α7烟碱受体拮抗剂对Aβ蛋白诱导损伤的PC12细胞保护作用的研究

目的观察α7烟碱受体拮抗剂对Aβ蛋白诱导损伤的PC12细胞远期影响,探讨其细胞保护的作用。方法采用高分化的PC12细胞为研究对象,以Aβ25-35制作细胞损伤模型,以烟碱受体激动剂(尼古丁)和α7烟碱受体拮抗剂(甲基牛扁亭碱)进行预处理。试验分为4组,分别是:对照组(蒸馏水)、模型组(Aβ25-35)、尼古丁组(尼古丁和Aβ25-35)、甲基牛扁亭碱组(甲基牛扁亭碱和Aβ25-35)。通过MTT比色法在多个时间点观察药物对细胞活力影响的动态变化,在此基础上采用流式细胞仪检测药物对细胞凋亡和坏死的影响。结果在所有时间点,模型组的细胞活力均显著低于对照组,凋亡和坏死率均高于对照组(P<0.01)。药物作用36～60h,尼古丁组的细胞活力显著高于模型组和甲基牛扁亭碱组(P<0.05),凋亡和坏死率较低(P<0.01);甲基牛扁亭碱组细胞活力及凋亡和坏死率与模型组差异无统计学意义。在药物作用84h后,与模型组和尼古丁组相比,甲基牛扁亭碱组细胞活力显著升高,凋亡和坏死率显著降低(P<0.01)。结论随着作用时间的延长(84h),烟碱受体激动剂(尼古丁)对PC12细胞的保护作用逐渐消失,而α7烟碱拮抗剂(甲基牛扁亭碱)逐渐显现出细胞保护作用。

神经元烟碱受体与异氟烷、七氟烷催眠和镇痛作用的关系

目的探讨神经元烟碱受体(neuronal nicotinic acetyl-choline receptors,nnAChRs)与异氟烷、七氟烷催眠和镇痛作用的关系。方法建立小鼠催眠、镇痛模型后,在催醒、热板和扭体实验中分别观察侧脑室(intracerebroventricular,icv)或鞘内(intrathecal,it)注射不同剂量烟碱(nicotine,N)对小鼠睡眠时间(sleeping time,ST)、热板法痛阈(pain threshold in hot-plate test,HPPT)和扭体次数的影响。结果催醒实验中,烟碱10、20、40μgicv能够剂量依赖性地缩短异氟烷、七氟烷催眠小鼠的ST(P<0·05,P<0·01);热板实验中,烟碱5、10、15μgit对清醒小鼠HPPT没有影响(P>0·05),但能够剂量依赖性地减少异氟烷、七氟烷镇痛小鼠的HPPT(P<0·05,P<0·01);扭体实验中,皮下注射镇痛剂量的异氟烷、七氟烷后均能引起小鼠的扭体次数减少(P<0·01),但烟碱5、10、15μgit对异氟烷、七氟烷镇痛小鼠的扭体次数的影响差异均无显著性(P>0·05)。结论nnAChRs是异氟烷、七氟烷催眠作用的重要靶位;也是异氟烷、七氟烷抗热刺激伤害的重要靶位,但与其抗化学内脏痛作用关系不大。

美加明和六烃季铵在交感神经元烟碱受体上作用位点的差异

为比较美加明 (mecamylamine,MEC)和六烃季铵 (hexamethonium ,HEX)在交感神经元烟碱受体上作用位点的差异 ,实验用膜片钳全细胞记录技术研究了MEC和HEX对交感神经元烟碱诱发电流的抑制作用。在培养的颈上神经节细胞上 ,MEC和HEX拮抗烟碱作用的IC50 分别为 0 0 0 12和 0 0 0 95mmol/L ,并且都加速烟碱受体脱敏。在 - 3 0、 - 70和 - 110mV钳制电压下 ,MEC和HEX抑制烟碱诱发电流的作用有电压依赖性。但在每隔 3min连续给药的情况下 ,MEC的作用有使用依赖性而HEX没有 。

突触前α7烟碱受体对海马神经元兴奋性突触传递的调控(英文)

