草鱼对点状气单胞菌菌苗的免疫反应

将点状气单胞菌用福尔马林、苯酚以及加热来灭活后，给草鱼注射接种，通过测定免疫鱼血清凝集抗体效价、血液中吞噬细胞的吞噬活性和强毒攻击的免疫保护力，证实了３种方法灭活的菌苗对草鱼均具有较强的免疫原性，并以苯酚灭活菌苗的免疫保护力最强。

草鱼对点状气单胞菌和柱状屈桡杆菌二联菌苗的免疫反应

将酚灭活的点状气单胞菌和柱状屈桡杆菌菌苗按不同比例制备成二联菌苗，注射接种草鱼后，通过检测受免草鱼血清中的凝集抗体效价和攻毒试验，初步证明了由这两种菌制备的酚灭活菌苗，可刺激草鱼产生良好的免疫反应，免疫保护力达到５６．０％～７３．０％。

草鱼肠型点状气单胞菌的分离和鉴定

从发病草鱼中分离出1株细菌。经形态学、染色特性、溶血性和理化特性鉴定为肠型点状气单胞菌。致病性试验中小白鼠和草鱼分别于48h和72h内全部死亡,并从小白鼠和草鱼中回收到分离菌。药敏试验表明,该菌对常用抗生素呈不同程度的敏感性。

肠型点状气单胞菌和鱼害粘球菌融合子的构建

为探索鱼类病原菌融合疫苗制备的可行性,以肠型点状气单细胞菌58-20-9菌株和鱼害粘球菌G4菌株作为初发菌株进行原生质体融合,构建融合子.在酶解温度37℃下,筛选出最适酶解时间为40min,最适溶菌酶质量浓度为4mg/mL.以PEG为促融剂的条件下,58-20-9菌株与G4菌株的原生质体进行了融合,58-20-9菌株的原生质体形成率为54.7%,原生质体再生率为18.2%,G4菌株的原生质体形成率为50.8%,原生质体再生率为12.2%,初筛的原生质体融合率为4‰.点种500个初筛融合子菌落在双抗培养基上连续传代12次,得到1个稳定的融合子菌落,其稳定率为0.2%.

肠型点状气单胞菌和鱼害粘球菌的融合子特性研究

为了探索病原菌融合疫苗制备的可行性及其理论基础,查明鱼类病原菌融合子的遗传规律,本研究对草鱼肠炎病和烂鳃病病原的融合子特性进行了研究,结果表明:筛选的融合子菌株菌体大小、酶类性状及生理生化指标介于两亲本菌株之间;融合子菌株具有致病性,用融合菌株制成灭活抗原进行抗原性研究,免疫保护率达74．9％和75．5％,抗体效价于第4周达到峰值,分别为1:322．5和1:435．5。

肠型点状气单胞菌口服疫苗微粒的制备及体外释放研究

采用复乳溶剂挥发法,以聚丙烯酸树脂Ⅲ为材料制备肠型点状产气单胞菌疫苗微球,进行了条件优化。研究结果显示,制备得到的口服疫苗微粒形态良好,平均粒径(6.78±0.07)μm,载药量和包封率分别为(6.04±0.07)%和(63.52±0.06)%,19 d时的累积体外释放百分率为65%。复乳溶剂挥发法置备的肠型点状产气单胞菌疫苗微球工艺可行,重复性良好,有一定的缓释特性。

肠型点状产气单胞菌口服疫苗对草鱼的免疫保护效应研究

采用生物可降解材料聚丙烯酸树脂制备含肠型点状产气单胞菌的微粒疫苗,口服免疫草鱼,测定实验鱼血清抗体及其对活菌攻击的保护率.实验结果显示,用肠型点状产气单胞菌微粒疫苗进行口服免疫或用全菌疫苗、佐剂疫苗进行注射免疫均可诱导草鱼的血清抗体应答,对肠型点状产气单胞菌攻击的草鱼具有一定的保护作用,保护率分别为52.4%、66.7%及71.4%,对照组仅有16.0%的存活率.可见,口服微粒疫苗对草鱼有显著免疫保护效应,可作为预防肠型点状产气单胞菌感染的疫苗.

中华绒螯蟹点状产气单胞菌的分离鉴定与药敏试验

为确定诱发中华绒螯蟹肠炎的病原菌,筛选潜在的防控药物,采用传统方法从患肠炎的中华绒螯蟹体内分离到一株病原菌（DD5）,通过API20E 细菌鉴定系统和16SrDNA 序列分析对菌株DD5进行了鉴定,并采用KB纸片扩散法对菌株DD5的抗菌药物敏感性进行了测定.结果表明,菌株DD5为点状产气单胞菌（GenBank登录号：KP260655）,其16SrDNA 序列与基因库中气单胞菌属菌株的16SrDNA 序列有99% ～100% 的同源性,而且与点状产气单胞菌136c株（GenBank 登录号：EU488688）的亲缘关系最近.此外,菌株DD5对四环素、链霉素、卡那霉素、庆大霉素、恩诺沙星、氧氟沙星、左氟沙星、复方新诺明等抗菌药物高度敏感.本研究证实点状产气单胞菌是中华绒螯蟹肠炎的病原菌,恩诺沙星、庆大霉素等常规渔药可作为点状产气单胞菌引起的中华绒螯蟹肠炎的防控用药.

