烟酰胺辅酶在聚甲苯胺蓝膜修饰的玻碳电极上的电催化氧化

用循环伏安法在玻碳电极上电沉积一层稳定的甲苯胺蓝聚合物膜 ,研究了这层膜在 0 .2mol/L磷酸缓冲溶液 (pH 6 .86 )中的电化学性质 ,并且考察了该膜修饰的玻碳电极对烟酰胺辅酶 (NADH)的电催化作用 ,用旋转圆盘电极测量了NADH在该修饰电极上的催化反应常数。实验发现 ,在该修饰电极上 ,NADH氧化峰电位比未修饰的玻碳电极负移了 4 5 0mV ,且其催化反应速率常数为 3.5× 10 3 L·mol-1·s-1。

烟酰胺辅酶NADH新型模型物的合成与表征

烟酰胺辅酶NADH的新型模型物BNAH和9-苯基占吨(9-PhXnH)在药物的绿色合成中显示越来越重要.本文分别以烟酰胺和9-苯基占吨醇为原料合成了辅酶NADH重要模型物BNAH和9-苯基占吨,该合成路线原料易得,反应条件温和,操作简单,产率高,产品纯度高,并通过核磁共振氢谱、元素分析、紫外等分析手段,对BNAH和9-苯基占吨进行了结构表征.

烟酰胺辅酶模型对N－芳基芴亚胺的酸催化还原反应的研究

报道了５种Ｎ－芳基芴亚胺在酸性条件下被烟酰胺辅酶模型（Ｈａｎｔｚｓｃｈ酯，ＢＮＡＨ）还原的反应。结果表明：亚胺的结构、酸的强度以及溶剂的不同均会影响亚胺的还原效率，本文结合反应的结构效应、溶剂效应和同位素效应，对其可能的酸催化氢负离子转移机理进行了讨论。

新型烟酰胺辅酶NADH模型物汉斯酯和苯并咪唑啉的合成与表征

新型烟酰胺辅酶NADH模型物汉斯酯(HEH)和苯并咪唑啉(ZH)在有机化合物和药物的绿色合成中越来越重要。文章分别以乙酰乙酸乙酯和邻苯二胺为原料合成了辅酶NADH重要模型物汉斯酯(HEH)和苯并咪唑啉(ZH),该合成路线原料易得、反应条件温和、操作简单、产率高、产品纯度高,并通过核磁共振氢谱、元素分析、质谱等分析手段,对汉斯酯(HEH)和苯并咪唑啉(ZH)进行了结构表征。

烟酰胺类辅酶依赖型氧化还原酶的辅酶偏好性改造及其在合成生物学中的应用

烟酰胺类辅酶NAD(P)是生命体氧化还原过程中最常见的电子中介体。绝大多数氧化还原酶都需要NAD或NADP进行分解代谢和合成代谢,但根据其在代谢过程中的作用,不同氧化还原酶表现出不同的辅酶偏好性。为了解决辅酶在代谢过程中的供需平衡、生产成本和稳定性等问题,对氧化还原酶的辅酶偏好性改造是蛋白质工程的研究热点。本文综述了氧化还原酶的天然烟酰胺辅酶偏好性的改造方法和研究进展,以及天然辅酶偏好性改造工程在提高产品收率和降低生产成本方面的应用。仿生烟酰胺辅酶因成本低、稳定性高,常被用来代替天然烟酰胺辅酶参与氧化还原反应,因此本文还详细介绍了改造酶元件使其偏好仿生烟酰胺辅酶以及其在合成生物学领域构建体内生物正交氧化还原途径和体外合成途径等方面的研究进展。随着更多天然酶元件以及新型优良仿生辅酶的挖掘和设计,从天然辅酶到仿生辅酶的辅酶偏好性改造已成为辅酶工程的一个重要方向。

可溶性聚乙二醇负载的烟酰胺辅酶模型物设计合成及应用

烟酰胺辅酶（NADH）是生命体内最重要的一种氧化还原辅酶,广泛地参与生命体的氧化还原反应.由于NADH辅酶的活性中心是1,4-二氢吡啶,近些年来人们设计合成了各种各样的1，4-二氢吡啶衍生物。

ATR-FTIR研究烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD＋）在纳米氧化铝／水的界面作用

生物体内烟酰胺辅酶是电子载体，在各种酶促氧化．还原反应中起着重要的作用。依赖于辅酶I（NAD＋）和辅酶II（NADP＋）的脱氢酶至少催化6种不同类型的反应。此外，NAD＋也是DNA连接酶的辅酶，对DNA的复制有着重要的作用。因为辅酶是体内许多重要的不需氧脱氢酶的辅酶，其改变往往会影响代谢途径，它与多种酶蛋白构成全酶形式参与体内基础代谢。