采用盲法膜片钳技术观察突触前烟碱受体(nicotinic acetylcholine receptors,nAChRs)对海马脑片CA1区锥体神经元兴奋性突触传递的调控作用。结果显示,nAChRs激动剂碘化二甲基苯基哌嗪(dimethylphenyl-piperazini-um iodide,DMPP)不能在CA1区锥体神经元上诱发出烟碱电流。DMPP对CA1区锥体神经元自发兴奋性突触后电流(spontaneous excitatory postsynaptic current,sEPSC)具有明显的增频和增幅作用,并呈现明显的浓度依赖关系。DMPP对微小兴奋性突触后电流(miniature excitatory postsynaptic Current,mEPSC)具有增频作用,但不具有增幅作用。上述DMPP增强突触传递的作用不能被nAChRs拮抗剂美加明、六烃季铵和双氢-B-刺桐丁所阻断,但可被α-银环蛇毒素阻断。上述结果提示,海马脑片CA1区锥体神经元兴奋性突触前nAChRs含有对α-银环蛇毒素敏感的α7亚单位,其激活可增强海马CA1区锥体神经元突触前递质谷氨酸的释放,从而对兴奋性突触传递发挥调控作用。

神经元烟碱受体在全身麻醉机制中的作用

作为配体 门控离子通道超家族成员的神经元烟碱受体分布于中枢和外周神经系统 ,包括多种亚型 ,具有广泛的生理作用 ,可以成为多种疾病的药物治疗靶点。它在全身麻醉原理中的作用也被日益重视 ,部分全身麻醉药物 (挥发性吸入、气体吸入麻醉药、硫喷妥钠、氯胺酮等 )在低于临床麻醉剂量时能够明显抑制该受体功能 ,神经元烟碱受体可能参与了这些药物的临床作用机制。

中枢神经系统烟碱受体:性质的多样性,功能的未知性

中枢神经系统烟碱受体其药理学和生理学性质表现为多样性特点。位于突触前的烟碱受体具有调节突触传递的作用。中枢由烟碱受体介导的功能性快突触传递 ,长期以来 (自 1966年 )已经明确的只存在于脊髓前角运动神经元与闰绍细胞间 ,只是到最近 ( 1998年 )才在脑中发现。尽管如此 ,中枢神经系统尤其是脑内的烟碱受体 ,其生理功能目前仍然是个谜。

中枢烟碱受体与阿尔茨海默病

中枢烟碱受体与阿尔茨海默病徐江平，刘传缋（军事医学科学院毒物药物研究所，北京１００８５０）阿尔茨海默病和阿尔茨海默型老年性痴呆（ＡＤ／ＳＤＡＴ）是最常见的痴呆性疾病，它ｏｆ具有典型的组织病理学特征（老年斑和神经元纤维缠结）以及多种中枢神经递质改变［１...

κ-银环蛇毒素敏感的烟碱受体激活引起的去甲肾上腺素释放参与烟碱诱导的长时程增强样反应(英文)

烟碱可以增强学习记忆功能,但其相关机制仍不清楚。海马长时程增强被认为是学习记忆的细胞机制。本研究室以往研究表明,当单脉冲的强度为诱发80%最大群体锋电位时,烟碱(10μmol/L)可以在海马CA1区诱导长时程增强样反应。本文通过细胞外记录离体海马脑片CA1区锥体细胞层群体锋电位,探讨烟碱诱导长时程增强样反应所涉及的烟碱受体亚型与相应的神经递质释放。结果显示,烟碱诱导的长时程增强样反应可以被美加明(mecamylamine,1μmol/L)或κ-银环蛇毒素(κ- bungarotoxin,0.1μmol/L)阻断,但不被dihydro-β-erythtroidine(DHBE,10μmol/L)阻断。烟碱诱导的长时程增强样反应可以被普萘洛尔(propranolol,10μmol/L)阻断,但不被酚妥拉明(phentolamine,10μmol/L)或阿托品(atropine,10μmol/L)阻断。以上结果提示,κ-银环蛇毒素敏感的烟碱受体激活引起的去甲肾上腺素释放参与烟碱诱导的海马CA1区长时程增强样反应。

新型镇痛药:神经元烟碱受体激动剂

从动物模型的研究中发现蛙皮素的镇痛效能与吗啡相当 ,而镇痛效价比吗啡高 2 0 0多倍。ABT 5 94的镇痛效能与蛙皮素相当 ,而毒副作用明显低于后者。研究发现这两种化合物均是烟碱受体强激动剂 ,而ABT 5 94对烟碱受体亚型的选择性明显高于蛙皮素。烟碱受体激动剂激活受体后 ,引起中枢多种神经递质的释放 ,可能是其产生镇痛效应的关键所在。

