卷烟烟气凝集物诱发人支气管上皮细胞转化的初步研究

目的建立卷烟烟气凝集物(CSC)诱发细胞转化的模型,模拟吸烟致肺癌的过程。方法利用CSC染毒体外培养的人支气管上皮细胞系BEP2D,诱导转化。结果以0·001支烟/ml剂量每代染毒24h,连续染毒30代共720h后,诱发细胞发生明显转化改变,细胞逐渐发生生长动力学和形态学的改变,生长失去接触抑制,获得对血清诱导末端分化的抗性和锚着独立性生长能力,与对照细胞比较均有统计学意义上的增强。结论从BEP2D到CSC转化的细胞能够在一定程度上模拟体内肿瘤的发生发展过程,可以为深入了解吸烟致肺癌发生多阶段过程中的细胞和分子机制提供研究模型。

高温与低剂量香烟联合致仔鼠的神经行为异常(英文)

背景:神经行为是评价中枢神经发育异常的最敏感指标,导致其发育畸形的影响因素较多。为此,探讨高温与香烟联合环境下对神经行为发育的影响。目的:探讨高温与香烟联合对仔鼠神经行为发育的影响。设计:以动物为观察对象的随机对照实验。单位:新乡医学院第三附属医院妇产科和新乡医学院的细胞生物学教研室。材料:健康未生育的SD大鼠270只,雌性大鼠180只,体质量190～210g,雄性大鼠90只,体质量225～275g,鼠颗粒饲料喂养,常规饮水,自然光照,室温25℃。将动情期的雌雄大鼠按2:1合笼过夜,次日晨检到阴栓为妊娠第0d,共获孕鼠160只,随机分成16组,暴露于高温、香烟及高温联合香烟的条件下,孕鼠自然分娩,观察仔鼠的早期反射和学习记忆。干预:160只孕鼠从妊娠第2d开始,37℃,41℃,42℃高温联合香烟组大鼠每只隔日皮下注射相当于1.0支香烟水溶物,25℃对照组和37℃,41℃,42℃单独高温组每日注射2.0mL的双蒸水,共7次。于孕第10d将孕鼠置于温箱中,37℃,41℃,42℃单独高温组肛温分别保持在(37+0.5)℃,(41+0.5)℃,(42+0.5)℃,持续2.0min;37℃,41℃,42℃高温联合香烟组肛温保持同单独高温组,每组均分别持续0.5,1.0,1.5,2.0min;25℃对照组不做高温处理。受孕18d后单笼饲养待其自然分娩。记录妊娠天数、仔鼠数、死胎数。

P13K／Akt—Nrf2信号通路调节大鼠气道上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达的研究

目的观察香烟烟雾提取物（CSE）通过磷酯酰肌醇-3-激酶（PBK）／Akt—Nrf2（Nuclearfactor—E2relatedfactor）信号通路对大鼠气道上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）的影响。方法用浓度为10％的CSE对体外原代培养的大鼠气道上皮细胞进行不同时间处理及使用P13K特异抑制剂LY294002进行干预。观察CSE在不同的时间及使用LY294002干预后对Nrt2的核转位及γ-GCS的影响，用细胞免疫化学、流式术、免疫荧光及Westernblot方法检测Nrf2、p-Akt及γ-GCS的表达水平；用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测γ-GCSmRNA的表达水平；检测还原型谷胱甘肽（GSH）的含量及γ-GCS的活性。结果暴露CSE后1h，GSH含量明显低于对照组，在暴露CSE后3h和6h，GSH含量明显增高。Nrf2蛋白质在对照组主要表达在胞浆，其蛋白质表达增强，而在CSE1h、CSE3h和CSE6h组主要在胞核中表达，其蛋白质表达增强。p-Akt蛋白质在暴露CSE后1h增强，3h最强，6h减弱。p-Akt阳性细胞百分比变化趋势与其蛋白质变化趋势相同。γ—GCSmRNA和蛋白质在CSE1h、CSE3h、CSE6h组表达逐渐增强。γ—GCS活性在CSE1h、CSE3h、CSE6h组逐渐增强。预先使用LY292002，p-Akt阳性细胞百分比及蛋白质表达明显弱于CSE3h组，Nrf2胞浆蛋白质表达增强，胞核表达减弱，吖-GCSmRNA、蛋白质和活性及GSH含量均明显低于CSE3h组。相关性分析显示Nri2与γ-GCS、γ-GCS活性呈正相关（r=0．81，0．77，P〈0．05），p-AM与γ-GCS、γ-GCS活性、GSH及Nrf2呈正相关（r=0．373，0．44，0．63，0．56，P〈0．05）。结论P13K／Akt信号通路可能参与Nrf2核转位及其对抗氧化基因γ-GCS的调控。