烟碱型乙酰胆碱受体α7亚基在帕金森病细胞模型中调控多巴胺神经元的作用机制

目的分析烟碱型乙酰胆碱受体(Nicotinic acetylcholine receptors,nAChRs)α7对人神经母细胞瘤细胞(Human neuroblastoma cells,SH-SY5Y)增殖及凋亡的影响,阐明α7nAChR可以通过正向调控多巴胺(Dopamine,DA)神经元的表达来发挥其生物学功能,从而治疗帕金森病。方法本实验通过选取SH-SY5Y细胞系进行细胞培养、复苏、传代、制作帕金森病细胞模型以及细胞转染;实验分组为对照组、模型组、α7nAChR过表达组、α7nAChR过表达空载组;分别进行细胞增殖实验(Cell counting kit-8,CCK8)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测多巴胺(DA)的表达水平;Western blot检测α7nAChR、磷酸化钙调素依赖性蛋白激酶2(Phosphorylated calmodulin kinaseⅡ,p-CAMKⅡ)、磷酸化细胞外信号调节激酶(Phosphorylated extracellular signal regulated kinase,p-ERK)、磷酸化Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(Phosphorylated Kirsten rats arcomaviral oncogene homolog,p-Ras)的蛋白表达水平;免疫荧光检测酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)、α7nAChR、α-突触核蛋白(Alpha synuclein,αSYN)的表达水平。结果Model组α7nAChR的蛋白表达水平较Control组显著降低(P<0.05),而α7nAChR-OE组的蛋白表达水平较Model组显著升高(P<0.05)。CCK8表明,Model组细胞的增殖活性较Control组显著降低(P<0.05);α7nAChR-OE组细胞的增殖活性较Model组显著升高(P<0.05)。流式细胞术表明,Model组细胞的凋亡率较Control组显著升高(P<0.05);α7nAChR-OE组细胞的凋亡率较Model组显著降低(P<0.05)。Model组的αSYN水平较Control组显著升高(P<0.05);α7nAChR-OE组的αSYN水平较Model组显著降低(P<0.05)。Model组的TH,α7nAChR,DA水平较Control组显著降低(P<0.05);α7nAChR-OE组的TH,α7nAChR,DA水平较Model组显著升高(P<0.05)。Model组的Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(Kirsten rats arcomaviral oncogene homolog,KRAS),CAMK II,ERK的蛋白磷酸化水平较Control组显著升高(P<0.05);α7nAChR-OE组的KRAS,CAMK II,ERK的蛋白磷酸化水平较Model组显著降低(P<0.05)。结论α7nAChR的高表达能促进帕金森病模型细胞的增殖、抑制凋亡,且α7nAChR可以通过抑制Ca^(2+)/CAMK/ERK通路活性来发挥神经保护作用,提高DA神经元表达,改善帕金森病的症状。

α7烟碱型乙酰胆碱受体与阿尔茨海默病的关系

背景:α7烟碱型乙酰胆碱受体在大脑皮质和海马高度表达,并在阿尔茨海默病的病理发展过程中起重要调控作用,是阿尔茨海默病治疗的潜在靶点。目的:总结α7烟碱型乙酰胆碱受体和阿尔茨海默病的密切关系和相互作用机制。方法:检索中国知网、PubMed数据库中相关文献,中文检索词为“α7烟碱型乙酰胆碱受体,阿尔茨海默病,β-淀粉样蛋白,激动剂,正变构调节剂,拮抗剂”;英文检索词为“alpha 7 nicotinic acetylcholine receptor,Alzheimer’s disease,beta amyloid protein,agonist,positive allosteric modulator,antagonist”,文献检索时限为各数据库建库至2024年7月,依据入选标准对检索结果进行录用或排除,最终纳入符合标准的83篇文献进行综述。结果与结论:α7烟碱型乙酰胆碱受体通过与β-淀粉样蛋白的相互作用减轻β-淀粉样蛋白的神经毒性,如促进阿尔茨海默病的突触可塑性和胆碱能突触的快速传递、减轻β-淀粉样蛋白诱导的神经中枢炎症反应、抵抗神经细胞凋亡,从而对阿尔茨海默病患者的脑具有保护作用等。α7烟碱型乙酰胆碱受体作为阿尔茨海默病治疗靶标具有很大的潜能,但是又存在一系列问题有待解决,比如α7烟碱型乙酰胆碱受体的脱敏性、适度活性稳定性及基因多态性等问题。筛选高特异、安全性和以α7烟碱型乙酰胆碱受体为核心的多靶点结合作用的药物,将成为未来阿尔茨海默病治疗研究的一个方向。