甲状腺激素对大鼠脑海马发育期神经元烟碱受体α4亚单位表达的影响

目的探讨甲状腺激素(TH)对发育关键期大鼠脑海马区域神经元烟碱受体α4亚单位(nAChRα4)表达的作用和影响。方法实验分成正常对照组(n=42)和甲减组(n=36)。选用甲巯咪唑(MM)复制甲状腺机能减退大鼠模型,收集出生后第0,4,7,14,21,30,120天的正常、甲减仔鼠脑组织,每组6只。采用原位杂交组织化学法检测发育关键期仔鼠大脑海马区域神经元烟碱受体α4亚单位(nAChRα4)的表达变化情况。结果①正常对照组nAChRα4 mRNA在生后不同发育阶段的表达变化明显且具有层状分布的特点。生后第0天表达很低,在生后第14-21天nAChRα4 mRNA表达最高,然后下降,直至成年鼠水平(生后第120天)。②正常对照组nAChRα4 mRNA海马CA1区阳性信号表达高峰(生后第21天)是成年鼠的4-5倍,海马CA2、CA3区阳性信号表达高峰(生后第21天)是成年鼠的8倍左右,海马齿状回(DG)区阳性信号表达高峰(生后第14天)是成年鼠的5倍左右。③甲减组nAChRα4 mRNA表达在各时点均明显低于正常对照组(P<0.001)。甲减组表达的高峰时间与正常对照组的高峰时间相一致,无高峰延迟。结论在脑发育关键期,甲状腺激素水平的减少改变了大鼠脑海马神经元烟碱受体α4亚单位的表达,进一步影响了该区域突触的发生及相关神经回路的建立,出现神经元的旷置或错误神经通路,这可能阻碍了脑发育与其功能的成熟。

神经元烟碱受体介导的钙信号及其调节作用

神经元烟碱受体广泛地分布于中枢神经系统并参与脑内信号传导系统的调节过程。烟碱受体对钙离子通透的特点在其中发挥了重要的作用。这种激活烟碱受体产生的由钙离子介导的复杂的信息传递或许与学习记忆的提高、药物成瘾或神经保护机制有密切的关系。

烟碱受体变构调节和变构调节剂的研究进展

本文综述了烟碱受体变构调节的证据和变构调节剂的种类 ,指出变构调节发生在烟碱受体除识别位点以外的多个位点上 ,这些位点在受体与细胞膜交界的外侧、内侧、离子通道中和细胞膜上。膜片钳技术是重要研究手段之一 ,根据变构调节剂导致的烟碱受体性质的改变能确定它们的作用位点 。

大鼠黑质密部alpha4烟碱受体免疫电镜的研究

大鼠黑质密部ａｌｐｈａ４烟碱受体免疫电镜的研究孙桂媛侍继忠张开宁斌（中国医科大学组织学胚胎学教研室，沈阳１１０００１）黑质密部（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｎｉｇｒａｐａｒｓｃｏｍｐａｃｔａ，ＳＮｃ）神经元已经显示出α３、α４、α５、和β２、β３烟碱受体亚型...

