小鼠的炎性细胞浸润情况,通过Western blot检测NLRP3、1L-1β、转化生长因子β(TGF-β)的蛋白的表达情况,通过支气管肺泡灌洗液(BALF)制备观察不同的细胞计数情况,氧化应激测定超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的活性。结果正常组建模前后差异无统计学意义(P=0.719),COPD模型组、BML-111低剂量组、BML-111高剂量建模后体质量明显低于建模前的体质量(P=0.027);COPD模型组的NLRP3、1L-1β、TGF-β的蛋白表达明显高于正常组(P=0.009),BML-111低剂量组的NLRP3、1L-1β、TGF-β的蛋白表达低于COPD模型组(P=0.032),BML-111高剂量组的NLRP3、1L-1β、TGF-β的蛋白表达显著低于COPD模型组(P=0.006);模型组中的白细胞计数明显高于正常组(P=0.017),BML-111高剂量组淋巴细胞计数显著低于模型组(P=0.036);COPD模型组的SOD的活性明显低于正常组(P=0.011),BML-111低剂量组的SOD的活性高于COPD模型组(P=0.028),BML-111高剂量组的SOD的活性显著高于COPD模型组(P=0.009);COPD模型组的MDA的活性明显高于正常组(P=0.013),BML-111低剂量组的MDA的活性低于COPD模型组(P=0.026),BML-111高剂量组的MDA的活性显著低于COPD模型组(P=0.005)。结论BML-111可以通过抑制NLRP3炎性小体的活化介导ROS产生来抵抗COPD的炎症发生。

芪苈参萸益心方通过减轻炎症反应、溶酶体功能和抑制NLRP3炎症小体激活来发挥对心肌梗死大鼠的保护作用

为探讨芪苈参萸益心方对心肌梗死(MI)大鼠炎症反应、溶酶体功能和NLRP3炎症小体的影响及机制。将实验大鼠随机分为正常组、模型组、芪苈参萸益心方组和地尔硫卓组。MI模型复制成功后分别予芪苈参萸益心方及地尔硫卓处理,正常组、模型组予0.5%羧甲基纤维素钠溶液,连续4周,处死大鼠,观察血流动力学,血液中ROS、LDH、SOD、GSH-Px、CAT、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18、IL-4、IL-10及血液、心肌和溶酶体中β-葡萄糖醛酸酶、β-半乳糖苷酶、组织蛋白酶B和D、心脏重量指数、心肌梗死面积的变化;HE染色观察心脏形态学改变;实时定量PCR测定心肌中TLR4、MyD88、iNOS、COX-2 mRNA表达,Western blot测定心肌中p-IKKβ、p-IκBα、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1、TXNIP、pro-IL-1β、pro-IL-18及胞浆和胞核中NF-κBp65蛋白表达。结果显示芪苈参萸益心方可显著改善MI大鼠心功能、降低心脏重量指数和梗死面积,减少心肌坏死和炎性细胞浸润;降低血液LDH、ROS、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18及血液、心肌和溶酶体中β-葡萄糖醛酸酶、β-半乳糖苷酶、组织蛋白酶B和D水平;升高血液中SOD、CAT、GSH-Px、IL-4、IL-10水平;下调心肌中TLR4、MyD88、iNOS、COX-2 mRNA及p-IKKβ、p-IκBα、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1、TXNIP、pro-IL-1β、pro-IL-18、胞核NF-κBp65蛋白表达及p-IKKβ/IKKβ和p-IκBα/IκBα比值,上调胞浆中NF-κBp65蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。芪苈参萸益心方对MI大鼠有保护作用,其机制可能与增强内源性抗氧化系统功能、减轻炎症反应和抑制NLRP3炎症小体激活有关。