α7烟碱型乙酰胆碱受体对围手术期神经认知功能的影响研究进展

α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)在中枢神经系统和免疫系统中广泛表达,发挥神经-免疫调节作用。一方面,α7nAChR参与神经递质的传递、兴奋性信号的传导和突触可塑性的维持,对于保持神经认知功能的正常与稳定具有重要意义;另一方面,α7nAChR作为胆碱能抗炎通路的重要组成部分,参与调节中枢系统炎症反应、氧化应激、细胞凋亡和自噬等生理、病理过程,发挥免疫调节和神经保护作用,是改善围手术期神经认知功能的潜在靶点。本文对α7nAChR的生物学特征及其对围手术期神经认知功能的影响进行综述,以期为临床改善手术患者的围手术期神经认知功能提供新的思路和方法。

α7烟碱型乙酰胆碱受体在阿尔茨海默病中的作用

随着全球人口老龄化的加剧,阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)发病率持续上升,目前已成为最常见的神经退行性疾病之一。尽管研究人员对AD的病理特征有深入的了解,如淀粉样斑块、Tau蛋白异常磷酸化形成神经元纤维缠结等,但其确切的病因和发病机制仍不完全清楚。α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)是中枢神经系统中重要的乙酰胆碱受体亚型,广泛分布于大脑的多个区域,尤其是与学习和记忆相关的海马和皮质区域,在神经递质释放、神经可塑性、细胞信号转导以及炎症反应中发挥重要功能。近年来,α7nAChR在AD中的作用受到广泛关注。研究表明,α7nAChR参与β淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)代谢、Tau蛋白磷酸化、神经炎症反应、氧化应激等AD发病进程中的多个重要环节,提示α7nAChR在AD的发病机制中扮演着重要角色,有望作为AD潜在治疗靶点。本综述旨在总结α7nAChR与AD发病的关联及其研究进展,为未来的疾病治疗提供可能的研究方向。

α7烟碱型乙酰胆碱受体mRNA和乙酰胆碱及胆碱酯酶对急性呼吸窘迫综合征患者早期病情评估及预测其发生多器官功能障碍综合征的价值研究

目的探讨外周血中α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAchR)mRNA、乙酰胆碱、胆碱酯酶对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者早期病情评估及预测其发生多器官功能障碍综合征(MODS)的价值。方法本研究采用前瞻性观察性研究方法。选取2020年8月至2022年10月在重庆市人民医院重症医学科住院的需要呼吸机治疗的ARDS患者65例。于确诊ARDS后24 h内检测外周血单个核细胞α7nAchR mRNA及外周血乙酰胆碱和胆碱酯酶水平,并进行与患者疾病严重程度有关的急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)和MODS评分。观察治疗28 d期间MODS发生情况,据此分为MODS组(31例)和非MODS组(34例)。比较2组上述临床资料。分析α7nAchR mRNA、乙酰胆碱、胆碱酯酶水平与APACHEⅡ、MODS评分的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析α7nAchR mRNA、乙酰胆碱、胆碱酯酶对ARDS患者发生MODS的预测价值。结果MODS组α7nAchR mRNA、乙酰胆碱、胆碱酯酶水平明显低于非MODS组[0.23(0.12,0.32)比0.69(0.58,0.87)、(201±79)mg/L比(317±80)mg/L、2319(1893,4241)U/L比4788(3831,5379)U/L],差异均有统计学意义(均P<0.001)。α7nAchR mRNA、乙酰胆碱、胆碱酯酶水平与APACHEⅡ、MODS评分均呈负相关(APACHEⅡ评分:r=-0.789、-0.650、-0.635,均P<0.001;MODS评分:r=-0.832、-0.658、-0.674,均P<0.001)。α7nAchR mRNA、乙酰胆碱、胆碱酯酶预测ARDS患者发生MODS的ROC曲线下面积、敏感度、特异度分别为0.964、100.0%、83.9%,0.848、88.2%、77.4%,0.845、100.0%、58.1%;前二者预测价值较高。结论α7nAchR mRNA、乙酰胆碱、胆碱酯酶水平可反映ARDS患者早期病情及预测MODS发生,其中α7nAchR mRNA、乙酰胆碱预测价值较高。

