炙红芪对脾气虚大鼠肠黏膜屏障保护的研究

目的 探究炙红芪调节脾气虚大鼠肠黏膜损伤的保护作用机制。方法 用苦寒泻下、劳倦过度及饥饱失常三因素复合造模法构建脾气虚模型大鼠。待造模成功后,随机分为模型组、炙红芪组和益生菌组,每组15只;另取15只正常大鼠作为空白组。炙红芪组以12.6 g·kg^(-1)的剂量灌胃给予炙红芪水煎液,益生菌组以0.625 g·kg^(-1)的剂量灌胃给予双歧杆菌乳杆菌三联活菌片混悬液,空白组和模型组均灌胃给予等剂量蒸馏水。4组大鼠每天给药1次,持续干预15 d。用酶联免疫吸附试验法检测血清中二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(D-LA)、分泌型免疫球蛋白A(SIgA)因子的水平,用蛋白质印迹法检测结肠组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AMPK)、闭合小带蛋白1(ZO-1)、闭锁蛋白(occludin)的表达水平。结果 空白组、模型组、炙红芪组和益生菌组大鼠血清中DAO含量分别为(138.93±9.78)、(187.95±12.90)、(147.21±6.92)和(166.47±3.37)pg·mL^(-1),D-LA含量分别为(892.23±49.17)、(1 099.84±137.64)、(956.56±86.04)和(989.61±51.75)μg·L^(-1),结肠组织中SIgA含量分别为(14.04±1.42)、(11.47±2.39)、(11.84±1.49)和(12.93±1.65)μg·mL^(-1),结肠组织中ZO-1蛋白相对表达水平分别为1.18±0.11、0.42±0.04、0.77±0.05和0.95±0.07,occludin蛋白相对表达水平分别为1.35±0.31、0.61±0.17、1.19±0.19和0.88±0.13,AMPK蛋白相对表达水平分别为0.91±0.02、0.35±0.09、0.74±0.08和0.59±0.11。炙红芪组与模型组相比,大鼠血清中DAO、D-LA含量,结肠组织中SIgA含量及ZO-1、occludin、AMPK蛋白相对表达水平在统计学上差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论 炙红芪可通过调节脾气虚大鼠机体中相关炎症细胞因子、肠黏膜上层细胞酶、紧密连接蛋白等的表达,增强对脾气虚大鼠肠道黏膜的保护作用。

基于盲肠内容物代谢组学的炙红芪干预脾气虚大鼠的作用研究

目的 以脾气虚大鼠的盲肠内容物为研究对象,筛选炙红芪干预脾气虚大鼠肠道功能的潜在生物标记物,分析其代谢途径。方法 将60只SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、实验组和对照组,除空白组外,其余大鼠均用三因素复合造模法建立脾气虚模型。实验组灌胃给予12.60 g·kg^(-1)蜜炙红芪水提物;对照组灌胃给予0.63 g·kg^(-1)双歧杆菌乳杆菌三联活菌片混悬液;空白组和模型组均灌胃给予等剂量蒸馏水。检测动物体质量、肛温,计算免疫脏器指数。用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术检测大鼠盲肠内容物代谢物,通过正交偏最小二乘法-判别分析,输入“京都基因与基因组百科全书”数据库,筛选出潜在差异代谢物及可能的代谢通路。结果 干预结束后,实验组、对照组、模型组和空白组的平均体质量分别为(216.87±7.85)、(210.96±9.03)、(159.47±5.18)和(293.51±22.98)g,肛温分别为(36.14±0.48)、(35.40±0.64)、(34.50±0.78)和(36.61±0.34)℃,胸腺指数分别为(1.19±0.20)、(1.24±0.25)、(0.47±0.15)和(1.31±0.21)mg·g^(-1),脾指数分别为(1.95±0.33)、(2.18±0.28)、(1.61±0.27)和(2.29±0.24)mg·g^(-1);与模型组相比,实验组和对照组大鼠的上述指标均显著升高(均P<0.01)。筛选出14种炙红芪干预脾气虚大鼠的潜在生物标志物,主要通过氨基酸代谢、核黄素代谢及腺苷酸活化蛋白激酶代谢等途径发挥作用。结论 炙红芪可通过改善脾气虚大鼠盲肠内容物代谢水平,保护肠黏膜屏障,减少肠道炎症反应,从而发挥健脾补气的作用。