稳定表达马NLRP3 HEK293T细胞系的构建及用于马NLRP3炎性小体的研究

为构建稳定表达马NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(eqNLRP3)的细胞系,并用于eqNLRP3炎性小体激活的研究,本研究采用同源重组的方法将经PCR扩增的eqNLRP3和GFP基因克隆至pLPCX中,构建重组表达质粒pLPCX-Flag-eqNLRP3-GFP,经PCR和测序鉴定正确后与pCGP、pVSV-G共转染HEK293T细胞,48 h后获得携带eqNLRP3的慢病毒。将该慢病毒感染HEK293T细胞,并采用嘌呤霉素筛选携带绿色荧光(GFP+)的单克隆细胞。采用western blot鉴定该细胞中eqNLRP3蛋白的表达、反应原性及细胞遗传稳定性。Western blot结果显示在146.1 ku处出现特异性条带,且传至1、4、7、10代的细胞均出现该条带,表明获得稳定表达eqNLRP3蛋白的HEK293T细胞系HEK293Teq NLRP3(2G1细胞)。采用NLRP3特异性激活剂尼日利亚菌素(Nig)处理2G1细胞1 h;将表达质粒pCDNA3.1-eqASC-HA转染2G1细胞,加入Nig处理1 h,采用激光共聚焦显微镜分别观察上述细胞中e NLRP3的聚化状态,及在2G1细胞中表达eqASC后能否形成ASC斑点(eqNLRP3-eqASC的复合物,即NLRP3炎性小体激活的典型特征)。结果显示,正常2G1细胞中呈绿色荧光的eqNLRP3弥散分布于细胞质中,加入Nig后弥散的eqNLRP3在细胞质中形成典型绿色荧光的点状聚集。转染表达eqASC质粒的2G1细胞中出现的红色荧光(eqASC)主要在细胞质中呈弥散性分布;转染表达eqASC的2G1细胞用Nig处理后形成2.5μm的中间呈绿色荧光四周呈红色荧光的典型ASC斑点。上述结果表明2G1细胞可以响应特异性激活剂并诱导eqNLRP3的聚化,招募ASC形成ASC斑点。将本实验室构建的iGLuc报告系统中的4种表达炎性小体蛋白质粒分别与EIV各蛋白对应质粒共转染HEK293T细胞,24 h后利用该报告系统检测各组细胞中的荧光素酶活性;采用western blot检测各共转染细胞中各EIV蛋白的表达对该系统中4种炎性小体蛋白表达的影响,通过上述两个试验筛选能够激活eqNLRP3炎性小体的EIV蛋白。iGLuc报告系统检测结果显示,仅表达EIV M2蛋白质粒的细胞上清中荧光素酶活性显著高于阳性对照组(P<0.05);western blot结果显示,EIV M2蛋白的表达对4种炎性小体蛋白的表达均无明显影响,表明EIV M2蛋白激活了eqNLRP3炎性小体。将表达EIV M2蛋白及表达eqASC的质粒共转染2G1细胞,24 h后经激光共聚焦显微镜观察以进一步验证上述结果。结果显示,该组细胞中带绿色荧光的eqNLRP3出现点状聚集,并招募细胞质中带红色荧光的eqASC形成了ASC斑点,与i GLuc报告系统筛选结果一致。上述结果表明,EIV感染对HEK293Teq NLRP3细胞系中的eqNLRP3产生了聚化效应,并招募ASC形成ASC斑点。本研究建立了稳定表达eqNLRP3蛋白的HEK293T细胞系,为马属动物病原感染激活NLRP3炎性小体的评价奠定了物质基础。

