烟蚜茧蜂内生细菌对烟草尖孢镰刀菌和青枯菌的影响

为了解烟蚜茧蜂内生细菌[短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、微小杆菌(Exiguobacterium sibiricum)、蜡质芽孢杆菌(Bacillus cereus)(黄色菌落和白色菌落)]对烟草尖孢镰刀菌和青枯菌的影响,本研究采用固体琼脂法,分别测定了该4种内生细菌对此2种病原生长的抑菌活性。结果表明,短小芽孢杆菌、蜡质芽孢杆菌(黄色菌落)对烟草尖孢镰刀菌抑制作用不显著。微小杆菌对烟草尖孢镰刀菌有显著的抑制作用,浓度为7.0×10^(6) cfu·mL^(-1)时对烟草尖孢镰刀菌的抑制作用最大,其抑制率为28.27%;浓度为7.0×10^(4) cfu·mL^(-1)时的促进作用最大,其抑制率为-15.81%;其它浓度对烟草尖孢镰刀菌的抑制率在-2.89%~21.73%;浓度为7.0×10^(5) cfu·mL^(-1)处理7和14 d后其对烟草尖孢镰刀菌根腐病防效均最好,分别为32.21%和27.56%。蜡质芽孢杆菌(白色菌落)对烟草尖孢镰刀菌有显著的抑制作用,随着浓度升高,该菌落直径逐渐减小,其抑制率逐渐增强;浓度为3.4×10^(7) cfu·mL^(-1)的抑制作用最大,其抑制率为21.74%;其它浓度的抑制率在9.57%~17.39%。4种内生细菌对烟草青枯菌的抑制作用均有显著影响。短小芽孢杆菌和蜡质芽孢杆菌(白色菌落)处理12 h时,浓度分别为6.9×10^(6)和3.4×10^(5) cfu·mL^(-1)时对烟草青枯菌的抑制作用最大,其抑菌圈直径分别达2.02和2.22 mm;而微小杆菌和蜡质芽胞杆菌(黄色菌落)处理24 h时,浓度分别为7.0×10^(3)、1.5×10^(8) cfu·mL^(-1)时对烟草青枯菌的抑制作用最大,其抑菌圈直径分别为1.59和1.67 mm。蜡质芽胞杆菌(白色菌落)对烟草青枯病防效最好,浓度3.4×10^(5) cfu·mL^(-1)处理7和14 d后,其防效分别为56.11%和39.78%。因此,本试验结果可为利用烟蚜茧蜂内生细菌控制烟草尖孢镰刀菌根腐病、青枯病及研制病害抑菌剂提供科学参考。

3株拮抗烟草尖孢镰刀菌的木霉菌筛选鉴定及促生防病效果评价

【目的】为筛选对烟草镰刀菌根腐病菌具有较好拮抗效果的菌株。【方法】从河南省主要烟叶产区健康烟株根际土壤中,分离纯化对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)具有一定拮抗作用的真菌菌株,对筛选出的拮抗菌株进行形态学和分子生物学鉴定,并测定促生作用和防治效果。【结果】分离纯化得到的3株木霉菌分别为棘孢木霉(Trichoderma asperellum)Ta-0101、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)Th-0201和毛簇木霉(Trichoderma velutinum)Tv-0207,具有较强的抑菌能力,对尖孢镰刀菌的抑菌率分别为91.24%、84.71%和82.48%。3株木霉菌对烟草种子根长和总长均有显著的促生效果,根长增长率分别为28.89%、25.92%和22.22%,根系活力也显著提高;对烟株最大叶面积和鲜重的促生作用明显,其中棘孢木霉Ta-0101促生效果最显著。3株木霉菌对尖孢镰刀菌的相对盆栽防效分别为78.95%、69.73%和69.73%,均高于70%甲基硫菌灵1000倍液处理的防效。【结论】3株拮抗木霉菌具有较好的抑菌效能和促生防病效果,应用前景良好。

根癌农杆菌介导的尖孢镰刀菌遗传转化体系构建

【背景和目的】尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)可引起烟草镰刀菌根腐病(Fusarium root rot of tobacco),为明确病原菌致病相关基因。【方法】以烟草强致病性尖孢镰刀菌菌株B-9-1的分生孢子为受体,利用携带潮霉素B(hygromycin B,hyg)质粒的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化,获得能够稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的尖孢镰刀菌转化菌株,构建烟草尖孢镰刀菌遗传转化体系。【结果】(1)尖孢镰刀菌的最优转化体系为:潮霉素B最适质量浓度50μg/mL,在25℃条件下,以1 cm宽的条形硝酸纤维膜为载体,将携带有pCAM-GFP-hyg质粒的根癌农杆菌摇菌培养至OD600=0.7,与震荡培养24 h获得的浓度为106个/mL的尖孢镰刀菌分生孢子悬浮液在含有200μmol/L乙酰丁香酮的共培养基上共培养48 h。(2)转化子继代培养、PCR检测和荧光显微观察结果表明外源GFP基因成功整合到烟草尖孢镰刀菌基因组中并可以进行稳定遗传表达。(3)Sourthern blot分析结果进一步证明T-DNA成功整合到尖孢镰刀菌基因组中,且60%以上为单拷贝插入。【结论】本研究成功构建了根癌农杆菌介导的烟草尖孢镰刀菌遗传转化体系,为烟草尖孢镰刀菌基因功能及病原菌的致病机制研究提供基础。