生防菌BZ3对烟草普通花叶病毒的生防效果及全基因组分析

利用稀释分离法从烟草根际土壤中分离筛选获得抗烟草普通花叶病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)的优良生防菌株BZ3,通过形态、生理生化和分子生物学鉴定菌株种类,评价其对TMV的生防效果,利用全基因组测序及生物信息学分析其次生代谢产物合成相关基因簇。结果表明,从根际土壤中分离的BZ3菌株鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis),其发酵液对TMV的盆栽和田间小区防效分别为58.97%和72.07%;基因功能预测显示菌株BZ3基因组中含有表面活性素等多种具有抑菌活性的次生代谢产物合成相关基因簇。本研究表明,BZ3菌株对TMV生防效果优良,抑菌谱较广,基因组中含有大量抑菌活性物质合成相关的基因簇,具有作为TMV生防菌剂的潜力。

卷烟携带烟草普通花叶病毒(TMV)的测定研究

对国内15个省市34个卷烟厂家64个品牌的卷烟样品生物检测结果表明,TMV检出率为67.69％;不论是混合型还是烤烟型以及不同等级的卷烟样品都可以检出。卷烟烟丝研磨液和不同浓度的TMV汁液一样,接种后足以导致烟苗发病。

生防菌混合培养液对烟草普通花叶病毒的抑制作用

由烟草普通花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）引起的病毒病是烟草上发病早、传播快的主要病害之一,农事操作机械接触传染及土壤病残传毒是TMV的主要流行因子。为应用生防菌进行土壤和工具消毒,对已筛选的5株生防菌（Ba、CZ、A3、4A1、2A2）,将其单菌株培养液及菌株两两混合接种后的培养液与TMV等体积混合,采用摩擦接种枯斑寄主三生NN烟的侵染力测定法进行菌株活性比较。结果显示,5株生防菌培养液及两两混合接种后的培养液对TMV均有较强的抑制活性,与NB培养基对照相比,其5倍稀释液对TMV的抑制效果为94%~99%,以CZ＋2A2混合接种培养液对TMV抑制效果最好,50倍稀释液防效为74.9%。具备单独或混合培养制备土壤消毒剂用以工具及苗床和大田土壤消毒的潜力。

烟草普通花叶病毒抗血清的吸附纯化及应用

为了检测烟草普通花叶病毒(TMV),使用提纯病毒免疫小白鼠,制备TMV抗血清,对抗血清进行了吸附纯化,并建立了基于自制TMV抗血清的ELISA检测体系。蛋白电泳研究结果表明,提取的TMV纯度和浓度都很高;经过烟草总蛋白吸附纯化后,有效去除了非特异性反应;通过效价测定,确定TMV抗血清的效价高达1∶40960;正交连续稀释法确定的ELISA检测最佳试剂浓度为:酶标二抗稀释度1∶20000,TMV抗血清稀释度1∶2000,病叶样品的稀释度为1∶20。

烤烟品种KRK26对烟草普通花叶病毒病及黑胫病的抗性鉴定

为了对引进烤烟品种KRK26在泸州的推广种植提供参考,对其烟草普通花叶病毒病及黑胫病的抗性进行了鉴定。结果表明,KRK26对烟草普通花叶病毒病的抗性表现为中感(MS),对黑胫病表现为感病(S)。建议,烤烟新品种KRK26大面积推广种植时,注意对烟草普通花叶病毒病和黑胫病提早防治,特别要注重对烟草黑胫病的防治。

基于气象因子的烟草普通花叶病毒非线性预测模型

研究烟草病害预测方法,可提前预警病害的发生,为制定综合治理方案以及农药合理施用方案等提供有效指导.研究首先引入非线性关联测度方法(Maximal information coefficient,MIC),并以此筛选与烟草普通花叶病毒病相关的气象因子;进一步以支持向量机(Support Vector Machine,SVM)多轮末位汰选进行自变量精细筛选;然后以地统计学(Geostatistics,GS)确定公用变程;对每一个预测样本都从训练集中找出距离小于公用变程的k个近邻,以SVR训练建模完成个体化预测.结果表明:基于k近邻的预测模型独立测试结果明显优于基于全部训练样本参与的预测模型的独立测试精度,且基于私有最近邻样本的个性化预测模型结果最优.

