家蚕卵滞育过程中的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸含量及相关代谢研究进展

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)为吡啶核苷酸类辅酶之一,是生物体呼吸作用的主要辅酶,在呼吸耗氧量调控中发挥重要作用,并且NAD与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)、过氧化氢和谷胱甘肽的代谢密切相关。本文概述了家蚕卵滞育过程中NAD的含量变化及相关代谢活动的研究进展,讨论了NAD及其代谢活动在家蚕卵呼吸耗氧量调控中可能的作用。

UPLC-MS/MS测定铁皮石斛及其同属近源石斛品种中烟酰胺单核苷酸和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸含量

烟酰胺单核苷酸(β-nicotinamide mononucleotide, NMN)与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide, NAD^(+),辅酶I)是近五年来风靡全球的抗衰老成分,口服NMN后在体内转化为NAD^(+)而发挥其抗衰老之功效。为揭示《神农本草经》记载石斛"轻身延年"之功效,该文首次建立了利用超高效液相色谱串联质谱仪(UPLC-MS/MS)同步测定NMN与NAD^(+)含量测定方法,并测定了铁皮石斛及其同属近源石斛的NMN与NAD^(+)含量。经方法学验证,该方法的精密度、重复性、稳定性良好,NMN与NAD^(+)的平均回收率分别为77.58%与80.70%,RSD分别为3.6%与4.3%。34批样品测定结果表明,铁皮石斛的NMN含量高于其他同属近源石斛品种;鲜品铁皮石斛中NMN质量分数高达0.931 9μg·g^(-1),意外地发现,仅有铁皮石斛含有抗衰老功效成分NAD^(+),且其含量更是高于NMN 3倍以上。这也许是铁皮石斛被祖先列为"九大仙草"之首的内在依据;同时发现不同的产地加工方法对石斛中NMN和NAD^(+)的含量影响较大,其含量高低表现为鲜品>烤条>枫斗,提示食用方法以鲜用为佳。

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定茶叶中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸及其4种前体化合物含量

烟酰胺核糖体(NR)、烟酰胺单核苷酸(NMN)、烟酸(NA)和烟酰胺(NAM)是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^(+))的4个前体化合物,口服后可在体内转化为NAD^(+)发挥抗衰老等功效。建立了采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定茶叶中NAD^(+)及其4种前体化合物含量的方法,茶叶经水提取,稀释后直接进行UPLC-MS/MS分析。经方法学验证,5种目标化合物在各自范围内线性关系良好(R^(2)≥0.99),回收率为70.00%~120.00%,相对标准偏差为2.09%~14.50%,方法的定量限为0.10~0.50μg·L^(-1)。绿茶、红茶和黑茶中5种目标化合物的含量测定结果显示,绿茶和红茶是NR、NMN、NAD^(+)的良好天然食物来源;主成分分析结果显示,根据5种化合物含量能对红茶、绿茶、黑茶进行良好的类群区分;聚类分析结果显示,同一产地同一类型茶叶中5种化合物质量分布不均,离散度较高,无法进行区分。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的聚亚甲基蓝／单壁碳纳米管修饰电极差分脉冲伏安法检测

研究了聚亚甲基蓝／单壁碳纳米管修饰电极的制备、电化学性质，采用差分脉冲伏安法成功应用于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的测定。在实验条件下，该修饰电极对NADH氧化具有很好的电催化作用，NADH浓度在2．0～500μmol／L范围内与峰电流呈良好的线性关系，检出限为0．6μmol／L，结果令人满意。

1,2-萘醌修饰的碳纳米管对β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸电化学氧化的催化作用

将具有电活性的1,2-萘醌(1,2-naphthoqu inone,Nq)分子修饰到碳纳米管(CNT)表面形成Nq-CNT纳米复合体,用紫外可见(UV-V is)和红外光谱等方法对Nq-CNT进行了表征,结果表明Nq不仅能快速、有效地修饰到CNT表面,而且还能有效地改善CNT在水溶液中的分散性能。循环伏安结果显示,与GC电极相比,CNT能显著提高Nq的氧化还原峰电流,其伏安曲线上表现出一对几乎对称的氧化还原峰,式量电位E0′几乎不随扫速而变化。进一步的实验结果表明,Nq和CNT对β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的电化学氧化具有协同催化作用,与CNT或Nq相比,Nq-CNT具有较高的电催化活性,能使其氧化过电位降低超过510 mV。本研究对碳纳米管功能化方法具有简单、电极制作容易以及催化效率高等优点。

