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适于烟草脆裂病毒诱导的本氏烟基因沉默分析的对照载体构建(英文) 被引量:6
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作者 程维舜 徐秋芳 +2 位作者 黎飞 徐幼平 蔡新忠 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期10-20,共11页
对烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)诱导的基因沉默分析体系中目前最常用的对照载体——空pYL156载体(pYL156∷00)对沉默处理后番茄和本氏烟(Nicotiana benthamiana)植株的病毒症状和生长影响进行分析.结果表明:pYL156∷00沉默... 对烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)诱导的基因沉默分析体系中目前最常用的对照载体——空pYL156载体(pYL156∷00)对沉默处理后番茄和本氏烟(Nicotiana benthamiana)植株的病毒症状和生长影响进行分析.结果表明:pYL156∷00沉默处理后的番茄和本氏烟植株均表现出严重的系统性病毒症状,生长受到显著抑制,因此,pYL156∷00并不是一个用于TRV诱导的番茄和本氏烟基因沉默分析的好的对照载体;为获得更好的对照载体,试验构建了2个新的对照载体pYL156∷NIRi和pYL156∷eGFP,它们分别通过在pYL156∷00载体多克隆位点插入253bp菜豆亚硝酸还原酶基因内含子序列和400bp eGFP基因片段而获得,对这2个对照载体对沉默处理后本氏烟植株的病毒症状和生长情况的影响与pYL156∷00进行比较分析.结果表明:pYL156∷00沉默处理后的植株表现出较严重的系统性病毒症状,生长受到显著抑制,其中26.7%植株死亡;pYL156∷NIRi沉默处理后的植株也表现出明显的病毒症状以及生长受抑制现象,但与pYL156∷00相比,所受影响较小,只有13.3%植株死亡;而pYL156∷eGFP沉默处理后的植株不表现明显的病毒症状,植株生长也不受显著影响;病毒积累量检测结果显示,3个对照载体沉默处理的植株病毒症状和生长受抑制情况与植株体内TRV病毒的积累水平密切相关.这些结果表明,新构建的pYL156∷eGFP可以作为一个优越的对照载体应用于TRV诱导的基因沉默分析. 展开更多
关键词 烟草脆裂病毒 基因沉默 对照载体 pYL156∷eGFP pYL156∷NIRi
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应用基因芯片检测烟草脆裂病毒 被引量:6
2
作者 马新颖 汪琳 +4 位作者 任鲁风 邓丛良 高文娜 汪万春 周琦 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期352-355,共4页
Total RNA in tulips was extracted by Trizol method.Primers were designed according to the sequences of Tobacco rattle virus and 18S rRNA gene of plant.The corresponding sections were amplified by RT-PCR and the PCR pr... Total RNA in tulips was extracted by Trizol method.Primers were designed according to the sequences of Tobacco rattle virus and 18S rRNA gene of plant.The corresponding sections were amplified by RT-PCR and the PCR products were labeled by Cy3-dCTP.The probes of plant virus,18S rRNA gene and comparisons were designed and immobilized on chips.Labeled PCR products were hybridized with the probes and the signals were scanned by scanner and analyzed by GenePix Pro 4.0 software.Tobacco rattle virus was detected from tulips which were imported from Holand.The accuracy and sensitivity of the plant virus gene chip were proved. 展开更多
