白及多糖在小鼠烟曲霉菌性角膜炎中的抗炎作用

目的研究白及多糖(BSP)在小鼠烟曲霉菌性角膜炎中的抗炎机制,探讨BSP对真菌性角膜炎的治疗作用。方法建立小鼠烟曲霉菌性角膜炎模型,使用BSP水溶液局部滴眼处理,裂隙灯下观察感染后第1、3、5天小鼠角膜的炎症程度,反转录-聚合酶链反应法检测小鼠角膜中炎症因子和模式识别受体Dectin-1的mRNA水平,酶联免疫吸附试验和蛋白免疫印迹法检测炎症因子和Dectin-1蛋白的表达。结果BSP处理的小鼠角膜炎症评分在感染后第3、5天明显低于对照组(F=6.64、11.58,P<0.05)。16 g/L的BSP水溶液可以降低小鼠角膜中炎症因子白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α以及模式识别受体Dectin-1的mRNA和蛋白表达水平,差异均具有统计学意义(F=2.21~97.39,P<0.05)。结论BSP通过下调炎症因子水平和抑制模式识别受体Dectin-1的表达在小鼠烟曲霉菌性角膜炎中发挥抗炎作用。

血小板细胞膜仿生纳米系统在烟曲霉菌性角膜炎中的抗炎作用

目的:构建一种血小板细胞膜包覆聚乳酸–羟基乙酸聚合物(poly (lactic-co-glycolic acid), PLGA)的仿生纳米系统(PLTm@PLGA),评估其在烟曲霉菌性角膜炎中的抗炎作用。方法:制备并表征PLTm@PLGA。通过CCK-8、溶血试验检测生物安全性。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测烟曲霉菌刺激RAW264.7细胞后炎症因子TNF-α、IL-1β的mRNA表达水平。建立烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型,观察治疗效果并进行炎症评分。结果:PLTm@PLGA呈球形,表现为典型的“壳–核”结构,其粒径为234.3 ± 8.9 nm。PLGA、PLTm@PLGA无明显细胞毒性,血液相容性好。PLTm@PLGA显著抑制RAW264.7细胞中TNF-α、IL-1β mRNA表达。PLTm@PLGA处理组临床炎症评分显著下降。结论:PLTm@PLGA具有良好生物相容性,抑制促炎细胞因子表达,减轻了小鼠烟曲霉菌性角膜炎的炎症反应。

刺芒柄花素在小鼠烟曲霉菌性角膜炎中保护作用的研究

刺芒柄花素(Formononetin, FMN),又称芒柄花素、芒柄花黄素,是一种异黄酮类中药单体,主要存在于黄芪、红车轴草、葛根等豆科植物中。最近的大量研究表明,刺芒柄花素具有抗炎、抗氧化、抗凋亡、抗菌、抗肿瘤和雌激素样作用等,药用价值高。然而,刺芒柄花素在真菌性角膜炎中的作用尚未被报道。本文旨在研究刺芒柄花素在烟曲霉菌性角膜炎中的保护作用。方法:在体外使用CCK-8试剂盒检测刺芒柄花素的毒性作用。用灭活的烟曲霉菌菌丝预先刺激RAW264.7细胞1小时,随后将刺芒柄花素溶液或DMSO溶液加入共培养7小时,通过PCR检测RAW264.7细胞炎症因子的mRNA表达水平。为了进一步明确刺芒柄花素在体内对角膜炎的治疗作用及炎症因子水平的影响,我们将烟曲霉菌孢子通过角膜基质内注射建立小鼠烟曲霉菌角膜炎模型,并使用刺芒柄花素溶液或DMSO溶液局部点眼治疗,通过PCR实验检测炎症因子的表达水平。结果:刺芒柄花素对RAW264.7细胞的存活能力影响小。与DMSO处理组相比,刺芒柄花素处理可以降低灭活菌丝刺激导致的细胞中炎症因子的表达升高。此外,在体内实验中,刺芒柄花素可以减轻小鼠烟曲霉菌性角膜炎的严重程度,减低感染角膜中炎症因子的表达。结论:刺芒柄花素可以降低小鼠烟曲霉菌性角膜炎的炎症因子表达水平起到抗炎保护作用。

烟曲霉菌免疫磁珠富集方法建立研究

目的:建立免疫磁珠富集烟曲霉菌的实施方案。方法:通过对免疫磁珠加入量、免疫磁珠和烟曲霉菌液孵育时间的探究,制定了免疫磁珠富集烟曲霉菌的最佳实施办法,同时对此富集技术方法学进行敏感性、特异性的验证。结果:当免疫磁珠加入量为100μL、免疫磁珠与烟曲霉菌液孵育时间30min,免疫磁珠富集烟曲霉菌的效果最好,与常规检测方法比较,提高了检测敏感性,同时具有强的特异性。结论:经探究建立了免疫磁珠富集烟曲霉菌的最佳实验方案。