咖啡酸玻碳修饰电极对烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的电催化氧化

研究了咖啡酸修饰电极的制备、性质及对NADH的电催化作用。修饰电极在 0 .1mol/LPBS缓冲溶液中 (pH 7.0 )于 0 .0～ +0 .5 0V(vs.Ag/AgCl )电位范围内呈现一对氧化还原峰 ,式量电位 (E0′)为 +0 .2 5 0V(vs.Ag/AgCl)。E0′随pH增加而朝负方向移动 ,pH在 5 .0～ 8.0范围内 ,其线性回归方程为E0′=0 .6 2 33-0 0 5 996pH ,R =0 .996 9。表观电极反应速率常数 (Ks)为 12 .3s-1。电极反应的电子数为 2且有 2个质子参与。该修饰电极对NADH的氧化具有很好的电催化作用。NADH浓度在 0 .1～ 6 .0mmol/L范围内与峰电流呈现良好的线性关系。

二化性家蚕滞育发动期间滞育性卵和非滞育性卵的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸变化

为了探究家蚕滞育发动期间呼吸耗氧量下降与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)含量变化的关系,用高效液相色谱法和分光光度法分别检测在25℃条件下产下后12～72 h的二化性家蚕滞育性卵与非滞育性卵中的还原型NAD(NADH)含量、氧化型NAD(NAD+)含量、乳酸脱氢酶(LDH)活性和胞质苹果酸脱氢酶(cMDH)活性。滞育性卵中的NADH+NAD+含量、NADH/NAD+值及LDH活性分别在产下后18、36、24 h达到峰值,而cMDH活性处于波动中。在产下后24～72 h,非滞育性卵中的NADH/NAD+值极显著低于滞育性卵,而LDH和cMDH活性极显著高于滞育性卵。据此可以推测,滞育发动期间家蚕滞育性卵的NAD+降解增强和NAD+再生下降共同导致呼吸耗氧量下降。

早产大鼠高氧肺损伤组织还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶的动态表达及其意义

目的探讨还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位1、2、5在早产大鼠高氧肺损伤组织中的动态表达及其意义。方法早产新生大鼠生后1d随机分为高氧和空气组,高氧组持续暴露于850mL/L氧气中,空气组置同一室内常压空气中。分别取二组大鼠高氧或空气暴露后1、4、7、10和14d肺组织标本,采用HE染色观察肺组织形态学改变,采用RT-PCR法在mRNA水平检测NADH脱氢酶亚单位1、2、5的表达。结果1.高氧暴露1、4d,早产大鼠肺组织形态较空气组无明显改变;高氧暴露7、10d,肺组织渐出现小血管充血扩张,肺泡腔内炎性细胞浸润,肺泡间隔增厚,肺泡数目减少、结构简单化和囊泡化等改变。2.空气组NADH脱氢酶亚单位1(ND1)和亚单位2(ND2)mRNA的表达随日龄增长渐降低,至7d时最低,随后其表达逐渐增高;空气组NADH脱氢酶亚单位5(ND5)mRNA的表达随日龄增长渐降低,至4d时最低,随后其表达逐渐增高。3.与同时间点空气组相比,高氧暴露后1、4和7dND1和ND5mRNA表达显著增强(Pa<0.05),随后其表达渐下降,10、14d时低于空气组,但二者相比差异无显著性意义(Pa>0.05);与同时间点空气组相比,高氧暴露后1、4d ND2 mRNA表达二组间差异无显著性意义(Pa>0.05),7d时较空气组极显著增强(P<0.01),10、14d时较空气组显著降低(Pa<0.05)。结论高氧可导致早产大鼠肺组织NADH脱氢酶表达改变,提示其可能参与高氧肺损伤的病理生理过程。

还原型辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸与人血清白蛋白相互作用的研究

运用荧光光谱、紫外光谱和计算机模拟分子对接等技术,研究了在模拟生理条件下还原型辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)与人血清白蛋白(HSA)的作用方式及热力学特征。结果表明,NADH与人血清白蛋白的荧光猝灭机理属于静态猝灭;NADH与HSA在温度283K和310K时的结合常数和结合位点数分别为1.972×104 L.mol-1、0.9657和1.468×104 L.mol-1、0.9105,通过热力学计算得到反应的热力学参数;同步荧光光谱表明NADH使色氨酸残基的微环境亲水性增强;分子模型研究表明,二者通过疏水力、静电力和氢键共同作用结合。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸类CD38抑制剂的合成及生物活性评价

分别以1,3,5-三苯甲酰基-α-D-核糖、3,5-二苯甲酰基-2-脱氧-2,2-二氟戊呋喃糖-1-酮和D-木糖为原料,经由烟酰胺核苷及烟酰胺核苷酸中间体,合成了系列糖环经氟原子取代的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)类CD38抑制剂.基于对CD38的水解抑制能力的考察,评价了所合成氟代NAD类似物的活性.结果表明,糖环上氟原子取代的数目和位置对抑制剂活性的影响十分明显,烟酰胺核苷的端基构型对活性的影响较大.2个化合物均显示出非常好的CD38抑制活性,其中化合物2a的抑制活性高出阳性对照物阿糖型氟代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸2个数量级.

