青蒿中番茄斑萎病毒和烟草花叶病毒的分子鉴定及相关序列分析

番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus, TSWV)和烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus, TMV)是2种重要的植物病原病毒,对多种经济作物的产量和品质均造成严重影响。2021年-2022年,在云南省丽江市烟草种植区不同烟区采集叶片黄化、皱缩以及无症状的青蒿Artemisia caruifolia样品共计14份,利用免疫金标速测卡和RT-PCR对其病原病毒进行检测。利用免疫金标速测卡检测结果显示,在所检样品中有9份样品检测出TSWV,检出率为64.28%,有3份样品检测出TMV,检出率为21.43%,2种病毒复合侵染的检出率同样为21.43%;利用RT-PCR对复合侵染的3份样品进行分子检测,结果显示,在3份复合侵染青蒿样品中获得3条TSWV N基因序列、3条TMV cp基因序列和2条TMV RdRp部分序列。TSWV青蒿分离物与分离自云南的TSWV-2分离物相似性最高,为99.6%;TMV青蒿分离物与分离自辽宁的TMV-Shenyang分离物和分离自云南的TMV-Yongren-1相似性最高,均大于99.4%。这是首次发现TSWV和TMV 2种不同属病毒复合侵染青蒿。

椴叶鼠尾草抗烟草花叶病毒活性成分研究

为寻找新型植物病毒抑制剂,以烟草花叶病毒(TMV)为供试病毒,研究发现入侵植物椴叶鼠尾草提取物具有抗TMV活性。通过半叶枯斑法不同施药方式筛选发现,在质量浓度为1 mg/mL时,石油醚萃取物的保护作用和钝化作用最强,抑制率为40.95%和52.85%;乙酸乙酯萃取物的治疗作用最强,抑制率为52.85%,与阳性对照药剂宁南霉素无显著差异。石油醚萃取物各馏分中,Fr7的保护作用和治疗作用最好,抑制率为40.51%和45.52%,Fr6的钝化作用最好,抑制率为74.63%。乙酸乙酯萃取物各馏分中,Fr1′的保护作用最强,抑制率为61.77%,Fr3′的治疗作用最强,抑制率为55.02%,Fr4′的钝化作用最强,抑制率为60.22%。运用现代色谱波谱技术分离鉴定了5个化合物分别为tilifodiolide、eupatoric acid、熊果酸、齐墩果酸和2-甲基-5,7-二羟基色原酮。

芷江县烟草花叶病的发生与防控药剂筛选

烟草普通花叶病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)病是严重为害烟草的重要病害之一,选择高效的防控药剂以减少烟草经济损失十分重要。本研究在调查分析土壤营养元素及当地花叶病发生情况的基础上,于病毒发生初期,通过小区试验研究了2亿CFU·mL^(-1)沼泽红假单胞菌PSB-S悬浮剂、2%宁南霉素水剂和0.5%几丁聚糖水剂3种药剂对烟草花叶病毒病的防控效果。结果表明,2亿CFU·mL^(-1)沼泽红假单胞功PSB-S悬浮剂的防效最高,为66.03%,可为烟草花叶病毒病的防控药剂选择提供参考。

薇甘菊提取物抗烟草花叶病毒活性研究

为探究薇甘菊抗烟草花叶病毒(TMV)活性,采用半叶枯斑法及叶圆片法对薇甘菊地上部分提取物抗TMV的活性进行测定。结果表明:在浓度为1 mg/mL时,5种提取物对TMV侵染均有不同程度的抑制作用,其中,薇甘菊甲醇提取物对TMV的侵染有较强的保护、治疗和钝化作用,抑制率分别为60.03%、54.24%、70.27%,均显著高于宁南霉素。正丁醇萃取物馏分Fr_(2)对TMV侵染有较好的保护作用,高于宁南霉素,其他萃取物馏分的保护活性均低于宁南霉素。乙酸乙酯萃取物馏分Fr_(4)和馏分Fr_(5)对TMV的治疗活性显著高于宁南霉素;石油醚萃取物馏分Fr3和乙酸乙酯萃取物馏分Fr3的治疗活性相当于宁南霉素。石油醚萃取物馏分Fr_(4)和乙酸乙酯萃取物馏分Fr_(2)~Fr_(4)的钝化活性均显著高于宁南霉素。5种提取物及萃取物馏分对TMV离体增殖均有抑制活性,其中甲醇提取物抑制活性较显著,与宁南霉素相当。综上,薇甘菊提取物具有一定的抗TMV活性,为进一步追踪抗病毒活性物质奠定了基础。

