基于传统散剂和炒炙法的雷公藤炮制减毒作用研究

目的:基于传统散剂和炒炙法探讨雷公藤的炮制减毒作用。方法:80只SPF级雄性小鼠随机分为正常组、生品组、清炒组、醋炙组、绿豆炙组、白芍炙组、甘草炙组、金钱草炙组,每组10只,各组连续28d灌胃给予雷公藤生品及各炮制品2g/kg,正常组给予等体积的溶媒,通过测定各组小鼠血清肝功指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST),肾功能指标肌酐(Cr)、尿素氮(BUN),评价其炮制减毒作用;通过对毒性靶器官肝和肾的丙二醛(MDA)及抗氧化指标超氧化物歧化酶(T-SOD)、微量还原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、谷胱甘肽-S转移酶(GST)水平的比较分析,初步探讨炮制减毒机制。结果:雷公藤引起了小鼠血清肝功和肾功指标的显著升高(P<0.01),肝和肾的脂质过氧化损伤(P<0.01)和抗氧化防御能力低下(P<0.01);而经醋炙和绿豆、白芍、甘草、金钱草分别煎汤炒炙后均可显著逆转血清肝功和肾功的异常(P<0.05,P<0.01),以及肝和肾的脂质过氧化损伤和抗氧化水平的低下(P<0.05,P<0.01)。结论:醋炙法和绿豆、白芍、甘草、金钱草煎汤炒炙法均对雷公藤的肝、肾毒性具有炮制减毒作用,其减毒机制可能涉及调控靶器官的氧化/抗氧化失衡。

炮制对雷公藤诱导的睾丸生殖毒性的减毒作用机制研究

目的考察不同炮制方法对雷公藤诱导的睾丸生殖毒性的减毒作用,并初探其减毒机制。方法在分别采用醋炙法、清炒法、以及煎汤(以金钱草、绿豆、白芍、甘草各自煎汤)炒炙法制备雷公藤各炮制品的基础上,通过对生殖毒性敏感指标血清睾酮的检测分析评价不同炮制方法对雷公藤灌服雄性小鼠28 d诱导的睾丸生殖毒性的减毒作用,进一步采用蛋白免疫印迹法和试剂盒方法通过对小鼠睾丸部分凋亡和氧化/抗氧化相关指标的检测分析初步评价其炮制减毒机制。结果雷公藤生品给药显著降低了小鼠血清睾酮的水平,醋炙法以及分别以金钱草、绿豆、白芍、甘草煎汤炒炙法炮制均能够使被雷公藤降低的血清睾酮水平显著逆转69.9%、122.4%、75.2%、101.4%、106.6%,而清炒法炮制对此无显著影响;进一步分析表明,雷公藤生品给药显著升高了小鼠睾丸丙二醛水平、以及Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平,并显著降低了睾丸总超氧化物歧化酶、微量还原型谷胱甘肽、谷胱甘肽-过氧化物酶、谷胱甘肽-S转移酶的水平、以及B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白表达水平,醋炙法以及分别以金钱草、绿豆、白芍、甘草煎汤炒炙法炮制均显著逆转了以上指标的异常,而清炒法炮制对这些指标的异常无显著影响。结论醋炙法以及分别以金钱草、绿豆、白芍、甘草煎汤炒炙法炮制对雷公藤诱导的小鼠生殖毒性均具有减毒作用,不同炮制方法的减毒作用由强到弱依次为金钱草煎汤炒炙法、甘草煎汤炒炙法、白芍煎汤炒炙法、绿豆煎汤炒炙法和醋炙法,而清炒法未体现出显著减毒作用;炮制减毒机制可能与抑制睾丸细胞凋亡、以及纠正睾丸的脂质过氧化/抗氧化失衡有关。

基于Nrf2/HO-1通路探讨炮制降低雷公藤心毒性的作用机制

该研究考察了不同炮制方法对雷公藤诱导的心毒性的减毒作用,并基于核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶1(HO-1)通路初探炮制减毒机制。雷公藤生品及其各炮制品(清炒品、金钱草炒炙品、绿豆炒炙品、白芍炒炙品、甘草炒炙品、醋炙品)均以2 g·kg^(-1)(以生药计)的剂量被灌胃给予小鼠连续28 d,末次给药后24 h,通过对小鼠血清生化指标的检测分析评价其减毒作用,通过蛋白免疫印迹法对心组织Nrf2/HO-1通路关键蛋白的表达、以及试剂盒法对部分氧化/抗氧化相关指标的检测分析,初探其减毒机制。雷公藤生品给药诱导小鼠血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶、心脂质过氧化产物丙二醛的水平均显著升高(P<0.01),以及心Nrf2、HO-1蛋白表达水平及总超氧化物歧化酶、还原型谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽S-转移酶的水平均显著降低(P<0.01);而金钱草炒炙品、绿豆炒炙品、白芍炒炙品、甘草炒炙品、醋炙品给药后均在不同程度上逆转了雷公藤诱导的以上指标的异常(P<0.05,P<0.01),其中尤以金钱草炒炙品的逆转率为最高。综上,采用金钱草、绿豆、白芍、甘草分别炒炙,以及醋炙法炮制,均对雷公藤诱导的心毒性有减毒作用,且以金钱草炒炙法的减毒作用更佳,减毒机制可能与上调Nrf2所介导的心抗氧化防御并减轻氧化损伤有关。