关键词 基因芯片 检测 烟草脆裂病毒 有害生物 检疫
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烟草脆裂病毒诱导的基因沉默在植物基因功能研究中的应用 被引量:3
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作者 唐清杰 沈文涛 周鹏 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期360-363,共4页
烟草脆裂病毒(tobaccorattlevirus,TRV)是一类应用比较广泛而且效率和持久性较好的病毒载体,能够介导基因沉默同时不会带来病毒诱导的症状。改造后的病毒能够促进非病毒序列的插入以及对植物的后续感染,也可以鉴定宿主植物生长点的基因... 烟草脆裂病毒(tobaccorattlevirus,TRV)是一类应用比较广泛而且效率和持久性较好的病毒载体,能够介导基因沉默同时不会带来病毒诱导的症状。改造后的病毒能够促进非病毒序列的插入以及对植物的后续感染,也可以鉴定宿主植物生长点的基因,因此TRV在植物基因功能鉴定中具有广泛的应用。该文介绍TRV沉默载体的构建、诱导基因沉默原理、在植物基因功能研究中的应用以及优缺点。 展开更多
关键词 烟草脆裂病毒 病毒诱导的基因沉默 基因功能
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侵染辣(甜)椒的烟草脆裂病毒及蚕豆萎蔫病毒的鉴定 被引量:2
4
作者 王述彬 赵华崙 +3 位作者 丁犁平 孙洁波 钱芝龙 刘金兵 《江苏农业学报》 CSCD 1994年第3期62-64,共3页
侵染辣(甜)椒的烟草脆裂病毒及蚕豆萎蔫病毒的鉴定王述彬,赵华,丁犁平,孙洁波,钱芝龙,刘金兵关键词:青椒;烟草脆裂病毒;蚕豆萎蔫病毒;鉴定青椒病毒病是青椒上的最重要病害。自1925年Oolitte证实黄瓜花叶病毒(C... 侵染辣(甜)椒的烟草脆裂病毒及蚕豆萎蔫病毒的鉴定王述彬,赵华,丁犁平,孙洁波,钱芝龙,刘金兵关键词:青椒;烟草脆裂病毒;蚕豆萎蔫病毒;鉴定青椒病毒病是青椒上的最重要病害。自1925年Oolitte证实黄瓜花叶病毒(CMV)侵染辣椒以来,迄今,世界各国... 展开更多
关键词 辣椒 烟草脆裂病毒 蚕豆萎蔫病毒
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烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus)牡丹分离物—TRV-Pa的研究 被引量:4
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作者 魏宁生 吴云峰 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第4期247-252,共6页
牡丹受一种病毒为害后,叶片呈现黄色花叶同时伴有少量的花药败育现象。经系统鉴定,此病毒被确认为烟草脆裂病毒的牡丹分离物(TRV-Pa)。该病毒人工接种时可侵染7个科的21种植物;其TDP为80℃,DEP为10^(-3)—10^(-4),L则为40天以上。TRV—P... 牡丹受一种病毒为害后,叶片呈现黄色花叶同时伴有少量的花药败育现象。经系统鉴定,此病毒被确认为烟草脆裂病毒的牡丹分离物(TRV-Pa)。该病毒人工接种时可侵染7个科的21种植物;其TDP为80℃,DEP为10^(-3)—10^(-4),L则为40天以上。TRV—Pa具有两种长度的杆状粒子,其大小分别为35—80×25nm和125—200×25nm。A 260/280为1.13,RNA含量为5.0%。经PAGE分析粒子有两条谱带,其Rf分别为0.25及0.26—0.28。迁移率分别是-1.57—-1.6×10^(-3)及-1.71—-1.75×10^(-3)cm^2·Sec^(-1)·V^(-1)(BYDV的迁移率为-1.43—-1.45×10^(-3)cm^2·See^(-1)·V^(-1))。两种核酸的分子量分别为RNA_1=2.45×10~6,RNA_2=0.65×10~6(标准核酸为TMV和雀麦花叶病毒的核酸分子)。外壳蛋白亚基是单一的,其分子量是2.11×10~4(标准蛋白分别是牛血清清蛋白、胃蛋白酶,胰蛋白酶和细胞色素C)。并含有较多的天冬氨酸、谷氨酸,苏氨酸和丝氨酸,未明显测到酪氨酸和苯丙氨酸,缺少胱氨酸。对牡丹花药进行病理解剖学和血清学研究时,在花粉粒子中检测到病毒,被病毒侵染的花粉约有80%为空瘪。在牡丹的繁育中,应选用无毒繁殖材料防止TRV通过无性繁殖过程在牡丹上传播。 展开更多