烟草花叶病毒实时荧光定量PCR检测体系的构建

[目的]防止隐症携带烟草花叶病毒(TMV)的烟苗移栽到大田造成产量损失。[方法]根据TMV的外壳蛋白(coat protein,CP)基因保守序列设计引物及探针,通过绘制标准曲线、重复性、特异性及灵敏性分析,建立了一种TMV的TaqMan-qPCR检测方法。[结果]该方法特异性好,与其他常见的烟草病毒无交叉反应;灵敏度高,检测下限可达到4.53×10^(1) copies/μL,比常规RT-PCR检测灵敏度提高了10倍;建立的标准曲线斜率为-3.299,决定系数(R^(2))为0.9933,扩增效率为100.97%,且循环阈值(Ct)与质粒标准品浓度之间线性关系良好,重复性试验结果可靠。[结论]利用建立的TaqMan-qPCR检测方法与常规RT-PCR检测方法同时检测烟苗样品,检测结果一致,进一步验证了荧光定量PCR方法的可靠性。

姬松茸粗多糖防治烟草花叶病毒病

烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)是导致茄科(Solanaceae)作物减产的重大因素,为探寻防治烟草花叶病的食用菌源多糖材料,采用半叶法、五点注射试验和系统寄主侵染活性评价测定6种粗多糖对TMV的防治效果。结果表明:姬松茸(Agaricus blazei)粗多糖提取率最高,可达24.32%,其次是平菇(Pleurotus ostreatus)为18.56%,最低为杏鲍菇(Pleurotus eryngii)10.04%。总糖含量中,姬松茸总糖明显高于其他种类,达到37.71%,其次是桑黄(Phellinus igniarius)和灵芝(Ganoderma lucidum),总糖含量均超过32.00%,此外姬松茸粗多糖的硫酸基含量高达2.10%。半叶法测定6种粗多糖对TMV的防治效果,结果显示,多糖喷施48 h后对接种病毒能达到较好的预防效果,其中云芝粗多糖、姬松茸粗多糖、平菇粗多糖的预防效果均达到60.00%以上。尤其是24 mg/mL姬松茸粗多糖的预防效果达92.04%,叶片的枯斑数目明显少于清水对照组。在五点注射试验中,姬松茸粗多糖处理的荧光斑点亮度弱于对照组,同时新叶上未出现荧光点,抑制率达38.18%,在病毒侵入前期姬松茸粗多糖有抑制作用,能够延缓TMV的移动速度,减慢系统侵入进程。在系统寄主NC-89上,姬松茸粗多糖对TMV的防治效果高达76.81%,效果优于0.5%香菇多糖水剂和1.8%辛菌胺醋酸盐水剂处理组,当姬松茸粗多糖浓度为48 mg/mL时植株出现损伤,多糖浓度过高在植株表面形成沉淀,引起植株黄化。大田试验显示,姬松茸粗多糖对TMV的治疗效果为70.31%,对叶片扭曲、蜷缩、停止生长的植株有明显改善。同时对TMV有一定的抑制作用,喷施姬松茸粗多糖的烟草发病时间延后,烟草长势良好,叶片伸展。本研究结果为进一步研究真菌多糖防治烟草花叶病毒的作用方式和机制奠定基础,对绿色防控作物TMV有一定的理论意义和实际意义。

千里光化学成分及抗烟草花叶病毒活性研究

对千里光(Senecio scandens)化学成分及其抗烟草花叶病毒(TMV)活性进行研究,为开发新型植物病毒抑制剂提供理论依据。综合运用硅胶、凝胶、MCI等多种柱层析方法对千里光地上部分乙酸乙酯萃取物化学成分进行分离,利用NMR、MS鉴定其结构;采用活体半叶枯斑法测定化合物对TMV的抑制活性。从千里光乙酸乙酯萃取物中共分离得到13个化合物,根据其理化性质以及波谱数据分别鉴定为24-烯-环阿尔廷酮(1)、3β-羟基-7β-甲氧基-5-豆甾烯(2)、正三十二烷(3)、乌索酸(4)、豆甾醇(5)、(22 E)-ergosta-6,22-diene-3β,5β,8α-triol(6)、山柰酚(7)、3-吲哚甲醛(8)、泽兰黄酮(9)、槲皮素(10)、紫杉叶素(11)、jacaranone(12)、叶绿醇(13)。除化合物7和化合物10外,其余化合物均为首次从该植物中分离得到。活性测定结果表明,化合物8和化合物13具有较强的抗TMV活性。

