生物杀菌剂对烟草镰刀菌根腐病的防治效果及农艺性状的影响

【目的】筛选防治烟草镰刀菌根腐病的有效药剂,促进生物菌剂在烟草生产上应用。【方法】以10~9cfu/g NJ13WP(Bacillus methylotrophilus)、10^(10) cfu/g FG14 WP(B.amyloliquefaciens)、10~9 cfu/g NT35 WP(B.velezensis)和10^(10) cfu/g FS6WP(B.amyloliquefaciens)4种生物杀菌剂为材料,采用生长速率法测定4种生物杀菌剂对烟草镰刀菌根腐病菌的室内毒力,采用灌根法进行病害的田间药效试验,并测定烟草的农艺性状。【结果】10^(10)cfu/g FG14和10~9 cfu/g NJ13 2种生物杀菌剂对烟草镰刀菌根腐病菌的EC_(50)值分别为0.342和0.581mg/L,109cfu/g NT35和10^(10) cfu/g FS6 2种生物杀菌剂对烟草镰刀菌根腐病菌的毒力较强,其EC_(50)值分别为2.655和8.189mg/L。4种生物杀菌剂田间防效达42.97%～70.19%,其中10~9 cfu/g NT35 1 350～2 250g/hm^2处理防治效果较好,防效达63.60%～70.19%;防治效果超过50%的生物杀菌剂对烟草农艺性状产生了一定的影响,对烟草根、茎、叶生长均有不同程度的促进作用。【结论】10~9 cfu/g NT35 1 350～2 250g/hm^2、10~9 cfu/g NJ13 1 350～1 800g/hm^2、10^(10) cfu/g FG14 2 250g/hm^2和10^(10) cfu/g FS6 2 250g/hm^2处理对烟草镰刀菌根腐病的田间防治效果较好,防效在60%以上。

3株拮抗烟草尖孢镰刀菌的木霉菌筛选鉴定及促生防病效果评价

【目的】为筛选对烟草镰刀菌根腐病菌具有较好拮抗效果的菌株。【方法】从河南省主要烟叶产区健康烟株根际土壤中,分离纯化对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)具有一定拮抗作用的真菌菌株,对筛选出的拮抗菌株进行形态学和分子生物学鉴定,并测定促生作用和防治效果。【结果】分离纯化得到的3株木霉菌分别为棘孢木霉(Trichoderma asperellum)Ta-0101、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)Th-0201和毛簇木霉(Trichoderma velutinum)Tv-0207,具有较强的抑菌能力,对尖孢镰刀菌的抑菌率分别为91.24%、84.71%和82.48%。3株木霉菌对烟草种子根长和总长均有显著的促生效果,根长增长率分别为28.89%、25.92%和22.22%,根系活力也显著提高;对烟株最大叶面积和鲜重的促生作用明显,其中棘孢木霉Ta-0101促生效果最显著。3株木霉菌对尖孢镰刀菌的相对盆栽防效分别为78.95%、69.73%和69.73%,均高于70%甲基硫菌灵1000倍液处理的防效。【结论】3株拮抗木霉菌具有较好的抑菌效能和促生防病效果,应用前景良好。

根癌农杆菌介导的尖孢镰刀菌遗传转化体系构建

【背景和目的】尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)可引起烟草镰刀菌根腐病(Fusarium root rot of tobacco),为明确病原菌致病相关基因。【方法】以烟草强致病性尖孢镰刀菌菌株B-9-1的分生孢子为受体,利用携带潮霉素B(hygromycin B,hyg)质粒的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化,获得能够稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的尖孢镰刀菌转化菌株,构建烟草尖孢镰刀菌遗传转化体系。【结果】(1)尖孢镰刀菌的最优转化体系为:潮霉素B最适质量浓度50μg/mL,在25℃条件下,以1 cm宽的条形硝酸纤维膜为载体,将携带有pCAM-GFP-hyg质粒的根癌农杆菌摇菌培养至OD600=0.7,与震荡培养24 h获得的浓度为106个/mL的尖孢镰刀菌分生孢子悬浮液在含有200μmol/L乙酰丁香酮的共培养基上共培养48 h。(2)转化子继代培养、PCR检测和荧光显微观察结果表明外源GFP基因成功整合到烟草尖孢镰刀菌基因组中并可以进行稳定遗传表达。(3)Sourthern blot分析结果进一步证明T-DNA成功整合到尖孢镰刀菌基因组中,且60%以上为单拷贝插入。【结论】本研究成功构建了根癌农杆菌介导的烟草尖孢镰刀菌遗传转化体系,为烟草尖孢镰刀菌基因功能及病原菌的致病机制研究提供基础。