间充质干细胞外泌体调节哺乳动物雷帕霉素靶点/p70核糖体蛋白S6激酶/盘卷肌球蛋白样Bcl-2-相互作用蛋白通路改善糖尿病肾病大鼠肾损伤的机制研究

目的探讨间充质干细胞外泌体(MSC-EVs)通过调节哺乳动物雷帕霉素靶点(mTOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(S6K1)/盘卷肌球蛋白样Bcl-2-相互作用蛋白(Beclin 1)通路改善糖尿病肾病(DN)大鼠肾损伤的机制。方法采用高脂饮食联合腹腔链脲佐菌素(STZ)注射的方法建立SD大鼠DN模型,随机分为模型组、MSC-EVs组、MSC-EVs+MHY1485(mTOR激活剂)组,每组12只。另取12只SD大鼠以正常饲料喂养6周后,腹腔注射同等剂量柠檬酸钠溶液作为对照。以MSC-EVs和MHY1485分组处理后,检测大鼠血糖及肾功能指标[血尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)、尿微量白蛋白(UmALB)]水平。采用苏木精-伊红(HE)染色检测各组大鼠肾组织病理形态;采用免疫组化检测各组大鼠肾组织mTOR/S6K1/Beclin 1通路相关蛋白表达;采用蛋白免疫印迹法检测各组大鼠肾组织mTOR/S6K1/Beclin 1通路及自噬相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组大鼠肾组织形态发生损伤,血糖、BUN、Scr、UmALB、p-mTOR及p-S6K1相对阳性表达、p-mTOR/mTOR、p-S6K1/S6K1显著升高(P<0.05),微管相关蛋白1A/1B轻链3(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin 1蛋白表达、Beclin 1相对阳性表达显著降低(P<0.05);与模型组相比,MSC-EVs组大鼠肾组织形态损伤减轻,血糖、BUN、Scr、UmALB、p-mTOR及p-S6K1相对阳性表达、p-mTOR/mTOR、p-S6K1/S6K1显著降低(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin 1蛋白表达、Beclin 1相对阳性表达显著升高(P<0.05);与MSC-EVs组相比,MSC-EVs+MHY1485组大鼠肾组织形态损伤加重,血糖、BUN、Scr、UmALB、p-mTOR及p-S6K1相对阳性表达、p-mTOR/mTOR、p-S6K1/S6K1显著升高(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin 1蛋白表达、Beclin 1相对阳性表达显著降低(P<0.05)。结论MSC-EVs可增强自噬,降低DN大鼠血糖、SCr、BUN和尿蛋白水平,减轻肾组织损伤,其机制可能与抑制mTOR/S6K1/Beclin 1通路激活有关。

环状RNA SAMD8调控miR-223-3p/RHOB表达抑制胰腺导管腺癌进程的分子机制

目的探讨环状RNA SAMD8(circ-SAMD8)在胰腺导管腺癌(PDAC)进展中的潜在机制。方法基于Microarray数据(GSE79634)分析PDAC组织中circRNAs的表达谱。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)验证circ-SAMD8(hsa_circ_0006148)在PDAC组织和细胞(CFPAC-1和PANC-1)中的表达。采用生物信息学分析预测circ-SAMD8的靶微小RNA(miRNA)及其下游mRNA,并采用双荧光素酶报告基因实验进行鉴定。采用MTT法和集落形成法检测PDAC细胞的增殖能力。采用免疫印迹法(Western blot)检测抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的表达水平。采用流式细胞术检测凋亡细胞百分比。结果circ-SAMD8在PDAC组织和细胞中的表达水平低于癌旁组织和正常细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达circ-SAMD8能有效促进PDAC细胞凋亡,抑制PDAC细胞增殖。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-223-3p是circ-SAMD8的一个潜在相互作用分子,miR-223-3p的下游mRNA靶点是RHOB。miR-223-3p在PDAC组织和细胞中异常过表达,并伴有RHOB低表达。在转染miR-223-3p模拟物或sh-circ-SAMD8的PDAC细胞中,RHOB表达显著降低,增殖能力增强,凋亡率降低。结论circ-SAMD8通过海绵化miR-223-3p,调控下游RHOB的表达,有效抑制PDAC的发生发展。

一种基于P2P点组技术的流媒体协作计算

分析了流媒体技术的现状和问题,讨论了在P2P环境下的流媒体多点分布式调度技术和调度性能分析,以及多点调度下的带宽分配算法,最后给出了一个基于P2P点组的流媒体协作调度模型。

