烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶2在恶性脑肿瘤中的普遍标志性表达

目的检测烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶2(NADK2)在恶性脑肿瘤中的表达。方法使用免疫组织化学法检测了NADK2在75例恶性脑肿瘤中的表达。结果本实验检测了NADK2在75例恶性脑肿瘤中的表达情况,包括55例星形细胞瘤、13例少突神经细胞瘤、3例髓母细胞瘤和4例室管膜瘤,74例样本中NADK2的表达都明显高于正常对照组织。对免疫组织化学结果进行吸光度分析,比较NADK2在不同肿瘤类型和不同分级的脑肿瘤中的表达,结果表明,NADK2在恶性脑肿瘤中的表达与肿瘤类型和分级无关。结论高表达NADK2是恶性脑肿瘤的一个普遍特征。

基于计算机模拟探究鱼类烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶源活性肽抗运动疲劳的功效

为了研究鱼类烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(Nicotinamide Adenine Dinucleotide Dehydrogenase,NADH Dehydrogenase)源活性肽抗运动疲劳的功效,该研究利用计算机模拟水解5种我国常见鱼类中的NADH Dehydrogenase蛋白亚基,将模拟水解得到的寡肽与乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶(Creatine Kinase,CK)分别进行分子对接,确定与LDH和CK具有超高亲和力的寡肽(对接分数≤-160),并利用Pymol、Ligplot+软件分析寡肽与LDH和CK分子间相互作用机制。结果显示,5种鱼类的7种不同NADH Dehydrogenase蛋白亚基经计算机模拟水解和分子对接后共获得72个超高亲和力寡肽,其中,与LDH、CK均具有超高亲和力的寡肽共36种,对接分数最高且出现次数最多的寡肽是PTIW(-198.762、-204.400)。研究结果为提升鱼类蛋白质的高值化利用以及开发抗疲劳功能食品提供理论参考。

家蚕烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶基因(BmNADK)的高温应激表达分析

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶(NAD kinase,NADK)是生物体内氧化还原调节和氧化应激反应的重要酶类。以对高温耐受性不同的家蚕品种的5龄幼虫为材料,进行34℃连续高温处理和42℃高温冲击3 h处理,通过实时荧光定量PCR检测家蚕NADK基因(Bm NADK)在雌蚕和雄蚕的脂肪体、中肠、丝腺3个器官组织中的表达水平,探究该基因是否与家蚕对高温的应激反应有关。结果显示,5龄期2种高温环境胁迫均可引起Bm NADK基因在蚕体3个器官组织中上调表达,其中在脂肪体表达的上调最为显著,且雄蚕脂肪体中的上调表达明显高于雌蚕,当恢复常温环境条件时,Bm NADK基因在蚕体组织的表达量也随之下降;高温胁迫下Bm NADK基因在耐高温家蚕品种7532幼虫组织中的表达量高于对高温耐受性差的品种皓月。研究结果显示Bm NADK基因与家蚕对高温的应激反应相关,在耐高温家蚕品种及雄蚕体内的应激表达水平相对较高。

还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2在局限性骨肉瘤组织中表达及与新辅助化疗效应及局部进展相关性研究

目的探讨局限性骨肉瘤组织还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)2表达与新辅助化疗效应及局部进展(L-PD)的相关性。方法选取自2005年1月至2016年12月收治的134例局限性骨肉瘤患儿(骨肉瘤组)及同期53例多指畸形患儿的软骨组织样本(参考组)进行回顾性分析。分别采用免疫组织化学法及蛋白质印迹法检测组织NOX2蛋白表达。采用Huvos分级系统评估新辅助化疗反应,RECIST标准评估L-PD情况。结果骨肉瘤组组织NOX2蛋白表达率及相对表达量均高于参考组,差异均有统计学意义(P<0.05),且两种检测结果基本一致。经受试者工作特征曲线(ROC)分析,组织NOX2蛋白相对表达量用于诊断骨肉瘤的曲线下面积(AUC)为0.746。组织NOX2蛋白高表达组病灶数目更多,且新辅助化疗反应不良的患儿比例更高(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线结果显示组织NOX2高表达者5年无L-PD时间短于低表达者(P<0.001)更高。同样地,单因素及多因素COX回归分析的结果显示组织NOX2蛋白高表达是骨肉瘤患儿5年L-PD预后不良的独立预测因子(P<0.001)。经ROC曲线分析,组织NOX2蛋白表达预测骨肉瘤患儿新辅助化疗反应不良及L-PD的AUC分别为0.774、0.774。结论组织NOX2蛋白表达对骨肉瘤患儿新辅助化疗不良及L-PD具有良好的预测效能,有望成为新型预测生物标志物。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶研究进展