炙红芪-醋莪术对结肠炎相关结肠癌小鼠短链脂肪酸代谢的影响

目的探究炙红芪-醋莪术对结肠炎相关结肠癌(CAC)小鼠短链脂肪酸(SCFAs)的影响。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、柳氮磺胺吡啶组和炙红芪-醋栽术组,每组10只。空白组灌胃给予等量饮用水,其余组用氧化偶氮甲烷联合葡聚糖硫酸钠建立CAC模型。柳氮磺胺吡啶组和炙红芪-醋术组从实验开始就灌胃给予0.455g·kg^(-1)柳氮磺胺吡啶和6.825g·kg^(-1)炙红芪-醋莪术溶液进行干预。用气相色谱-质谱法检测小鼠结肠内容物中SCFAs的含量。结果空白组小鼠结肠内容物中乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、戊酸和已酸的含量分别为(2.80±0.54)、(0.47±0.26)、(0.02±5.90×10^(-3))、(0.82±0.24)、(9.85±2.24)×10^(-3)和(5.45±4.26)×10^(-3)mg·g^(-1)模型组小鼠结肠内容物中乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、戊酸和已酸的含量均较空白组显著降低,分别为(0.71±0.36)、(0.24±0.08)、(6.08±2.54)×10^(-3)、(0.13±0.03)、(3.64±2.14)×10^(-3)和(1.99±0.81)×10^(-3)mg·g^(-1)(均P<0.01)。经炙红芪-醋栽术干预后,结肠内容物中乙酸、丙酸、丁酸、戊酸和已酸的含量均较模型组显著升高,分别为(1.58±0.25)、(0.39±0.04)、(0.34±0.08)、(5.51±1.76)×10^(-3)和(6.67±1.73)×10^(-3)mg·g^(-1)(P<0.05,P<0.01)。结论炙红芪-醋术可以调控CAC小鼠SCFAs的代谢。