意大利蜜蜂α1亚型烟碱型乙酰胆碱受体功能表达和分析

尽管作用于昆虫烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors,nAChRs)的新烟碱类杀虫剂是农作物害虫防治的常用工具,但它们对意大利蜜蜂等传粉昆虫产生严重的负面影响。本研究克隆意大利蜜蜂nAChRα1亚基基因,对其进行系统发育分析,并利用双电极电压钳技术研究α1亚型nAChR与新烟碱类杀虫剂(吡虫啉、噻虫胺和呋虫胺)的相互作用机制。序列比对和系统进化树分析显示,意大利蜜蜂nAChRα1亚基具有典型的nAChRs亚基家族基因结构域特征,与半翅目昆虫的α1亚基关系最远,与同属膜翅目蜜蜂的α1亚基关系最近。将意大利蜜蜂nAChRα1亚基与大鼠nAChRβ2亚基在非洲爪蟾卵母细胞中共表达,电生理结果显示吡虫啉对Amα1/rβ2 nAChR的激动效率最高,噻虫胺最低,而Amα1/rβ2 nAChR对呋虫胺的激动亲和力最高,对吡虫啉最低。这表明意大利蜜蜂nAChRα1亚基是新烟碱类杀虫剂的作用靶标之一,并且Amα1/rβ2 nAChR对不同新烟碱类杀虫剂敏感性存在差异。本研究结果对于开发作用于害虫的新型高选择性杀虫剂具有重要理论指导意义。

严重多发伤并急性胃肠损伤家兔的肠道黏膜损伤严重程度及α7烟碱型乙酰胆碱受体的变化

目的:探究严重多发伤并急性胃肠损伤(AGI)家兔的肠道黏膜损伤严重程度及α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7-nAChR)的变化。方法:使用自制重力小型牵引式对(侧)撞机来模拟交通意外致伤以构建严重多发伤家兔模型;创伤严重程度评分(ISS)评估家兔创伤程度;AGI评分评估家兔AGI程度;ELISA法检测血浆二胺氧化酶(DAO)、内毒素及血清TNF-α含量;高压液相色谱法检测尿液乳果糖(L)、甘露醇(M)含量,并计算L/M;平板计数法检测家兔肠道细菌移位情况;HE染色及透射电镜分别观察小肠组织病理变化及超微结构损伤情况;免疫组化法及Western blot检测小肠组织α7-nAChR表达情况。结果:造模12 h后,AGI分级:Ⅰ级40只,Ⅱ级25只,Ⅲ级11只,Ⅳ级4只;与T0比较,T1、T2、T3家兔血浆DAO及内毒素、尿液L/M及血清TNF-α含量、肠道细菌移位率、肠道病理损伤程度随时间的推移依次显著升高(P<0.05),小肠组织α7-nAChR表达随时间的推移依次显著降低(P<0.05)。结论:严重多发伤家兔于早期便出现肠道功能损伤、肠道菌群移位及肠黏膜屏障功能损伤,这可能与α7-nAChR表达降低有关。