本文介绍了ＮＡＤ￣＋激酶的来源和分布、测定方法、最适ｐＨ、反应平衡常数、影响酶稳定性的因子、比活力和动力学常数、三磷酸核苷酸特异性、对金属离子的需要、抑制剂和底物类似物、反应机制、反应的感光性、酶固定化、与钙调蛋白的关系、各种效应物等方面研究的进展，并进行了评述。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶与心房颤动的研究

心房颤动是最常见的心律失常,其发生和维持的分子机制尚未明确。近年来发现心房颤动存在氧化应激,并已从动物实验、临床试验等多方面证实其主要来源为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶,推测NADPH氧化酶可能在心房颤动发生发展过程中起重要作用。以NADPH氧化酶为靶点的心房颤动干预措施如肾素-血管紧张素系统抑制剂和他汀类等也愈受关注。

烟酸腺嘌呤二核苷酸磷酸-Ca^(2＋)释放的调控物质

烟酸腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinic acid adenine dinucleotide phosphate,NAADP)是于1987年发现的,存在于无脊柱动物海胆卵和哺乳动物的肌肉、神经、腺体等组织细胞中的,与Ca2+释放有关的物质。NAADP可作用于细胞内溶酶体和溶酶体样的酸性小泡的双孔通道,引起小泡内Ca2+的释放,也可作用于细胞内质网膜上的三磷酸肌醇和环二磷酸腺苷核糖受体,引起细胞质网的Ca2+释放,具有Ca2+第二信使样作用。本文简述NAADP的生成、分布、生理作用、受体、引起细胞内Ca2+释放的可能机制。

基于ROCK/NOX4信号通路探究刺芒柄花素对2型糖尿病大鼠内质网应激损伤及肾功能的影响

目的基于RAS同源基因家族成员相关激酶(ROCK)/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)4信号通路探究刺芒柄花素对2型糖尿病大鼠内质网应激损伤及肾功能的影响。方法SPF级健康8周龄雄性C57BL/6大鼠60只,随机分为5组,各12只,健康组、模型组、刺芒柄花素低、中、高组,除健康组外均建立2型糖尿病大鼠模型,刺芒柄花素低组、刺芒柄花素中组、刺芒柄花素高组分别给予20、40、100 mg/kg刺芒柄花素灌胃,其余组别灌胃等体积生理盐水。采用自动生化分析仪测定肾功能指标。苏木素-伊红(HE)染色与Masson染色观察大鼠肾组织病形态。TUNEL检测肾小管上皮细胞凋亡。免疫组化检测RAS同源基因家族成员(Rho)A、NOX4、ROCK阳性表达。Western印迹检测内质网应激相关蛋白表达。结果HE染色结果显示:健康组肾脏组织结构正常;模型组肾小球有一定程度萎缩,组织结构排列不均匀,并且有肿胀、脱落现象、还存在空泡样变性、鲍曼囊腔扩,而经过刺芒柄花素干预后,上述情况有所改善,且呈现出明显的剂量依赖性。Masson染色结果显示:健康组肾组织正常;模型组肾小球、肾小管基底膜增厚,产生空泡样病变,肾间质胶原纤维沉积明显;在经过刺芒柄花素干预后上述状况明显改善,且呈现出明显的剂量依赖性。健康组24 h MAU、SCr、BUN、细胞凋亡率、RhoA、NOX4、ROCL、eIF2α、GRP78水平显著低于模型组(P<0.05)。模型组24 h MAU、SCr、BUN、细胞凋亡率、RhoA、NOX4、ROCL、eIF2α、GRP78水平显著高于刺芒柄花素低组(P<0.05)。刺芒柄花素低组24 h MAU、SCr、BUN、细胞凋亡率、RhoA、NOX4、ROCL、eIF2α、GRP78水平显著高于刺芒柄花素中组(P<0.05)。刺芒柄花素中组24 h MAU、SCr、BUN、细胞凋亡率、RhoA、NOX4、ROCL、eIF2α、GRP78水平显著高于刺芒柄花素高组(P<0.05)。结论刺芒柄花素可能是通过调控Rho/ROCK/NOX4信号通路抑制了2型糖尿病大鼠内质网应激,改善肾功能,对肾脏起保护作用。