ATR-FTIR研究烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD＋）在纳米氧化铝／水的界面作用

生物体内烟酰胺辅酶是电子载体，在各种酶促氧化．还原反应中起着重要的作用。依赖于辅酶I（NAD＋）和辅酶II（NADP＋）的脱氢酶至少催化6种不同类型的反应。此外，NAD＋也是DNA连接酶的辅酶，对DNA的复制有着重要的作用。因为辅酶是体内许多重要的不需氧脱氢酶的辅酶，其改变往往会影响代谢途径，它与多种酶蛋白构成全酶形式参与体内基础代谢。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在纳米α-氧化铝上的吸附作用

用紫外-可见吸收光谱、X射线衍射、荧光光谱和衰减全反射傅里叶变换红外(ATR-FTIR)光谱等方法,研究了烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)在纳米α-Al2O3粒子上的吸附行为。实验结果显示,NAD+的吸附量受pH值和离子强度影响较大,说明NAD+主要通过静电作用吸附在纳米α-Al2O3粒子上。采用ATR-FTIR光谱分析了不同pH值溶液中及被吸附的NAD+,发现吸附后的NAD+与溶液中NAD+的ATR-FTIR光谱相似,但磷酸根的吸收峰向高波数位移,说明磷酸根参与了表面静电作用。吸附过程符合Langmuir和Freundlich等温式。荧光实验结果显示,随着吸附剂α-Al2O3用量的变化,NAD+构象也发生变化。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸与纳米氧化铝和勃姆石的作用(英文)

采用多种现代分析手段研究了烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)与纳米氧化铝(γ-Al2O3)和纳米勃姆石(γ-AlOOH)的相互作用,结果显示NADP+与γ-AlOOH主要通过静电作用相结合,而在γ-Al2O3表面除了静电和氢键作用外,还存在通过铝与磷酸根中的氧配位形成的内层配合物;在3<pH<5时,NADP+的最大吸附量明显下降,这可能是由于酸性条件下溶解Al髥的竞争吸附所致;NADP+与2种纳米铝化合物的吸附过程均为自发的,且符合Langmuir等温式。荧光结果表明吸附后NADP+折叠式构象增加,由此可能影响依赖于NADP+的脱氢酶体系的生物活性。

血管外膜成纤维细胞及其还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶激活在血管损伤中的作用

血管外膜是血管壁最复杂的组成部分,血管外膜成纤维细胞(AF)是血管外膜主要的细胞成分,在血管的病理生理过程中发挥着重要作用。AF的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶激活与活性氧生成是多种血管损伤的始发阶段和共同机制。本综述对AF及其NADPH氧化酶、活性氧在血管损伤中的作用进行了总结。

氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸抗辐射损伤作用及其机制

目的探讨氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的抗辐射损伤作用及其机制。方法将培养的人正常肝细胞株L02细胞分为3组:对照组、照射组和照射+NAD+组。对照组细胞不予照射,直接加入不含NAD+的RPMI-1640培养基培养;照射组细胞照射后加入不含NAD+的RPMI-1640培养基培养;照射+NAD+组细胞照射后加入含有NAD+(终浓度1 g.L-1)的RPMI-1640培养基培养。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测NAD+对受照射L02细胞生长活性的影响;应用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率以及凋亡相关蛋白p53、bax、bcl-2阳性表达率和各周期细胞含量;采用Caspase-3活性检测试剂盒检测细胞Caspase-3活性。结果细胞受照射后加入NAD+能够对抗X射线照射对L02细胞的生长抑制作用,细胞生长活性较照射组细胞活性显著提高;L02细胞在受照射后p53、bax蛋白表达增加,bcl-2表达下调,Caspase-3活性增加,而且细胞周期表现为G1期阻滞;受照射后加入NAD+,则p53、bax蛋白表达下调,bcl-2表达增加,Caspase-3活性下降,G2/M期细胞比例明显增加。结论 NAD+可对抗L02细胞的X线辐射损伤,其作用机制可能通过下调p53、bax与上调bcl-2表达以及抑制Caspase-3活性,抑制受照射细胞凋亡。

电催化测定烟酰胺腺嘌呤二核苷酸——以聚亚甲基蓝-碳纳米管修饰电极作为工作电极

制备了聚亚甲蓝-碳纳米管修饰的玻碳电极（PMB-SWCNT’s／GCE），并研究了烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）在此电极上的电化学行为。结果表明：此修饰电极对NADH表现出协同电催化作用和较好的响应性能。在pH7．0的磷酸盐缓冲溶液中可观察到NADH氧化峰电位的正移及其峰电流的增加，当NADH的浓度在5．0×10^-6～7．0×10^-4mol·L^-1范围内，与相应的氧化峰电流值之间存在线性关系。方法的检出限（3s／N）为1．4×10^-6mol·L^-1，所提出的方法应用于生物材料样品中NADH的直接测定，测得方法的平均回收率为99．5％。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶-活性氧氧化应激信号通路在过敏反应中的作用及抗氧化剂干预实验研究