炙黄芪和炙红芪干预脾气虚大鼠的药效比较研究

为了探讨炙黄芪与炙红芪干预脾气虚证的药效差异,将110只SD雄性大鼠随机分为10只空白组与100只造模组,造模成功后将造模组分为模型组,补中益气丸组,炙红芪高、中、低剂量组以及炙黄芪高、中、低剂量组,每组10只。空白组正常饲养,模型组持续施加造模条件,补中益气丸组每天灌胃给予18.9g·kg^(-1)补中益气丸水溶液,炙黄芪与炙红芪高、中、低剂量组每天分别灌胃给予18.9、12.6、6.3g·kg^(-1)对应剂量炙黄芪与炙红芪水煎液。给药组每天早晨以10m L·kg^(-1)给予相应药物,空白组与模型组给予同等剂量蒸馏水,每天1次,连续给药15d。药物干预完成后,计算各组大鼠脾脏指数和胸腺指数,对脾脏组织切片,HE染色,并观察病变情况;检测各组大鼠血常规、D-木糖(D-xylose)、胃动素(MTL)、白细胞介素-2(IL-2)、干扰物-γ(IFN-γ)、免疫球蛋白A(IgA)及胃黏膜胃蛋白酶(pepsin)等指标水平。结果显示,与空白组相比,模型组大鼠血常规各项指标、脾脏指数、胸腺指数、D-xylose、IFN-γ、IgA、MTL及pepsin水平均明显下降(P<0.01),IL-2水平明显上升(P<0.01),脾脏病理切片结果显示脾脏病变严重。与模型组相比,各给药组的IL-2水平均明显下降(P<0.05或P<0.01);除炙红芪低剂量组对脾脏指数、胸腺指数、IgA水平差异无统计学意义,炙黄芪中剂量组对脾脏指数差异无统计学意义,以及炙黄芪低剂量组对脾脏指数、胸腺指数、IgA、MTL水平的影响在统计学上没有差异外,其余各组血常规各项指标、脾脏指数、胸腺指数、D-xylose、IFN-γ、IgA、MTL及Pepsin水平均明显上升,具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),各给药组脾脏病变不同程度的恢复。炙红芪各剂量组与炙黄芪各剂量组相比,炙红芪高、中剂量组对血常规白细胞计数(WBC)水平影响均强于炙黄芪对应剂量组(P<0.05),炙红芪高剂量组对IL-2水平影响及炙红芪高、中剂量组对IFN-γ水平影响均高于炙黄芪相应剂量组(P<0.05或P<0.01),炙红芪各对应剂量组对D-xylose及MTL水平影响均高于炙黄芪相应剂量组(P<0.05或P<0.01),其余指标两药之间无差异;同时,通过比较发现,炙红芪与炙黄芪低剂量组(6.3g·kg^(-1))对IL-2及IFN-γ水平恢复并无差异,而炙红芪高剂量组(18.9g·kg^(-1))明显优于炙黄芪高剂量组(IL-2,P<0.01;IFN-γ,P<0.05)。综上,炙黄芪与炙红芪对脾气虚大鼠均有一定治疗作用。免疫调节方面,当给药剂量为6.3g·kg^(-1)以内时,两药免疫调节能力相当;当给药量超过18.9g·kg^(-1)时,炙红芪免疫调节能力明显优于炙黄芪;消化吸收方面,炙红芪消化吸收作用优于炙黄芪。炙黄芪与炙红芪两药在免疫调节与消化吸收作用的差异,有可能是临床用药有别的原因。

红芪与炙红芪补中益气作用对比及成分差异分析

目的比较红芪与炙红芪补中益气作用及成分差异,初步揭示红芪蜜炙炮制机制。方法建立大鼠脾气虚模型,通过红芪与炙红芪不同剂量水提液干预,以大鼠血清木糖(D-xylose)、胃泌素(GAS)、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)为指标,对红芪与炙红芪补中益气药效作用进行比较。基于HPLC法分析红芪和炙红芪醇提液中的差异成分。结果与对照组相比,模型组大鼠血清D-xylose、GAS水平均显著降低(P<0.01),与模型组相比,除红芪低剂量组外,各给药组大鼠血清D-xylose、GAS水平均显著升高(P<0.01),且炙红芪中剂量组D-xylose、GAS水平均显著高于红芪中剂量组(P<0.05、0.01)。与对照组相比,模型组大鼠血清IL-2和TNF-α水平均显著升高(P<0.01),与模型组相比,各给药组大鼠血清IL-2和TNF-α水平均显著降低(P<0.05、0.01);与红芪中剂量组相比,炙红芪中剂量组大鼠血清IL-2和TNF-α水平均显著降低(P<0.05、0.01)。HPLC检测结果表明红芪炮制前后成分发生变化。结论炙红芪和红芪均可以明显干预和改善大鼠脾气虚证,且炙红芪的药效作用优于红芪,炙红芪与红芪中存在差异成分。