柯萨奇病毒B3(CVB3)通过激活NADK2促进小鼠巨噬细胞NLRP3的活化

目的研究在柯萨奇病毒B3(CVB3)刺激下,小鼠巨噬细胞中含pyrin结构域NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)表达的变化及机制。方法CVB3刺激RAW264.7细胞、小鼠原代(骨髓来源或腹腔)巨噬细胞以及感染NLRP3短发夹RNA(shRNA-NLRP3)慢病毒的RAW264.7细胞,实时荧光定量PCR检测NLRP3和白细胞介素1β(IL-1β)表达水平;ELISA检测细胞上清中IL-1β的含量;Western blot法检测NLRP3蛋白的变化,免疫共沉淀(Co-IP)法检测NLRP3相互作用蛋白的表达。结果CVB3刺激RAW264.7细胞、骨髓来源或腹腔巨噬细胞后,NLRP3和IL-1β表达明显升高;下调NLRP3后,IL-1β分泌明显减少;NLRP3抗体Co-IP所得复合物银染,组间差异蛋白经质谱分析鉴定为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶2(NADK2),证明CVB3诱导NADK2与NLRP3相互作用。结论CVB3通过激活NADK2促进巨噬细胞NLRP3活化,增加炎症因子IL-1β表达和释放。

8-异前列腺素F2α及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶p22phox亚基C242T基因多态性与2型糖尿病大血管病变的相关性

目的：探讨8-异前列腺素F2α（8-epi-prostaglandin F2 alpha，8-isoPGF2α）及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADPH）氧化酶P22phox亚基C242T基因多态性与河北省汉族人群2型糖尿病（T2DM）大血管病变的关系。方法选取2012年7月至2013年7月在河北医科大学第三医院内分泌科住院的215例T2DM患者（其中单纯T2DM组110例，T2DM大血管病变组105例）和100名健康对照者为研究对象，采集其体质指数（BMI）、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、踝肱指数（ABI）等一般情况，应用全自动生化分析仪测定空腹血糖（FBG）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C），在德国拜耳DCA2000仪器上测量糖化血红蛋白（HbA1c）；采用酶联免疫吸附法对8-isoPGF2α水平进行测定，同时用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测受试者p22phox亚基C242T基因多态性。采用方差分析、相关分析和logistic逐步回归法进行统计学分析。结果T2DM大血管病变组8-isoPGF2α水平明显高于单纯T2DM组[（49±24）比（33±13）ng/L，t=－5.856，P〈0.05]和正常对照组[（49±24）比（28±13）ng/L，t=－7.780，P〈0.05]。8-iso-PGF2α与SBP、DBP、BMI、TC、TG、LDL-C、FBG及HbA1c呈显著正相关（r=0.247、0.269、0.201、0.134、0.177、0.233、0.255、0.226，均P〈0.05），与ABI和HDL-C呈显著负相关（r=－0.382、－0.195，均P〈0.05）。T2DM大血管病变组T等位基因及CT＋TT基因型频率均显著高于单纯T2DM组和对照组（χ^2值分别为6.67、4.08、14.01、10.81，均P〈0.05）。CT＋TT型大血管病变发生率高于CC型（χ^2=10.06，P〈0.01）。多元回归分析显示BMI、LDL-C及8-iso-PGF2α是大血管病变的独立危险因素（β=0.913、2.787、0.835）。结论单纯T2DM以及T2DM大血管病变者体内存在氧化应激，但T2DM大血管病变者更加明显；NADPH氧化酶p22phox亚基C242T多态性可能与T2DM大血管病变的易患性无关。