NLRP3炎症小体在痛风性关节炎中的作用及中药干预研究进展

[目的]总结Nod样受体蛋白3(nod-like receptor pyrin domain 3,NLRP3)炎症小体在治疗痛风性关节炎(gouty arthritis,GA)中的作用。[方法]检索2015年1月至2020年1月Web of Science、PubMed、中国知网(China National Knowledge Infrastructure,CNKI)、维普、万方等数据库中中药通过NLRP3炎症小体干预GA的相关国内外文献,归纳总结出NLRP3炎症小体在中药治疗GA中的作用。[结果]共检索到相关中文文献35篇、英文文献45篇。分析文献发现,GA患者关节滑膜中NLRP3蛋白表达升高。中药治疗GA多以脾虚湿热瘀阻为辨证要点,通过影响NLPR3炎症小体,在GA治疗中发挥重要作用。NLRP3炎症小体由NLRP3支架、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)和效应蛋白半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,caspase-1)三部分组成。以NLRP3炎症小体为核心,中药复方、单味中药提取物、中药单体均能够通过多个信号通路干预GA的发生和发展。[结论]以NLRP3炎症小体为切入点,深入探究中药治疗GA的具体机制,开发高效低毒的新药是未来研究的重要方向。

外周血IL-18/IL-35联合PCT检测对脓毒症病情和预后评估的临床价值

目的探讨外周血IL-18/IL-35联合PCT检测在脓毒症病变程度和预后评估中的应用价值。方法选取本院2016-01~2017-12收治的脓毒症患者120例,设为A组;按脓毒症的严重程度,再分为A1组(脓毒症)、A2组(严重脓毒症)、A3组(脓毒性休克)。选取健康志愿者30例,设为B组。A组于确诊脓毒症后12h内,B组于体检当日,检测IL-18、IL-35及PCT水平,计算IL-18/IL-35。记录28d内患者的预后情况,再分为Ax组(存活)和Ay组(与脓毒症相关的死亡)。比较各组血清IL-18IL-35、IL-18/1L-35及PCT水平,分析指标间相关性,采用ROC曲线比较各指标对脓毒症的诊断效能。结果A组血清IL-18、IL-18/IL-35.PCT显著高于B组,IL-35显著低于B组(P<0.01)。A1、A2、A3组血清IL-18、IL-35、IL-18/IL-35、PCT水平比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),按照A1、A2、A3组的顺序,IL-18、IL-18/IL-35、PCT水平依次升高,而IL-35水平依次降低。Ay组血清IL-18、IL-18/IL-35、PCT显著高于Ax组,IL-35显著低于Ax组(P<0,01)。血清IL-18和IL-35水平呈负相关(r=-0.47,P=0.042),IL-18/IL-35和PCT水平呈正相关(r=0.76,P=0.020)。ROC曲线及AUC显示,IL-18/IL-35联合PCT诊断脓毒症的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比、阴性似然比、Youden指数均优于IL-18、IL-35、IL-18/IL-35和PCT(P<0.05)。结论外周血IL-18/IL-35联合PCT检测应用于脓毒症具有较高的诊断效能,IL-18/IL-35和(或)PCT的高表达状态可能提示患者病变程度较重及预后不佳,两者联合检测对于脓毒症患者的病情和预后判断可能具有较高的指导意义。

胰岛α细胞胰岛素抵抗与炎症通路激活的关系及机制

目的探讨高脂饲养大鼠胰岛α细胞炎症通路分子基因的表达变化及吡格列酮干预的影响。方法 8周龄雄性 SD 大鼠随机分为3组(每组15只):正常饲养组(NC)、高脂饲养组(HF)、高脂+吡格列酮组(HP)。喂养20周后检测空腹血胰岛素(FIns)、胰高血糖素(Glc)、游离脂肪酸(FFA)、高敏 C 反应蛋白(hsCRP)水平;正常血糖高胰岛素钳夹试验评价外周胰岛素抵抗程度;离体胰岛细胞表面灌注检测高糖状态 Glc 分泌的动态变化,同时3组大鼠各随机入组8只给予大剂量链脲菌素去β细胞处理,分为正常去β细胞组(NC-B),高脂去β细胞组(HF-B),高脂+吡格列酮去β细胞组(HP-B),采用定量 PCR 方法比较3组去β细胞大鼠α细胞 NF-B、NF-B抑制蛋白α(IBα)mRNA 表达的情况。结果 (1)HF 组葡萄糖输注率(GIR)明显低于 NC 组,血 FIns、Glc、FFA及 hsCRP 水平均显著高于 NC 组;而 HP 组以上各项指标较 HF 组均明显改善。(2)胰岛细胞表面灌注,HF 组基础 Glc 的分泌高于 NC 组(P<0.01),16.7 mmol/L 葡萄糖灌注后 HF 组胰岛的 Glc 分泌未受抑制,HP 组与 NC 组比较差异无统计学意义。(3)与 NC-B 组相比,HF-B 组α细胞 NF-B mRNA的表达增高20.5%,IBα mRNA 表达降低24.3%(P 值均<0.01)。HP-B 组较 HF-B 组 NF-κB、IκBαmRNA 分别改善78.3%、58.8%。(4)HF 组血 FFA 水平与 GIR 呈负相关(r=-0.675,P<0.01);与NF-κB mRNA 表达呈正相关(r=0.775,P<0.05)。结论高脂饲养导致胰岛α细胞胰岛素抵抗,同时激活了α细胞炎症通路基因的表达且与 FFA 升高有关。吡格列酮干预能改善上述变化。

