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点青霉葡萄糖氧化酶基因的克隆及其酶学性质研究
被引量:
9
1
作者
高庆华
胡美荣
+4 位作者
吴芳彤
陶勇
王云鹏
罗同阳
胡常英
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第7期152-159,共8页
旨在克隆点青霉菌(Penicillium notatum)中的葡萄糖氧化酶基因(GOD),在毕赤酵母(Phchia pastoris)中异源表达,纯化并研究其酶学性质。利用PCR技术从点青霉No.8312菌株的基因组DNA中克隆得到GOD基因,将该基因克隆到穿梭载体p MD-AOX上并...
旨在克隆点青霉菌(Penicillium notatum)中的葡萄糖氧化酶基因(GOD),在毕赤酵母(Phchia pastoris)中异源表达,纯化并研究其酶学性质。利用PCR技术从点青霉No.8312菌株的基因组DNA中克隆得到GOD基因,将该基因克隆到穿梭载体p MD-AOX上并在毕赤酵母X33中表达,对纯化后的葡萄糖氧化酶的酶学性质进行分析。结果显示,X33-GOD可高表达具有活性的GOD,在30℃、pH6.5的条件下,其培养液上清GOD酶活可达496 U/mL,比活123.0 U/mg;重组表达的葡萄糖氧化酶最适温度为40-45℃,最适pH为6.0,酶的稳定性研究表明,该酶在pH3.5-7.0区间和温度低于50℃下稳定。1 mmol/L Zn^(2+)对其有激活作用;Ag^+对该酶活性有较大抑制作用。构建出GOD的高产毕赤酵母工程菌株,与点青霉GOD相比,具有更高的发酵酶活和比活。
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关键词
葡萄糖氧化酶
点青霉菌
重组表达
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职称材料
题名
点青霉葡萄糖氧化酶基因的克隆及其酶学性质研究
被引量:
9
1
作者
高庆华
胡美荣
吴芳彤
陶勇
王云鹏
罗同阳
胡常英
机构
河北省微生物研究所
中国科学院微生物研究所
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第7期152-159,共8页
基金
河北省科技计划项目(14292804D)
河北省科学院科技计划项目(20150503 LR62-3)
文摘
旨在克隆点青霉菌(Penicillium notatum)中的葡萄糖氧化酶基因(GOD),在毕赤酵母(Phchia pastoris)中异源表达,纯化并研究其酶学性质。利用PCR技术从点青霉No.8312菌株的基因组DNA中克隆得到GOD基因,将该基因克隆到穿梭载体p MD-AOX上并在毕赤酵母X33中表达,对纯化后的葡萄糖氧化酶的酶学性质进行分析。结果显示,X33-GOD可高表达具有活性的GOD,在30℃、pH6.5的条件下,其培养液上清GOD酶活可达496 U/mL,比活123.0 U/mg;重组表达的葡萄糖氧化酶最适温度为40-45℃,最适pH为6.0,酶的稳定性研究表明,该酶在pH3.5-7.0区间和温度低于50℃下稳定。1 mmol/L Zn^(2+)对其有激活作用;Ag^+对该酶活性有较大抑制作用。构建出GOD的高产毕赤酵母工程菌株,与点青霉GOD相比,具有更高的发酵酶活和比活。
关键词
葡萄糖氧化酶
点青霉菌
重组表达
Keywords
glucose oxidase
Penicillium notatum
recombinant expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
Q55 [生物学—生物化学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
点青霉葡萄糖氧化酶基因的克隆及其酶学性质研究
高庆华
胡美荣
吴芳彤
陶勇
王云鹏
罗同阳
胡常英
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
9
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