红芪与炙红芪对脾气虚大鼠免疫功能的干预作用

目的:研究红芪与炙红芪对脾气虚大鼠免疫功能的干预作用。方法:将90只雄性大鼠随机分为空白组、模型组、炙黄芪组、红芪和炙红芪低、中、高剂量组,每组10只。空白组大鼠正常饲养,其他各组大鼠均施加饮食失节、泻下加疲劳复合因素,复制脾气虚大鼠模型。模型复制成功后,炙黄芪组大鼠灌胃给予10.8 g·kg-1的炙黄芪水煎液,红芪和炙红芪高、中、低剂量组分别灌胃给予16.2,10.8,5.4 g·kg-1的对应剂量红芪与炙红芪水煎液。各药物组大鼠每天早晨以10 mL·kg-1灌胃给予相应药物,空白组和模型组大鼠灌胃给予等剂量蒸馏水。每天一次,连续给药15 d。药物干预完成后,经眼眦静脉采血1 mL置于EDTA抗凝采血管中,直接用血细胞分析仪进行大鼠血液常规分析,经腹主动脉采血,检测各组大鼠血清IL-2和TNF-2含量,并计算各组大鼠脾脏指数和胸腺指数。结果:与空白组相比,模型组大鼠血清白细胞和淋巴细胞数均显著降低(P<0.01);与模型组相比,药物干预后,各给药组大鼠血清白细胞和淋巴细胞计数均有不同程度的恢复(P<0.01);与红芪中剂量组相比,炙红芪中剂量组大鼠血清白细胞和淋巴细胞计数均显著增高(P<0.01)。与空白组相比,模型组大鼠胸腺指数和脾脏指数均显著降低,(P<0.01);与模型组相比,各药物组大鼠胸腺指数和脾脏指数均不同程度升高。与红芪中剂量组相比,炙红芪中剂量组大鼠胸腺指数和脾脏指数均较高(P<0.01和P<0.05)。与空白组相比,模型组大鼠血清IL-2和TNF-α含量均显著升高(P<0.01);与模型组相比,各药物组大鼠血清IL-2和TNF-α含量均不同程度降低(P<0.05或P<0.01);与红芪中剂量组相比,炙红芪中剂量组大鼠血清IL-2和TNF-α含量均明显降低(P<0.01和P<0.05)。结论:红芪与炙红芪均能不同程度提高脾气虚大鼠免疫功能,且炙红芪的干预作用强于红芪。

甘肃道地药材红芪与炙红芪指纹图谱对比研究

目的:建立红芪与炙红芪指纹图谱,比较红芪蜜炙前后指纹图谱差异。方法:采用HPLC色谱技术绘制红芪与炙红芪醇提液指纹图谱,利用相似度软件分析红芪与炙红芪指纹图谱差异。HPLC色谱条件如下:色谱柱:Agilent HC-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-0.01%磷酸水溶液。流速:1.0 mL·min-1;检测波长:280 nm;柱温:30℃;进样量10μL。梯度洗脱程序:0~5 min,乙腈2%~5%;5~20 min,乙腈5%~16%;20~35 min,乙腈16%~18%;35~36 min,乙腈18%~30%;36~66 min,乙腈30%~60%;66~80 min,乙腈60%~90%。结果:红芪与炙红芪甲醇提取液指纹图谱中有19个共有峰,除1,4,6,18,19号峰外,其余共有峰峰面积具有显著性差异。与红芪组相比,炙红芪组9号和2,3,8,10,11,16,17号共有峰峰面积均显著增加,P<0.05和P<0.01。5,7,12,13,14,15号共有峰峰面积显著减少,P<0.01。其中16号峰为毛蕊异黄酮,17号峰为芒柄花素;20号和21号峰为炙红芪组新出现的色谱峰。结论:红芪与炙红芪醇提液指纹图谱存在差异,红芪蜜炙前后化学成分存在量与质的差异,表明蜜炙过程对红芪中化学成分影响显著,可以采用指纹图谱对红芪与炙红芪做鉴别和质量控制。

基于多元统计分析的红芪蜜炙前后成分差异研究

目的比较红芪蜜炙前后化学成分差异,分析其差异标志物,为红芪蜜炙炮制机理及红芪与炙红芪质量标准研究提供参考。方法采用HPLC建立红芪与炙红芪样品指纹图谱,并测定香草酸、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素含量;采用SIMCA14.1软件对红芪与炙红芪各10批样品共有峰峰面积数据进行主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)。结果红芪和炙红芪指纹图谱有19个共有峰,20、21号峰为红芪蜜炙后出现的色谱峰。炙红芪中毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷和香草酸含量均显著降低(P<0.01),分别降低48.00%、21.74%和48.24%;毛蕊异黄酮和芒柄花素含量均显著上升(P<0.01),分别上升34.18%和17.49%。多元统计分析结果显示,红芪蜜炙前后化学成分存在显著差异,毛蕊异黄酮苷、芒柄花素、香草酸、毛蕊异黄酮及芒柄花苷为其差异主要指标性成分。结论红芪与炙红芪成分差异显著,红芪蜜炙后产生了新的成分,毛蕊异黄酮苷、芒柄花素、香草酸、毛蕊异黄酮及芒柄花苷可作为二者的差异标志物。

