失敏态烟碱样受体

烟碱样受体属于配体门控性离子通道受体 ,参与调节体内许多生理过程。激动剂反复作用可以诱导N受体失敏 ,许多因素参与调节烟碱样受体的失敏 ,如受体亚单位、信号转导系统、细胞微环境的变化等都会影响受体的失敏过程。失敏态N受体并非处于无功能状态 ,它们可能参与调节递质的释放。

烟碱样乙酰胆碱受体及其有关杀虫药剂

对烟碱基本结构作适当调整 ,出现新一代烟碱类似物 ,其杀虫活性和稳定性明显高于烟碱 ,它们的作用靶点因此受到人们的重视。本文重点阐述了烟碱样乙酰胆碱受体的分子结构和药理特性 ,并简要介绍其有关的杀虫药剂。

烟碱样乙酰胆碱受体α7在支气管哮喘患儿CD4^+T淋巴细胞上的表达

目的探讨哮喘患儿血CD4+T淋巴细胞表达烟碱样乙酰胆碱受体α7(nAChRα7)与相应的细胞培养液IL-4、干扰素-γ(IFN-γ)水平的关系,分析nAChRα7在哮喘发病过程中的临床意义。方法哮喘患儿30例(哮喘组)与健康儿童20例(健康对照组),分别抽取静脉血8mL,分离外周血淋巴细胞,并分别加入100μmol/L烟碱、1.0mg/Lα-银环蛇毒(α-BTX),另设空白对照,恒温孵育24h后提取其淋巴细胞,并收取培养液置-20℃冰箱保存。用三色流式细胞仪检测各组淋巴细胞CD3+/CD4+/nAChRα7表达。ELISA法检测其淋巴细胞培养液中IFN-γ、IL-4水平。结果哮喘组患儿血CD3+/CD4+/nAChRα7表达较健康对照组儿童明显增高(P<0.05)。烟碱刺激24h后哮喘组、健康对照组外周血CD3+/CD4+/nAChRα7的表达均较空白对照明显增加(Pa<0.01);且烟碱刺激24h后哮喘组较健康对照组表达显著增加(P<0.05)。α-BTX刺激24h后外周血CD3+/CD4+/nAChRα7表达降低,但无统计学意义(Pa>0.05)。哮喘组培养液中IL-4水平较健康对照组增加,IFN-γ水平较健康对照组减低。烟碱刺激24h后IL-4水平较空白对照增高(P<0.01),IFN-γ水平较空白对照明显减低(P<0.05)。α-BTX刺激24h后IL-4、IFN-γ水平均无明显变化(Pa>0.05)。外周血CD4+T淋巴细胞nAChRα7表达与淋巴细胞培养液IL-4水平呈正相关(r=0.517P<0.05),与IFN-γ水平呈负相关(r=-0.288P<0.05)。结论哮喘患儿血CD4+T淋巴细胞表面的nAChRα7表达增加,nAChRα7表达影响培养液IL-4、IFN-γ水平和Th1/Th2平衡,是影响哮喘的发病的重要因子。

3T3-L1前脂肪细胞烟碱样胆碱能受体α7亚型功能状态对chemerin及其受体chemerinR基因表达的影响

目的观察3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化过程中chemerin及其受体(chemerinR)基因表达水平的变化趋势,及脂肪细胞中非神经元型胆碱能系统尤其是烟碱样胆碱能受体α7功能状态对前脂肪细胞和诱导分化成熟脂肪细胞中新型促脂解脂肪因子chemerin和其受体基因表达水平的影响,旨在探讨脂肪细胞中非神经元型胆碱能系统对脂解影响的分子机制。方法"经典激素鸡尾酒法"(1-甲基3-异丁基黄嘌呤+胰岛素+地塞米松+胎牛血清+DMEM/F12培养基)诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,并于分化进程中0h,6h,12h,1d,3d,6d和9d收集细胞并提取总RNA,RT-PCR技术检测chemerin、chemerinR mRNA时序性变化规律。并加入不同浓度(10-8mol/L、10-6mol/L和10-4mol/L)的烟碱样乙酰胆碱受体α7激动剂氯化胆碱和拮抗剂甲基牛扁亭碱,分别处理3T3-L1前脂肪细胞和诱导分化成熟的脂肪细胞12 h、24 h和36 h后,抽提总RNA,RT-PCR检测chemerin、chemerinR mRNA的表达。结果①在诱导3T3-L1前脂肪细胞分化成熟的过程中,二者基因均呈现逐渐升高趋势,至分化末期表达水平最高。②与相应作用时点的空白对照组比较,氯化胆碱能显著下调前脂肪细胞chemerin、chemerinR mRNA和成熟脂肪细胞中chemerin mRNA水平;甲基牛扁亭碱则明显上调前脂肪细胞chemerin、chemerinR mRNA和成熟脂肪细胞中chemerin mRNA水平,上述两种干预均对成熟脂肪细胞中chemerinR mRNA水平无明显影响。③且在相同浓度、相同时间干预下,烟碱样胆碱能受体α7特异性激动剂或拮抗剂对前脂肪细胞中chemerin、chemerinR mRNA水平影响均较诱导分化成熟脂肪细胞组显著。结论前脂肪细胞上烟碱样胆碱能受体α7,很可能是介导前脂肪细胞固有胆碱能系统发挥生物学效应的重要物质,除参与脂解的直接调控外,还可能通过影响自身脂肪因子的表达实现间接调节。