臭椿不同部位提取物抗烟草花叶病毒活性研究

为探究臭椿不同部位提取物抗烟草花叶病毒(TMV)活性,本试验采用半叶枯斑法对臭椿枝叶、种子石油醚提取物、树皮乙醇提取物以及各提取物的不同柱层析馏分进行了抗TMV的活性测定。结果表明,臭椿种子石油醚提取物的保护作用、治疗作用、钝化作用均最强,抑制率分别为63.64%、50.60%、60.01%,臭椿树皮乙醇提取物对TMV增殖的抑制作用最强,为79.33%,显著高于其他处理;臭椿枝叶石油醚提取物对TMV的抑制作用相对较差,抑制率介于32.02%~43.47%。枝叶石油醚提取物各馏分中,LE.3和LE.5的保护作用、LE.11的钝化作用显著高于宁南霉素,抑制率分别为54.99%、46.22%、51.99%;种子石油醚提取物各馏分中,SE.4、SE.6、SE.9的保护作用及SE.10、SE.11、SE.12的钝化作用显著高于宁南霉素,抑制率分别为71.96%、58.74%、67.84%、63.62%、72.18%、76.25%;臭椿树皮提取物各馏分中,BE.10的保护作用、BE.5和BE.8的治疗作用及BE.10、BE.11、BE.13的增殖抑制作用显著高于宁南霉素,抑制率分别为54.25%、58.67%、62.32%、81.25%、61.89%、70.59%。臭椿3个部位提取物及馏分对TMV都具有一定的抑制作用,这为进一步追踪臭椿中抗烟草花叶病毒活性物质奠定了基础。

长梗喉毛花中3种化合物抗烟草花叶病毒活性分析及其对4种防御酶活性的影响

【目的】评价从长梗喉毛花[Comastoma pedunlulatum(Royle ex D.Don)Holub]中分离得到的3种化合物的抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)活性及其对烟草4种防御酶活性的影响,为研发有效防治TMV的植物源农药提供先导化合物和理论依据。【方法】以心叶烟为试验材料,设化合物处理(当药黄素、高杯喉毛花内酯A和异荭草素)、空白对照(CK)和药剂对照(8%宁南霉素)处理,采用半叶枯斑法测定化合物对TMV侵染的预防保护和钝化作用;以普通烟草栽培品种K326为试验材料,设对照[空白对照(CK)和接种对照(CK+TMV)]、宁南霉素[药剂对照(PC)]、当药黄素、高杯喉毛花内酯A和异荭草素处理,利用防御酶检测试剂盒测定各处理烟草叶片中多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性。【结果】先施用被试物后接种TMV,当药黄素、高杯喉毛花内酯A和异荭草素在100μg/mL时均减少TMV在心叶烟上的枯斑数目,对TMV的抑制率分别为50.05%、57.55%和61.73%,对TMV侵染均具有一定的预防保护作用,对照药剂宁南霉素对TMV的抑制率为47.75%;TMV与被试物溶液混合接种心叶烟时,当药黄素和高杯喉毛花内酯A对TMV的抑制率分别为51.65%和45.66%,对TMV侵染有较好的钝化作用。分别施用当药黄素、高杯喉毛花内酯A和异荭草素后,烟草叶片防御酶PPO活性分别在处理后24、12和24 h达最大值;PAL活性均在处理后72 h达最大值;POD活性分别在处理后24、48和72 h达最大值。PPO、PAL和POD活性在最大值时与CK均呈显著差异(P<0.05),而SOD活性在最大值时与CK无显著差异(P>0.05)。【结论】分离自长梗喉毛花的3种化合物当药黄素、高杯喉毛花内酯A和异荭草素使用浓度为100μg/mL时对TMV均有较好的预防保护活性,具有作为抗TMV植物源农药或先导化合物的潜力。

