新型烟碱受体激动剂ZY-1对叠氮钠损伤细胞的保护作用

目的：观察新型烟碱受体激动剂ZY-1对叠氮钠造成PC12细胞化学性缺氧损伤的影响。方法：通过MTT比色法及台盼兰染色法测定存活细胞的相对数量。结果：叠氮钠(3μg／ml～1mg／ml)与PC12细胞共同孵育，可剂量依赖性地损伤细胞。因此，在随后的试验中以1mg／ml的叠氮钠作为细胞损伤模型的有效浓度。

α7烟碱受体拮抗剂对Aβ蛋白诱导损伤的PC12细胞保护作用的研究

目的观察α7烟碱受体拮抗剂对Aβ蛋白诱导损伤的PC12细胞远期影响,探讨其细胞保护的作用。方法采用高分化的PC12细胞为研究对象,以Aβ25-35制作细胞损伤模型,以烟碱受体激动剂(尼古丁)和α7烟碱受体拮抗剂(甲基牛扁亭碱)进行预处理。试验分为4组,分别是:对照组(蒸馏水)、模型组(Aβ25-35)、尼古丁组(尼古丁和Aβ25-35)、甲基牛扁亭碱组(甲基牛扁亭碱和Aβ25-35)。通过MTT比色法在多个时间点观察药物对细胞活力影响的动态变化,在此基础上采用流式细胞仪检测药物对细胞凋亡和坏死的影响。结果在所有时间点,模型组的细胞活力均显著低于对照组,凋亡和坏死率均高于对照组(P<0.01)。药物作用36～60h,尼古丁组的细胞活力显著高于模型组和甲基牛扁亭碱组(P<0.05),凋亡和坏死率较低(P<0.01);甲基牛扁亭碱组细胞活力及凋亡和坏死率与模型组差异无统计学意义。在药物作用84h后,与模型组和尼古丁组相比,甲基牛扁亭碱组细胞活力显著升高,凋亡和坏死率显著降低(P<0.01)。结论随着作用时间的延长(84h),烟碱受体激动剂(尼古丁)对PC12细胞的保护作用逐渐消失,而α7烟碱拮抗剂(甲基牛扁亭碱)逐渐显现出细胞保护作用。

α7烟碱型乙酰胆碱受体激动剂通过抑制核转录因子-κB活化可减轻脂多糖诱导的巨噬细胞炎症反应

目的 研究α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7nAchR）激动剂对脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞炎症反应的调控作用及其分子机制.方法 体外培养RAW264.7巨噬细胞,用LPS诱导炎性细胞模型进行实验.用1、10、100和500μg/L LPS刺激细胞5 h或用100μg/L LPS刺激细胞0、2、4、8、12、24、48、72 h;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达,免疫荧光法检测α7nAchR在巨噬细胞的定位,细胞增殖与毒性试剂盒（CCK8）检测1、10、100、1000μmol/Lα7nAchR激动剂（GTS-21）对LPS刺激后细胞活性的影响;ELISA检测不同浓度GTS-21对LPS刺激后促炎因子TNF-α、白细胞介素-1β（IL-1β）的表达.用100μg/L LPS和100μmol/L GTS-21刺激巨噬细胞,蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达,免疫荧光法检测HMGB1、NF-κB p65在细胞内的位置变化.结果 100μg/L LPS刺激巨噬细胞24 h时TNF-α表达达高峰.免疫荧光法检测显示,巨噬细胞膜上有α7nAchR存在.α7nAchR激动剂GTS-21无细胞毒性作用,且可呈剂量依赖性地反转LPS诱导细胞活性下降〔（96.2±1.0）%、（92.0±1.1）%比（86.5±2.2）%,均P〈0.05〕.与对照组比较,LPS组细胞上清液中TNF-α（ng/L：453.0±60.6比100.8±3.2）和IL-1β（μg/L：8.21±0.31比0.87±0.16）水平均明显升高（均P〈0.05）;用10μmol/L和100μmol/L GTS-21干预后可剂量依赖性地减少上清液中TNF-α（ng/L：227.5±17.5、81.0±8.8比453.0±60.6）和IL-1β（μg/L：4.86±0.72、2.32±0.45比8.21±0.31）表达水平（均P〈0.05）.GTS-21可明显降低LPS诱导的HMGB1表达水平（灰度值：0.788±0.130比2.061±0.330,P〈0.05）,并反转了LPS诱导的HMGB1胞质转移;同时GTS-21还可逆转LPS诱导的NF-κB p65核转位.结论 α7nAchR激动剂GTS-21通过抑制NF-κB活化途径而减轻LPS诱导的巨噬细胞炎症反应.