大蒜素激活核因子E2相关因子信号通路并抑制还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶抗脑缺血再灌注损伤作用机制研究

目的探讨大蒜素在大鼠脑缺血再灌注过程中对核因子E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)信号通路和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶的影响,研究其抗脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法将45只健康雄性8周龄SD大鼠随机分为假手术组、大脑中动脉阻塞(MCAO)模型组和大蒜素处理组。脑缺血2 h,再灌注48 h后进行神经功能评分,四氮唑红(TTC)染色检测脑梗死体积,酶联免疫吸附(ELISA)等方法检测脑皮质中超氧化物、丙二醛(MDA)、蛋白羰基化和8-羟脱氧鸟苷(8-OHd G)水平,采用蛋白印迹法(Western blotting)测定脑皮质核内Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)和醌氧化还原酶(NQO-1)以及NADPH氧化酶亚基gp91-phox和p47-phox的蛋白表达水平。用SPSS 19.0软件进行单因素方差分析和Bonferroni’s检验。结果与假手术组(0 mm3)比较,MCAO模型组脑梗死体积[(204.6±24.8)mm3]明显增加,大蒜素组脑缺血再灌注诱导的脑梗死体积[(105.6±18.9)mm3]较MCAO模型组明显减少,差异均有统计学意义(P<0.01)。与假手术组(0分)比较,MCAO模型组大鼠神经功能缺损评分[(4.8±0.2)分]增加,与MCAO模型组比较,大蒜素处理组神经功能缺损程度[(2.5±0.5)分]明显减低,差异均有统计学意义(P<0.01)。与假手术组比较,MCAO组大鼠脑皮质超氧化物水平、MDA、蛋白羰基化和8-OHd G水平均明显增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。大蒜素处理组与MCAO组比较,以上4项指标水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。与假手术组比较,MCAO组大鼠脑皮质NADPH氧化酶亚基gp91-phox和p47-phox的蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05),而核内Nrf2以及HO-1和NQO-1的蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。与MCAO模型组比较,大蒜素能显著降低大鼠脑皮质NADPH氧化酶的亚基gp91-phox和p47-phox的蛋白表达,增加核内Nrf2以及HO-1和NQO-1的蛋白表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。大蒜素处理组的HO-1和NQO-1的活力较假手术组及MCAO组显著增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论大蒜素具有显著的抗脑缺血再灌注损伤作用,可能的作用机制是大蒜素能够激活Nrf2信号通路,并抑制NADPH氧化酶的表达和活力,从而抑制脑缺血再灌注诱导的氧化应激。

贝那普利对肝纤维化大鼠核因子E2相关因子2、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶及活性氧簇的影响

目的研究贝那普利对肝纤维化大鼠肝脏核因子E2相关因子2(Nrf2)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)表达及血清活性氧簇(ROS)浓度的影响,探讨贝那普利可能的抗纤维化机制。方法将22只清洁级健康雄性SD大鼠随机分3组,其中对照组6只,模型组和贝那普利治疗组每组8只,在造模及治疗过程中模型组和贝拉普利治疗组各有2只大鼠死亡,建立四氯化碳诱导的肝纤维化模型,贝那普利治疗组同时应用贝那普利灌胃,共8周,各组肝组织损伤的评估采用常规苏木精-伊红和Masson染色,RT-PCR检测肝组织中Nrf2mRNA及NOX4mRNA的表达量、比色法测定血清ROS浓度。所有数据表示为均数±标准差,采用SPSS21.0统计软件分析。计量资料组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t法;相关性分析采用Spearman相关分析。结果随着肝纤维化的加重,模型组肝脏Nrf2mRNA、NOX4mRNA表达及血清ROS浓度均较对照组升高[(4.01±3.40)、(31.78±3.96)、(1.82±0.46)μg/ml对比(0.12±0.11)、(2.03±0.31)、(1.56±0.84)μg/ml,P值均<0.05]。贝那普利治疗后NOX4mRNA表达和ROS浓度较模型组下降[(15.93±5.01)、(0.78±0.44)μg/ml对比(31.78±3.96)、(1.82±0.46)μg/ml,P值均<0.05],而Nrf2mRNA表达较模型组升高(相对表达量6.69±4.86对比4.01±3.40,P<0.05)。Nrf2与NOX4、Nrf2与ROS、NOX4与ROS三组之间均呈正相关(r值分别为0.616、0.411、0.802,P值均<0.05)。结论贝那普利可能通过激活Nrf2表达发挥抗肝纤维化作用,亦可能抑制NOX4产生的ROS介导的氧化应激反应,发挥抗肝纤维化作用。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2抑制剂通过影响微小RNA-155/白细胞介素-10保护脊髓损伤大鼠

