烟曲霉震颤素B的高效液相色谱检测方法的建立

介绍了一种简便、快捷的检测烟曲霉震颤素Ｂ的高效液相色谱（ＨＰＬＣ）检测方法，用三氯甲烷提取后直接进样，方法检出限为１．５～２．０ｐｇ，在２．５～４００ｐｇ范围内线性良好，方法回收率为８４．４％～１０９．３％

烟曲霉震颤素B复合抗原的制备及鉴定

为建立快速、简便、灵敏的检测烟曲霉震颤素Ｂ（ｆｕｍｉｔｒｅｍｏｒｇｉｎＢ，ＦＴＢ）的定量检测方法，利用自行制备的ＦＴＢ制备出３种ＦＴＢ复合抗原。首先将ＦＴＢ的Ｃ６位羟基与琥珀酸酐反应，制备出ＦＴＢ琥珀酸单酯化合物（ＦＴＢ－ｈｅｍｉｓｕｃｃｉｎａｔｅ，ＦＴＢＳ），经元素分析和光谱分析后，再用常规方法与３种载体蛋白脱水结合形成酰胺化合物。对合成路线、中间体的化学结构等进行了分析鉴定。为提高准确性，用红外光谱法代替紫外吸收光谱法判断结合物的生成。

烟曲霉震颤素B的制备

为了自行制备烟曲霉震颤素Ｂ（ＦＴＢ），在ＦＴＢ高产菌株筛选的基础上，选用高产菌株烟曲霉Ｃ４１０４和３６５６在５ｋｇ大米培养基中进行产毒培养。培养物用乙酸乙酯提取，无水硫酸钠去除水分，正己烷去脂，硅胶Ｈ柱层析，活性炭脱色，甲醇中重结晶，得到无色细针状晶体约４．０ｇ。两株菌的平均产毒量约为８００ｍｇ／ｋｇ大米。本改良方法的收率约为２０％，远高于文献报道的收率（１．１１％）。经熔点、紫外、红外、元素分析、质谱以及核磁共振氢谱、碳谱等化学分析鉴定，其结果与文献报道一致，确证为含有一个结晶水的ＦＴＢ。根据谱学数据，对自行制备的ＦＴＢ分子结构中的碳、氢归属进行了探讨。

烟曲霉震颤素高产菌株的筛选

用改良后的Ｃｚｅｐｅｋ－Ｄｏｘ培养基在４５℃下从土壤、饲料及荞麦样品中分离出１８株烟曲霉菌株，其分离纯化效率有所提高。选用２６株烟曲霉分别在半合成培养基及大米培养基中进行产毒培养（２５℃，１４～２１ｄ），有２３株产生烟曲霉震颤素Ｂ（ＦＴＢ），未检出ＦＴＡ，菌株在大米培养基中生长较好，用薄层色谱法和高效液相色谱法测定，ＦＴＢ产量亦较高。

FTB多克隆抗体的研制

为建立ＦＴＢ的间接酶联免疫吸附方法，用自行制备的ＦＴＢＳ－载体蛋白结合物ＦＴＢＳ－ＢＳＡ和ＦＴＢＳ－ＨＳＡ作为免疫原，按常规免疫程序分别免疫新西兰大耳白家兔各２只，４～１０周后获得２种抗ＦＴＢ的多克隆抗体，ＰｃＡｂ－ＦＴＢ１（以ＦＴＢＳ－ＢＳＡ为免疫原）和ＰｃＡｂ－ＦＴＢ２（以ＦＴＢＳ－ＨＳＡ为免疫原）。以ＦＴＢＳ－ＩｇＧ作为标识抗原包被酶标板，建立了测定ＦＴＢ的间接酶联免疫吸附试验（ＩＣ－ＥＬＩＳＡ）方法，这２株多克隆抗体与８种真菌毒素的交叉反应均较小。

FTB单克隆抗体的研制与特性鉴定

为建立测定ＦＴＢ的ＩＣ－ＥＬＩＳＡ方法，用复合抗原ＦＴＢＳ－ＢＳＡ和ＦＴＢＳ－ＨＳＡ作为免疫原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取免疫小鼠脾细胞与鼠ＳＰ２／Ｏ－Ａｇ１４骨髓瘤细胞融合，经反复筛选，获得２株稳定分泌抗ＦＴＢ抗体的单克隆杂交瘤细胞株。免疫球蛋白亚型鉴定，１株为ＩｇＭ，１株为ＩｇＧ１。两株杂交瘤腹水的ＥＬＩＳＡ效价分别为１×１０－６和１×１０－８，用ＰＥＧ沉淀法和辛酸－饱和硫酸铵法对抗体腹水进行了纯化，并分别测定了２种单抗与ＦＴＢＳ－ＩｇＧ的亲和力常数以及与其它１１种真菌毒素的相对交叉反应，建立了测定ＦＴＢ的ＩＣ－ＥＬＩＳＡ法。

烟曲雹震颤素B的制备

烟曲霉震颤素是由烟曲霉产生的一类真菌毒素,被认为与伐木工人病,农民肺和燕麦草蹒跚症等人畜疾病有关。中国预防医学科学院营养与食品研究所刘江等,为了自行制备烟曲霉震颤素B。