皖南烟区不同时期杂草中烟草普通花叶病毒检测与分析

[目的]明确安徽省烟草不同种植时期烟田杂草携带烟草普通花叶病毒的情况。[方法]采集安徽省皖南烟区烟田3个不同时期的17科35种杂草,采用双抗夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)检测烟草普通花叶病毒。[结果]烟田不同时期多种杂草均携带烟草普通花叶病毒,且不同时期采集的杂草中烟草普通花叶病毒感染率分别为烟草收获期66.7%,烟田空闲期28.6%,烟草种植前期25.0%。菊科杂草带毒率较高,是该病毒的重要寄主。通过杂草汁液摩擦接种试验得出,不同时期杂草中携带的烟草普通花叶病毒均可侵染健康烟苗产生烟草花叶病,并造成危害。[结论]该研究为烟田杂草携带烟草普通花叶病毒病的综合防治提供理论依据。

心叶烟中一类抗烟草普通花叶病毒病活性生物碱

烟草普通花叶病毒(TMV)是烟草主要病害之一,利用色谱分离、纯化技术,采用活性追踪方法,对采自于云南省玉溪市的心叶烟(Nicotiana glutinosa L.)中的化学成分进行系统研究,从中分离得到了12个具有抗TMV活性的生物碱类化合物,其中3个为新化合物(1~3)[(S)-Nkolbisine-β-D-glucoside,(R)-Nkolbisine-β-D-glucoside,Lepabisine A],9个已知化合物(4~12)均为该属植物中首次分离得到。生物活性测定结果表明,该类生物碱能够钝化烟草普通花叶病毒并抑制其增殖。新化合物1对病毒抑制作用强于对照药物宁南霉素。该研究首次从烟草中发现具有抗TMV活性的一类生物碱类化合物,为进一步系统研究烟草内源性抗烟草花叶病毒病物质提供了科学依据。

桂阳县烟草普通花叶病毒病绿色防控技术应用研究

为防控烟草病虫害,围绕烟草普通花叶病毒病单项靶标,构建了以“无毒育苗+检测试纸+免疫诱抗剂”技术为核心的烟草普通花叶病毒病绿色防控技术体系,并进行了大面积示范应用,示范面积0.07万hm2,辐射面积0.25万hm2。结果表明,示范区防治效果在37.4%~100.0%之间,示范区经济效益较对照区高3571.0元/hm2,示范和辐射烟区都未进行过化学农药防治。该技术的应用整体上有效控制了烟草普通花叶病毒病的发生和危害,减少了防治烟草普通花叶病毒病的化学农药使用量,确保了烟叶质量安全,经济效益、生态效益和社会效益显著。

拮抗细菌对烟草花叶病毒(TMV)的抑制作用研究

从发生烟草花叶病毒(TMV)的烟田耕作层土样中分离到对TMV有拮抗作用的菌株By33和By88。生物测定试验表明,By33和By88的无菌发酵液对TMV的体外抑制作用分别为81.81%和83.29%,涂抹菌液24 h后接种TMV,仍有73.01%和66.98%的预防作用。硫酸铵沉淀无菌发酵液、PBS透析获得拮抗蛋白;拮抗蛋白对TMV的体外抑制作用分别为85.38%和87.47%,并且在274.00 nm处有明显的蛋白吸收峰,为典型的蛋白质吸收光谱。此外,通过叶圆片法和透析法生物测定表明,抗病毒蛋白与TMV粒子结合作用为不可逆,有抑制TMV在烟株体内复制的作用。

