骨骼肌纤维烟酰胺腺嘌呤二核苷酸四唑氧化还原酶组化染色的检测

本文应用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸四唑氧化还原酶(NADH-TR)组化染色,将大鼠与家兔小腿胫前肌与腓肠肌的肌纤维型分成染色最深的快缩氧化FO型、染色较深的慢缩氧化SO型、染色浅的快缩氧化酵解FOG型及染色最浅的快缩酵解FG型纤维。这与定量分析结果相吻合。并对低温液氮保存骨骼肌标本进行观察,发现小块肌组织+生理盐水和小块肌组织+5%二甲基亚砜(DMSO)冷冻保护剂的玻璃化冻存一起浸入液氮制成切片,都未见冰晶形成;而在用5%二甲基亚砜玻璃化冻存大块肌组织切片见有少量冰晶出现;未使用5%二甲基亚砜玻璃化冻存大块肌组织切片见有大量冰晶出现。提示小块标本超快速浸入液氮内能减少冰晶形成,保证酶组化染色切片的质量。并进一步对烟酰胺腺嘌呤二核苷酸四唑氧化还原酶组化作用机理与孵育液的科学配制进行了探讨。

CYP450氧化还原酶基因多态性对CYP酶影响的研究进展

肝药酶CYP即细胞色素P450氧化酶（CYP450），属于单加氧酶（ monooxygenase），也称肝微粒体混合功能氧化酶，多位于内质网和线粒体内膜上，参与药物、致癌物、类固醇激素和脂肪酸等多种内、外源性物质代谢。肝药酶CYP氧化还原酶（ POR）是所有肝微粒体酶的唯一电子供体，通过还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（ reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH）将电子传递给 CYP 450酶， CYP 450酶得到电子后再与底物发生氧化还原反应，从而发挥代谢活性。

家兔腓肠肌和胫前肌NADH-TR染色的探讨

研究成年家兔腓肠肌内外侧头和胫前肌的肌纤维构成比例与分布.应用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸四唑氧化还原酶（NADH-TR）染色法,观察比较各型肌纤维的组织化学特性.结果表明：NADH-TR染色,依据其肌纤维内线粒体和肌质网显示紫色或紫蓝色,肌原纤维中的肌动蛋白和肌球蛋白不着色,可以分为Ⅰ型、ⅡA型、ⅡB型肌纤维,横切面呈多边形或椭圆形,以镶嵌交叉方式排列.三种类型的肌纤维在腓肠肌内侧头中分别约占15.2%,27.4%和57.4%,在站立负荷中提供足够肌力和稳定机体姿势的作用;在腓肠肌外侧头中分别约占13.7%,65.4%和20.9%,主要参与力量和速度运动,提供奔跑,跳跃中的推进动力;在胫前肌中约占10.9%,52.3%和36.8%,维持跗关节稳定,参与保持足弓形状与弹性,完成足跖屈和足内翻运动.腓肠肌内外侧头和胫前肌的三型肌纤维直径有所差异,其中Ⅰ型纤维为57.50～58.40 μm,ⅡA型纤维为59.25～75.40 μm,ⅡB型纤维为73.25～97.85 μm.ⅡB型纤维的横切面积最大,ⅡA型纤维的横切面积中等,Ⅰ型纤维的横切面积最小.

NOX1在糖化终末产物诱导主动脉内皮细胞氧化应激中的作用

目的 探讨非吞噬细胞氧化酶1（NOX1）的激活是否是糖化终末产物（AGEs）诱导主动脉内皮细胞（BAECs）氧化应激的始动因素.方法 将BAECs分为3组：对照组（5.6 mmol/L葡萄糖）,AGE组（200 mg/L AGEs）和NOX1沉默干预组（200 mg/L AGEs＋ NOX1 RNAi）.用2＇,7 ＇二氯双氢荧光素二乙酸酯（H2DCFDA）检测各组氧自由基的水平;同时免疫杂交法检测NOX1、NOX2和调节eNOS耦联状态的关键酶二氢叶酸还原酶（DHFR）的蛋白表达.结果 AGEs培养2天后,NOX1和NOX2均表达上调,而DHFR的表达下降,同时伴有氧自由基水平的升高.NOX1 RNAi转染后,NOX2的表达不受影响,DHFR的表达和氧自由基的产生则均恢复到正常对照水平.结论 AGEs对BAECs氧化应激的诱导是通过激活NOX1起始的,NOX1的激活也通过抑制DHFR的表达来促进内皮一氧化氮合成酶（eNOS）的解耦联而加重氧化应激.