目的探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(NOX2)抑制剂对脊髓损伤大鼠的保护作用及其机制。方法将购自北京中国科学院的SD大鼠随机分为假手术组、对照组和观察组,观察组和对照组大鼠均接受脊髓采用脊髓打击器损伤脊髓,观察组大鼠采用NOX2抑制剂(gp91ds-tat)处理,术后检测各组大鼠肢体运动功能,5周后取脊髓组织,检测其中NOX2、炎性因子及微小RNA(miRNA,miR)-155含量和小胶质细胞/巨噬细胞浸润情况,组间比较采用方差检验和t检验。结果在术后第2~5周,与对照组脊髓损伤运动功能(BBB)评分比较(5.54±1.10、6.24±1.96、9.56±1.02、10.58±1.77),观察组的BBB评分均显著升高(12.12±1.98、15.14±2.25、16.77±2.14、17.05±1.87),差异有统计学意义(t=8.941,9.252,9.115,7.035,P<0.05)。观察组大鼠脊髓组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、NOX2相对表达量显著少于对照组(t=9.024、11.247、12.846、13.237,P<0.05),白介素-10(IL-10)、精氨酸酶1(Arg1)、类几丁质酶3样分子3(Ym1)相对表达量显著多于对照组(t=13.294、8.356、15.389,P<0.05)。观察组脊柱组织中miR-155含量均显著高于对照组(t=7.363,P<0.05)。而观察组大鼠在损伤处和未损伤处M1、M2型细胞比例与假手术组差异均无统计学意义(F=1.035,P>0.05)。结论NOX2抑制剂可以通过调节miR-155/IL-10信号通路调节炎性反应保护受损脊髓。

胸腔镜肺楔形切除术对小于1.5 cm肺混合性磨玻璃结节患者疗效及血清NOX2水平的影响

目的探究胸腔镜肺楔形切除术对小于1.5 cm肺混合性磨玻璃结节(GGN)患者疗效及血清还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(NOX2)水平的影响。方法选取2018年11月—2022年11月安徽医科大学第二附属医院收治的96例肺混合性GGN患者,利用随机数字表法分为对照组(48例,采用胸腔镜下肺叶切除术进行治疗)与研究组(48例,采用胸腔镜肺楔形切除术进行治疗)。比较两组肺患者的临床疗效、手术指标、肺功能、血清NOX2水平的变化及术后发生并发症的情况。结果研究组总有效率高于对照组(P<0.05)。研究组术中出血量低于对照组(P<0.05),手术时间、胸管留置时间、住院时间短于对照组(P<0.05)。研究组治疗前后最大肺活量、每分钟最大通气量、残气量的差值高于对照组(P<0.05)。研究组手术前后血清NOX2的差值低于对照组(P<0.05)。两组患者术后并发症总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论胸腔镜肺楔形切除术治疗肺混合性GGN的疗效确切,可改善患者的手术指标及肺功能,降低患者血清NOX2水平,安全性高,值得推广。

不同糖耐量人群血清吞噬细胞样还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶水平与胰岛β细胞功能的关系

