含烟草几丁质酶基因的质粒pBG1121的构建及水稻转化

烟草几丁质酶基因已转入番茄、烟草等作物中 ,并得到了抗病转基因植物 .为了检验该基因转入水稻后 ,能否得到抗病的水稻 ,构建了适于水稻转化的质粒 p BG112 1.将烟草几丁质酶基因 (Tchi B)连上 Ca MV35 S启动子和Nos终止区构建成融合基因 ,再将 Ca MV35 S启动子 / Tchi B编码区 / Nos终止区融合基因插入到双元载体p CAMBIA130 1的多克隆酶切位点 ,得到一个 13.9kb具有几丁质酶基因和潮霉素抗性基因的转化质粒 p BG112 1,进行酶切和 PCR检验后 ,用花器介导法转化水稻 ,后代植株用潮霉素处理 ,经 PCR检验 。

转几丁质酶基因烟草对三种真菌拮抗作用的研究

几丁质酶广泛存在于高等植物体内,它可以分解真菌细胞壁中的几丁质,破坏其细胞结构,从而获得对真菌的抗性.试验以转苦瓜几丁质酶基因烟草(T-Chit)为供试植物,测定植株根系和叶片内几丁质酶活性,选取了3种具有代表性的真菌:毛霉、木霉、禾谷镰刀霉,通过抑菌试验验证了T-Chit组织萃取液对真菌的抗性.结果表明:1)T-Chit几丁质酶活性显著高于非转基因烟草(Nt-X),且转基因烟草根系几丁质酶活性比叶片高86%;2)T-Chit组织萃取液对毛霉生长具有明显抑制作用,根系强于叶片;3)T-Chit对木霉和禾谷镰刀霉的抑制具有时空效应:抑菌效果与植株部位及作用时间有关.

接种木霉和大丽轮枝菌对转几丁质酶基因烟草防御酶和养分含量的影响

为了研究不同类型土壤真菌对转几丁质酶基因烟草防御酶和养分的影响,通过盆栽试验,以转几丁质酶基因烟草(T-Chit)为供试材料,野生型烟草(Nt-X)为对照,分别接种大丽轮枝菌(Verticillium dahliae Kleb)和木霉(Trichodermasp),结果表明:在不接种处理(CK)中,T-Chit的苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性显著高于Nt-X,但两者过氧化物酶(POD)活性及养分含量均无显著性差异.在木霉处理(T)中,T-Chit的PAL和POD活性较不接种处理分别提高89.1%和113.5%,此时T-Chit中两种防御酶活性均显著高于Nt-X,分别高出31.9%和25.3%,TChit根系全K含量比Nt-X显著降低了14.7%.在大丽轮枝菌处理(V)中,T-Chit的PAL和POD活性较不接种处理分别提高66.9%和69.4%,此时两种基因型烟草间PAL,POD活性均无显著性差异.另外,T-Chit根系全P含量比Nt-X低17.2%,且差异显著.总的来说,真菌侵染时,能有效诱导转几丁质酶基因烟草的防御性酶活性增强,而对转基因植株生长及营养状况基本无影响.