关键词 牡丹 烟草脆裂病毒 分离物
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烟草脆裂病毒甜椒环斑花叶分离物(TRV-PRSM)的鉴定 被引量:3
6
作者 田文会 张书萍 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期32-35,T001,共5页
从邯郸市甜椒田间采集呈环斑花叶或黄斑花叶症状材料编号为82—6—35(2).经生物学、血清、电镜下的形态观察证实82—6—35(2)为烟草脆裂病毒(Tobaccorattlevirus)的一个分离物,称之为TRV—P... 从邯郸市甜椒田间采集呈环斑花叶或黄斑花叶症状材料编号为82—6—35(2).经生物学、血清、电镜下的形态观察证实82—6—35(2)为烟草脆裂病毒(Tobaccorattlevirus)的一个分离物,称之为TRV—PRSM.该病毒以汁液接种传染,感染5科22种植物,引起局部坏死斑、褪绿斑、花叶、系统坏死、黄脉、黄化等。病毒粒体呈直杆状,有2种粒体,长粒体190~210nm×25um.短粒体40~80nm×20~25nm.长短粒体比1:2、TRV-PRSM分离物同TRV标准抗血清形成特异的沉淀线。 展开更多
关键词 甜椒 环斑花叶 黄斑花叶 烟草脆裂病毒
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水仙上分离出的烟草脆裂病毒的鉴定 被引量:4
7
作者 郑祥洋 林奇英 谢联辉 《福建农学院学报》 CSCD 1990年第1期58-63,共6页
从福建省平潭县的矮化畸形水仙病株中获得一个分离物 NFV-4,并从病株根围土壤分离物中得到一种毛刺线虫(Trichodorus sp.)。该线虫传毒接种在苋色藜、昆诺藜、普通烟草和豌豆上产生坏死斑;在蔓陀罗、豇豆、牵牛上表现为系统症状。病叶... 从福建省平潭县的矮化畸形水仙病株中获得一个分离物 NFV-4,并从病株根围土壤分离物中得到一种毛刺线虫(Trichodorus sp.)。该线虫传毒接种在苋色藜、昆诺藜、普通烟草和豌豆上产生坏死斑;在蔓陀罗、豇豆、牵牛上表现为系统症状。病叶榨出液采用 ELISA 测定,与荷兰水仙上的烟草脆裂病毒(TRV)标准抗血清呈阳性反应。电镜下病原为78×24nm 和195×24nm 2种竖杆状空心粒体。据此认为该分离物属于 TRV。本文还就 TRV 的株系问题及其所致的水仙病害进行了讨论。 展开更多
关键词 水仙 烟草脆裂病毒 鉴定
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基于烟草脆裂病毒构建同时表达2种外源蛋白的载体及其应用
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作者 郭歌 常发光 +3 位作者 赖家良 张先文 杜志游 廖乾生 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2022年第7期1381-1390,共10页
目的构建在整个寄主植物中能同时表达两个非融合蛋白的病毒载体。方法以烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)基因组RNA2的农杆菌侵染性克隆pYL156为材料,缺失TRV RNA2的2b基因5’端279 bp并将其起始密码子ATG改变为AGG、同时引入豌... 目的构建在整个寄主植物中能同时表达两个非融合蛋白的病毒载体。方法以烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)基因组RNA2的农杆菌侵染性克隆pYL156为材料,缺失TRV RNA2的2b基因5’端279 bp并将其起始密码子ATG改变为AGG、同时引入豌豆早枯病毒(pea early-browning virus,PEBV)外壳蛋白(coat protein,cp)基因启动子,获得pTRV2e2载体;在pTRV2e2载体的2b和PEBV的cp启动子下游插入不同的外源基因,测定病毒TRVe2表达外源蛋白的能力、携带外源基因后重组病毒的稳定性以及分析蛋白质的生物学功能。结果病毒TRVe2能快速同时表达2个非融合的外源蛋白,且至少能表达70 ku外源蛋白,且该病毒携带~2.0 kb外源基因能稳定存活于寄主植物中;病毒TRVe2可用于分析蛋白质的生物学功能以及2个蛋白质间的相互作用。结论本文构建的重组病毒TRVe2为快速有效地表达2个外源蛋白以及分析2个蛋白质间的相互作用提供技术工具。 展开更多
关键词 烟草脆裂病毒 基因组RNA2 双元表达载体 蛋白质功能分析 本氏烟