目的：研究不同血糖水平下，体内总吞噬细胞样烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶（Nox）含量与氧化应激水平，及其与胰岛β细胞功能的关系。方法根据空腹血糖（FBG）和口服糖耐量试验2 h血糖（OGTT 2 hPG），将84名体检市民分为正常糖耐量组（NGT组26例）：FPG〈6.1 mmol/L和OGTT 2 hPG〈7.8 mmol/L；糖调节受损组（IGR组，27例）：FPG在6.1-7.0 mmol/L之间，且OGTT 2 hPG〈7.8 mmol/L或FPG〈6.1 mmol/L，且OGTT 2 h PG在7.8-11.1 mmol/L之间或FPG在6.1-7.0 mmol/L之间，且OGTT 2 h PG 7.8-11.1 mmol/L之间；糖尿病组（DM组，31例）：FPG≥7.0 mmol/L和/或OGTT 2 hPG≥11.1 mmol/L。测定每组Nox含量、8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平。多组计量资料间比较采用方差分析，组间比较采用独立样本t检验，各因素与校正胰岛素抵抗后的胰岛β细胞功能指数（HBCI）行Pearson法相关分析和多元逐步回归分析。结果 DM组Nox水平较IGR组升高，HBCI较IGR组降低[分别为（143.3±22.1）比（118.0±21.8）U/L，12.4±2.3比31.1±7.7，t=2.156、5.621，均P〈0.05]；DM组Nox水平较NGT组明显升高，HBCI较NGT组明显降低[分别为（143.3±22.1）比（97.2±19.9）U/L，12.4±2.3比105.2±21.3，t=4.460、4.111，均P〈0.05]。Nox是HBCI的独立影响因素（r=-0.572，β=-1.088, R2=0.455，P〈0.001）。结论 Nox是反映机体氧化应激水平的一个较为理想指标，与胰岛β细胞功能之间存在密切联系。

子痫前期孕妇外周血NOX2和胎盘组织中NOX2、ROS的表达及其临床意义

目的探讨子痫前期孕妇外周血、胎盘组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(NOX2)及胎盘组织中活性氧(ROS)的表达及其临床意义。方法选取2021年3月—2022年10月在徐州医科大学附属徐州妇幼保健院就诊的子痫前期孕妇60例,其中早发型子痫前期孕妇30例(早发组),晚发型子痫前期孕妇30例(晚发组),另取同期在该院就诊的健康孕妇30例作为对照(正常组)。检测各组外周血NOX2、胎盘组织中NOX2 mRNA相对表达量和ROS表达。结果早发组外周血NOX2、胎盘组织NOX2阳性表达率、NOX2mRNA相对表达量、ROS阳性表达率均高于对照组和晚发组(P<0.0125);晚发组与对照组外周血NOX2、胎盘组织NOX2阳性表达率、NOX2 mRNA相对表达量、ROS阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。早发组≥30岁孕妇外周血NOX2高于<30岁孕妇(P<0.05)。早发组不同体质量指数、孕妇类型、严重程度孕妇外周血NOX2、胎盘组织NOX2阳性表达率、NOX2 mRNA相对表达量、ROS阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。晚发组不同年龄、体质量指数、孕妇类型、严重程度孕妇外周血NOX2、胎盘组织NOX2阳性表达率、NOX2 mRNA相对表达量、ROS阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。子痫前期外周血NOX2与胎盘组织NOX2蛋白、NOX2 mRNA相对表达量呈正相关(r=0.411和0.455,P=0.017和0.012);胎盘组织NOX2蛋白与胎盘组织NOX2 mRNA相对表达量呈正相关(r=0.425,P=0.013)。早发组胎盘组织NOX2和ROS阳性表达率高于晚发组和对照组(P<0.05)。结论外周血NOX2和胎盘组织中NOX2、ROS表达水平升高可能与早发型子痫前期的发病有关。子痫前期早发型与晚发型的发病机制可能有所不同。

