烟酸羟基化酶产生菌的快速筛选及催化条件

建立了一种基于紫外显影法快速筛选烟酸羟基化酶产生菌的方法,用96孔板培养菌后,将菌液点样到滤纸上,利用6-羟基烟酸在紫外光照射(300nm)下显影的特性,可以快速、方便地筛选出烟酸羟基化酶产生菌.对筛选出的最高酶活菌株BKC4进行了研究,菌株为杆状,革兰氏染色呈阴性,通过16SrRNA序列分析鉴定为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida).利用BKC4菌株催化烟酸合成6-羟基烟酸,结果表明,BKC4菌株烟酸羟基化酶的最适催化条件为:底物浓度10g/L,温度37℃,pH6.5,摇床转速200r/min,酶在低于30℃及pH6.0～6.5范围内较稳定.

1株产烟酸羟基化酶海洋细菌H9的分离鉴定及培养条件优化

利用96孔板和紫外显影相结合的定向快速筛选方法,从烟台渤海湾采集的腐败鱼尸上分离筛选得到1株高产烟酸羟基化酶的菌株H9,通过形态、生理生化特征和16S r DNA系统发育分析鉴定为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida),对其产酶培养条件进行优化,最适培养基和培养条件为:可溶性淀粉15 g/L、玉米浆15 g/L、烟酸10 g/L、K_2HPO_4 1.0 g/L、初始pH 7.0、培养温度25℃、接种量7%、500 mL三角瓶装液量50 mL。优化后烟酸羟基化酶活力达到0.37 U/mL,比优化前提高了68%,采用静息细胞转化生产6-羟基烟酸产率达到124.77 g/L,具有工业化生产6-羟基烟酸的应用前景。