氧化应激与糖尿病脑组织损伤关系的研究新进展

糖尿病是一种常见的内分泌代谢紊乱疾病,随着生活方式的改变和老龄化的进程,糖尿病的患病率急剧增加,而糖尿病脑组织损伤是糖尿病患者致死、致残的重要原因。研究表明,在糖尿病脑损伤的发生、发展过程中,氧化应激增多是糖尿病性脑组织损伤的重要因素[1]。而近年来研究发现烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶是氧化应激的关键因素。本文就氧化应激、NADPH氧化酶、醛糖还原酶和糖尿病脑组织损伤的关系作系统的表述。

高糖与高尿酸通过醛糖还原酶通路协同作用加重内皮细胞损伤

目的寻找高血糖与高尿酸血症协同加重内皮细胞损伤的共同作用靶点和分子机制,为糖尿病合并高尿酸血症患者心血管疾病的保护提供干预靶点。方法用人脐静脉内皮细胞系(HUVEC-C)给予高糖(30 mmol/L,HG)、高尿酸(600μmol/L,UA)和高糖(HG)+高尿酸(UA)联合培养48 h。利用10μmol/L阿司他丁阻断醛糖还原酶(AR)的活性。实时定量PCR检测内皮型一氧化氮合成酶(e NOS)和AR mRNA的表达;Western blot检测还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(NOX2)、NOX4、e NOS和AR蛋白的表达;共聚焦显微镜检测细胞内ROS的活性;一氧化氮(NO)试剂盒检测NO活性。结果与单独HG组和UA组相比,HG+UA共培养组明显降低e NOS mRNA水平和蛋白表达,减少NO产生,增加内皮细胞胞内ROS活性;HG+UA共培养明显上调AR mRNA水平和蛋白表达。应用AR抑制剂能够明显增加HG+UA组内皮细胞e NOS mRNA水平和蛋白表达,增加内皮细胞NO的分泌水平。AR抑制剂能够明显下调HG+UA组内皮细胞NOX4的蛋白表达,对NOX2无影响;降低细胞内ROS的含量。结论高血糖和高尿酸协同作用通过激活醛糖还原酶途径下调内皮细胞e NOS的表达,增加ROS活性,减少NO的产生,加重内皮细胞功能障碍;而抑制醛糖还原酶,能够通过抑制NOX4表达,阻断这种协同损伤作用。

不同部位猪肉肌纤维类型组成与品质特性比较研究

为比较不同部位猪肉肌纤维类型组成与品质特性的差异,选取9头6月龄杜长大三元杂交猪背最长肌(Longissimus dorsi)、半膜肌(Semimembranosus)和半腱肌(Semitendinosus)3个部位猪肉作为研究对象,通过烟酰胺腺嘌呤二核苷酸四唑氧化还原酶(nicotinamide adenine dinucleotide-tetrazolium reductase,NADH-TR)染色法研究不同部位猪肉的肌纤维类型组成,并分析肌纤维类型数量比例、平均直径、横截面积、密度等肌纤维特性;测定不同部位猪肉的品质特性(p H值、色泽、蒸煮损失率、剪切力以及质构特性)。结果表明,背最长肌和半膜肌中主要为ⅡB型肌纤维(P<0.05),数量比例分别为82.03%和53.22%,半腱肌则主要由Ⅰ型(45.44%)和ⅡB型(39.01%)肌纤维组成。半膜肌中各类型肌纤维的平均直径和横截面积较大,总肌纤维密度最小(P<0.05),为42.15根/mm2。背最长肌的亮度值和蒸煮损失率最高(P<0.05),pH值和红度值最低(P<0.05);半膜肌的剪切力最高(P<0.05);半腱肌的pH值和红度值最高(P<0.05),亮度值、剪切力和蒸煮损失率最低(P<0.05)。

线粒体电子传递呼吸链及其生物学意义的研究进展

线粒体为细胞的生命活动提供基本能量。其内膜上的呼吸链酶传递氢和电子到ATP酶复合体,用于合成能量及维持跨内膜氢离子梯度循环。细胞生存所需能量的95%由线粒体呼吸链提供,主要由位于线粒体内膜上的5个复合体(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ)组成的线粒体呼吸链酶完成,即NADPH-泛醌、琥珀酸-泛醌还原酶、泛醌-Cytc还原酶、细胞色素c氧化酶及ATP合成酶。本文对线粒体呼吸链Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ/Ⅳ/Ⅴ的分子结构、功能及生物学意义等进行了综述。