应用量子点技术检测Bcl-2和P53在皮肤血管瘤中的表达

目的通过量子点技术检测Bcl-2和P53在增生期、退化期皮肤血管瘤及正常组织中的表达,进一步阐明Bcl-2和P53在皮肤血管瘤细胞增殖与凋亡中的作用。方法选取武汉大学人民医院病理科2007年至2010年皮肤毛细血管瘤存档蜡块38例(男性16例,女性22例),血管瘤周围正常皮肤组织5例。对所有标本进行常规苏木精-伊红染色,并使用免疫组织化学SP法检测增殖细胞核抗原(PCNA),根据Mulliken提出的分类标准并结合PCNA的表达情况将所有血管瘤组织分为增生期组和退化期组。然后采用免疫组织化学SP法以及量子点双染技术检测38例皮肤血管瘤及5例正常瘤旁皮肤组织中Bcl-2和P53蛋白及PCNA的表达水平;采用多光谱成像系统对量子点染色结果进行图像分析,并用SPSS 13.0软件对各组量子点染色分析后的数据行单因素方差分析和SNK(q)检验,检验水准α为0.05。结果①38例标本中,增生期血管瘤有24例,退化期血管瘤有14例。②免疫组织化学SP法显示,增生期血管瘤有Bcl-2和P53表达,瘤旁正常皮肤组织中和退化期血管瘤组织中Bcl-2和P53表达极弱或无表达。③量子点染色及统计分析显示,Bcl-2和P53在增生期血管瘤中的表达显著高于退化期血管瘤和瘤旁正常皮肤组织(均P<0.05),而退化期血管瘤和瘤旁正常皮肤组织之间Bcl-2和P53的表达差异无统计学意义。结论 Bcl-2和P53在皮肤血管瘤的发生发展中发挥重要作用。Bcl-2可能是通过抑制血管瘤增生期内皮细胞的凋亡,使其增殖和凋亡失衡;P53可能促进内皮细胞的增殖,使血管内皮细胞大量生成。

P2P软件和服务提供商著作权侵害刑事责任探究——以P2P技术架构为切入点

P2P去中心化的技术架构决定通常直接侵害著作权的终端用户难以被追责,由此产生P2P软件和服务提供商是否应为终端用户行为负责的问题。域外典型案件表明,不同P2P技术架构下网络服务商在著作权侵害中所起的作用、对用户侵害著作权的知悉可能性以及对于用户的监督控制能力大相径庭,因而是采取集中或混合式架构还是分散式架构对于P2P网络商的责任评价可能产生不同影响,有必要针对其提供P2P软件和服务的行为,就教唆犯与帮助犯各自的成立条件基于不同的技术架构予以仔细分析。《刑法修正案(九)》试图通过共犯正犯化的规定彻底解决网络服务商刑事责任的有关问题,但因不考虑技术的特性而显得有些"冒进",需要予以反思。

基于P2P技术的VOD视频点播系统应用与实践

关于VOD视频点播,是一种能够以用户为主导的音频信息系统。而相对于传统的视频点播系统而言,其C/S的框架结构得以改变,出现较大的管理以及维护开销,拓展性无法体现。该次研究提出了基于P2P技术的VOD视频点播系统,探索其具体的应用与实践,结合某图书馆多媒体数字化系统分析,分析应用实效。

论P2P视频点播技术的开发与应用

在传统流媒体服务系统中,由于用户数量较多,服务器负载较大,网络带宽较小,形成了流媒体系统发展的瓶颈,而P2P技术解决了这一问题。本文从P2P视频点播技术的构建及优点出发,论述了P2P视频点播技术的开发与设计,并详细的分析了P2P视频点播在网络对等点的应用。

P∗(κ)-线性权互补问题的一种全牛顿步可行内点算法

本文提出一种求解P∗(κ)-线性权互补问题(LWCP)的新全牛顿步可行内点算法.首先基于一个连续可微的核函数,构造新代数等价变换,得到光滑中心路径的等价形式.然后沿着搜索方向使用全牛顿步,无需进行线搜索,节省运行内存.最后分析算法的可行性及收敛性,并通过数值算例验证算法的有效性.