植物源抗病毒剂VFB-1防治烟草花叶病毒病研究

以植物源抗病毒剂VFB为基础,经配方改造和工艺改进,优化出了植物源抗病毒剂VFB-1。为探究VFB-1对烟草花叶病的防治作用,本研究采用半叶枯斑法测定了VFB-1对TMV的体外钝化、初侵染和复制增殖抑制活性;采用盆栽法和田间小区试验评价了VFB-1对烟草花叶病毒病的预防及治疗效果。结果表明,VFB-1对烟草花叶病毒(TMV)具有明显的体外钝化作用,钝化30min后,抑制率达82.77%;对TMV的初侵染和复制增殖具有较好的抑制作用,24 h的抑制率分别达到69.80%和54.07%?盆栽药效试验中,VFB-1100倍稀释液的预防效果为70.23%,治疗效果为35.70%;田间药效试验表明,VFB-1对烟草花叶病毒病有较好的预防和治疗作用,其200倍稀释液药后21d的预防效果仍为40%以上,400倍液的预防效果明显高于VFB,且与病毒A(20%吗啉胍·乙铜WP)相当;其200倍液14d的治疗效果显著高于VFB(200倍稀释液)和病毒A(400倍稀释液)处理。可见,植物源抗病毒剂VFB-1对TMV具有良好的预防和治疗效果,开发前景良好?

基于Sentinel-2卫星数据与植被指数的烟草花叶病特征研究

利用Sentinel-2卫星遥感影像,选取DVI、EVI、GNDVI、NDVI、NDGI、RVI等6种植被指数,对2022年发生在龙岩市上杭县庐丰畲族乡较为严重的烟草花叶病病害特征展开研究。结果表明,经过优化后的植被指数EVI对烟草花叶病病害监测效果优于其他植被指数,该结果可为烟草种植区烟草花叶病防治和灾后损失评估提供参考。

宁南霉素防治烟草花叶病的研究

在我国四川省和云南省进行的总面积９０１．８６ｈｍ２多点防治试验、示范结果表明，农用抗生素宁南霉素对烟草花叶病的防治效果为６９．４％～９５．４％，平均增产效果为２６．１％，均优于目前推广防治烟草花叶病的植病灵、菌毒清和８３增抗剂，并可使烟叶的内在质量明显提高．在温室内施药间隔３～１０ｄ后，人工分别接种烟花叶病毒（ＴＭＶ）、黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）和马铃薯Ｙ病毒（ＰＹＶ），实验表明，宁南霉素对烟花叶病毒（ＴＭＶ）和黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）所引起的烟草花叶病的防治效果高达９２．９％和９０．９％，对马铃薯Ｙ病毒（ＰＹＶ）引起的烟草花叶病的防治效果达５３．８％．

臭椿和鸦胆子抗烟草花叶病毒作用研究

目的:研究臭椿和鸦胆子的抗植物病毒作用。方法:以烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)为供试病毒,采用局部枯斑法测定2种药用植物提取物对TMV侵染的抑制作用;叶碟法研究2种药用植物提取物的抗TMV增殖作用,并通过盆栽试验,测定2种药用植物提取物对烟草花叶病的防治作用。结果:臭椿和鸦胆子提取物不仅能有效抑制TMV侵染,而且对TMV的增殖也有明显抑制作用,并对烟草花叶病具有较好的防治效果。结论:臭椿和鸦胆子抗烟草花叶病毒作用显著,在抗植物病毒方面具有进一步研究和开发价值。

壳寡糖诱导烟草抗烟草花叶病毒的超微结构研究

电镜检查表明,接种烟草花叶病毒(TMV)表现系统侵染的烟草植株叶肉细胞和筛管内有大量病毒粒子和病毒结晶体,细胞质中出现髓鞘样结构、多泡体和次级囊泡。叶片薄壁细胞内叶绿体、线粒体等细胞器变形解体,膜结构增生。经壳寡糖(50μg/mL)诱导处理的烟草,系统症状减轻,叶肉细胞和筛管中病毒粒子显著减少,偶见病毒结晶体;叶肉细胞中细胞器基本完好,但叶绿体内出现较大的淀粉粒;液泡内和细胞间隙出现大量电子致密物质。在未接毒和未经壳寡糖处理的植株中未见此种电子致密物,其产生可能与诱导抗病性表达有关。