烟曲霉菌性脊柱炎一例

患者男,43岁,因“腰痛伴腰部活动受限6月”入院。患者于6个月前无明显诱因出现腰背部疼痛,伴腰部活动受限,并逐渐加重。无双下肢放射痛及麻木、无力,无低热、盗汗、消瘦等,考虑“腰椎间盘突出症”。予以药物治疗后,疼痛症状缓解不明显,3个月前上述症状明显加重,遂就诊。查体:腰椎前屈、后伸活动明显受限,拾物试验(+),其余查体无异常。实验室检查:降钙素原和红细胞沉降率增高;白细胞计数和C反应蛋白水平正常;G试验、RBPT试验和SAT试验均阴性。

薯蓣皂苷对烟曲霉菌性角膜炎的作用及其机制

目的探究薯蓣皂苷(DS)对烟曲霉菌(AF)性角膜炎的作用及其机制。方法通过细胞存活实验(CCK-8)和Draize眼表毒性实验分别检测DS对RAW264.7细胞和小鼠角膜的毒性作用;应用扫描电子显微镜、透射电子显微镜、碘化丙啶摄取实验评估DS的抗真菌作用;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测RAW264.7细胞中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和核因子-红细胞2相关因子2(Nrf2)mRNA的表达,评估DS的抗炎作用;在AF性角膜炎小鼠模型中,通过裂隙灯拍照临床评分评估DS对AF性角膜炎的改善作用;通过平板菌落计数和苏木精-伊红(HE)染色分别评估DS在体内的抗真菌及抗炎作用。结果CCK-8和Draize眼表毒性实验结果显示,16 mg/L的DS对RAW264.7细胞和小鼠角膜无明显毒副作用(P>0.05);扫描电子显微镜、透射电子显微镜观察显示,16 mg/L的DS能够使菌丝萎缩变形、破坏真菌细胞器及细胞膜;碘化丙啶摄取实验显示,16 mg/L的DS能够破坏细胞膜完整性;qRT-PCR检测显示,16 mg/L的DS可以显著升高Nrf2的mRNA表达,并抑制炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达(F=40.31~126.81,P<0.001);临床评分、平板菌落计数和HE染色结果均表明,16 mg/L的DS可以明显改善AF引起的角膜炎症反应(F=18.27,P<0.001),降低真菌负荷(t=8.78,P<0.05)以及减少炎症细胞的浸润。结论DS可通过抗真菌和抗炎作用改善AF性角膜炎。

血根碱在小鼠烟曲霉菌性角膜炎中的抗炎作用

目的探索血根碱(SAN)在小鼠烟曲霉菌感染角膜炎模型中的抗炎作用。方法应用CCK-8实验检测不同浓度SAN(0、62.5、125.0、250.0、500.0、1000.0μg/L)对小鼠来源巨噬细胞(RAW264.7)增殖活力的影响;制备小鼠烟曲霉菌角膜炎模型,取感染第3天眼球,应用苏木精-伊红(HE)染色检测小鼠角膜组织炎症细胞浸润程度,ELISA法检测小鼠角膜组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)及环氧化酶2(COX-2)的蛋白表达水平;采用RT-PCR和ELISA方法检测巨噬细胞中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、TNF-α及单核细胞趋化蛋白(MCP-1)的蛋白和mRNA的表达。结果500.0μg/L的SAN对RAW264.7细胞活性无影响(F=0.292,P>0.05);HE染色显示,500.0μg/L SAN组小鼠角膜组织炎症细胞浸润相较于模型组明显减少;500.0μg/L SAN可显著下调烟曲霉菌诱导的RAW264.7细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1的mRNA和蛋白表达及小鼠模型中TNF-α、COX-2的蛋白表达水平,差异均有显著性(F=20.939~2690.170,P<0.01)。结论SAN通过抑制炎症细胞浸润和下调炎症递质的表达在烟曲霉菌感染中发挥抗炎作用。