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第十届中国花博会中烟草脆裂病毒生物学特性及检测监控技术应用 被引量:2
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作者 田沂民 朱雅君 +3 位作者 印丽萍 陈仲兵 滕凯 于翠 《园林》 2021年第7期44-48,共5页
第十届中国花博会于2021年5月21日7月2日在上海崇明岛举办。其中从国内外大规模输入新品种植物种球、种苗、种子、种植介质及木质包装品。这些植物及其相关产品很可能会携带大量外来生物,使得崇明岛的生态安全遭受重大威胁。病毒是迄今... 第十届中国花博会于2021年5月21日7月2日在上海崇明岛举办。其中从国内外大规模输入新品种植物种球、种苗、种子、种植介质及木质包装品。这些植物及其相关产品很可能会携带大量外来生物,使得崇明岛的生态安全遭受重大威胁。病毒是迄今为止人们在超微世界里所认知的最小生物之一,其随植物传播扩散更为隐秘,这严峻考验着防控能力。其中烟草脆裂病毒是一种能侵染多种花卉植物的植物病毒,通过寄主植物繁殖材料(种球、砧木、芽条等)的贸易活动进行远距离病毒传播,或借助带毒介体线虫进行短距离扩散,为阿根廷、巴西、加拿大、墨西哥、土耳其等国家的检疫性有害生物,在我国局部地区有发生。本次花博会大面积布置的百合、芍药、玉簪等都是其主要寄主,一旦传入可引起严重生态影响和经济损失。研究从烟草脆裂病毒的寄主范围、危害症状、传播扩散途径等生物学特性及经济影响、检测监控技术应用等方面进行阐述,为防止其再次入侵和进一步传播扩散提供参考,为花博会生态安全提供技术保障。 展开更多
关键词 第十届中国花博会 烟草脆裂病毒 生物学特性 检测监控技术
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烟草脆裂病毒介导的人参基因沉默体系的构建
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作者 李冉琪 李雅淑 +3 位作者 汤淼淼 曲正义 郑培和 侯微 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期232-239,共8页
目的人参Panax ginseng中构建烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)介导的基因沉默体系,为人参中基因功能的验证提供新方法。方法通过序列比对得到人参中八氢番茄红素脱氢酶(phytoene desaturase,PDS)基因的完整序列,利用保守结构域... 目的人参Panax ginseng中构建烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)介导的基因沉默体系,为人参中基因功能的验证提供新方法。方法通过序列比对得到人参中八氢番茄红素脱氢酶(phytoene desaturase,PDS)基因的完整序列,利用保守结构域预测工具得到核心片段,将其整合进pTRV2载体内。重组载体转化农杆菌后侵染人参叶片,观察表型并利用q PCR检测沉默效率。结果通过序列比对得到了2条PDS基因。PgPDS1基因c DNA序列全长1746 bp,编码581个氨基酸;PgPDS2基因c DNA序列全长1299bp,编码432个氨基酸。2个PgPDS蛋白均具有典型的PDS结构域。将重组载体通过农杆菌转化人参叶片,接种3周后叶片表型无变化,5周后叶片尖端以及边缘出现枯萎现象。经q PCR检测,接种后3周和5周人参内源PgPDS基因表达量分别下降至接种前的70.37%和37.35%,表明体系构建成功。结论人参中成功构建了TRV介导的基因沉默体系。 展开更多
关键词 病毒诱导的基因沉默 人参 八氢番茄红素脱氢酶 烟草脆裂病毒 农杆菌
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侵染牡丹的烟草脆裂病毒的检测鉴定及序列分析 被引量:4
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作者 贺振 陈春峰 +1 位作者 罗云建 陈夕军 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期893-899,共7页