目的:探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(Noxs)-活性氧(ROS)氧化应激通路在过敏反应中的作用,并考察抗氧化剂对过敏反应的影响。方法:体外建立肥大细胞脱颗粒模型,将细胞分为空白组、阳性对照组[培养基中含有Compound48/80 (C48/80) 100μmol/L]和抗氧化剂组[培养基中含有C48/80 100μmol/L+二苯基氯化碘盐(DPI) 5μmol/L]。利用酶联免疫吸附试剂盒检测各组细胞胞内β氨基己糖苷酶(β-Hex)、组胺、超氧化物歧化酶(SOD)、脂质过氧化物(LPO)及炎症介质白细胞介素-4(IL-4)和IL-6水平。利用荧光染色及流式细胞仪检测胞内活性氧(ROS)水平。采用Western blot检测三组细胞中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1、2、3、4(Nox1、Nox2、Nox3、Nox4)蛋白表达情况。结果:C48/80诱导大鼠原代嗜碱性白血病细胞(RBL-2H3)释放β-Hex、组胺及炎症介质IL-4、IL-6,RBL-2H3细胞脱颗粒过程中胞内的SOD含量呈下降趋势,而LPO及ROS浓度升高。利用DPI处理脱颗粒的RBL-2H3细胞后,可以抑制胞内ROS水平,同时升高胞内SOD含量,降低LPO浓度,并且抑制了β-Hex、组胺、IL-4及IL-6的释放。当肥大细胞脱颗粒时,Nox1-4的蛋白表达均呈上升趋势,抗氧化剂DPI可以抑制这一反应。结论:阻断Noxs-ROS信号通路可以抑制过敏反应,抗氧化剂的应用为抗过敏提供了新的治疗思路。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^+)类似物的合成及性质

合成了3种新型结构稳定的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^+)类似物并通过~1H NMR、^(13)C NMR、^(31)P NMR和HRMS进行了表征。NAD^+类似物经80℃加热24 h后,通过~1H NMR确认其结构稳定;通过循环伏安法(CV)测定了其电化学性质,表明其仍然具有良好的氧化还原性能。

高浓度氧暴露对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸表达的影响

目的探讨高浓度氧(高氧)暴露对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)-脱氢酶亚基4(ND4)表达的影响。方法原代培养早产Sprague-Dawley(SD)大鼠AECⅡ,待其在含50mL/L二氧化碳(CO2)培养箱中生长至接近融合状态时随机分为高氧组和空气组。高氧组持续暴露于常压高浓度氧中,氧体积分数>900mL/L,CO2体积分数为50mL/L;空气组仍置于含50mL/L CO2培养箱中。二组分别于高氧或空气暴露6、12、24h提取细胞RNA,采取半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定ND4 mRNA的表达;采用免疫细胞化学染色法检测细胞爬片ND4蛋白的表达。结果与空气组比较,免疫细胞化学结果显示高氧暴露6、12h ND4的表达无显著性差异(Pa>0.05),高氧暴露24h ND4的表达显著减弱(P<0.05);RT-PCR检测显示高氧暴露6h ND4 mRNA表达无显著性差异(P>0.05),高氧暴露12、24h ND4 mRNA表达显著减弱(Pa<0.05)。结论高氧暴露下调早产SD大鼠AECⅡ ND4 mRNA和蛋白水平的表达,这种改变可能参与高氧肺损伤的发病过程。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸对精子DNA碎片化指数的影响

目的研究烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)对精子DNA碎片化的作用,并探讨此过程中的分子生物学机制。方法在差异浓度NAD(0、1、10、100、1 000μmol/L)孵育下,观察最适宜的精子NAD孵育浓度;采用Bio Vsion公司生产的NAD/NADH定量试剂盒测定精子NAD水平;采用流式细胞仪观察精子DNA碎片率和染色质成熟度;采用实时定量PCR观察精子DNA单链修复酶PARP1和双链修复酶BRCA1的转录水平。结果 10μmol/L NAD孵育即能显著增加精子NAD含量。在精子内NAD水平显著升高的同时,精子DNA碎片率明显降低,然而精子染色质成熟度不受精子NAD水平的影响。精子内NAD水平能显著影响精子内DNA单链修复酶PARP1和双链修复酶BRCA1的转录水平。结论这些结果初步提示,精子内NAD水平可能通过调节DNA修复系统,参与精子DNA损伤修复。