抗烟草花叶病毒活性放线菌的初步筛选和鉴定

为筛选对烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)具有拮抗活性的放线菌,以烤烟Coker 176、K326为材料,采用生物活性测试和半叶枯斑法,测定47株放线菌菌株发酵上清液抗TMV的活性,对具活性的菌株进行分子鉴定和系统发育分析。结果表明,6株放线菌的发酵上清液具有一定的抗TMV活性,其中菌株F187、F349、F417发酵上清液对TMV具有明显钝化作用,发酵上清液与TMV作用30 min后抑制率分别为57.18%、60.27%、70.19%;分子鉴定和系统发育分析显示菌株F187、F417、F349均属链霉菌;链霉菌F187、F349、F417的代谢产物对TMV有较高的抑制活性,值得在菌种鉴定、发酵条件优化、活性物质的分离与鉴定等方面进行深入研究。

宁南霉素与醋酸铜混配对烟草普通花叶病的联合作用

在室内条件下,用枯斑抑制率法测定了宁南霉素、醋酸铜及其5种不同比例的混配对烟草普通花叶病毒的毒力。结果表明,宁南霉素和醋酸铜对烟草普通花叶病的EC70分别为0.9647mg/L和0.4556mg/L,两者以4:1混配具有显著的增效作用,增效系数为1.48。

2011年巫溪烟区烟草普通花叶病发生规律及防治研究

立足巫溪烟区2011年烟草普通花叶病发生流行的概况和新特点,采用系统调查、试验研究和资料整理相结合的方法,阐述了花叶病发生的客观原因,重点分析了巫溪县2011年度气象条件、花叶病暴发流行的规律和花叶病药剂防治效果。结果表明,气候条件是影响花叶病的主要因素。由于受年度4-6月份气候条件的影响,2011年花叶病暴发共出现3次高峰,每次发病高峰都与盛发前半个月左右的大范围降雨、低温高湿寡日照以及雨后气温骤升有关。药剂防效试验结果表明,施用药剂对预防烟草花叶病具有明显的效果,但在烟株感染病源后,施药对花叶病并不能起到有效的防治作用。

烤烟漂浮育苗中普通花叶病的主要传播途径

对烤烟漂浮育苗过程中TMV传播途径进行了研究。结果表明:各种剪叶方式均能传播TMV,而且传播效率极高,剪叶是漂浮育苗中TMV引起的烟草普通花叶病在苗期传播的最主要、最有效的途径。而受TMV污染的漂浮盘、营养液和基质是TMV在漂浮育苗中传播的主要初侵染源,但对TMV的传播效率较低。

不同类型烟草种质资源对TMV的抗性鉴定

为揭示从美国新引进的不同类型烟草种质资源对烟草普通花叶病毒(TMV)的抗性,采用温室盆栽试验,通过苗期高压喷枪接种,对新引进的304份烟草种质资源进行了TMV的抗性鉴定。结果表明,供试材料中有94份免疫资源、15份抗病资源、56份中抗资源、122份中感资源和17份感病资源。免疫资源包括14份白肋烟、28份雪茄烟、2份晾烟、14份烤烟、1份马里兰烟、4份香料烟、31份黄花烟或黄花烟杂交材料。白肋烟、雪茄烟、晾烟、烤烟、马里兰烟、香料烟、黄花烟和杂交材料七大资源类型中,免疫资源在同类供试资源中所占比例存在明显差异,按比例排序依次为黄花烟和杂交材料>烤烟>白肋烟>雪茄烟>晾烟>香料烟>马里兰烟。

烟草漂浮育苗剪叶刀具消毒药剂的筛选

为筛选对烟草漂浮育苗剪叶刀具有消毒效果的药剂,以烟草漂浮育苗中易发生的烟草普通花叶病为研究对象,对"绿先锋"、"育宝"、"毒消"、"菌毒净"、"病毒特"、"漂白粉"等6种消毒剂进行了消毒效果的试验。结果表明:"绿先锋"300倍、"育宝"100倍、"育宝"150倍、"毒消"800倍、"菌毒净"200倍、漂白粉20倍,浸泡5 m in消毒,对TMV的相对防效达100%。