为明确江苏省牡丹上烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)的发生情况,利用ELISA和RT-PCR方法对采集自扬州市的40份牡丹叶片样品进行了检测鉴定,测定了其中一个分离物Peony-11中TRV RNA1分子的部分蛋白编码区序列,并结合Gen Bank中已... 为明确江苏省牡丹上烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)的发生情况,利用ELISA和RT-PCR方法对采集自扬州市的40份牡丹叶片样品进行了检测鉴定,测定了其中一个分离物Peony-11中TRV RNA1分子的部分蛋白编码区序列,并结合Gen Bank中已报道的相关序列对其进行了多样性和系统发生分析。结果显示,江苏省扬州市牡丹上TRV的检出率高达62.5%;序列分析表明本研究获得的TRV牡丹分离物Peony-11与Gen Bank中其它63个分离物的核苷酸序列一致率为90.5%~99.7%;系统发生和遗传距离分析表明TRV可以分成2个组10个亚组,组间、亚组间具有较为清晰的地理和寄主特异性,其中Peony-11分离物位于亚组I-1。 展开更多
关键词 牡丹 烟草脆裂病毒 序列分析 系统发生分析
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逆转录环介导等温扩增技术检测烟草脆裂病毒 被引量:2
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作者 陆辰晨 祝秀丽 +4 位作者 杨小凤 邵沛泽 谌运清 杨万风 汪连军 《植物检疫》 2021年第4期29-34,共6页
为实现进境种球中烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)的快速检测,本研究应用逆转录环介导等温扩增技术,建立了TRV-RT-LAMP检测方法,在60℃,60 min条件下,能特异性地检测到TRV,灵敏度可达到10 pg/μL,是普通RT-PCR的100倍。用SYBR G... 为实现进境种球中烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)的快速检测,本研究应用逆转录环介导等温扩增技术,建立了TRV-RT-LAMP检测方法,在60℃,60 min条件下,能特异性地检测到TRV,灵敏度可达到10 pg/μL,是普通RT-PCR的100倍。用SYBR Green I染色后可以使检测结果可视化,方便快速。同时结合RNA粗提,建立了一步法RT-LAMP技术,可以快速检测植株中的TRV。 展开更多
关键词 烟草脆裂病毒 逆转录环介导等温扩增 可视化检测
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病毒诱导烟草的基因沉默 被引量:6
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作者 傅达奇 朱本忠 +3 位作者 赵晓丹 朱宏亮 谢远红 罗云波 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期1517-1520,共4页
病毒诱导基因沉默是利用RNA介导病毒防卫机制的一项技术.构建含有目的基因片段的人工改造病毒载体,通过农杆菌侵染导致植物内源目的基因沉默.为建立病毒诱导基因沉默体系,选用烟草脆裂病毒(TRV)和烟草为实验材料.构建了八氢番茄红素去... 病毒诱导基因沉默是利用RNA介导病毒防卫机制的一项技术.构建含有目的基因片段的人工改造病毒载体,通过农杆菌侵染导致植物内源目的基因沉默.为建立病毒诱导基因沉默体系,选用烟草脆裂病毒(TRV)和烟草为实验材料.构建了八氢番茄红素去饱和酶基因(PDS)的基因沉默病毒载体,病毒载体侵染结果显示目的基因PDS沉默导致烟草幼苗出现光漂白现象.采用RT-PCR的方法检测目的基因PDS的沉默效果,结果显示PDS基因mRNA被显著降解.该体系的建立有利于将来对植物基因进行高通量功能分析. 展开更多
关键词 烟草脆裂病毒 基因沉默 烟草 LePDS
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病毒载体诱导转录后基因沉默系统的建立及烟草(Nicotiana bentha miana)rbcs基因功能的研究 被引量:3
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作者 周晓馥 王兴智 《分子植物育种》 CAS CSCD 2003年第3期423-424,共2页