基于ADMM的完全去中心化P2P能源交易机制

为研究完全去中心化的点对点(peer-to-peer,P2P)能源市场中产消者的最优清算问题,重点解决产消者内部的协作和在P2P市场中实现社会福利最大化的挑战,采用了一种新的平行、分布式的交替方向乘子法(alternating direction method of multipliers,ADMM),推导出P2P市场的交易机制。该方法考虑每个产消者的效用函数,并引入分布式发电机(distributed generator,DG)和电能存储系统(battery energy storage system,BESS)。算法中每个产消者通过迭代与其相邻的产消者同步交换少量信息,并优化以满足不同的需求。通过对6-peers系统的数值验证,证明了所提出方法的有效性。与基于池的交易机制相比,完全去中心化的P2P问题在单位时间内交易电量提升了160%,社会福利从-9.47元增加到32.43元。

L2-P5三靶点绕障拱型水平井钻井技术

介绍了胜利油田L2-P5三靶点绕障拱型水平井的设计和施工情况,重点分析了该井直井段和水平段井眼轨迹控制技术,对施工中出现的问题进行了分析并给出了相应的对策,为该区类似井钻井提供了有益的借鉴。

基于miR-34a-5p/SIRT1通路探讨壮医药线点灸治疗偏头痛模型大鼠的作用机制

目的观察壮医药线点灸对偏头痛模型大鼠脑组织miR-34a-5p/SIRT1通路的影响,探讨其治疗偏头痛的作用机制。方法40只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、点灸组、点灸+EX-527组、点灸+生理盐水组,每组8只。皮下注射硝酸甘油制备偏头痛大鼠模型,点灸组、点灸+EX-527组和点灸+生理盐水组予壮医药线点灸“脐环穴”(3穴、6穴、9穴、12穴)、“合谷”(双)、“太冲”(双)干预,点灸+EX-527组腹腔注射EX-527(5 mg/kg),点灸+生理盐水组腹腔注射生理盐水(5 mg/kg),空白对照组和模型对照组仅固定,不干预,每日1次,共14次。对大鼠进行行为学评分,ELISA测定血清降钙素基因相关肽(CGRP)、核因子(NF)-κB、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量,qPCR检测中脑组织miR-34a-5p、沉默信息调节因子(SIRT)1、NF-κB p65 mRNA表达,Western blot检测中脑组织SIRT1、Ac-NF-κB p65、NF-κB p65、TNF-α蛋白表达,HE染色、TUNEL染色分别观察中脑组织神经细胞形态和细胞凋亡情况。结果与空白对照组比较,模型对照组大鼠行为学评分升高(P<0.01),血清CGRP、NF-κB、TNF-α含量增加(P<0.01),中脑组织miR-34a-5p、NF-κB p65 mRNA表达升高(P<0.01),SIRT1 mRNA和蛋白表达降低(P<0.01),NF-κB p65、Ac-NF-κB p65和TNF-α蛋白表达升高(P<0.01);与模型对照组比较,点灸组大鼠行为学评分降低(P<0.05),血清CGRP、NF-κB、TNF-α含量减少(P<0.05),中脑组织miR-34a-5p、NF-κB p65 mRNA表达降低(P<0.05),SIRT1 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),NF-κB p65、Ac-NF-κB p65和TNF-α蛋白表达降低(P<0.05);与点灸组比较,点灸+EX-527组大鼠行为学评分升高(P<0.05),血清CGRP、NF-κB、TNF-α含量增加(P<0.05),中脑组织miR-34a-5p、NF-κB p65 mRNA表达升高(P<0.05),SIRT1 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),NF-κB p65、Ac-NF-κB p65和TNF-α蛋白表达升高(P<0.05)。各组大鼠中脑组织形态未见异常,无明显细胞凋亡。结论壮医药线点灸可抑制偏头痛模型大鼠中脑组织miR-34a-5p表达,促进SIRT1表达,使NF-κB p65去乙酰化,降低血清CGRP、NF-κB、TNF-α含量,从而调控炎症反应,发挥治疗偏头痛作用。