肝络通对门静脉高压症大鼠肝组织α7-烟碱样乙酰胆碱受体的影响

目的:分析肝络通对门静脉高压症大鼠肝组织中α7-烟碱样乙酰胆碱受体表达的影响特征,探讨肝络通治疗门静脉高压症的可能机制。方法:取体重240～260g的清洁级雄性SD大鼠40只,根据体重随机分为假手术组、2周模型组、2周肝络通组、4周模型组、4周肝络通组。模型组及给药组采用胆总管结扎术(CBDL)对大鼠进行造模,分别于造模2周、4周测量门静脉压力,并用免疫印迹法检测α7-烟碱样乙酰胆碱受体(nAchRα7)在肝组织中的表达。结果:胆总管结扎后2周和4周门静脉压力均显著升高,模型组nAchRα7的表达较假手术组明显增多,门静脉压力和nAchRα7的表达具有随术后时间延长而加重的一致性趋势。肝络通组门静脉压力显著低于模型组,术后4周作用最为显著;2周肝络通组nAchRα7的表达与2周模型组比较无显著差异,4周肝络通组较4周模型组显著减少。结论:肝组织nAchRα7的表达变化与门静脉压力变化具有一致性趋势,肝络通降低门静脉压力的作用可能与调节肝组织内nAchRα7的表达有关。

条件免疫对胶原性关节炎大鼠烟碱样乙酰胆碱受体及胆碱乙酰转移酶表达的影响

目的建立条件免疫反应(CIR)模型,研究CIR状态下胶原性关节炎(CIA)大鼠烟碱样乙酰胆碱受体α7亚单位(nAChRα7)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)蛋白和mRNA表达,探讨CIR可能的胆碱能通路作用机制。方法将大鼠分为健康对照组和CIA模型组,模型组大鼠分为5组:CIR组;甲氨蝶呤(MTX)+泼尼松(Pred)治疗组;MTX+Pred治疗减量组;单纯闻樟脑气味组;空白对照组。用免疫组织化学方法和RT-PCR方法检测各组大鼠关节滑膜nAChRα7、ChAT蛋白和mRNA表达。结果免疫组织化学和RT-PCR均显示CIR组关节滑膜nAChRα7、ChAT蛋白和mRNA的表达明显均高于空白对照组(P均<0.01);空白对照组大鼠表达nAChRα7、ChAT明显低于健康对照组和CIR(P均<0.01),而MTX+Pred组、MTX+Pred减量组、单纯闻樟脑气味组均与空白对照组差异无显著性(P均>0.05)。结论CIR状态下nAChRα7、ChAT mRNA和蛋白表达水平增高,表明胆碱能抗炎通路在CIR治疗胶原性关节炎大鼠的作用机制中起重要作用。