蒙氏假单胞菌3A菌株对烟草漂浮育苗中TMV的钝化效果

选用对烟草花叶病毒Tobacco mosaic virus(TMV)具有显著拮抗活性的蒙氏假单胞菌Pseudomonas monteilii3A菌株对烟草漂浮育苗过程中被TMV污染的育苗棚、育苗盘、基质及剪叶机械等进行生物钝化,并利用real-time RT-PCR对污染基质中TMV的含量进行了定量检测。结果显示,200、400倍及600倍P.monteilii 3A菌悬液稀释液均可显著钝化病苗残留干叶及干根中的TMV;剪叶机械经不同稀释倍数的P.monteilii 3A菌悬液处理后,在一定程度上抑制了TMV的发生,相对防效达51.42%~100%;基质经不同稀释倍数的P.monteilii 3A菌悬液处理后,其中TMV的含量也下降了72.73%~88.46%,对TMV的相对防效达61.56%~87.46%。其中,200倍P.monteilii 3A稀释液处理育苗棚、育苗盘20min以上,浸泡剪叶机械1min以上对TMV钝化效果最好。

3种消毒剂对烟草漂浮育苗中TMV的钝化效果

为指导烟草(Nicotiana tabacum L.)漂浮育苗中剪叶工具和旧苗盘消毒剂的使用,采用半叶法测定了3种消毒剂对烟草普通花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)病叶汁液和病苗干根、干叶中TMV的钝化效果,同时运用叶面喷雾法测定了消毒剂常用浓度下烟苗的药害发生率和症状。结果表明,兆冠50倍稀释液处理20 min可完全钝化病叶汁液中的病毒、50倍稀释液可完全钝化病苗风干的细侧根和叶片细条中的病毒;锦钰50倍稀释液处理5 min可完全钝化病叶汁液中的病毒、50倍稀释液可完全钝化病苗风干的细侧根和叶片细条中的病毒;金百万20倍稀释液处理20 min可完全钝化病叶汁液中的病毒、20倍稀释液可完全钝化病苗风干的细侧根和叶片细条中的病毒。常用浓度下金百万基本不产生药害;锦钰和兆冠易产生药害,症状主要表现为退绿斑点、坏死和叶片畸形。

一种利用水提物快速简便检测烟草中TMV的方法

由烟草普通花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)侵染所致的植物病毒病是世界性的难题,具有寄主广泛,易于传播等特点。笔者研究了一种快速简捷检测烟草中TMV的方法,通过利用无菌水研磨TMV侵染后发病的烟草病叶,取上清液进行1%的琼脂糖凝胶电泳检测,可检测到一条特异性的,大小为6 000 bp的电泳条带,而在健康烟草叶片水提物中却检测不到该电泳条带的存在。以TMV复制酶基因片段为探针,对该特异性电泳条带进行Northern-blotting分析。结果表明,水提物中的电泳条带与TMV复制酶基因探针发生较强的杂交信号,暗示该条带可能为TMV的基因组。因此,该方法可在10 min内方便快速的检测烟株中TMV的存在,避免了常规血清学检测和分子检测(RT-PCR和western-blot)等方法的昂贵试剂和繁琐的操作步骤。但是该方法的水提取物在室温下不稳定,当静止3 h以上,就很难再检测到特异性的电泳条带。

烟草漂浮育苗剪叶刀具消毒技术研究

烟草普通花叶病毒病（TMV）是烟草漂浮育苗苗床期易发生和传播的病毒病,为筛选出对烟草漂浮育苗剪叶刀具有消毒作用的药剂和有效的消毒方法,避免该病害的大面积传播,选用绿先锋、育宝、菌毒净、2%二氧化氯4种消毒剂对剪叶刀具进行不同消毒方式和不同消毒时间处理,研究各处理对TMV发病情况的影响。结果表明：用绿先锋100倍液、育宝50倍液、2%二氧化氯50倍液、菌毒净100倍液对剪叶刀具正反两面均匀喷雾消毒20s或用绿先锋100倍液、育宝50~100倍液、2%二氧化氯50倍液、菌毒净100~200倍液对剪叶刀具浸泡消毒20s,对TMV的相对防效均可达到100%。