兴国红鲤血细胞对肠型点状产气单胞菌免疫反应的研究

用肠型点状产气单胞菌 (Aeromonaspunctataf.intedtinalis)福尔马林灭活菌苗免疫兴国红鲤 ,于免疫后 2 0d和 4 0d对其脾、胸腺、头肾和体肾中的淋巴细胞、中性粒细胞和单核细胞的总值 (含原始型、未成熟和成熟型细胞的百分比值 )进行了测定。结果显示 :免疫后 2 0d和 4 0d ,脾中淋巴细胞总值显著增加 ,中性粒细胞和单核细胞总值则显著减少。头肾中淋巴细胞总值稍有增加 ,中性粒细胞和单核细胞的总值在免疫后 2 0d减少 ,免疫 4 0d增加。体肾中淋巴细胞和单核细胞总值在 2 0d和 4 0d均为增加。胸腺中淋巴细胞总值在 2 0d无变化 ,4

草鱼点状产气单胞菌单克隆抗体的制备与双抗原夹心ELISA法的建立

为了建立一种快速、准确能早期检测草鱼肠炎病原菌的方法,以患病草鱼为材料,制备点状产气单胞菌单克隆抗体(McAb),并鉴定其特异性和抗原表位;采用过碘酸钠方法,以辣根过氧化物酶标记单抗,用试管凝集试验测定其活性;建立点状产气单胞菌McAb的双抗原夹心ELISA检测方法,确定包被单抗和酶标单抗的浓度,并测定其灵敏度和特异性。结果:1)获得了2株特异性强和抗原表位不同的单抗,其ELISA效价为1∶16 000。2)辣根过氧化物酶标记的抗体活性为1∶640。3)建立了包被抗体稀释度为1∶800、酶标抗体稀释度为1∶1 600的双抗原夹心ELISA检测方法,该方法与点状产气单胞菌呈强阳性反应,与近似菌无交叉反应,灵敏性为7×103cfu/mL。结论:制备的点状产气单胞菌McAb的效价高、特异性强;建立的双抗原夹心ELISA方法操作简单、灵敏度高、特异性强,可应用于草鱼肠炎病原体的早期快速检测。

草鱼肠型点状产气单胞菌McAb制备及鉴定

为获得草鱼肠型点状产气单胞菌McAb,从患细菌性肠炎的草鱼机体上分离肠型点状产气单胞菌制成免疫原,免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,获得1株特异的针对肠型点状产气单胞菌的单克隆抗体杂交瘤细胞株,命名为AM,用吉姆萨染色,其染色体条数平均在90-100条。小鼠腹腔扩大培养,其腹水单克隆抗体的ELISA效价为1∶16000,与其他细菌无明显的交叉反应,抗体类型为IgG1。证明实验制备的抗体为高特异性的针对肠型点状产气单胞菌的单克隆抗体,可以用于患细菌性肠炎病草鱼的快速诊断。

草鱼肠型点状产气单胞菌双抗夹心ELISA试剂盒的研制

通过对包被单抗和酶标单抗以及抗原最佳工作浓度的优化,建立草鱼肠型点状产气单胞菌双抗夹心ELISA试剂盒检测体系。用分光光度法对检测体系的特异性、稳定性和灵敏度进行测定;用脱脂奶平板法对试剂盒的临床应用进行检测。结果表明,单抗最适稀释液为pH9.4的碳酸盐缓冲液,洗涤液为含φ=0.05%Tween-20的PBS,包被单抗最适体积稀释倍数为1∶800,酶标单抗最适体积稀释倍数为1∶6 000,抗原最佳工作浓度为3×104cfu/mL。试剂盒与肠型点状产气单胞菌有特异性反应,脱脂奶平板法与试剂盒法对草鱼患病检出率基本一致,符合率达90%;试剂盒有很好的储存稳定性,检测灵敏度为7×103cfu/mL。

人工养殖大鲵点状产气单胞菌的防治一例

大鲵（Andrias davidianus），属两栖纲有尾目隐鳃鲵科，俗称娃娃鱼，为我国所特有的珍稀有尾两栖动物，国家二级保护动物，具有很重要的科研价值及药用和营养价值。近年来，伴随着大鲵人工养殖在全国的迅速发展，各种病毒性，细菌性疾病时常爆发，给养殖户造成惨重的经济损失。本文结合研究中心成功治疗的一例大鲵感染点状产气单胞菌病例进行报道，以供参考。