RNA沉默是一种序列特异性的RNA降解过程 ,主要作用于同源性较高的转录产物 ,它广泛存在于各种生物中 ,在植物中称转录后基因沉默 (Post TranscriptionalGeneSilencing ,PTGS)、动物中称为RNA干扰(RNAinterference ,RNAi)、真菌中被称为... RNA沉默是一种序列特异性的RNA降解过程 ,主要作用于同源性较高的转录产物 ,它广泛存在于各种生物中 ,在植物中称转录后基因沉默 (Post TranscriptionalGeneSilencing ,PTGS)、动物中称为RNA干扰(RNAinterference ,RNAi)、真菌中被称为RNA压制 (RNAquelling)。病毒诱导转录后基因沉默是由携带基因片段的病毒载体感染植物引起相应的寄主基因沉默的现象 ,是一种典型的RNA沉默现象。本论文建立了病毒载体诱导转录后基因沉默系统 ,并运用该体系研究烟草 (Nicotianabenthamiana)的 1,5二磷酸核酮糖羧化酶 /加氧酶小亚基 (Ribulose - 1,5 -bisphosphate (RuBP)carboxylase/oxylasesmallsubunit,rbcS)基因的部分功能。具体包括以下内容 :1、分别用携带与 1,5二磷酸核酮糖羧化酶 /加氧酶小亚基 (rbcS)基因同源的cDNA片段的烟草脆裂病毒载体 (pTV rbcS)和马铃薯X病毒载体 (pgR10 7 rbcS)侵染烟草 (Nico tianabenthamiana) ,诱导内源rbcS基因沉默 ;2、分别用携带与八氢番茄红素脱氢酶 (phytoenedesat urase ,PDS)基因同源的cDNA片段的烟草脆裂病毒载体 (pTV PDS)和马铃薯X病毒载体 (pgR10 7 PDS)侵染烟草 (Nicotianabenthamiana) ,诱导内源PDS基因沉默 ;3、利用携带与绿色荧光蛋白 (GFP)同源的cDNA片段的烟草脆裂? 展开更多
关键词 RNA沉默 转录后基因沉默 病毒诱导 核酮糖1 5二磷酸羧化酶/加氧酶小亚基 RbcS基因 烟草脆裂病毒载体
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病毒诱导的基因沉默防控烟草马铃薯Y病毒病研究 被引量:8
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作者 刘天波 蔡海林 +7 位作者 滕凯 曾维爱 毛辉 魏润洁 周志成 周向平 戴良英 唐前君 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第5期82-89,共8页
【背景】病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是植物抗病毒侵染的一种自然机制。【方法】以马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)脉坏死株系(PVYN)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因为靶向序列,构建烟草脆裂病毒(Tobacco ... 【背景】病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是植物抗病毒侵染的一种自然机制。【方法】以马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)脉坏死株系(PVYN)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因为靶向序列,构建烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的基因沉默表达载体pTRV2-CP,转化农杆菌GV3101后,与pTRV1-GV3101混合成TRV::CP(OD6000.4~0.6)喷施处理剪叶后的烟苗,测定其侵染效率。人工接种PVY于对照及TRV::CP处理的烟苗,RT-qPCR检测、表型观察和小区试验评价TRV介导的VIGS体系对PVY侵染的沉默效果。【结果】①与TRV::00相比,接种PVY 35 d时,TRV::CP处理的烟株中PVY累积量减少了72.8%;②VIGS表达载体45 d内能有效表达;③温室盆栽和田间小区试验TRV::CP处理对PVY防治效果分别达到85.12%和73.08%。【结论】研究建立的VIGS体系能够沉默PVY CP基因的表达,有效防治烟草马铃薯Y病毒病,为PVY的防治提供了新的方法。 展开更多
关键词 病毒诱导的基因沉默 马铃薯Y病毒 烟草脆裂病毒 防治效果
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TRV病毒诱导大豆基因沉默体系优化及应用 被引量:3
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作者 李文辰 刘鑫 +4 位作者 康越 李伟 齐泽铮 于璐 王芳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期143-150,共8页