一种基于点路结合的骨干网P2P缓存部署方法

P2P应用的广泛流行给ISP骨干网络带来了前所未有的流量压力,P2P缓存(peer-to-peer caching)技术是目前缓解这种流量压力的最有效手段之一,缓存部署方法对P2P缓存系统的运行效率有重要影响.已有缓存部署方法分为两类:基于骨干节点的部署方法(node-based cache deployment,NCD)和基于骨干链路的部署方法(link-based cache deployment,LCD).在不同的P2P流量分布情形下,NCD与LCD各有优劣,但是,这两类方法未能充分发挥缓存的性能.提出一种基于点路结合的骨干网P2P缓存部署方法(node-Link based cache deployment,NLCD),根据缓存部署过程中P2P流量分布和缓存存储状态的动态变化,灵活选择骨干节点或骨干链路作为部署位置.建立了以网络负载最小化为目标的缓存部署模型,基于该模型将P2P缓存部署问题建模为一个最优化问题,由于流量分布和缓存状态会在部署过程中不断变化,不具有最优子结构性质.证明了该最优化问题为NP完全问题,并设计了一种启发式贪婪算法进行求解.实验结果表明,针对典型的H&S型、Ladder型骨干网络拓扑,使用NLCD的平均链路使用率比使用LCD低5%～15%,比使用NCD低7%～30%.

口腔颊癌p16INK4/CDKN2基因的纯合子缺失与点突变

目的探讨p16基因纯合子缺失和点突变与颊癌发生、发展的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)、DNA单链构象多态性(SSCP)分析和DNA测序技术研究30例颊癌及10例颊黏膜白斑p16基因纯合子缺失和点突变的情况,并应用免疫组化检测基因改变组织中P16蛋白质的表达。结果颊白斑和正常颊黏膜无p16基因的纯合子缺失和点突变。在30例颊癌标本中,7例标本p16纯合子缺失,纯合子缺失率是23.3%(7/30);5例颊癌出现点突变,均发生在第2外显子上,点突变率为16.7%(5/30)。经DNA直接测序,发现5例点突变均为错义突变,其中3例突变位点相同,均在第99密码子上由GAT突变为AAT,由门冬酰胺取代门冬氨酸;对纯合子缺失和点突变的12例颊癌组织进行P16蛋白的检测,发现11例标本P16蛋白表达缺失,1例点突变标本表达正常。结论p16基因纯合子缺失和点突变是颊癌基因失活的主要形式,与颊癌的发生、发展密切相关。

采用PCR—RFLP技术分析石蜡包埋胃癌组织ras和p53基因点突变

采用多聚酶链延伸反应一限制性片段长度多态性分析（ＰＣＲ—ＲＦＬＰ）法对福尔马林固定、石蜡包埋胃癌组织ｒａｓ和ｐ５３基因点突变进行分析，结果表明，Ｃ—Ｈａ—ｒａｓ第１２位密码子突变率为１３．６％（１２／８８），第６１位密码子为３．８％（３／８０）；Ｃ—Ｋｉ—ｒａｓ第１２位密码子点突变率为７．２％（５／６９），第１３位密码子未发现有点突变者；Ｎ—ｒａｓ第１２位密码子点突变率为１．４％（１／６８）。ｐ５３基因第２４８位密码子点突变率为７．４％（５／６８），第２４９位密码子未见有点突变者。以上提示采用ＰＣＲ—ＲＦＬＰ技术可对多数从石蜡包埋胃癌组织提取的ＤＮＡ进行ｒａｓ和ｐ５３基因点突变分析。

应用PCR产物直接银染测序技术检测大肠癌p53基因点突变

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ结合ＰＣＲ产物直接银染测序技术对２４例大肠癌ｐ５３基因第５～７外显子进行点突变的研究。结果检出５例（２６７％）阳性，均为错义突变；其中３例为碱基ＧＣ到ＡＴ的转换，１例为ＧＣ到ＴＡ的颠换，另１例为ＡＴ到ＣＧ的颠换，后者尚未见报道。突变位点分布在ｐ５３基因第１４１、１７５、２４５、２４８和２５８位密码子，其中４例发生在ＣｐＧ位点。本文对ｐ５３基因点突变谱的分析为大肠癌的病因学研究提供了科学依据，并讨论了ＰＣＲ产物直接银染测序技术的优越性。