手性NAD类似物合成及其辅酶应用

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)是生命体中必不可少的氧化还原辅因子。NAD具有β-NAD和α-NAD两种差向异构体,而大多数NAD依赖酶偏好β-NAD。近年来,已合成大量结构简化的NAD类似物,并探索其作为氧化还原辅因子应用于生物催化反应。通常认为酶天然具有立体选择性,而很多结构简化的NAD类似物不含手性中心,暗示有必要合成手性NAD类似物以评估其性能。本研究拟设计合成手性NAD类似物,并初步探讨部分氧化还原酶利用它们作为辅酶的催化性能。以商品化光学纯的氨基-3-苯基丙酸为手性原料,合成了两对NAD类似物对映体,并用来源于巨芽孢杆菌的突变型细胞色素P450单加氧酶(P450 BM3 R966D/W1046S)和来源于硫化叶菌的突变型葡萄糖脱氢酶(SsGDH I192T/V306I),测试这些NAD类似物作为辅酶的催化活性。结果发现,P450 BM3 R966D/W1046S利用还原型S构型NAD类似物的催化效率高于对应的R构型NAD类似物;而SsGDH I192T/V306I则对NAD类似物对映体均没有活性。研究初步表明,氨基酸可作为手性原料制备立体构型明确的NAD类似物,而氧化还原酶表现出偏好特定手性NAD类似物的现象,也提示需要合成更多的手性NAD类似物,并系统测试和匹配氧化还原酶及其突变体,以创建出基于辅酶依赖型氧化还原酶的新催化体系。

注射性坐骨神经损伤后针刺对家兔腓肠肌内NADH-TR和胶原纤维的影响

目的探索注射性坐骨神经损伤后针刺腧穴改善肌萎缩的机制。方法成年家兔42只,随机分为7组:正常组;青霉素注射坐骨神经2周和4周组;青霉素注射坐骨神经加针刺腧穴4周和8周组;青霉素注射坐骨神经加针刺尾部对照4周和8周组。取腓肠肌外侧头横切片作烟酰胺腺嘌呤二核苷酸四唑氧化还原酶染色与VG染色。结果青霉素注射2周时,腓肠肌外侧头内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸四唑氧化还原酶染色加深,光密度值增大,肌纤维横切面积减小,肌重减轻,胶原纤维增多。I型和II型纤维的比例不变,IIA型纤维比例增加,IIB型纤维相应减少。4周时上述变化更重。坐骨神经注射性损伤4周后,针刺穴位治疗4周,上述变化明显恢复。8周时,进一步好转。尾部针刺对照组无恢复迹象。结论针刺腧穴改善注射性坐骨神经损伤所致的肌萎缩可通过降低肌内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸四唑氧化还原酶活性和减少胶原纤维增生实现。

纳米金颗粒/麦尔多拉蓝溶胶的合成及NADH传感器应用

1引言 脱氢酶是氧化还原酶中为数最多的一类酶,目前已知超过300种脱氢酶使用氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD＋）作为辅酶。在这些酶和辅酶协同作用催化底物时,NAD＋从底物接受电子被还原成还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）。

家兔小腿屈伸趾肌群肌纤维型增龄变化研究

目的使用NADH-TR染色探讨家兔屈伸趾肌群在增龄过程中肌纤维型的改变。方法健康家兔24只,根据家兔年龄段划分为:幼年组(4周)、青年组(12月)、中年组(24月)、老年组(36月)共4个组。取肌腹中部横切片作烟酰胺腺嘌呤二核苷酸四唑氧化还原酶(NADH-TR)染色。结果 4周组能分辨出Ⅰ、ⅡA和ⅡB三型肌纤维;36月龄组的Ⅱ型肌纤维尤其是ⅡB型肌纤维构成比减少,Ⅰ型肌纤维呈增加趋势,出现小角化肌纤维和肌纤维类聚现象。结论随着增龄家兔骨骼肌三型肌纤维的分布逐渐改变,骨骼肌萎缩以Ⅱ型肌纤维为主。

注射性坐骨神经损伤后针刺腧穴对家兔胫骨前肌胶原纤维和NADH-TR的影响

目的探索注射性坐骨神经损伤后针刺腧穴对家兔胫骨前肌内胶原纤维和NADH-TR的影响。方法成年家兔35只,分正常、青霉素注射、生理盐水注射、青霉素注射加针刺腧穴治疗4组;手术暴露坐骨神经干,神经外膜下注射青霉素或生理盐水0.5 mL;青霉素注射损伤4周后针刺患侧环跳和后三里4～8周;VG染色法和NADH-TR组化染色法观察胶原纤维与NADH-TR的变化。结果青霉素注射坐骨神经后2周,胫骨前肌内胶原纤维已明显增生;NADH-TR活性增强,三型肌纤维构成比发生了变化,肌纤维横切面积减小,光密度值下降,肌重减轻;4周时进一步加重,肌块明显萎缩。生理盐水注射2周,可见肌内一过性损伤。青霉素注射4周后针刺腧穴治疗4周,上述指标明显好转,治疗8周时进一步恢复,接近正常。结论针刺腧穴治疗可减少肌内胶原纤维增生,降低NADH-TR活性,改善肌萎缩。