3T3-L1前脂肪细胞中烟碱样乙酰胆碱受体α7对脂肪因子肾上腺髓质素mRNA表达的影响

目的研究3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中是否有胆碱能系统物质mRNA的表达,及烟碱样乙酰胆碱受体(nAChR)α7功能状态对脂肪因子肾上腺髓质素(AM)mRNA表达的影响,初步阐明脂肪细胞中非神经胆碱能系统与肥胖、胰岛素抵抗及其他脂代谢性疾病的关系。方法以3T3-L1前脂肪细胞和诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞为研究对象,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中是否有乙酰胆碱酯酶(AChE)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)和nAChR α7三种胆碱能系统主要组分的mRNA表达;对前脂肪细胞及成熟脂肪细胞分别予不同水平的广谱nAChR激动剂尼古丁、特异性nAChR α7激动剂氯化胆碱及特异性nAChRα7拮抗剂甲基牛扁亭碱处理12、24、36h,并设立相应处理时间的空白对照组,应用RT-PCR方法检测前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中AM mRNA的表达。结果1.RT-PCR方法证实在3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中均有AChE、ChAT、AChR α7的mRNA表达。2.给予不同剂量的尼古丁和氯化胆碱,干预作用不同时间,3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中AM mRNA表达水平与相应的空白对照组比较均呈剂量依赖性升高(P<0.05或P<0.01),但随干预作用时间延长,这种剂量依赖性上调效应减弱。二种激动剂以氯化胆碱的剂量依赖性上调效应更明显。而相同剂量下不同作用时间的处理组间无统计学差异(Pa>0.05)。3.拮抗剂甲基牛扁亭碱对3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中AM mRNA表达则呈明显的剂量依赖性抑制作用(P<0.05或P<0.01)。结论3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中存在非神经元型胆碱能系统,其中nAChR α7调节脂肪因子AM mRNA的表达,脂肪组织中非神经元型胆碱能系统的重要组分nAChR α7可能在肥胖、胰岛素抵抗及其他脂代谢相关疾病的病理生理过程中发挥重要作用。

α7-烟碱样乙酰胆碱受体基因多态性与精神分裂症的关联研究

目的研究α7-烟碱样乙酰胆碱受体基因rs1042724多态性与精神分裂症的相关性。方法运用聚合酶链反应扩增及单核苷酸多态性的分子生物学技术,对符合精神分裂症诊断标准的98个先证者及其父母组成的核心家系,测定α7-烟碱样乙酰胆碱受体基因分型,进行精神分裂症的α7-烟碱样乙酰胆碱受体基因多态性的关联分析和传递不平衡(TDT)检验。结果TDT检验结果提示α7-烟碱样乙酰胆碱受体基因等位基因与精神分裂症之间的相关性(M cNem ar2χ=4.21,P<0.05),且等位基因T携带者,其精神分裂症的易患性是C携带者的1.31倍(RR=1.31,2χ(RR)=3.96,P<0.05)。结论提示α7-烟碱样乙酰胆碱受体基因rs1042724与精神分裂症相关联。

α7-烟碱样乙酰胆碱受体基因rs1042724多态性与精神分裂症的关联研究

目的研究α7-烟碱样乙酰胆碱受体基因rs1042724多态性与精神分裂症的相关性。方法运用聚合酶链反应扩增及单核苷酸多态性的分子生物学技术,对符合精神分裂症诊断标准的98个先证者及其父母组成的核心家系,测定α7-烟碱样乙酰胆碱受体基因分型,进行精神分裂症的α7-烟碱样乙酰胆碱受体基因多态性的关联分析和传递不平衡(TDT)检验。结果TDT检验结果提示α7-烟碱样乙酰胆碱受体基因等位基因与精神分裂症之间的相关性(McNemarχ2=4.21,P<0.05),且等位基因T携带者,其精神分裂症的易患性是C携带者的1.31倍(RR=1.31,χ2(RR)=3.96,P<0.05)。结论提示α7-烟碱样乙酰胆碱受体基因rs1042724与精神分裂症相关联。

烟碱样胆碱能受体（N-AChR）的分离提纯以及在药理毒理研究中的应用

本文报告了从丁氏双鳍电鳐电器官中分离纯化N—AChR，研究其生化性质，并在毒物、药物、实验性重症肌无力（EAMG）等方面进行了研究。一、N—AChR的分离提纯：N—AChR膜片可用于研究天然状态下受体性质和功能。我们用几次蔗糖密度连续梯度和不连续梯度离心分离，得到的受体膜片无活性胆碱酯酶，比活性达5nmol α-神经毒素结合点／mg蛋白。采用眼镜蛇α-神经毒素为配基制成的亲和层析柱，提纯了N—AChR蛋白，达到了等电聚焦纯，等电点为5．2。发现PAGE出现两条带，