炙红芪和炙黄芪对脾气虚大鼠脑肠功能的影响

目的 研究炙红芪和炙黄芪对脾气虚大鼠脑肠功能的影响。方法 取SPF级雄性大鼠50只,其中10只作为空白组,40只采用过度疲劳、限制饮食、苦寒泻下三因素复合造模。模型复制成功后随机分为模型组、炙红芪组、炙黄芪组和补中益气丸组,炙红芪和炙黄芪组灌胃1.26 g·mL^(-1)水煎液,补中益气丸组灌胃1.89 g·mL^(-1)水煎液,给药量10 mL·kg^(-1),空白组和模型组灌胃同体积蒸馏水,实验中测定大鼠体质量、肛温及游泳时间。给药结束,测定大鼠胸腺及脾指数,用酶联免疫吸附(ELISA)法测定大鼠血清白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、环氧合酶-2(COX-2)、二胺氧化酶(DAO)、分泌型免疫球蛋白A(SIgA)、多巴胺(DA)及血管活性肠肽(VIP)含量。结果 模型组较空白组大鼠体质量、肛温及游泳时间均显著降低,脾及胸腺指数显著降低;炙红芪组和炙黄芪组能够改善脾气虚大鼠的胸腺质量、胸腺指数、脾质量和脾指数。空白组、模型组、炙红芪组、炙黄芪组和补中益气组大鼠血清IL-6含量分别为(63.88±1.75)、(98.82±6.62)、(80.77±7.57)、(80.42±3.93)和(70.23±2.86)pg·mL^(-1),IFN-γ含量分别为(1 302.14±115.90)、(400.71±62.21)、(671.43±65.68)、(625.71±96.58)和(960.00±39.05)pg·mL^(-1),TNF-α含量分别为(119.05±4.96)、(287.76±26.78)、(188.10±13.16)、(210.98±16.41)和(140.74±7.21)pg·mL^(-1),COX-2含量分别为(17.22±4.77)、(46.08±5.52)、(27.30±4.50)、(27.86±3.56)和(21.40±3.68)pg·mL^(-1),DAO含量分别为(89.49±5.81)、(158.06±8.39)、(111.65±6.70)、(120.48±5.43)和(109.97±6.91)pg·mL^(-1),SIgA含量分别为(79.01±4.99)、(42.01±4.34)、(68.54±6.33)、(59.54±7.55)和(72.72±8.33)μg·mL^(-1),DA含量分别为(78.31±9.85)、(48.09±6.66)、(71.45±11.05)、(64.33±4.38)和(67.59±12.52)pg·mL^(-1),VIP含量分别为(59.56±6.67)、(142.64±8.10)、(108.35±6.61)、(106.85±15.78)和(74.29±4.02)pg·mL^(-1)。模型组的上述指标与空白组比较,炙红芪组、炙黄芪组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 炙红芪和炙黄芪可能通过调节免疫、脑和胃肠道功能达到对脾气虚的治疗效果。