肉桂油对大鼠前列腺增生的治疗作用及其机制研究

目的研究肉桂油对实验性大鼠前列腺增生的治疗作用及其作用机制。方法将SD大鼠随机分成正常组、模型组、对照组和肉桂油高、中、低剂量组,每组各10只。大鼠皮下注射5 mg·kg^(-1)·d^(-1)丙酸睾酮,连续30 d,诱导大鼠前列腺增生模型。正常组和模型组灌胃给予1 mL·kg^(-1)的0.9%NaCl,对照组灌胃给予1 mg·kg^(-1)非那雄胺,肉桂油高、中、低剂量组分别灌胃给予1、0.5和0.25 mg·kg^(-1)肉桂油,每天1次,连续30 d。比较大鼠前列腺湿质量和指数等指标,研究肉桂油对5α-还原酶和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶的抑制作用。结果正常组、模型组、对照组和肉桂油高、中、低剂量组大鼠前列腺湿质量分别为(0.51±0.09)、(1.02±0.17)、(0.65±0.15)、(0.64±0.17)、(0.79±0.09)和(0.81±0.15)mg,前列腺指数分别为(2.25±0.33)、(4.70±0.48)、(3.03±0.82)、(3.02±0.60)、(3.53±0.46)和(3.68±0.66)mg·kg^(-1),NADPH氧化酶荧光强度分别为(1.26±0.18)、(5.21±0.80)、(2.21±0.56)、(2.51±0.56)、(4.13±0.64)和(4.90±0.88)RLU,对照组和肉桂油高、中剂量组与模型组相比,在统计学上差异有统计学意义(P<0.01)。同时研究还发现,阳性对照组(20μmol·L^(-1)非那雄胺)、肉桂油组(10、20μmol·L^(-1))对5α-还原酶的平均抑制率分别为49.36%、45.62%和63.45%,肉桂油组(20μmol·L^(-1))对5α-还原酶的平均抑制率高于阳性对照组,在统计学上差异有统计学意义(P<0.05)。结论肉桂油可能通过抑制5α-还原酶和抑制NADPH氧化酶抑制前列腺增生。

中国草原红牛不同部位肌纤维特性及类型

为研究中国草原红牛不同部位肌纤维组织特性,对草原红牛不同部位肌纤维特性及类型进行比较分析。选择6头体质量、日龄相近的中国草原红牛,通过石蜡切片、苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸四唑氧化还原酶组织化学染色对不同部位肌肉样本(西冷、大条、米龙、上脑、小条及牛腩)进行显微观察并结合形态计量学分析。采取HE染色法对不同部位肌纤维直径、肌纤维横截面积、肌内膜厚度、肌束膜厚度及肌纤维类型组成占比进行测定和统计,同时进行差异性分析。结果表明:中国草原红牛不同部位间的肌纤维横截面积与肌纤维直径均不存在显著性差异;牛腩、西冷部位肌束膜厚度与其他部位差异极显著(P<0.01);西冷、大条肌内膜厚度与其他部位相比差异显著(P<0.05),Ⅰ型肌纤维占比各部位间均差异显著(P<0.05),ⅡB型肌纤维占比米龙、西冷部位与其他部位差异极显著(P<0.01)。结果提示,草原红牛不同部位间肌纤维组织特性及肌纤维组成占比存在差异。

Sirtuins家族蛋白在卵巢衰老过程中的作用

衰老导致的卵巢功能衰退是不可逆的自然生理过程,表现为卵泡的逐渐耗竭和卵巢的卵母细胞质量下降。现有研究表明,Sirtuins家族通过多种途径参与卵巢衰老的发生发展,如调控烟酰胺腺嘌呤二核苷酸水平、氧化应激、染色体分离和基因组稳定性等。本文就目前Sirtuins家族蛋白在卵巢衰老中扮演的角色及其分子机制进行综述。

电子传递链复合物I缺陷症

线粒体复合物I[烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）：泛醌氧化还原酶]作为氧化磷酸化（OXPHOS）系统的第一个且最大的酶，在人体能量代谢及供应中至关重要。氧化磷酸化是分解有机营养素并把它转化成三磷酸腺苷（ATP）产物的过程。复合物I功能障碍可导致复合物I缺陷症，它是OXPHOS系统最常见的生物化学缺陷症。