病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术已广泛用于植物基因功能研究,以烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)为载体的沉默体系介导大豆基因沉默效率有待明确,采用无缝克隆技术构建TRV-VIGS沉默体系,探索不同接... 病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术已广泛用于植物基因功能研究,以烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)为载体的沉默体系介导大豆基因沉默效率有待明确,采用无缝克隆技术构建TRV-VIGS沉默体系,探索不同接种方法对大豆靶基因在不同组织间的沉默效率,为大豆基因功能研究提供依据。以八氢番茄红素去饱和酶(phytoene desaturase,GmPDS)及泛素连接酶(GmATL3)基因为靶基因,将含有pTRV1和重组载体菌液采用注射、灌根(agroinoculation)、注射与灌根相结合3种方法分别接种大豆中黄13,接种28 d观察沉默表型现象,并使用RT-qPCR技术检测根部与叶部基因相对表达量,明确不同方法沉默效果。注射接种的大豆叶边缘及叶内出现黄化褪绿,灌根接种与注射加灌根接种的叶片表面出现褪绿斑点及褶皱褪绿表型。RT-qPCR结果表明,3种接种方法对沉默GmPDS效果接近100%;注射接种对GmATL3的沉默效率在叶部为80%-95%,根部为40%-60%;灌根与注射加灌根接种,根部沉默效率为70%-90%,叶部沉默效率为15%-50%。不同接种方法产生不同程度沉默表型,且对不同内源基因沉默效率不同。接种方法对不同组织沉默效率存在差异,注射方法对叶片沉默效率最高,注射加灌根结合的方法对根部沉默效率最高。 展开更多
关键词 大豆 病毒诱导的基因沉默 烟草脆裂病毒
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番茄环纹斑点病毒N和NSm基因的VIGS载体构建
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作者 崔玥 赵立华 +4 位作者 陈思 文俊元 邱润霜 张仲凯 赵明富 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第1期98-104,共7页
【目的】番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot orthotospovirus,TZSV)由传毒介体蓟马以持久增殖型方式传播,且能与其他病毒复合侵染作物,对中国西南地区重要蔬菜的产量和观赏作物的品质造成严重影响,给当地农业生产带来了严重危害。TZS... 【目的】番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot orthotospovirus,TZSV)由传毒介体蓟马以持久增殖型方式传播,且能与其他病毒复合侵染作物,对中国西南地区重要蔬菜的产量和观赏作物的品质造成严重影响,给当地农业生产带来了严重危害。TZSV的N和NSm基因与病毒分类、运动和系统侵染密切相关。本研究通过构建N和NSm基因沉默载体,以期为进一步研究TZSV N和NSm基因在病毒侵染方面的功能提供材料,为抗病育种以及田间绿色防控提供一些依据。【方法】根据TZSV N和NSm基因序列设计特异性引物,利用RT-RCR技术扩增得到TZSV N和NSm基因片段,将扩增得到的目的基因连接到pEASY-Blunt-Zero载体上,含有N和NSm基因序列的pEASY-Blunt-Zero载体和pTRV-pTV00载体用Bam HI和Hind III限制性内切酶进行双酶切,并将酶切产物进行纯化回收,纯化后产物与pTRV-pTV00载体使用T4 DNA连接酶连接,获得pTRV-PTV00-N和pTRV-PTV00-NSm重组载体,将其转入根癌农杆菌GV3101中,并注射到本氏烟和栽培烟K326中,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测病毒N和NSm基因的沉默效率,间接酶联免疫吸附试验(ID-ELISA)检测N和NSm蛋白的含量。【结果】RT-qPCR分析表明,本生烟和栽培烟K326中N和NSm基因在接种TZSV后5 d沉默效率均大于90%。ID-ELISA结果显示,2个蛋白含量在不同时间内均显著下降,其中NSm蛋白含量连续9 d显著下降。【结论】TZSV N和NSm基因沉默载体构建成功,并成功试验于本氏烟和栽培烟K326。通过构建TZSV N和NSm基因沉默载体,为研究TZSV致病机理提供了材料,为田间抗TZSV育种和防控提供了理论依据。 展开更多