α7烟碱型乙酰胆碱受体调控线粒体自噬在脓毒症急性胃肠损伤中的作用机制研究

目的分析α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChRs)调控线粒体自噬在脓毒症急性胃肠损伤(AGI)中的作用及机制。方法将清洁级大鼠(均为雄鼠,重量约200g)随机分为脓毒症AGI大鼠模型组(模型组)、模型+迷走切除组、假手术组(Sham组),各10只,于术后6 h取大鼠肠道组织,采用电镜观察线粒体,酶联免疫吸附法检测白介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)。培养RAW264.7细胞,分为α7nAChRs siRNA组、阴性对照组,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测线粒体DNA(mtDNA),采用Western blot法检测P62、parkin水平。结果模型组细胞内线粒体变大,嵴变短变少;模型+迷走切除组线粒体转化为空泡状;Sham组细胞内线粒体较小。模型+迷走切除组、模型组IL-1β、IL-6、TNF-α水平高于Sham组(均P<0.05),模型+迷走切除组明显高于模型组(均P<0.05);α7nAChRs siRNA组mtDNA相对表达量高于阴性对照组(P<0.05),P62、parkin水平低于阴性对照组(均P<0.05)。结论α7nAChRs的失活可减少线粒体自噬,加剧脓毒症AGI局部炎症反应。其可能通过降低巨噬细胞P62、parkin等线粒体自噬相关蛋白水平,上调mtDNA表达的机制实现。

α7烟碱型乙酰胆碱受体改善创伤性脑损伤认知功能的研究进展

认知功能障碍是创伤性脑损伤主要的临床特征,这种长期存在的认知功能障碍与神经退行性疾病存在紧密联系,是发生痴呆的危险因素。α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)在中枢神经元及免疫细胞广泛分布,在调控感觉、认知、递质释放和神经元的保护等方面具有重要作用,更是改善脑损伤后认知行为和神经保护的重要机制。本研究拟探讨α7nAChR在创伤性脑损伤中认知功能障碍作用的研究进展。

α7烟碱型乙酰胆碱受体在单核/巨噬细胞介导的炎症反应与极化调控中的作用

单核细胞和巨噬细胞在健康和疾病中均发挥重要作用,是固有免疫的重要组成,在其介导的炎症反应中保护宿主、清除病原体和调节免疫平衡,可通过清除细胞碎片、异物及调节炎症和愈合过程等维持内环境稳定。根据微环境和细胞激活状态,巨噬细胞可通过改变不同表型影响疾病转归。近二十年人们对胆碱能抗炎通路(CAP)在炎症反应中的作用及机制研究越来越深入,尤其是该通路中的重要结构——α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR),其本质为神经免疫系统的配体门控离子通道,且在调控单核/巨噬细胞吞噬、趋化因子和细胞因子产生、细胞存活和极化等方面发挥重要作用,相关机制涉及NLRP3炎症小体,可作为多种炎症性疾病的潜在治疗靶点。本文综述α7nAChR在炎症和免疫介导的疾病中对单核/巨噬细胞功能调控和极化的作用。

作用于烟碱型乙酰胆碱受体的杀虫剂研究进展

烟碱型乙酰胆碱受体是昆虫体内一类重要的神经蛋白,具有多种亚型结构,是开发高效、安全杀虫剂的重要靶标。针对该靶标已开发了多种杀虫剂,从作用机制和化学结构等方面,分类概述了作用于烟碱型乙酰胆碱受体杀虫剂的研究进展。