人精子烟碱样乙酰胆碱受体的表达与精子活力的相关性

目的研究弱精子症患者的精子与正常精子中烟碱样乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors,nAChRs)的表达差异,探讨精子nAChRs的表达与精子活力的相关性。方法收集弱精子症患者和正常生育男性的精液,根据入组标准选入弱精子症组(31例)和正常对照组(36例)。Western blot法检测弱精子症组和对照组nAChRA7蛋白的表达,并比较两组之间的差异。用计算机辅助的精液分析系统检测和分析对照组和弱精子症组精液加入乙酰胆碱前后精液基本参数变化。结果与正常精子相比,弱精子症组精子nAChRA7表达减少。体外精液加入200 nmol/L乙酰胆碱能显著促进弱精子症组精子的活力(P<0.01),而正常对照组精子活力没有显著变化。结论弱精子症精子nAChRA7表达减少,nAChRs表达降低与精子活力降低有关。乙酰胆碱能显著提高弱精子症精子的运动能力。

α7烟碱样乙酰胆碱受体在重症肌无力患者外周血单个核细胞中的表达及对T细胞活化的影响

目的:探讨α7烟碱样乙酰胆碱受体(α7 nAChR)在重症肌无力(MG)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及其对T细胞活化的影响。方法:采用qRT-PCR、Western blot法检测健康对照组(n=20)及MG患者组(n=20)PBMC中α7 nAChR的表达情况,用ELISA检测血清IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10和IL-12水平。收集MG患者的PBMC,诱导T细胞活化,将活化的T细胞分为空白对照组、α7 nAChR拮抗剂组、α7 nAChR激动剂组,培养72 h后采用流式细胞术检测T细胞亚群的增殖情况,并用ELISA检测培养液上清中IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10和IL-12水平。结果:与健康对照组相比,MG患者组α7 nAChR mRNA及蛋白表达水平降低,血清IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-12水平升高(P均<0.001)。与空白对照组相比,α7 nAChR拮抗剂组T细胞亚群增殖增强,IFN-γ、TNF-α、IL-6水平升高(P均<0.05),而α7 nAChR激动剂组T细胞亚群增殖受抑,IFN-γ、TNF-α、IL-6水平降低(P均<0.05)。结论:α7 nAChR在MG患者PBMC中的表达降低,α7 nAChR可能参与调控MG的发生。

海马神经元α7型烟碱样乙酰胆碱受体的失敏特征

目的研究大鼠海马神经元α7型烟碱样乙酰胆碱受体(α7-nAChR)的失敏特征。方法在培养大鼠海马神经元上,以胆碱作为工具药,采用膜片钳全细胞记录方式研究胆碱诱发α7型烟碱样乙酰胆碱受体失敏的电生理学特征。结果在培养大鼠海马神经元上,喷射胆碱可诱发出一内向电流,能被α7-nAChR选择性拮抗剂methyllycaconitine(10 nmol.L-1)和α-bungarotoxin(100 nmol.L-1)明显阻断;延长高浓度胆碱(10 mmol.L-1)的给药时间不影响α7-nAChR的失敏和失敏态的恢复,但可以延长其处于完全失敏态的时间;灌流低浓度胆碱(50、100μmol.L-1)可以使α7-nAChR缓慢失敏,失敏程度与胆碱浓度有关。结论高浓度胆碱诱发α7-nAChR的快速失敏及恢复与给药时间无关,低浓度胆碱诱发受体的缓慢失敏及恢复与浓度有关。