关键词 番茄环纹斑点病毒 病毒诱导的基因沉默 实时荧光定量PCR 烟草脆裂病毒
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基于三角梅的病毒诱导基因沉默体系的建立与优化
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作者 刘珍银 段郅臻 +2 位作者 彭婷 王童欣 王健 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期123-130,共8页
三角梅是紫茉莉科灌木,具有较高的观赏价值,是研究花色叶色调控的理想材料。建立快速高效的基因验证体系,是三角梅基因功能研究的关键。以三角梅‘金心双色’品种为材料,选用八氢番茄红素脱氢酶基因(PDS)为指示基因,探索不同接种部位和... 三角梅是紫茉莉科灌木,具有较高的观赏价值,是研究花色叶色调控的理想材料。建立快速高效的基因验证体系,是三角梅基因功能研究的关键。以三角梅‘金心双色’品种为材料,选用八氢番茄红素脱氢酶基因(PDS)为指示基因,探索不同接种部位和基因片段长度对烟草脆裂病毒(TRV)诱导三角梅叶片内源PDS mRNA沉默效果的影响,建立适用于三角梅的病毒诱导基因沉默体系(VIGS)。结果表明,摩擦注射嫩叶法相比顶端嫩茎沉默效果更明显;基因沉默片段长度在336 bp和457 bp均可诱导PDS基因沉默,后者效果更加明显。初步构建了三角梅VIGS体系,为后续基因功能研究提供了技术参考。 展开更多
关键词 三角梅 八氢番茄红素脱氢酶 烟草脆裂病毒 基因沉默
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病毒诱导番茄的基因沉默 被引量:11
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作者 马红珍 裴冬丽 +3 位作者 耿慧霞 王来 王文静 李成伟 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1531-1537,共7页
该实验通过RT-PCR获得了番茄八氢番茄红素脱氢酶(Phytoene desaturase,PDS)基因的部分序列,双酶切PDS片段和烟草脆裂病毒载体(pTV00),构建重组载体pTV00-PDS,经农杆菌GV3101介导侵染番茄叶片并观察植株表型变化。结果显示,被侵染的番茄... 该实验通过RT-PCR获得了番茄八氢番茄红素脱氢酶(Phytoene desaturase,PDS)基因的部分序列,双酶切PDS片段和烟草脆裂病毒载体(pTV00),构建重组载体pTV00-PDS,经农杆菌GV3101介导侵染番茄叶片并观察植株表型变化。结果显示,被侵染的番茄表现出明显的光漂白现象。半定量RT-PCR检测表明,PDS的mRNA被显著降解。该沉默体系的建立为下一步大规模验证番茄基因功能奠定了基础。 展开更多
关键词 番茄 八氢番茄红素脱氢酶 病毒诱导基因沉默 烟草脆裂病毒
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病毒诱导的基因沉默技术实验教学设计和实践 被引量:8
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作者 侯巧明 张立 +1 位作者 贺新强 丁琦 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2015年第9期191-193,共3页
病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术是近年发展起来研究植物基因功能的新方法。利用含有目的基因片段的病毒载体侵染植物,导致植物体内相应的功能基因表达受到抑制成为沉默基因,相应功能缺失,从而推测目的基因的功能。该文克隆了烟草番茄红... 病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术是近年发展起来研究植物基因功能的新方法。利用含有目的基因片段的病毒载体侵染植物,导致植物体内相应的功能基因表达受到抑制成为沉默基因,相应功能缺失,从而推测目的基因的功能。该文克隆了烟草番茄红素脱氢酶(PDS)基因片段,插入到烟草脆裂病毒载体(TRV)中,构建了pTRV-PDS的VIGS载体,转入农杆菌侵染烟草后成功沉默了PDS基因,使烟草叶片出现白化表型,成功建立了烟草VIGS体系。将VIGS这个当前生物学研究热点引入教学实验中,改革更新实验教学内容,有益于学生扩展科研思维。 展开更多
关键词 VIGS RNAI 烟草脆裂病毒 番茄红素脱氢酶
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