七种中草药对柱状屈挠杆菌和肠型点状产气单胞菌的体外抑菌试验

试验采用试管!倍稀释法对引起淡水鱼类细菌性烂鳃病和肠炎病的柱状屈挠杆菌和肠型点状产气单胞菌进行了大黄、黄芩等7种中草药的体外抑菌试验。结果表明:%种中草药对这两种菌都具抑菌作用,MIC在7.8-250mg/ml之间。黄芩的抑菌效果最好,对肠型点状产气单胞菌MIC为7.8-mg/ml连翘抑菌效果较差。

肠型点状产气单胞菌和鱼害粘球菌的药敏试验报告

笔者使用纸片扩散法测定引起鱼类疾病的肠型点状产气单胞菌和鱼害粘球菌对12种不同抗菌药物的敏感性,以选择出有效药物用于预防和治疗。试验表明,肠型点状产气单胞菌对卡纳霉素、痢特灵、复方新诺明、新霉素、链霉素、氯霉素、庆大霉素、呋喃妥因、诺氟沙星高度敏感;对四环素中度敏感;对红霉素、青霉素耐药。鱼害粘球菌对红霉素、卡纳霉素、痢特灵、复方新诺明、新霉素、链霉素、氯霉素、庆大霉素氯霉素、呋喃妥因、诺氟沙星高度敏感;对四环素中度敏感;对青霉素耐药。

氯氰菊酯降解菌的分离鉴定及其降解底物谱研究

采用富集培养法,从长期受氯氰菊酯农药污染的果园土壤中,分离筛选得到1株可降解氯氰菊酯的菌株N-02。经形态、生理生化特征及16S rDNA序列分析,初步鉴定为点状气单胞菌(Aeromonas punctata)。菌株N-02在35℃、pH 7.5、氯氰菊酯质量浓度为20 mg/L的LB培养基中培养96 h,对氯氰菊酯的降解率达到62.31%。该菌株N-02对拟除虫菊酯的降解谱较宽,培养96 h对20 mg/L高效氯氰菊酯、溴氰菊酯和氟氯氰菊酯降解率分别达到40.17%、33.26%和30.45%。

草鱼肠炎病病原菌的分离鉴定

根据患病草鱼(Ctenopharyngodon idellus)的临床症状,解剖分析,初步判断为草鱼肠炎病。为确诊该病,从患病草鱼采集组织进行实验室检查,分离得到病原菌CQWL001,按常规方法进行形态特征、培养特性、主要生化及动物试验,确定该病的病原菌为肠型点状气单胞菌。

鱼细菌性肠炎病的防治

鱼细菌性肠炎病是由肠型点状气单胞菌引起的我国养殖鱼类中危害严重的疾病之一。一、流行情况鱼细菌性肠炎病是鱼类一种常见病,主要危害草鱼、青鱼、鲤鱼。水温在18℃以上时,就开始流行,水温在25—30℃时,是本病流行高峰期。

七彩神仙鱼肠炎病原菌的分离鉴定及药敏试验

为确定七彩神仙鱼(Symphysodon aequifasciatus)肠炎的致病菌并筛选敏感药物,利用传统培养法,从该鱼的肠道组织中分离出优势菌,通过生理生化试验及16S rDNA序列测序比对确定菌种信息,并使用药敏纸片法筛选致病菌的敏感药物。试验结果表明:优势菌株QC3为肠型点状气单胞菌(Aeromonas punctata),是七彩神仙鱼肠炎的致病菌株,此菌对氟苯尼考、强力霉素、庆大霉素、诺氟沙星高度敏感,对链霉素中度敏感,对土霉素、红霉素、青霉素、头孢唑林、氨苄西林表现出耐药性。根据研究结果,建议使用氟苯尼考、诺氟沙星、强力霉素、庆大霉素等药物对七彩神仙鱼肠炎病进行治疗。

草鱼三元病原菌融合子的构建及生物学特性

采用细胞融合技术首次将肠型点状产气单胞菌菌株和鱼害粘球菌菌株融合,构建二元融合菌株AM-1,再将AM-1与荧光假单胞菌菌株融合,构建三元融合菌株AM-2。对AM-1和AM-2菌株的形态结构、生理生化特性、致病性、抗原性、抗体效价进行分析。结果表明,AM-1活菌椭圆形,无鞭毛,死菌短杆状,AM-2菌株短杆状,有鞭毛,它们的生理生化性状介于3原始亲本菌株之间;用AM-2菌株对当年健康草鱼种进行人工感染攻毒,被攻毒草鱼种具有烂鳃病、赤皮病及肠炎病的部分症状;AM-2菌株抗原的受免草鱼种对荧光假单胞菌、鱼害粘球菌和肠型点状产气单胞菌菌株的免疫保护率分别达64.90%、68.00%、67.00%,抗体效价最高达1∶256、1∶256、1∶512。测定了AM-1和AM-2菌株及亲本DNA含量并进行了琼脂糖凝胶电泳分析,AM-1和AM-2菌株DNA含量明显高于任一原始亲本。