阿尔茨海默病与星形胶质细胞中α7烟碱样乙酰胆碱受体免疫反应性选择性增强有关

探讨阿尔茨海默病(早老性痴呆症,AD)可能涉及星形胶质细胞中烟碱样乙酰胆碱受体(nAchRs),并以Lewy小体痴呆(DLB)作比较。

烟碱样胆碱能通路对胶原性关节炎大鼠的作用研究

目的探讨烟碱样胆碱能通路对胶原性关节炎(CIA)的作用,为关节炎等自身免疫性疾病寻找新的治疗途径。方法建立大鼠CIA模型,将模型大鼠分为迷走神经刺激(VNS)组和假手术组,VNS组在完全清醒状态下给予持续迷走神经刺激(5v,2ms,1HZ),每天30min,共4周。观察2组大鼠的病理和关节炎指数变化,用免疫组织化学和RT-PCR技术检测大鼠烟碱样乙酰胆碱受体α7亚单位(nAChRα7)和胆碱乙酰转移酶(ChAT)及乙酰胆碱酯酶(AChE)在关节滑膜的蛋白和基因表达。结果治疗4周后,VNS组大鼠关节炎指数明显低于假手术组(P<0.01);VNS组大鼠踝关节组织病理改善明显高于假手术组(P<0.01);免疫组化和RT-PCR检测nAChRα7、ChAT蛋白和mRNA表达均明显高于假手术组(P<0.01);各组大鼠AChE蛋白和基因水平表达均差异无显著性(P>0.05)。结论电刺激迷走神经可以上调nAChRα7、ChAT基因在免疫组织的表达,减轻胶原性关节炎大鼠的炎症,提示烟碱样胆碱能通路在治疗胶原性关节炎中有重要作用。

脑N受体α_7亚型同源性上行性调节的药理学特征

目的 研究脑N受体α7亚型同源性上行性调节的药理学特征。方法 在体外培养的海马神经元中加入不同浓度的胆碱、烟碱及甲基牛扁碱 ,孵育 7d ,用γ计数器检测[12 5I]α 银环蛇毒素结合位点的变化情况。结果 胆碱(0 0 0 1～ 1μmol·L-1) ,烟碱 (>10 μmol·L-1)以及甲基牛扁碱 (>10 μmol·L-1)长期作用后 ,都可以增加 [12 5I]α 银环蛇毒素的结合量 (P <0 0 5 ) ,但对解离常数 (Kd)无影响 (P >0 0 5 )。结论 在一定浓度范围内 ,胆碱、烟碱和甲基牛扁碱长期作用可使海马神经元上的N受体α7亚型数目上调 ,且胆碱与烟碱上调α7受体的药理学特征不同。

M受体亚型及消化道功能紊乱时的受体变化

1914年Dale根据胆碱能神经元末梢释放的神经递质乙酰胆碱对细胞表面受体作用的不同,将其分为毒蕈碱受体（M受体）和烟碱样受体（N受体）两类。N受体广泛分布于组织,在横纹肌、自主神经节及中枢神经系统中发挥N样调节作用。,由于N受体对阻断剂反应不同,N受体又分为N1和N2受体。M受体参与许多重要的生理过程,如神经-神经传导、平滑肌收缩及腺体分泌等,临床上它们在许多病理过程中发挥重要作用。

新烟碱类杀虫剂定量构效关系及杀虫作用机理的研究进展

综述了烟碱、烟碱类似物和新烟碱类杀虫剂的定量构效关系及其杀虫作用机理的研究进展,重点介绍了新烟碱类杀虫剂与烟碱样乙酰胆碱受体的结合模型,并指出在对新烟碱类杀虫剂构效关系进行深入研究的基础上,从分子水平对其作用机理进行研究,将为解决新烟碱类杀虫剂存在的问题,更好地应用、开发此类杀虫剂提供理论基础。

SH-EP1细胞株转染表达神经元N受体α4β2、α4β4和α7亚型激活态的电生理学特征

目的:建立SH-EP1细胞株转染表达的神经元N受体α4β2、α4β4和α7亚型的膜片钳全细胞记录技术并研究其激活态的电生理学特征。方法:用高糖DMEM培养液培养细胞。传代3d后,细胞可用于膜片钳全细胞记录。通过多管给药电极喷射给予激动剂烟碱(α4β2,α4β4)或胆碱(α7)诱导受体由静息态转变为激活态。结果:传代培养的SH-EP1细胞功能状态良好,受体表达丰富。α4β2、α4β4和α7三种亚型均可被激动剂快速激活诱发内向电流,且该三种通道的内向电流均具有激动剂浓度依赖性、电压依赖性和内向整流特性。三种通道由静息态转变为激活态、以及激活态受体数目减少的速度各不相同。其中,α7亚型激活速度最快,失活速度也最快;α4β4亚型激活速度最慢,失活速度也最慢;α4β2亚型则均居中。结论:在激动剂作用下神经元N受体α4β2、α4β4和α7亚型激活态的形成和转变各具特点,但其介导的内向电流均具有激动剂浓度依赖性、电压依赖性和内向整流特性。