烟碱受体拮抗剂α-芋螺多肽Eb1．6对L5脊神经切断大鼠热痛阈及脊髓星形胶质细胞和IL-1β表达水平的影响

目的探讨烟碱受体拮抗剂旷芋螺多肽（α—conotoxin，α-CTX）Ebl．6对L5脊神经切断（SNT）大鼠热痛阈（TWL）及脊髓IL-1β表达水平和星形胶质细胞活性的影响。方法180～220g成年雄性SD大鼠50只，随机分为五组：假手术组（N组），SNT后分别腹腔注射α-CTXEb1．60．15nmol／kg组（E1组）、1．5nmol／kg组（E2组）、15nmol／kg组（E3组）和SNT后生理盐水对照组（C组），每组10只。在造模手术术后第7天疼痛模型稳定后开始腹腔注射相应剂量药物或生理盐水，连续用药7d。分别于术后第7天、术后第13天测定各组大鼠给药前、给药后1、2、4、7、12h热缩爪潜伏期（TWL）。于术后第13天行为学测试结束后将各组大鼠处死取L5脊髓组织，以Western blot法测定脊髓星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary Acidic protein，GFAP）表达水平，ELISA法测定脊髓IL-1β表达水平。结果与给药前比较，E1、E2、E3组大鼠第7天给药后1、2、4hTWL明显延长（P〈0．05），给药后2h延长最明显；E1、E2、E3组大鼠第13天给药后1、2、4、7h以及E2、E3组第13天给药后12hTWL明显延长（P〈0．05），且均长于各组第7天相应时点的TWL（P〈0．05），给药后2h延长最明显；与E3组比较，E1、E2组大鼠第7天及第13天给药后2h的TWL明显缩短（P〈0．05）。且E1组明显短于E2组（P〈0．05）。与N组比较，E1、E2、E3组和C组大鼠脊髓IL-1β与GFAP表达水平明显升高（P〈0．05）；与C组比较，E1、E2、E3组脊髓IL-1β与GFAP表达水平明显下降（P〈0．05）；与E3组比较，E1、E2组脊髓IL-1β与GFAP表达水平明显升高（P〈0．05），且E1组明显高于E2组（P〈0．05）。结论腹腔注射Eb1.6能够剂量依赖性地减轻L5脊神经切断大鼠的热痛敏且连续用药能够增强其镇痛效果。其镇痛作用可能与抑制脊髓背角星形胶质细胞活化、降低IL-1β表达水平有一定关系。

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞的神经型烟碱受体电流(英文)

本实验采用膜片箝技术观察了神经生长因子分化 5～ 10 d的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤 (PC12 )细胞上烟碱受体离子通道电流。在全细胞膜片箝条件下 ,当箝制电压为 -80 m V时 ,灌流乙酰胆碱 (ACh,3 0μmol/ L )诱发一内向电流 ,快速始发并衰减。此乙酰胆碱诱发电流 (IAch)随膜去极化和超级化而分别减小和增大 ,且被筒箭毒所阻断 ,可见此电流是由烟碱受体引起的。全细胞IACh呈较强的内向整流。其衰减相可被一双指数函数拟合 ,时间常数 (τ)分别在秒和分级。τf 对浓度的依赖性较τs强。 PC12细胞表面含有与交感神经元相似的烟碱受体 ,因此提供了一个交感神经元样的同源细胞株。

培养大鼠颈上神经节单烟碱受体通道及突触电流的膜片钳研究

在培养１─２周的大鼠颈上神经节交感神经元标本上，用膜片钳技术记录了单烟碱受体通道电流及胆碱能突触电流，并分析了它们之间的关系。单烟碱受体通道至少有三种亚导状态，即１５ｐＳ，２７ｐＳ，３８ｐＳ，其中以２７ｐＳ最常见。通道有两种开放模式，即单个短促开放与长串开放。对应的平均开放时间分别为τ＿１＝１．７１ｍｓ，τ＿２＝１２．２４ｍｓ。对自发突触电流的分析表明，其下降相的衰减时间常数（τ＝１５．７±１ｍｓ）与上述长串开放的持续时间相当，提示在突触传递过程中，突触前末梢释放的ＡＣｈ引起了突触后神经元烟碱受体通道的长串开放。

新霉素抑制PC12细胞烟碱受体介导的反应

新霉素是一种氨基甙类抗生素 ,在细胞水平可以抑制磷脂酶C介导的信号转导系统。本研究采用全细胞膜片钳技术 ,以大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 (PC12 )为标本 ,观察了新霉素对乙酰胆碱诱发电流 (IACh)的影响。药理学鉴定表明 ,PC12细胞上的IACh是通过ACh激动烟碱受体引起的。钳制电压为 - 80mV时 ,ACh (30μmol/L)诱发一内向电流 ;细胞外同时给予新霉素 (0 0 1～ 1mmol/L)和ACh (30 μmol/L) ,可显著抑制IACh峰值。此抑制作用迅速、可逆 ,呈浓度依赖性。用新霉素预处理细胞 3～ 8min不影响其对IACh的抑制作用。用外源性蛋白激酶C (PKC)激动剂激活PKC ,同样可抑制IACh,而细胞内透析PKC抑制剂 (PKCI 19 31,0 1～ 5 μmol/L)不影响新霉素对IACh的抑制作用。以上结果提示 ,新霉素对PC12细胞的IACh有抑制作用 。