草地贪夜蛾烟碱型乙酰胆碱受体α6和α7亚基基因克隆及其对乙基多杀菌素胁迫的响应

【目的】烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors,nAchRs)作为昆虫中枢神经系统中重要的神经递质受体,是乙基多杀菌素的重要靶标。本研究旨在克隆草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda nAchR基因,并探析其对乙基多杀菌素胁迫的响应。【方法】基于前期草地贪夜蛾转录组数据,采用RT-PCR和RACE分别克隆草地贪夜蛾nAchRα6和α7亚基基因;乙基多杀菌素(0.400 mg/L)处理草地贪夜蛾3龄幼虫48 h后,采用RT-qPCR技术检测nAchRα6和α7亚基基因的表达量的变化。【结果】nAchRα6亚基基因(GenBank登录号:MT951400)开放阅读框长1506 bp,编码502个氨基酸,并具有跨膜区与信号肽;nAchRsα7亚基基因(GenBank登录号:MW557608)开放阅读框长1524 bp,编码508个氨基酸,并具有跨膜区与信号肽。根据氨基酸多序列比对分析,草地贪夜蛾nAchR亚基α6和α7具有烟碱性乙酰胆碱受体α家族典型特征。0.400 mg/L乙基多杀菌素胁迫48 h后,草地贪夜蛾3龄幼虫nAchRα6亚基基因表达量显著增加,而nAchRα7亚基基因表达量无显著性变化。【结论】乙基多杀菌素可能作用于草地贪夜蛾的nAchRα6亚基。本研究为深入研究草地贪夜蛾对乙基多杀菌素的靶标抗性机制奠定了初步基础。

小菜蛾烟碱型乙酰胆碱受体α亚基cDNA片段的克隆和序列分析

利用简并引物 ,采用PCR等分子生物学技术 ,对小菜蛾烟碱型乙酰胆碱受体 (nAChR)α亚基的cDNA片段进行克隆 ,并对序列进行分析。测序结果显示 ,扩增的目的基因片段包含了nAChRα亚基的 3种亚型 (分别命名为Pxαl、Pxα2、Pxα3) ,都具有典型的α亚基的结构 :2个相邻的半胱氨酸 ,由 2个半胱氨酸之间二硫键形成包含 15个氨基酸的胞外环 ,与烟碱和α银环蛇毒素结合有关的氨基酸残基。克隆的基因片段在氨基酸序列上和其他昆虫nAChRα亚基基因之间有高达 6 5 %～ 99%的同源性 ,表明克隆的cDNA片段是小菜蛾nAChRα亚基基因的部分序列。

电针对脑缺血再灌注大鼠学习记忆行为及海马区α7烟碱型乙酰胆碱受体的影响

目的:探讨电针对脑缺血再灌注大鼠学习记忆行为及海马区α7烟碱型乙酰胆碱受体(alpha7 nicotinic acetylcholine receptor,α7n ACh R)的影响。方法:将45只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组和电针组,每组均15只。模型组和电针组均参照Longa改良线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。电针组电针神庭、百会穴,共7d,每次30min。采用Morris水迷宫实验观察大鼠的学习记忆功能;HE染色法观察大鼠海马神经元细胞结构变化;免疫组织化学染色法观测大鼠海马区α7n Ach R免疫阳性细胞的表达;Western blot法检测大鼠海马区α7n ACh R蛋白的表达。结果:各组大鼠游泳速度未见显著性差异(P>0.05);模型组与假手术组相比大鼠逃避潜伏期明显延长(P<0.01),跨越平台次数明显减少(P<0.01);电针组与模型组相比大鼠逃避潜伏期明显缩短(P<0.01),跨越平台次数明显增加(P<0.01)。与假手术组相比,模型组海马区CA1区α7n ACh R免疫阳性细胞表达及整个海马区α7n ACh R蛋白的表达降低(P<0.01),海马神经元细胞损伤加重;与模型组相比,电针上调海马区CA1区α7n ACh R免疫阳性细胞表达及整个海马区α7n ACh R蛋白的表达(P<0.01),同时降低海马神经元细胞的损伤。结论:电针能改善脑缺血再灌注损伤大鼠的学习记忆能力,保护神经元细胞,其机制可能与上调海马区α7n ACh R表达有关。