肝脏线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸依赖性异柠檬酸脱氢酶参与葡萄糖代谢机制的研究

目的探讨肝细胞中线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸依赖性异柠檬酸脱氢酶(IDH2)对葡萄糖代谢机制的影响。方法分别用高糖或低糖处理小鼠正常肝细胞AML12细胞株,于24、48、72 h后检测IDH2 mRNA及蛋白表达。慢病毒转染法构建IDH2敲低(KD-IDH2组)、IDH2敲低对照(KD-Ctrl组)、IDH2过表达(OE-IDH2组)以及IDH2过表达对照(OE-Ctrl组)细胞株,分别用正常糖、高糖、低糖处理细胞,每组设置3个复孔。流式细胞学检测细胞内活性氧簇(ROS)生成及细胞凋亡。实时定量聚合酶链反应和Western blot法检测糖异生、糖摄取、糖酵解相关基因[己糖激酶1(HK1)、丙酮酸激酶(PKLR)]以及胰岛素、胰高糖素通路相关蛋白[磷酸肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、蛋白激酶A(PKA)、磷酸化PKA(p-PKA)]的表达。在胰岛素、胰高糖素刺激下,检测低糖条件下肝细胞葡萄糖输出能力。通过多功能酶标仪检测2-NBDG摄取用于评估肝细胞糖摄取能力。两组间比较采用t检验。结果AML12细胞在高糖处理48 h后,IDH2 mRNA表达明显下降(P<0.01)。KD-IDH2组细胞IDH2 mRNA表达量为KD-Ctrl组的(35.67±10.60)%(P<0.01),OE-IDH2组IDH2 mRNA表达上调为OE-Ctrl的(4.59±0.77)倍(P<0.01)。KD-IDH2细胞在低糖条件下,葡萄糖输出能力明显减弱(P<0.01),糖摄取能力为KD-Ctrl组的(1.23±0.06)倍(P<0.01),AKT、PI3K蛋白活化程度(p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K)显著增加,PKA活化程度(p-PKA/PKA)降低(P<0.01),OE-IDH2组细胞则有相反表现。高糖处理使KD-IDH2细胞中糖酵解途径相关基因HK1、PKLR表达上调(P<0.05),细胞内ROS水平较高(P<0.05),同时细胞凋亡增加(P<0.01)。结论肝脏IDH2表达调控影响肝细胞内葡萄糖代谢,IDH2表达降低使细胞内胰岛素信号通路活化增加,且低糖条件下糖异生途径下调;而过表达IDH2通过增加肝细胞对胰高糖素的响应并降低对胰岛素的敏感性上调肝糖生成。

NADH通过SIRT1/Nrf2通路缓解小鼠抗结核药物性肝损伤及凋亡

目的探究烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)通过SIRT1/Nrf2通路调控小鼠抗结核药物性肝损伤和凋亡的机制。方法将24只6周龄SPF级雄性小鼠按体质量随机分成4组:ADLI组[90 mg/(kg·d)异烟肼+135 mg/(kg·d)利福平+315 mg/(kg·d)吡嗪酰胺灌胃]、对照组[与抗结核药物性肝损伤(ADLI)组等体积生理盐水灌胃]、NADH组(对照组基础上应用30 mg/kg NADH灌胃)和NADH干预组(ADLI组基础上应用30 mg/kg NADH灌胃),每组6只,连续灌胃7 d,收集血清和肝组织。qRT-PCR法和Western blot法分别检测SIRT1/Nrf2通路中的沉默信息调节因子1(SIRT1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)和凋亡相关指标B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、人胱天蛋白酶3(caspase-3)的mRNA和蛋白表达情况;HE染色法观察小鼠肝脏组织形态;称取小鼠肝脏质量,将其质量除以体质量获得肝脏指数;微板法检测肝损伤指标谷氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)的水平。结果与对照组相比,ADLI组SIRT1和Nrf2蛋白、mRNA表达水平下降(P<0.05);肝组织结构紊乱,细胞明显肿胀、边界不清;小鼠体质量下降,肝指数上升;抗凋亡因子Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平降低,凋亡因子Bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达增强;肝损伤指标ALT、AST、LDH水平升高(P<0.05)。而与ADLI组相比,NADH干预后,SIRT1、Nrf2的mRNA和蛋白表达升高;肝组织结构清晰,细胞呈多边形;抗凋亡因子Bcl-2 mRNA和蛋白表达升高,凋亡因子Bax、caspase-3 mRNA和蛋白水平降低;小鼠体质量上升,肝指数下降;肝损伤指标ALT、AST、LDH表达降低(P<0.05)。结论NADH可能通过调控SIRT1/Nrf2通路缓解小鼠抗结核药物性肝损伤和细胞凋亡。