α7烟碱乙酰胆碱受体激动剂可能通过抑制p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路减少心肌纤维化

目的 探讨α7烟碱乙酰胆碱受体（α7nAchR）激动剂在心肌纤维化中的作用及其机制。 方法 分离培养乳鼠心肌成纤维细胞，传代培养2～4代时，分为4组：空白对照组、模型组、α7nAchR激动剂组和α7nAchR阻断剂组。空白对照组不做任何处理，模型组仅加入10－6 mol/L的血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ），α7nAchR激动剂组和α7nAchR阻断剂组分别加入5×10－6 mol/L的PNU-282987和10－6 mol/L的α7nAchR抑制剂甲基牛扁亭碱（MLA），60 min后加入10－6 mol/L的Ang Ⅱ。水溶性四唑盐WST-1检测不同处理组心肌成纤维细胞增殖，实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测不同处理组心肌成纤维细胞中α7nAchR基因表达，Western blot法检测不同处理组心肌成纤维细胞中α7nAchR、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）和磷酸化p38MAPK（p-p38MAPK）蛋白表达。结果 （1）α7nAchR激动剂组心肌成纤维细胞最终吸光度（0.50±0.13）显著低于α7nAchR阻断剂组和模型组（0.75±0.10、0.63±0.11，F＝10.567，P＝0.000），提示激动α7nAchR可抑制心肌成纤维细胞增殖。（2）α7nAchR激动剂组心肌成纤维细胞中α7nAchR mRNA和蛋白相对表达量（0.87±0.15、0.76±0.08）显著高于α7nAchR阻断剂组（0.45±0.09、0.40±0.14）、模型组（0.62±0.11、0.59±0.10）和空白对照组（0.32±0.13、0.30±0.07，F＝25.402，P＝0.000），提示α7nAchR激动剂可上调心肌成纤维细胞中α7nAchR基因表达。（3）α7nAchR激动剂组Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白、α-SMA蛋白、p-p38MAPK蛋白相对表达量（0.53±0.09、0.50±0.12、0.38±0.08、0.27±0.09）均低于模型组（0.65±0.12、0.62±0.10、0.57±0.11、0.45±0.11）和α7nAchR阻断剂组（0.81±0.13、0.71±0.11、0.70±0.10、0.68±0.08），而高于空白对照组（0.41±0.08、0.35±0.06、0.19±0.07、0.16±0.07，F＝29.647、32.962、30.549、53.665，P＝0.000、0.000、0.000、0.000），α7nAchR激动剂组p38MAPK蛋白相对表达量（0.71±0.12）高于模型组（0.52±0.10）和α7nAchR阻断剂组（0.35±0.09），而低于空白对照组（0.85±0.14，F＝44.347，P＝0.000）。结论 α7nAchR激动剂可抑制心肌成纤维细胞增殖，减少细胞间胶原蛋白合成，其机制可能与抑制p38MAPK信号通路活化有关。

胆碱能抗炎通路

机体在受到感染和损伤打击时,通过高度保守的内源性机制调节先天性免疫反应的程度,使致炎和抗炎反应趋于平衡,从而维持内环境稳定。缺乏炎症反应或过度炎症反应都会引起病理性反应：缺乏适当的炎症反应增加感染率或导致继发感染；而过度反应引起TNFα,HMGB1和其它促炎介质大量释放,形成全身性炎症反应,导致严重的病理性并发症如脓毒症和自身免疫性疾病,从而造成比原发打击本身更大的损伤。因此体内炎症反应的强度必须受到精细的调节。机体控制炎症反应主要通过两个机制：自身控制的先天性免疫机制和脑源性免疫调节通路。