坐骨神经分支选择性损伤模型L4～6背根神经节水平不同时间点P2X3mRNA表达变化

目的观察坐骨神经分支选择性损伤（SNI）动物制作型模后不同时间点L4~6背根神经节（DRG）水平P2X3mRNA的表达情况,探讨外周P2X3mRNA在神经病理性痛模型不同阶段中的作用。方法 54只健康雄性SD大鼠完全随机分为空白对照（control）组、假手术（sham surgery）组和手术（surgery）组。通过结扎腓总神经及切断胫神经,保留腓肠神经的方法建立SNI模型。动态观察造模前、造模后1d、3d、7d和14d双侧足跖机械痛阈;Real-time PCR法检测患侧造模后3d、7d和14d L4~6 DRG水平P2X3mRNA表达情况。结果模型制作后各时间点,surgery组大鼠患侧足跖痛阈明显降低（P〈0.05）,sham surgery组大鼠与control组比较差异无显著性（P〉0.05）;各组大鼠健侧足跖痛阈于模型制作后各时间点均无显著变化（P〉0.05）。模型制作后3d、7d,surgery组大鼠L4、L5、L6 DRG水平P2X3mRNA表达均有不同程度的提高（P〈0.05）;而模型制作后14d,surgery组大鼠L5、L6DRG水平P2X3mRNA表达明显减少（P〈0.05）,L4 DRG水平P2X3mRNA表达仍显著多于sham surgery组（P〈0.05）。模型制作后各时间点、各DRG水平,sham surgery组和surgery组大鼠P2X3mRNA表达差异均无显著性（P〉0.05）。结论外周P2X3mRNA参与SNI模型疼痛的产生和维持,且其在不同阶段发挥的作用不同。

毛细管电泳技术快速检测p53基因点突变

目的 探讨利用毛细管电泳技术快速检测 p5 3基因点突变的临床应用价值。方法 采用毛细管电泳作 SSCP分析 ,检测 2 0例结肠癌肿瘤标本 p5 3基因第 7外显子 PCR扩增产物 ,并与传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳结果进行比较 ,最后用 DNA序列测定判断其准确性。结果 2 0例结肠癌标本中 ,毛细管电泳技术检测出 5例标本( Ca4,Ca6,Ca7,Ca8,Ca14)有突变 ,而凝胶电泳结合银染技术仅检出 4例标本 ( Ca4,Ca6,Ca7,Ca14)有突变 ,测序证实经毛细管电泳所检出的 5例标本均存在点突变。结论 对于 PCR产物的单链构象多态性分析 ,毛细管电泳技术是一种更加快速、简便、敏感的方法 。

肝癌非高发区安徽省肝细胞癌p53基249密码子点突变的研究

目的： 研究 p53基因 249密码子在肝癌非高发区安徽省的点突变的发生率。方法：应用 PCR- RFLP技术分析肝细胞癌 p53基因 249密码子突变的频率。结果：所检测的 38例肝细胞癌均无出现 p53基因第七外显子纯合性缺失， 4例有 p53基因 249密码子的点突变，且均为杂合型突变，突变率为 10.53％ (4/38)。结论：本资料说明，在肝细胞癌非高发区中 ,肝细胞癌中 p53基因第七外显子发生的点突变并非为高发事件。提示 p53基因第七外显子的点突变在肝癌非高发区肝细胞癌的形成过程中可能不起主导作用。

p53基因缺失和248位密码子点突变与肺癌发生和预后间关系的研究

以野生型p53cDNA片段作探针，采用DNA分子印迹杂交（Southernblot）技术检测20例原发性肺癌和10例肺良性病变p53基因缺失与重排。肺癌组阳性率为30％；肺良性病变组均为阴性。同时采用聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）检测20例原发性肺癌，2例肺转移癌以及它们相应的非癌肺组织p53基因248位密码子点突变。结果发现，4例原发性肺癌和2例肺转移癌有p53基因248位密码子点突变，非癌肺组织均为阴性。P53基因缺失和突变与肿瘤大小、分期、非小细胞肺癌病理分型无关（P＞0．05），与肿瘤转移有关（P＜0．05）。提示：p53基因缺失和突变与肺癌的发生和预后密切相关。

P2P网络多视点立体视频传输的数据块调度策略

立体视频数据量大、编码结构复杂,因此视频数据块的重要性和紧急程度对视频的播放质量有更大的影响作用。综合考虑立体视频播放质量和网络传输效率,提出一种联合优先级和随机传输的P2P数据块调度算法。依据数据块的重要性、紧急性和稀有性计算传输优先级别,同时评估邻居节点传输能力,利用多余带宽传输随机数据块。该算法能够提供优越的视频播放质量,并能够使数据块均匀分布,保证系统传输性能。仿真实验通过分析视频PSNR、启动延迟、节点吞吐量和数据到达率等指标,证明了该算法的有效性。