聚苯乙烯固载NADH辅酶模型化合物的合成及应用

设计、合成了一类新型的高分子还原试剂——聚苯乙烯固载烟酰胺辅酶模型化合物1-苄基-1,4-二氢烟酰胺(BNAH)4。该还原剂可以在温和条件下有效的还原活化烯烃,而且可以循环再生,但循环再生后有效BNAH含量下降。

NADPH依赖型谷氨酸脱氢酶的辅酶特异性改造

基于结构信息及保守序列比对,通过半理性设计和高通量筛选,将来源于Pseudomonas putida的NADPH依赖型谷氨酸脱氢酶PpGDH改造为NADH依赖型。与原始PpGDH相比,突变体PpGDH-D264V对NADH的偏好性(Ratio of k_(cat)/K_(m))增强了1607倍,并具有对多种酮酸底物的催化活力,可用于制备多种非蛋白质氨基酸。对PpGDH-D264V进行酶学性质表征,其最适温度为45℃,最适pH值8.0,T_(1/2)^(10 min)温度达到58.1℃,在中性及弱碱性环境下具备良好的稳定性,为后续应用奠定基础。

聚硅氧烷固载NADH模型物的设计合成及应用

设计合成了一类新型的高分子还原试剂聚硅氧烷固载烟酰胺辅酶 ( NADH)模型化合物 4.该还原剂可以在温和条件下有效地还原活化烯烃 ,而且自身具有很好的循环再生性 ,是优良的绿色还原剂 .

肌红蛋白作催化剂荧光分析法高灵敏检测NADH

基于肌红蛋白对NADH与H2O2之间的反应具有催化作用,提出了一种催化荧光光谱测定NADH的新方法.在实验选定的最佳反应条件下,该反应体系的荧光强度与NADH的浓度在1.6×10-7～2.0×10-5mol/L范围内呈良好的线性关系,检出限为4.1×10-8mol/L.对1.0×10-6mol/LNADH的标准样品作了9次重复测定,其相对标准偏差RSD=4.6%.

聚灿烂甲酚蓝修饰玻碳电极的制备及电化学性质

在含灿烂甲酚蓝的磷酸缓冲溶液中,用循环伏安法扫描.在经预处理的玻碳电极上形成了聚合物薄膜.在-0.7V-+0.9V(vsSCE)的扫描电位范围和弱碱性介质中形成的薄膜具有较高电活性和稳定性.制备好的聚灿烂甲酚蓝修饰电极在磷酸缓冲溶液的循环伏安曲线有两对氧化还原峰,峰电位随pH升高而向负电位方向移动.该电极对NADH的电化学氧化有催化作用,使其氧化电位负移了270mV并增大了氧化峰电流.

聚酚藏花红功能碳纳米管生物阳极制备及其在乙醇传感器应用(英文)

应用电化学法聚合酚藏花红(PPS)功能化的单壁碳纳米管,以其作为烟酰胺辅酶(NADH)氧化的电化学催化剂(电极),构建基于乙醇脱氢酶的安培型乙醇生物电化学传感器.该电极于0.0 V时,对NADH具有很好的催化性能.而单体酚藏花红则由于其电位过低(-0.48 V),不能显示催化性能.循环伏安和计时安培法测试表明:该传感器的碳纳米管的载量,固定化酶的量,NAD+的浓度以及溶液的pH都能直接影响它的性能.经优化制备的乙醇传感器在0.2 V电位下,对乙醇响应的灵敏度为2.0μA.cm-2.mM-1,检测限为36μmol.L-1.表现出很好的稳定性,连续测定45 min后,响应电流下降仅为起始值的7%.本文的研究为电化学生物传感器的创新开发提供了新的思路.

生理经济学

功能内稳态(FSH)用负反馈的方式维持功能特异的涨落,实现功能充分稳定的发挥.FSH特异的应激因子(FSSR)打破FSH.FSH特异的应激(FSH-specific stress,FSS)是系统对FSSR的响应,也可以处于FSS特异的内稳态(FSS-specific homeostasis,FSSH).处于FSSH的FSS打破FSH1,建立FSH2,称为成功应激.Sirtuin 1(SIRT1)是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+)依赖的组蛋白去乙酰化酶.人体存在FSH/FSSH特异的SIRT1活性.FSS可增加SIRT1活性.一个人可以同时有多种FSH,{FSHi,i=1,2,…,n}.每个FSH具有一个品质Q,{Qi,i=1,2,…,n}.定义Qmax=max{Qi,i=1,2,…,n},相应的功能记为Fmax.最佳品质结构是金字塔形,Qmax处于塔顶,只要Fmax可以获得最佳发挥,其它品质越小越好.