小菜蛾烟碱型乙酰胆碱受体α亚基cDNA的克隆、序列分析与不同发育阶段表达分析

烟碱型乙酰胆碱受体（nAChR）介导昆虫中枢神经系统中胆碱能突触兴奋性神经递质的快速传递，也是新烟碱类杀虫剂和多杀菌素的作用靶标。本研究利用RT-PCR和RACE技术，克隆了小菜蛾Plutella xylostella nAChRα亚基的一个新基因（Pxx8）的全长cDNA（GenBank登录号为EU914853）。Pxα8的cDNA序列全长1744bp，开放阅读框为1602bp，编码534个氨基酸，具有nAChRd亚基的典型特征，与其他昆虫nAChRα8亚基具有77％～96％的相似性，与果蝇nAChR132亚基具有76％的相似性。既胡的开放阅读框存在单核苷酸多态性位点，导致多个位点氨基酸的替换。雌性4龄幼虫的多态性位点多于雄性4龄幼虫，而且雌、雄4龄幼虫的多态性位点均不相同。半定量RT—PCR研究结果表明，Pxcα8mRNA在成虫期表达量高于蛹期和4龄幼虫期。本研究结果为进一步研究小菜蛾nAChR亚基的多样性和对多杀菌素的靶标抗性机制提供重要基础。

α7烟碱型乙酰胆碱受体基因敲除对非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝脏炎症的影响研究

目的探讨α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7n AChR)基因敲除对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠肝脏炎症的影响。方法 2014年6月—2015年5月,选取40只SPF级雄性6周龄C57BL/6J小鼠和40只SPF级雄性6周龄α7n AChR基因敲除小鼠,采用随机数字表法分为C57普通饲料组、C57高脂高糖组、基因敲除普通饲料组、基因敲除高脂高糖组,每组20只。C57普通饲料组、基因敲除普通饲料组小鼠给予普通饲料喂养,C57高脂高糖组、基因敲除高脂高糖组小鼠给予高脂饲料喂养同时饮用20%果糖饮用水,喂养24周,建立NASH小鼠模型;小鼠饲养期间定期称量体质量,并且尾静脉取血检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)水平。21周时C57高脂高糖组、基因敲除高脂高糖组小鼠给予400μg/kg烟碱腹腔注射;C57普通饲料组、基因敲除普通饲料组小鼠给予等量0.9%氯化钠溶液腹腔注射,均1次/d,共3周。24周后处死小鼠,眼球取血,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清炎性细胞因子白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,观察小鼠肝脏外观变化及肝脏湿重,肝脏病理切片染色观察炎症程度和脂肪变性情况。结果第12、15、18、21、24周时,C57高脂高糖组、基因敲除高脂高糖组小鼠体质量较C57普通饲料组、基因敲除普通饲料组升高(P<0.05);第12、15、18、21、24周时,基因敲除高脂高糖组小鼠体质量较C57高脂高糖组升高(P<0.05)。C57高脂高糖组、基因敲除高脂高糖组小鼠第8、16、24周时血清ALT、AST、TG、TC水平,第24周时血清IL-6、TNF-α水平、肝脏湿重较C57普通饲料组、基因敲除普通饲料组升高(P<0.05);基因敲除高脂高糖组小鼠第8、16、24周时血清ALT、AST水平,第16、24周时血清TG、TC水平,第24周时血清IL-6、TNF-α水平、肝脏湿重较C57高脂高糖组升高(P<0.05)。病理切片苏木素-伊红(HE)、油红染色结果显示:C57普通饲料组、基因敲除普通饲料组小鼠炎症程度和脂肪变性均不明显,C57高脂高糖组、基因敲除高脂高糖组小鼠在第8周开始出现轻微炎症和脂肪变性,以小脂滴为主,到第16、24周,炎症和脂肪变性逐渐加重,脂肪变性以中、大滴为主,基因敲除高脂高糖组小鼠肝脏组织炎症程度和脂肪变性均明显重于C57高脂高糖组小鼠。结论α7n AChR基因敲除能够明显加重NASH小鼠的肝脏炎症。

治疗炎性疾病的新靶点——α7烟碱型乙酰胆碱受体

胆碱能抗炎通路是新近发现的一种神经-免疫调节通路,其潜在的药物作用靶点是α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR)。近年来大量的研究证明特异性激动α7nAChR能够有效减少促炎细胞因子的释放。本文综述了α7nAChR在炎性疾病发生发展中的作用,拟为炎性疾病的治疗提供新的理论和思路。