妊娠期高血压疾病的免疫学研究新进展

胎儿这样一个同种半异体移植物在妊娠期可以不被母体排斥而直至足月,提示母体与胎儿之间存在特殊的免疫关系。该文从妊娠免疫抑制、细胞凋亡、母体胎儿免疫系统协调失衡、主要组织相容性抗原与保护性抗体及炎症反应过度激活角度总结了近年来在免疫学方面对妊娠期高血压疾病的研究。

猪TREM-1基因的克隆与启动子分析

髓样细胞触发受体1（Triggeringreceptorexpressedonmyeloidcells1，TREM-1）是2000年发现的一种新型免疫球蛋白超家族成员，分子量约为30000，主要分布在外周血中性粒细胞、单核细胞亚群等天然免疫反应的效应细胞和肺泡吞噬细胞等细胞表面。

MRE11参与炎症小体信号通路激活的初步研究

目的探究减数分裂重组蛋白11同系物A(MRE11)在不同刺激物诱导下炎症小体激活中的作用和地位。方法利用不同刺激物,如Poly(I∶C)、Poly(d A∶d T)、E.coli g DNA、293T g DNA和CPPD以及生殖疱疹病毒(HSV)等处理单核巨噬细胞THP-1,通过IL-1β酶联免疫吸附试剂盒(ELISA)筛选出诱导激活炎症小体的有效刺激物;合成si MRE11干扰小RNA,转染THP-1细胞,免疫印迹检测MRE11干扰下调效率;利用筛选到的阳性刺激物处理MRE11干扰下调的细胞,采用ELISA和免疫印迹方法检测MRE11对细胞分泌炎性因子IL-1β水平和前胱天蛋白酶(pro-caspase)-1切割的影响。结果在MRE11干扰下调的THP-1细胞中,Poly(I∶C)、Poly(d A∶d T)、E.coli g DNA和293T g DNA刺激激活细胞分泌的IL-1β水平以及前胱天蛋白酶-1切割的水平均有不同程度降低。结论MRE11参与由DNA以及RNA刺激激活的炎症小体信号通路。

慢性酒精性肝病的致病机理及中医辨证治疗

慢性酒精性肝病是由脂质沉积,脂质氧化,氧化应激,炎症因子激活等引起的肝组织脂质沉积、慢性炎症及纤维化的病理表现。中医对慢性酒精性肝病分以酒疸,酒癖,酒积三阶段辨证治疗。