代谢相关脂肪性肝病患者血清YKL-40 NOX2表达与肝纤维化的关系

目的 探究代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)患者血清几丁质酶样蛋白40(YKL-40)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(NOX2)表达水平,并分析其与肝纤维化的关系。方法 选取2020年4月至2021年12月于保定市人民医院就诊的108例MAFLD患者为MAFLD组,选取同期该院108例健康体检者为对照组。肝纤维化程度评估根据瞬时弹性成像技术所得肝脏硬度值分为非纤维化组(60例,肝脏硬度值<8.0 k Pa)和纤维化组(48例,肝脏硬度值≥8.0 k Pa)。比较研究对象YKL-40、NOX2及临床资料差异。logistic回归分析MAFLD患者发生肝纤维化的影响因素。受试者工作特征(ROC)曲线评价YKL-40、NOX2对肝纤维化的预测效能。结果 MAFLD组血清YKL-40、NOX2水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。纤维化组YKL-40、NOX2水平高于非纤维化组,差异有统计学意义(P<0.05)。回归分析显示,年龄(OR=1.647,95%CI:1.053~2.575,P=0.029)、HOMA-IR(OR=1.758,95%CI:1.083~2.853,P=0.022)、YKL-40(OR=2.016,95%CI:1.237~3.284,P=0.004)、NOX2(OR=2.292,95%CI:1.388~3.786,P=0.001)是MAFLD患者发生肝纤维化的影响因素(P<0.05)。YKL-40、NOX2单独预测MAFLD患者肝纤维化的曲线下面积(AUC)分别为0.833、0.838,YKL-40联合NOX2预测MAFLD患者肝纤维化的AUC为0.922,优于单一指标(Z_(二者联合-YKL-40)=2.268,P=0.023、Z_(二者联合-NOX2)=1.999,P=0.046)。结论 YKL-40、NOX2在MAFLD患者血清中水平增加,且与肝纤维化相关,YKL-40联合NOX2可作为预测肝纤维化的生物标志物。

急性脑梗死患者血清NOX2和MyD88蛋白水平与颈动脉粥样硬化斑块的相关性分析

目的分析急性脑梗死患者血清中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(NOX2)和髓样分化因子88(MyD88)蛋白水平与颈动脉粥样硬化斑块的相关性。方法选取2020年1月至2023年1月在宿迁市第一人民医院急诊抢救室需要急诊溶栓的80例急性脑梗死患者为观察组,及同期80例健康体检志愿者为对照组。经颈动脉彩超检查将患者分为无斑块组(18例)、稳定性斑块组(25例)、不稳定性斑块组(37例)。采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清NOX2和MyD88蛋白水平。对患者血清NOX2和MyD88水平与颈动脉粥样硬化斑块的关系进行Spearman分析;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清NOX2和MyD88蛋白水平对急性脑梗死患者不稳定性颈动脉粥样硬化斑块的诊断价值。结果与对照组相比,观察组急性脑梗死患者血清中NOX2和MyD88水平均显著升高(P<0.05);无斑块组与稳定性斑块组患者血清NOX2和MyD88水平比较差异无统计学意义(P>0.05);不稳定性斑块组较无斑块组和稳定性斑块组患者血清NOX2和MyD88水平显著升高(P<0.05);急性脑梗死患者血清NOX2和MyD88水平与颈动脉粥样硬化斑块均呈正相关(r=0.466、0.597,P<0.05);NOX2和MyD88联合诊断急性脑梗死患者不稳定性颈动脉粥样硬化斑块的ROC曲线下面积(AUC)为0.906,均优于其各自单独诊断(Z二者联合-NOX2=2.417,P=0.008;Z二者联合-MyD88=1.710,P=0.044)。结论急性脑梗死患者血清NOX2和MyD88水平升高,与颈动脉粥样硬化斑块有关,可能在诊断患者不稳定性颈动脉粥样硬化斑块中具有一定价值。