桃叶珊瑚苷在烟曲霉菌角膜炎中抗炎作用及其机制

目的探讨桃叶珊瑚苷(AU)对烟曲霉菌角膜炎的抗炎作用及其机制。方法采用CCK-8实验检测AU对人角膜上皮细胞(HCECs)的细胞毒性,裂隙灯拍照和临床评分评估AU对烟曲霉菌角膜炎的治疗效果,髓过氧化物酶(MPO)实验和免疫荧光染色检查中性粒细胞浸润和活性,RT-PCR、Western blot和ELISA方法检测重组与合成蛋白(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)以及白细胞介素-6(IL-6)的表达。结果AU降低了感染第3天的小鼠角膜临床评分(F=35.714,P<0.001),抑制了中性粒细胞的募集和活性(t=9.882,P<0.001),同时也下调了IL-1β、IL-6的mRNA表达(F=59.356、110.224,P<0.001)。体外实验显示,AU明显上调烟曲霉菌刺激的Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白表达,下调IL-1β、IL-6的mRNA表达及IL-6的蛋白表达(F=17.569~146.436,P<0.001)。结论AU能够改善烟曲霉菌角膜炎严重程度,抑制中性粒细胞募集和活性,上调Nrf2和HO-1表达,抑制下游炎症因子表达,在烟曲霉菌角膜炎中起抗炎作用。

阿魏酸在烟曲霉菌诱导人角膜上皮细胞中的抗炎作用

目的探讨阿魏酸(FA)在烟曲霉菌诱导的人角膜上皮细胞中的抗炎作用。方法采用CCK-8方法检测不同浓度FA(0、50、100、150、200、250、300μmol/L)溶液对人角膜上皮细胞(HCEC)活力的影响;采用RT-PCR方法检测灭活的烟曲霉菌菌丝感染HCEC后,FA对炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及核因子E2相关因子2(Nrf2)mRNA表达的影响;采用ELISA方法检测FA对炎症因子IL-6及单核细胞趋化蛋白(MCP-1)蛋白表达的影响。结果300μmol/L的FA溶液处理组HCEC存活率低于其他各组(F=5.390,P<0.05),250μmol/L及以下浓度FA溶液处理对HCEC活力无影响(P>0.05)。250μmol/L FA处理可显著升高Nrf2 mRNA表达,降低IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达水平,并显著降低IL-6及MCP-1蛋白表达(F=4.720~990.967,P<0.05)。结论FA可能通过上调Nrf2的表达,抑制烟曲霉菌诱导的HCEC炎症反应中促炎因子的表达,发挥抗炎作用。

鸭卡氏杆菌和烟曲霉菌感染病理学和相关进展

卡氏杆菌通常存在于鸭的呼吸道和生殖道,是卵巢炎、输卵管炎和腹膜炎的主要原因,降低了母鸭的产蛋量和死亡率,从而严重影响动物福利和生产力。呼吸道是烟曲霉菌感染的主要场所,导致严重的呼吸窘迫和相关的肉芽肿性气管炎和肺炎,导致重大经济损失。

1例大面积烧伤合并重度吸入性损伤并发烟曲霉菌感染患者的护理

总结1例大面积烧伤合并重度吸入性损伤并发烟曲霉菌感染的护理体会。采取全程精细化护理,做好有效的气道管理,密切观察特殊用药后的反应,监测目标温度,制定个性化饮食治疗方案,预防二重感染,加强肺部功能锻炼,以及关注患者心理是患者康复的关键。

糖尿病酮症酸中毒合并低磷血症、烟曲霉菌肺炎一例并文献复习

目的探讨糖尿病酮症酸中毒(DKA)合并肺部感染患者发生低磷血症的临床特点。方法报道1例DKA合并重度低磷血症、烟曲霉菌肺炎的35岁男性病例。以中英文“糖尿病酮症酸中毒”“低磷血症”为检索词对以下数据库进行检索:PubMed、中国知网、万方数据知识服务平台、维普中文科技期刊数据库,收集并分析检索到的DKA合并低磷血症病例的资料。结果该例为35岁初诊糖尿病的男性患者,并发DKA、烟曲霉菌肺炎以及重度低磷血症,予补液、降糖、抗真菌治疗后,血磷水平也随着DKA纠正、肺部感染控制而自行恢复正常,患者好转出院。复习文献共检索到具有较完整临床资料的DKA合并低磷血症病例16例,临床表现包括:呼吸衰竭、横纹肌溶解、癫痫发作、心脏骤停、疲劳、无症状等。部分患者可自行恢复,但部分患者仍需接受补磷治疗。结论DKA合并肺部感染患者易发生低磷血症,临床表现无特异性,严重时可危及生命,早期识别有助于改善预后。

1例烟曲霉菌感染性心内膜炎合并失代偿期肝硬化的布罗卡失语症病人的护理

总结1例烟曲霉菌感染性心内膜炎合并失代偿期肝硬化的布罗卡失语症病人的护理措施。护理要点:人工肝治疗期间落实出血的防范措施;加强术后病情监测,维持循环的稳定,降低术后肺部并发症的发生;警惕肝硬化并发症肝性脑病的发生;针对抗真菌感染药物进行使用后效果及副作用的观察;重视布罗卡失语症的康复训练。经过17 d精心的护理与治疗,病人顺利出院。