马铃薯甲虫3个烟碱型乙酰胆碱受体α亚基基因的克隆及表达分析

通过克隆马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata)烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)基因的全长序列并分析其时空表达量差异,为马铃薯甲虫nAChR亚基功能以及对新烟碱类药剂靶标抗性机制的研究提供重要基础。根据马铃薯甲虫转录组数据,采用RACE克隆技术获得3个马铃薯甲虫nAChRα基因的cDNA全长序列;通过相似性和进化树分析验证这3个基因的亲缘关系;利用实时荧光定量PCR技术分析这些基因在马铃薯甲虫不同发育阶段和成虫不同部位的表达情况。本试验验证并获得3条nAChRα亚基片段序列,经BLAST比对得出其分别属于nAChRα4、nAChRα7和nAChRα9亚基,进一步克隆得到这些基因的全长序列,分别命名为Ldα4、Ldα7和Ldα9。3个亚基基因编码的氨基酸序列与已知的昆虫同源序列有较高的相似性。其中Ldα4、Ldα7和Ldα9与赤拟谷盗的相似性最高,分别为87%、89%和47%;Ldα4、Ldα7和Ldα9亚基基因在马铃薯甲虫成虫中主要集中于头部和胸部,在蛹期、幼虫和成虫中均有表达,但表达量有明显差异,Ldα4、Ldα7和Ldα9分别在成虫、3龄幼虫和蛹期阶段的表达量最高。克隆获得的3个基因Ldα4、Ldα7和Ldα9具备nAChRα基因的典型结构特征,且与赤拟谷盗的相应基因位于同一分支,进一步验证了同为鞘翅目昆虫的亲缘关系。Ldα4、Ldα7和Ldα9亚基基因在马铃薯甲虫不同生长阶段的表达量有差异,推测这些亚基基因在马铃薯甲虫的不同生长发育中发挥特定作用。

α7烟碱型乙酰胆碱受体在调控动物炎症反应中的作用

α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)属于配体门控离子通道蛋白,由5个相同的亚单位组成,除在神经细胞表达外,在多种免疫细胞中也有表达。α7nAChR活化后主要通过核转录因子-κB(NF-κB)和双面神激酶2-信号传导与转录激活子3(JAK2-STAT3)等信号途径调控细胞因子的基因表达、蛋白质合成,进而缓解炎症反应。部分营养物质能通过α7nAChR介导的信号途径调控动物炎症反应。本文主要就α7nAChR介导的抗炎作用机制及其在营养物质调控炎症反应中的作用作一综述。

α3β2与α3β4烟碱型乙酰胆碱受体α和β亚基不同配比的药理活性研究

目的:比较α和β亚基不同配比形成α3β2和α3β4烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)敏感性的差异。方法:体外转录获得α和β亚基的cRNA,采用显微注射将3种不同配比(α∶β分别为1∶10、1∶1和10∶1)的cRNA注入非洲爪蟾卵母细胞,利用双电极电压钳检测受体表达情况。利用激动剂乙酰胆碱(ACh)和拮抗剂α-芋螺毒素Reg IIA(α-CTx Reg IIA)检测在3种配比条件下形成受体药理活性的差异。结果:对于α3β2 nAChR亚型,在3种配比情况下,ACh的半数有效浓度(EC50)分别为91.2μmol/L、104.4μmol/L和130.6μmol/L,α-CTx Reg IIA的半数抑制浓度(IC50)分别为40.2 nmol/L、36.4 nmol/L和42.3 nmol/L。对于α3β4 nAChR亚型,在3种配比情况下,ACh的EC50分别为44.0μmol/L、110.0μmol/L和230.0μmol/L,α-CTx Reg IIA的IC50分别为226.8 nmol/L、71.5 nmol/L和49.4 nmol/L。结论:α3和β4亚基比例的改变会导致α3β4 nAChR结构和药理活性的改变。α3和β2亚基比例的改变对α3β2 nAChR结构和活性没有影响。