炙红芪对脾气虚大鼠肠道菌群组成与短链脂肪酸代谢的调节作用

目的 探究炙红芪对脾气虚模型大鼠肠道菌群组成及短链脂肪酸代谢的影响。方法 用疲劳、限制饮食、泻下三因素复合造模方法进行脾气虚模型大鼠复制,并随机分为模型组、实验组,每组15只;另取15只正常SD大鼠作为空白组。实验组灌胃给予12.6 g·kg^(-1)炙红芪水提液,空白组和模型组均灌胃给予等剂量的蒸馏水。用16SrRNA检测大鼠肠道菌群组成;用GC-MS法检测结肠内容物短链脂肪酸含量,并进行差异菌属筛选及相关性分析。结果 空白组、模型组和实验组的Ruminococcaceae_UCG-005相对丰度分别为36.32±9.31×10^(-3)、3.58±1.37×10^(-3)和32.77±6.67×10^(-3),g_Bifidobacterium相对丰度分别为4.60±5.46×10^(-3)、91.78±4.30×10^(-2)和12.07±9.83×10^(-3),g_Faecalibaculum相对丰度分别为0.78±0.30×10^(-3)、43.80±5.47×10^(-3)和16.94±1.88×10^(-3),总短链脂肪酸含量分别为(21.98±1.85)、(10.48±3.17)和(17.26±3.10) mg·g^(-1)。模型组的上述指标与实验组和空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。差异菌属与短链脂肪酸有一定的相关性。结论 炙红芪可能通过调节肠道菌群,改善短链脂肪酸代谢起到治疗脾气虚大鼠作用。

红芪蜜炙前后配伍醋莪术抗结肠炎相关结直肠癌的药效比较研究

目的:基于转录组学结合免疫浸润分析探讨红芪蜜炙前后配伍醋莪术抗结肠炎相关结直肠癌(CAC)的药效及潜在机制差异。方法:75只SPF级C57/6J小鼠随机分为5组:空白组、氧化偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸钠(DSS)组、柳氮磺胺吡啶阳性对照组、红芪∶醋莪术(4∶1)组(6.825 g/kg)及炙红芪∶醋莪术(4∶1)组(6.825 g/kg)。采用AOM与DSS联合诱导CAC小鼠模型的同时,各给药组给药干预,空白组给予0.9%氯化钠溶液,干预17周后实验结束。计算各组小鼠体质量、DAI评分、结肠长度、肿瘤计数、生存指数、结肠长度/结肠质量、结肠及脾、胸腺、肝、肺、肾与心等脏器指数,HE染色观察小鼠结肠病变情况,ELISA法检测小鼠血清白介素(IL)-1β及肿瘤坏死因子(TNF)-α表达水平,有参转录组测序结合免疫浸润分析筛选并预测给药后免疫细胞表达情况,流式细胞术对所筛选的免疫细胞进行检测。结果:与AOM/DSS组比较,炙红芪-醋莪术与红芪-醋莪术均可显著升高CAC小鼠体质量、结肠长度、生存率及胸腺指数(P<0.05,P<0.01),显著降低DAI评分、肿瘤计数、HE病理评分、结肠长度/结肠质量及结肠、脾、胸腺、肝、肺等脏器指数与血清IL-1β与TNF-α表达水平(P<0.05,P<0.01);但从结肠HE病理切片评分及TNF-α水平来看,炙红芪-醋莪术的作用要显著优于红芪-醋莪术(P<0.05,P<0.01)。有参转录组测序结合免疫浸润分析发现,红芪-醋莪术与炙红芪-醋莪术均可通过上调小鼠脾脏CD4^(+)T淋巴细胞、CD8^(+)T淋巴细胞及CD19+B淋巴细胞表达量,降低CD4^(+)T/CD8^(+)T值;但对小鼠脾脏CD8^(+)T淋巴细胞表达的影响,炙红芪-醋莪术作用显著优于红芪-醋莪术(P<0.01)。结论:红芪-醋莪术与炙红芪-醋莪术均具防治CAC作用,机制与调节机体T、B淋巴细胞表达量,改善机体免疫,从而改善炎症状态,延缓炎症进程,改善结肠病变有关。但炙红芪-醋莪术防治CAC优于红芪-醋莪术的机制主要与降低小鼠脾脏CD8^(+)T淋巴细胞与血清TNF-α水平,从而改善小鼠结肠炎病理损伤有关。