抗烟曲霉菌单克隆抗体鉴定和初步应用

目的 :制备抗烟曲霉菌单克隆抗体 (McAb) ,建立一种快速检测烟曲霉菌抗原方法。方法 :用基因重组烟曲霉菌半乳糖甘蛋白 (AFMP1)抗原 ,免疫BALB/c小鼠 ,制备单克隆抗体 ,选择针对不同抗原决定簇单抗配对 ,建立双抗夹心ELISA法检测烟曲霉菌抗原。结果 :筛选出 3株稳定分泌抗烟曲霉菌单抗杂交瘤细胞株 ,IgG亚类鉴定分别为IgG1、IgG2a、IgG2b ,抗体亲和常数分别为 1 2× 10 10 、4 5 6× 10 9和 1 81× 10 10 mol/L ,免疫印迹证实单抗特异性识别烟曲霉菌培养上清和细胞裂解产物 ,相加试验表明 3株单抗是针对不同抗原决定簇 ,组成配对双抗夹心ELISA法 ,检测最高灵敏度为 0 1ng/ml,可测范围为 0 1～ 6 0ng/ml。结论 :3株杂交瘤细胞株特异性好、亲和力高 ,组成配对夹心ELISA法可用于快速检测烟曲霉菌抗原。

补中益气汤合用两性霉素B治疗肺部烟曲霉菌感染1例

1病例资料 患者王某,男性,85岁,住院号：271767。以＂反复咳嗽咳痰10余年,复发伴胸闷气短2 d＂于2012年3月19日入院。入院症见：咳嗽、咯白色泡沫痰、胸闷、气促、口唇紫绀、小便量少、大便稀溏、舌淡胖苔白腻,脉细弱。既往高血压病史10余年。查体：肺气肿体征、双肺呼吸音粗、可闻及湿啰音,心界向左下扩大、心律不齐。查血常规：WBC 17.26×109/L,N 92.9%,RBC 2.83×1012/L,HGB 82 g/L。生化全套示：Crea 131μmol/L,BUN16.5 mmol/L,TP 49 g/L,ALB 20 g/L;CPR 144 mg/L。

烟曲霉菌孢子对哮喘大鼠气道炎症和气道反应性的影响

目的研究大鼠哮喘模型接触烟曲霉菌孢子后的气道炎症和气道反应性的改变。方法70只健康雄性Wistar大鼠随机分为Ⅰ和Ⅱ两大组(每组35只),每组下分为空白对照组(5只)、哮喘组(10只)、孢子滴鼻对照组(10只)和孢子滴鼻哮喘组(10只)。以卵白蛋白(OVA)致敏并激发建立大鼠哮喘模型,分别在OVA激发前(Ⅰ组)或激发后(Ⅱ组)予烟曲霉菌孢子滴鼻。通过BCA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)上清中总蛋白浓度以观察支气管上皮损伤情况,并进行BALF细胞计数和分类。通过测定跨肺压和气体流速来计算大鼠气道阻力和予以不同浓度乙酰胆碱(Ach)刺激后的气道反应性变化。结果在Ⅰ组中,激发前孢子滴鼻哮喘组(CA组)BALF上清中总蛋白浓度较未用孢子滴鼻的哮喘组(A1组)明显增多[(1.125±0.254)μg/mL比(0.825±0.173)μg/mL,P<0.01],且CA组大鼠在给予10μg/kg和100μg/kg Ach后的气道阻力[(0.997±0.196)cm H2O.mL-1.s-1,(1.123±0.142)cm H2O.mL-1.s-1]均较A1组[(0.655±0.089)cm H2O.mL-1.s-1,(0.687±0.048)cm H2O.mL-1.s-1]显著升高(P均<0.05)。但在Ⅱ组中,激发后孢子滴鼻哮喘组(AC组)BALF上清中总蛋白浓度,基础气道阻力和给予Ach后气道阻力与哮喘组(A2组)比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。CA组BALF细胞总数和细胞分类与A1组间差异无统计学意义,但AC组BALF中性粒细胞较A2组明显升高[(2.488±0.420)×106比(0.936±0.459)×106,P<0.05]。结论哮喘大鼠在雾化激发前接触烟曲霉菌孢子,能加重其支气管上皮损伤和增加气道反应性。