酶循环荧光法定量检测人血红细胞NADH浓度

用酶循环荧光测定法,多功能微孔板检测系统检测人血清还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的浓度。通过底物和酶的循环反应将待测物质NADH的量扩大至荧光可检测范围。该方法的荧光强度与NADH的质量在0.00—0.80pmol范围内呈良好的线性关系,建立的线性方程式为:y=99.377x+13.481,r=0.9941,加标回收率为95.5%—100.0%,批内RSD为1.0%—2.7%,批间RSD为1.9%—12.6%。该方法准确度、灵敏度高、稳定性好,可用于NADH的定量检测。

NAD^+在纳米金胶上的组装、表征及其应用研究

将NAD+ 固定在纳米金胶 半胱胺修饰的金电极表面构建一种新型的纳米仿生功能界面 ,用电化学交流阻抗、反射紫外 可见光谱和电化学分析法对其组装过程以及活性进行了表征 .基于这种功能界面构建的新型酶生物传感器对乳酸的电催化响应呈现良好的线性 ,米氏常数为 8.8μmol/L ,检测限为 6.0× 1 0 -8mol/L (S/N =3) ,且对NAD+

四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠肝组织和HSC-T6细胞NOX4基因及其蛋白表达的变化

目的探讨四氯化碳(CCl_(4))诱导的肝纤维化小鼠和肝星状细胞(HSC-T6)还原型辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶家族氧化酶4(NOX4)基因及其蛋白表达的变化。方法采用腹腔注射四氯化碳(CCl_(4))构建10只小鼠肝纤维化模型,采用qRT-PCR法和Western Blot法检测小鼠肝组织NOX4基因和蛋白表达水平。将肝星状细胞(HSC-T6)分为对照组、无意干预组和NOX4-siRNA干预组,后两组分别采用脂质体2000将无意义序列或NOX4-siRNA转染HSC-T6细胞,采用qRT-PCR法和Western Blot法检测HSC-T6细胞NOX4、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原(Col1a I)、组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)、金属蛋白酶2(MMP-2)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2和Smad3水平,采用DCFH-DA荧光探针法检测细胞活性氧(ROS)含量,采用MTT法检测细胞增殖,使用流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况。结果模型小鼠肝组织出现明显的病理学损伤,有大量的胶原纤维沉积;模型组小鼠肝组织NOX4 mRNA水平显著高于对照组(P<0.05);与对照组细胞比,NOX4-siRNA干预组细胞NOX4 mRNA及其蛋白、ROS、增殖活性、S期细胞比例、α-SMA、Col1a I、TIMP-1、MMP-2、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3表达水平显著降低,而G0/G1期细胞比例和细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论肝纤维化组织NOX4呈高水平,下调NOX4可抑制肝星状细胞的增殖和活化,并促进其凋亡,可能是通过下调TGF-β/Smad信号通路实现的。

基于邻苯二胺聚合膜的纳米金自组装NADH修饰电极测定肾上腺素

研究了基于邻苯二胺聚合膜的纳米金自组装NADH修饰玻碳电极的制备，并探讨了肾上腺素在此修饰电极上的电化学行为，在pH=7．2的磷酸盐缓冲液中，肾上腺素在该修饰电极上产生一个灵敏的氧化峰，峰电流与肾上腺素浓度在3．0×10^-6～5．0×10^-5mol／L范围内呈良好的线性关系，检出限为3．15×10^-7mol／L．该方法可用于盐酸肾上腺素注射液中肾上腺素的检测．

解决氧化还原酶反应体系中辅酶问题的策略及其应用

氧化还原酶还原醛或酮生成各种手性醇或手性胺类化合物。然而,氧化还原酶的催化过程通常需要价格昂贵的烟酰胺类辅酶提供或接受电子,这严重阻碍了氧化还原酶的工业化进程。因此,如何降低辅酶的成本已成为生物催化领域的研究热点和关键问题。随着工业化应用的实际需求和研究工作的深入,各种解决辅酶问题的策略被相继提出,如构建体外辅酶再生系统,利用发酵工程与代谢工程等手段提高内源性辅酶利用率,研究和开发辅酶替代物等。文中对这些策略的研究概况进行简要介绍,并通过列举相关应用实例分析各自的优、缺点,为进一步拓展氧化还原酶的工业化应用提供借鉴和参考。

内源性自由基与生命科学相关的若干物理有机化学问题

随着后基因组时代的到来，化学界和生物学界对生物功能的主要体现者或执行者——蛋白质给予了空前的关注。众所周知，蛋白质特定功能的实现离不开蛋白质特定结构的构筑由于蛋白质的修饰加工、转运定位、代谢、蛋白质与蛋白质及其他生物大分子的相互作用等均无法从基因组水平上的研究获得，因此，对蛋白质功能中心结构的研究以及蛋白质功能中心被内源性小分子自由基（如一氧化氮）修饰后的改变对其功能影响的研究成为人们认识生命奥秘的一种迫切的需求。