烟芽夜蛾囊泡病毒3h株3h-122基因于棉铃虫幼虫体内的转录表达分析

本文构建了烟芽夜蛾囊泡病毒3h株(HvAV-3h)第122个基因(3h-122)的原核表达载体并制备多克隆抗体。利用蛋白免疫印迹、RT-PCR、免疫组织化学染色等技术检测3h-122的转录表达时相以及组织特异性。结果表明,3h-122编码大小16.1 kD的结构蛋白(3H-122)。HvAV-3h感染棉铃虫幼虫后3 h开始检测到3h-122的转录并稳定持续至第168 h。3H-122在棉铃虫感毒后24 h至168 h可持续检测到其表达。此外,3H-122主要在脂肪体组织中表达。本研究为阐明囊泡病毒结构蛋白的功能及其在囊泡病毒致病机制中的作用奠定了基础。

烟芽夜蛾囊泡病毒3h毒株3h-161的克隆和表达谱分析

【目的】本文旨在明确烟芽夜蛾囊泡病毒3h毒株(HvAV-3h)编码的第161号开放阅读框(3h-161)的序列特征及表达谱,为深入研究其功能奠定基础。【方法】采用PCR技术克隆3h-161的CDs序列,构建原核表达载体,并制备高效的多克隆抗体;利用RT-PCR技术检测3h-161的转录情况,利用蛋白免疫印迹法检测3H-161的表达情况。【结果】3h-161编码区长516 bp,共编码172个氨基酸残基,感染甜菜夜蛾Spodopteraexigua3龄幼虫后12h开始转录、48h开始表达;3H-161在囊泡病毒属内的不同毒株(HvAV-3j、HvAV-3i、HvAV-3e、HvAV-3f和HvAV-3g)间高度保守,序列一致性为100%。【结论】本研究阐明了3h-161的序列特征、获得了3H-161的多克隆抗体,明确了其表达谱,为进一步研究该基因在HvAV-3h感染甜菜夜蛾过程中发挥的作用奠定基础。

烟芽夜蛾囊泡病毒3h株编码的3H-117蛋白能干扰AcMNPV的口服活性

【目的】囊泡病毒是一类体液传播的昆虫病毒,具有特殊的致病历程和良好的生防应用潜力。烟芽夜蛾囊泡病毒3h株(Heliothis virescens ascovirus 3h,HvAV-3h)是我国分离的第一株囊泡病毒,其编码的3H-117蛋白被报道为HvAV-3h病毒粒子的结构蛋白。【方法】为了进一步探究3h-117基因的功能,本研究以Bac-to-Bac昆虫表达系统为研究平台,将3h-117插入到苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nuclepolyhedrovirus,AcMNPV)的基因组中,成功构建了具有口服活性的重组病毒AcMNPV-117。【结果】通过与野生型病毒(AcMNPV-Egfp)的比较,证实在感染Sf9细胞72–96 h后,AcMNPV-117的出芽型病毒粒子产量以及病毒DNA的拷贝数显著降低,且AcMNPV-117的多角体明显增大。进一步的生测结果表明,AcMNPV-117对三龄甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)的90%致死浓度明显高于AcMNPV-Egfp。此外,被病毒感染的甜菜夜蛾幼虫生长相对健康幼虫明显减缓,且试虫的日均取食量也因病毒的感染而被抑制。共聚焦结果表明,3H-117与AcMNPV-117感染后宿主细胞核骨架的聚集过程相关,提示3H-117在囊泡病毒感染过程中可能具有瓦解宿主细胞核的功能。【结论】本研究的结果进一步验证了3h-117的功能,为囊泡病毒的分子生物学研究奠定了基础。

烟芽夜蛾囊泡病毒3h株对草地贪夜蛾幼虫的感染特性及对其生长发育的影响

为寻找有效防控外来入侵物种草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda的技术,以烟芽夜蛾囊泡病毒3h株(Heliothis virescens ascovirus 3h,HvAV-3h)为研究对象,通过测定不同龄期草地贪夜蛾幼虫口服或针刺感染HvAV-3h后的死亡率、存活时间、取食量及体重,分析该毒株对草地贪夜蛾幼虫的感染特性及对其生长发育的影响。结果显示,草地贪夜蛾1、2龄幼虫口服HvAV-3h后的校正死亡率分别为9.22%和0,3~6龄幼虫针刺感染HvAV-3h后的校正死亡率则高达100.00%,感染HvAV-3h的幼虫均在幼虫期或蛹期死亡。3~5龄幼虫针刺感染HvAV-3h后的存活时间明显长于健康幼虫;3~6龄幼虫针刺感染HvAV-3h后其体重和取食量均受到不同程度的抑制作用,体重抑制率分别为67.79%、41.68%、16.31%和10.30%,总取食量抑制率分别为57.80%、33.90%、17.42%和41.82%;其中3龄幼虫针刺感染HvAV-3h后的体重和取食量被显著抑制,且蜕皮困难,最终在幼虫期死亡;部分4~6龄感染HvAV-3h幼虫能够完成化蛹,但是均无法羽化。表明HvAV-3h感染能够有效控制草地贪夜蛾幼虫,有望开发为草地贪夜蛾的生防制剂。