烟曲霉菌感染小鼠肺组织中NOD1信号通路的激活

目的研究天然免疫NOD1信号通路在烟曲霉菌感染小鼠肺组织中是否得以激活。方法小鼠分为正常对照组和感染组,感染组小鼠经鼻滴入烟曲霉菌孢子24 h、48 h、72 h后分别处死,碾碎肺组织平板培养以检测其肺组织烟曲霉菌负荷,观察肺组织病理学改变,RT-PCR检测NOD1及RIP2 mRNA表达量、Western Blot检测胞核NF-κBp65和胞浆TNF-α在小鼠肺组织中的含量。结果①感染组小鼠肺组织48 h时Af负荷达最高且可见严重的充血和出血,有大量的炎症细胞浸润,72 h时Af负荷迅速下降且未见菌丝形成,仅见轻微的充血、出血和炎症反应;正常组烟曲霉菌培养阴性且肺组织结构正常;②RT-PCR及Western Blot结果显示:感染组小鼠肺组织各时相点NOD1 mRNA、RIP2 mRNA、NF-κBp65和TNF-α的表达量均明显高于正常对照组(P<0.05),前三者均在48 h表达最高,TNF-α在72 h表达最高(P<0.05)。结论NOD1信号通路在烟曲霉菌感染的小鼠肺组织中得以活化,其介导的天然免疫对抗烟曲霉菌感染和保护小鼠肺组织起了一定的作用。

烟曲霉菌提取物对人支气管上皮细胞粒-巨噬细胞集落刺激因子表达的影响

目的:探讨烟曲霉菌对呼吸道上皮细胞的粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)表达的影响及其可能机制。方法:分别应用不同浓度(0、8、16、20 mg/L)的烟曲霉菌提取物(Aspergillus fumigatus extract,AFE)作用体外培养人支气管上皮细胞16HBE-14o不同的时间(12、24、48、72 h)。同时还应用热处理的AFE(heat-treated AFE,HT-AFE)、丝氨酸蛋白酶抑制剂(抑肽酶)、蛋白激酶激活受体-2(PAR-2)激动剂(SLIGLV-NH2)和PAR-2阻断剂(FSLLRY-NH2)作用16HBE-14o细胞。应用ELISA法检测细胞上清液GM-CSF含量,同时应用RT-PCR法检测GM-CSF mRNA的表达。结果:正常培养条件下的对照组细胞仅表达分泌少量GM-CSF,而给予不同浓度的AFE作用后,细胞合成和分泌GM-CSF的量较对照组明显增加(P<0.05),并呈明显的时间和浓度依赖性。PAR-2激动剂同样可以促进细胞合成分泌GM-CSF。丝氨酸蛋白酶抑制剂和PAR-2阻断剂几乎完全抑制AFE的上述作用。HT-AFE的蛋白酶活性完全灭活,不能促进细胞GM-CSF表达增加。结论:AFE依赖其蛋白酶活性激活PAR-2受体,促进呼吸道上皮细胞GM-CSF合成和分泌,从而促进哮喘的发生和发展。

肉桂醛对烟曲霉菌体外生物膜的影响

目的探讨肉桂醛对烟曲霉菌生物膜(BF)的体外作用。方法体外建立烟曲霉菌BF;采用2倍稀释法测定肉桂醛的最低抑菌浓度(MIC);结晶紫法评价不同浓度的肉桂醛对烟曲霉菌BF的影响;扫描电镜观察BF的形态学变化。结果烟曲霉菌可在体外形成生物膜;肉桂醛对受试烟曲霉菌的MIC为256μg/mL;在1 MIC、1/2 MIC、1/4 MIC时,生物膜量分别为0.81±0.11、1.13±0.18和1.59±0.11,与阳性对照组(2.18±0.15)相比,差异有统计学意义(P<0.05);电镜下可见肉桂醛作用后生物膜结构变稀疏松散。结论肉桂醛对烟曲霉菌具有抗菌活性,亚抑菌浓度的肉桂醛对生物膜具有一定的破坏作用,其中浓度越高作用越强。

烟曲霉菌中抗真菌活性肽类物质的分离与纯化

目的从烟曲霉菌培养上清液中分离纯化具有抗真菌活性的肽类物质 (FIP)。方法用离子交换柱层析法分离 ,用反相高效液相色谱法进一步纯化 ,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析确定相对分子质量。结果从烟曲霉菌培养上清液中分离出一种具有抗真菌活性的FIP。纯化后得到高活性的精制FIP ,其相对分子质量约为 8kD ,MTT法测定结果表明 ,FIP对 5种真菌均具有明显的抗真菌效应。结论烟曲霉菌培养上清液中含有抗真菌活性的肽类物质。