委陵菜酸对幽门螺杆菌诱导GES-1细胞损伤的保护作用

目的探索委陵菜酸对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导人胃黏膜上皮细胞GES-1损伤的影响。方法GES-1细胞与Hp共培养,给予委陵菜酸和NOD样受体家族3(NOD-like receptor family 3,NLRP3)抑制剂MCC950,考察各组细胞存活率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率、集落形成、凋亡率、线粒体膜电位和活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)变化;采用ELISA法检测各组细胞上清液中单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)、角质细胞趋化因子(keratinocyte chemokines,KC)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-Iβ(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-18、IL-4和IL-10水平;采用试剂盒检测各组细胞谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;采用qRT-PCR检测各组细胞Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、Bcl-2、Bcl-xl、Bax和BadmRNA表达情况;采用Western blotting法检测各组细胞TLR4/NLRP3/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和线粒体凋亡信号通路相关蛋白表达情况。结果委陵菜酸显著抑制Hp诱导的GES-1细胞LDH释放率(P<0.05、0.01),促进细胞集落形成(P<0.05、0.01),抑制细胞凋亡(P<0.05、0.01);升高细胞线粒体膜电位(P<0.01),降低ROS水平(P<0.01);降低上清液中MCP-1、KC、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-18水平(P<0.01),升高IL-4和IL-10水平(P<0.01);升高细胞GSH-Px、SOD和CAT活性(P<0.01),降低MDA含量(P<0.01);降低细胞TLR4、MyD88、Bax、Bad mRNA表达水平(P<0.01),升高Bcl-2、Bcl-xl mRNA表达水平和Bcl-2/Bax、Bcl-xl/Bad(P<0.01);下调细胞TLR4、MyD88、磷酸化IκB激酶β(phosphorylated inhibitor kappa B kinaseβ,p-IKKβ)、p-IκBα、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1前体(pro-Caspase-1)、Caspase-1、硫氧还蛋白互作蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)、pro-IL-lβ、pro-IL-18、Bax、Bad、细胞色素C、凋亡酶激活因子-1(apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1)、剪切型Caspase-9(cleaved Caspase-9)、cleaved Caspase-3和胞核p65蛋白表达水平(P<0.01),上调Bcl-2、Bcl-xl、pro-Caspase-9、pro-Caspase-3和胞质p65蛋白表达水平(P<0.01)。结论委陵菜酸对Hp诱导的GES-1细胞损伤具有明显保护作用,其作用机制可能与增强内源性抗氧化系统功能、抑制氧化应激、炎性反应及TLR4/NF-κB/NLRP3炎症小体信号通路激活,从而减少线粒体介导的凋亡密切相关。

血清HMGB1在新生儿呼吸道合胞病毒感染诱导毛细支气管炎中的动态变化及临床意义

目的分析血清高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein box 1,HMGB1)在新生儿呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染诱导毛细支气管炎中的动态变化及临床意义,为RSV毛细支气管炎的诊断和治疗提供新的思路。方法2020年10月1日至2021年5月31日,我院新生儿科被诊断为RSV感染且住院治疗的毛细支气管炎足月新生儿86例,被纳入研究作为研究组,同时纳入100例健康足月新生儿作为健康对照组。在研究组患儿急性期和恢复期时采集血清样本,采用ELISA试剂盒测定血清HMGB1水平,绘制受试者工作特征曲线,确定血清HMGB1用于RSV毛细支气管炎诊断的曲线下面积(AUC)。Spearman秩相关系数分析血清HMGB1与其他临床参数的关系。结果研究组新生儿急性期[0.455(0.196,0.632)ng/mL vs 0.112(0.054,0.261)ng/mL,P<0.01]和恢复期时[0.237(0.148,0.374)ng/mL vs 0.112(0.054,0.261)ng/mL,P<0.01],血清HMGB1水平均高于健康对照组,且急性期时升高更明显。急性期血清HMGB1水平用于RSV毛细支气管炎诊断的AUC为0.787(95%CI:0.725~0.849,P<0.01)。研究组患儿急性期血清HMGB1水平与王氏毛细支气管炎严重程度评分(r=0.295,P<0.01)、呼吸支持(r=0.476,P<0.01)、出生体重(r=0.404,P<0.01)、入院时外周血单核细胞计数(r=0.409,P<0.01)、淋巴细胞计数(r=0.508,P<0.01)及CRP水平(r=0.402,P<0.01)呈正相关性。结论RSV感染毛细支气管炎新生儿血清HMGB1水平升高与机体炎症反应相关。