宁南霉素对烟草花叶病毒的生物活性

研究了宁南霉素 (Ningnanmycin)对烟草花叶病毒 (tobaccomosaicvirus,TMV)的预防、治疗和钝化作用 .结果表明 ,宁南霉素喷施 5d后接种TMV ,对烟草花叶病毒的预防效果为 5 8.4 1% ;宁南霉素浓度为 15 0～ 2 0 0 μg/mL时 ,对烟草花叶病毒的治疗效果达 79.6 5 %～ 84 .96 % ,治疗效果最好为接种TMV 1d后喷施 2 0 0 μg/mL宁南霉素 ;宁南霉素对烟草花叶病毒的钝化效果为 76 .99%～ 83.19% ,混合 4 5min的TMV与宁南霉素等体积混合液效果更好 .试验证明 ,宁南霉素对烟草花叶病有很好的治疗作用 ,对烟草花叶病毒有显著的钝化效果 .图 1表 3参

抗病毒剂对烟草花叶病毒与烟草叶绿体互作的影响

通过测试被烟草花叶病毒（ＴＭＶ）侵染的烟叶片叶绿素含量与荧光光谱特征的变化，发现叶绿素含量随ＴＭＶ侵染时间的延长而降低，Ｆ６８５／Ｆ７４０比值随ＴＭＶ侵染时间的延长而增加。用叶绿素含量、荧光光谱特征可作为筛选抗植物病毒剂的指标。实验结果表明：８种植物抽提物中，紫草、月季抽提物抑制ＴＭＶ与叶绿体的结合活性高。

青霉菌灭活菌丝体对烤烟漂浮育苗生长和抵抗烟草花叶病的影响

以红花大金元烟草品种为材料,分别在嵩明、宜良两个烟区研究了不同浓度的青霉菌灭活菌丝体(DMP)对烟草漂浮育苗成苗状况、生物学特性及大田苗期跟踪抗烟草花叶病试验,结果表明:在漂浮育苗基质中随着拌入DMP浓度的增加,烟苗株高、茎直径、地上部干重和根干重增加,但是,嵩明试验点当DMP处理浓度大于0.4 g/株时烟苗株高和地上部干重下降。同时,当DMP处理浓度大于0.4 g/株时与对照相比出苗时间推迟2～12 d,出苗率降低8.6%～35.2%,成苗率降低10.7%～54.1%;而当DMP处理浓度小于0.4 g/株时对出苗时间、出苗率和成苗没有明显影响。DMP苗期处理烟苗在大田期烟草花叶病病情指数明显降低,防治效果达50%～77%。综合成苗状况、烟苗素质,建议生产中DMP苗期处理的最佳浓度为0.1～0.4 g/株。

病毒抑制剂防治烟草花叶病田间试验

为了筛选防效较好的病毒抑制剂 ,对目前市售的防治烟草花叶病 (TMV和CMV)的 8种主要化学药剂和 4种植物提取物进行了防治烟草花叶病的田间试验。试验结果表明 ,2 %“菌克毒克”AS和4 0 %“病毒灵”WP具有明显的预防效果 ;3.95 %“病毒必克”WP、4 0 %“病毒灵”WP、商陆 (Phytolaccaaci nosa)的乙醇提取物和香菇 (Lentinusedodes)的水提取物具有一定的治疗效果。

云南、福建、湖南烟区烟草花叶病主要病毒种类检测及黄瓜花叶病毒亚组鉴定

采用抗原直接包被和双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA)对采自云南、福建、湖南烟区烟草花叶病样品进行了病毒种类检测,利用三抗体夹心ELISA对黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的亚组类型进行了鉴定。在云南采集的520个花叶病样品中,烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、CMV和马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)总检出率分别为71.74%、55.01%和6.35%;在福建采集的150个花叶病样品中,TMV、CMV和PVY的总检出率分别为94%、24.66%和8.00%;在湖南采集的74个花叶病样品中,TMV、CMV和PVY的总检出率分别为58.11%、51.35%和2.70%。部分样品为2种以上病毒复合侵染。云南、福建和湖南采集的64个CMV阳性样品中,属亚组Ⅰ的样品为57个,占89.1%;属亚组Ⅱ的样品为10个,占15.6%;其中3个样品为亚组Ⅰ和亚组Ⅱ的复合侵染。